Abstract Lucrarea noastr prezint rezultatele obinute n cadrul laboratorului n cultura in vitro a Staiunea de Cercetare de fructe din Cluj n ceea ce privete comportamentul pe la propagarea in vitro a coacz negru soiuri de "Perla Neagra" i "Amurg". Pentru iniiere, multiplicarea i nrdcinarea Murashige & Skoog mediu a fost utilizat, cu 1 mg / l Vitamina B1, 6 g / l Agar a Plantelor i pH-ul ajustat la 5,8. n Rata de nmulire in vitro a fost stabilit, precum i procentele de nrdcinare i de aclimatizare. n faza de multiplicare, Murashige & Skoog (MS), Woody Plant Medium (WPM) i driver & Kunyuki Walnut (DKW) au fost folosite ca mass-media bazal. Ca regulatori de cretere, 6benzylaminopurine (BAP), Zeatine, Thidiazuron (TDZ) i 2-izopentiladenine (2-IP) au fost testate. Aclimatizare a fost fcut n substrat solid, respectiv perlit sau dintr-un amestec de sol + perlit 1:1 n volum pentru a raportului de volum, cum precum i n hidrocultura, n tvi din plastic care conin ap, cu pH-ul = 7 i folosind diferite tipuri de de explantelor. Cuvinte cheie: coacz negru, culturi in vitro, Cuvinte cheie: coacz negru, n cultura in vitro 1. Introducere Coacz negru este propagat n mod tradiional prin butai Greenwood, butai de lemn de esenta tare, stratificare i rareori prin divizare sau altoire. Propagarea prin butai lemn de esenta tare este extrem de eficient, de la un hectar de pepinier plantaii 300000 butai pot fi obinute, fiecare 20 cm n lungime (Mircea Botez et. Al, 1984.). Exist foarte puine date n literatura de specialitate n ceea ce privete n nmulire in vitro a coacz negru. Tatiana Lazic i Durdina Ruzic (2007) utilizat MS mediu (Murashige & Skoog 1962) i diferite concentraii de BAP, TDZ i IBA. BAP a avut un efect inhibitor asupra creterii in vitro de cultivar coacz negru Cacanska Crna. Rezultate mai bune au fost obinute n ceea ce privete creterea n vitro i rata de multiplicare dup

transferul plantulelor la mass-media fr cytokinins. nrdcinare i ratele de aclimatizare au fost de 100%. 2. Material i metode Am studiat "Perla Neagra" i "Amurg" soiuri crescute la statia de cercetare de fructe din Cluj. Pentru coacz negru n nmulire in vitro am fcut urmtorii pai: Plantele folosite ca surse de explantelor de nmulire in vitro sunt n colectarea arbust rodul Staiunea de Cercetare de fructe din Cluj. Din aceste plante, muguri (creteri anuale) au fost recoltate, de la care un singur nod fragmente au fost obinute, care au fost folosite pentru iniiere n cultura in vitro. Fragmentele de un singur nod au fost splate cu ap de la robinet timp de 60 de minute, apoi clatit cu apa curata ap deionizat, apoi dezinfectate timp de 20 minute ntr-un amestec antiseptic de ap deionizat steril i 20 ACE inalbitor% i apoi cltete cu ap deionizat steril (6 cltiri), n scopul de