Cromatografia lichida
2
Cercetarea criminalistică a microurmelor Student: …………………… Analiza acidului acetil salicilic (aspirinei) şi a acidului salicilic Data: ……………………….… MASTER Lect. Dr. Cecilia Arsene Criminalistică Conf. Dr. Romeo-Iulian Olariu An I, Semestrul II, An Universitar 2011-2012 Pag. 1 1 Introducere Importanţa metodelor cromatografice instrumentale în analizele calitative din domeniul farmaceutic este de necontestat. Prin utilizarea aparaturii moderne se poate asigura atât o sensibilitate adecvată, cât şi reproductibilitate, prin realizarea unei automatizări a analizelor efectuate. În prezent, când zeci de compuşi sunt testaţi zilnic pentru a le descoperi potenţialul biologic, este important ca aceştia să poată fi detectaţi uşor şi rapid din fluidele biologice, în vederea stabilirii unor parametri importanţi, cum ar fi viteza de adsorbţie. Şi în acest caz, metode cum sunt cromatografia de ioni sau cromatografia de înaltă performanţă prezintă soluţii avantajoase pentru rezolvarea acestor probleme. Se prezintă analiza unei probe de aspirină din farmacie, folosind metoda curbei de etalonare în cadrul cromatografiei de înaltă performanţă. COOH OCO CH 3 acid acetil salicilic: M = 180,16 K a = 3,2×10 -4 Aspirina poate conţine şi acid salicilic liber. COOH OH acid salicilic: M = 138 K a1 = 10 -3 K a2 = 4 ⋅10 -14 Aspirina este greu solubilă în apă. Pentru solubilizare se foloseşte de obicei mediu hidroalcoolic (alcool etilic). 2 Partea experimentală Pentru prepararea soluţiilor şi a fazei mobile se folosesc reactivi de puritate analitică. Proba de aspirină de analizat poate fi achiziţionată din farmacie. Acidul acetil salicilic folosit la prepararea standardelor poate fi sintetizat în laborator. Se foloseşte pentru analiză un instrument cromatografic HPLC Agilent 1100. Coloana folosită la analiză este de tip C18. Detecţia se realizează printr-un detector UV-vis. Citirile se vor efectua la lungimea de undă de 235 nm. Fazele mobile folosite la analiză - amestec A preparat din 1000 mL apă, 10 mL acetonitril şi 0.2% acid tricloracetic. - amestec B preparat din 900 mL acetonitril, 100 mL apă şi 0.1% acid tricloracetic. Soluţii stoc şi standarde Se prepară 2 soluţii stoc de concentraţie 1000 ppm de acid acetilsalicilic şi acid salicilic în acetonitril. Din cele 2 soluţii se prepară o soluţie mixtă de concentraţie 100 ppm în fiecare din cei doi componenţi, în amestec apă:acetonitril = 70:30 şi 0.3% acid fosforic. Din soluţia mixtă se vor prepara 4 soluţii de concentraţii 1, 5, 10 şi 20 ppm în amestec apă:acetonitril = 70:30 şi 0.3% acid fosforic.
description
laborator analiza cromatografica lichide - aspirina
Transcript of Cromatografia lichida
Cercetarea criminalistică a microurmelor Student: ……………………
Analiza acidului acetil salicilic (aspirinei) şi a acidului salicilic Data: ……………………….…
MASTER Lect. Dr. Cecilia Arsene Criminalistică Conf. Dr. Romeo-Iulian Olariu An I, Semestrul II, An Universitar 2011-2012 Pag. 1
1 Introducere Importanţa metodelor cromatografice instrumentale în analizele calitative din domeniul farmaceutic este de necontestat. Prin utilizarea aparaturii moderne se poate asigura atât o sensibilitate adecvată, cât şi reproductibilitate, prin realizarea unei automatizări a analizelor efectuate.
În prezent, când zeci de compuşi sunt testaţi zilnic pentru a le descoperi potenţialul biologic, este important ca aceştia să poată fi detectaţi uşor şi rapid din fluidele biologice, în vederea stabilirii unor parametri importanţi, cum ar fi viteza de adsorbţie. Şi în acest caz, metode cum sunt cromatografia de ioni sau cromatografia de înaltă performanţă prezintă soluţii avantajoase pentru rezolvarea acestor probleme.
Se prezintă analiza unei probe de aspirină din farmacie, folosind metoda curbei de etalonare în cadrul cromatografiei de înaltă performanţă. COOH
OCO CH3
acid acetil salicilic: M = 180,16 Ka = 3,2×10-4 Aspirina poate conţine şi acid salicilic liber.
COOH
OH
acid salicilic: M = 138 Ka1 = 10-3 Ka2 = 4 ⋅10-14 Aspirina este greu solubilă în apă. Pentru solubilizare se foloseşte de obicei mediu hidroalcoolic (alcool etilic).
2 Partea experimentală Pentru prepararea soluţiilor şi a fazei mobile se folosesc reactivi de puritate analitică. Proba de aspirină de analizat poate fi achiziţionată din farmacie. Acidul acetil salicilic folosit la prepararea standardelor poate fi sintetizat în laborator. Se foloseşte pentru analiză un instrument cromatografic HPLC Agilent 1100. Coloana folosită la analiză este de tip C18. Detecţia se realizează printr-un detector UV-vis. Citirile se vor efectua la lungimea de undă de 235 nm.
Fazele mobile folosite la analiză - amestec A preparat din 1000 mL apă, 10 mL acetonitril şi 0.2% acid tricloracetic. - amestec B preparat din 900 mL acetonitril, 100 mL apă şi 0.1% acid tricloracetic.
Soluţii stoc şi standarde Se prepară 2 soluţii stoc de concentraţie 1000 ppm de acid acetilsalicilic şi acid salicilic în acetonitril. Din cele 2 soluţii se prepară o soluţie mixtă de concentraţie 100 ppm în fiecare din cei doi componenţi, în amestec apă:acetonitril = 70:30 şi 0.3% acid fosforic. Din soluţia mixtă se vor prepara 4 soluţii de concentraţii 1, 5, 10 şi 20 ppm în amestec apă:acetonitril = 70:30 şi 0.3% acid fosforic.
Cercetarea criminalistică a microurmelor Student: ……………………
Analiza acidului acetil salicilic (aspirinei) şi a acidului salicilic Data: ……………………….…
MASTER Lect. Dr. Cecilia Arsene Criminalistică Conf. Dr. Romeo-Iulian Olariu An I, Semestrul II, An Universitar 2011-2012 Pag. 2
Pentru prepararea soluţiei de analizat se mojarează o pastilă de 500 mg acid acetilsalicilic, conţinutul pulberiii rezultate se cântăreşte şi se transferă cantitativ la un volum de 50 mL cu amestec apă:acetonitril = 70:30 şi 0.3% acid fosforic. Din soluţia obţinută se măsoară 0,25 mL care se aduc la un volum final de 15 mL. Soluţia finală de analizat se obţine prin măsurarea a 3 mL din soluţia anterioară şi aducerea lor la un volum final de 10 mL, astfel încât concentraţia finală teoretică să fie de 50 ppm.
Condiţii de operare instrument Atât curba de etalonare cât şi citirea probelor de analizat se vor realiza la un debit de 1 mL/minut cu o componenţă a fazei mobile de A:B=70:30. Timpul de înregistrare a unei cromatograme va fi de 10 minute. 3 Prezentarea şi interpretarea rezultatelor Curba de etalonare se realizează folosind 5 puncte (1, 5, 10, 20 dar şi 100 ppm). Datele obţinute la înregistrarea cromatogramelor se vor trece în Tabelul 1:
Tabel 1: Rezultatele obţinute la investigarea prin HPLC a aspirinei.
Nr. det. Conc stand. (ppm) Arie acid acetilsalicilic Arie acid salicilic Observaţii 1 2 3 4 5 Probe 6 7 8
1) Se vor identifica timpii de retenţie pentru acid acetilsalicilic şi acid salicilic.
2) Se va reprezenta grafic dependenţa S=f(arie acid acetil salicilic) şi S=f(arie acid salicilic).
3) Se vor realiza/justifica valorile obţinute pe probe reale prin calcule adecvate.
4 Observaţii şi concluzii
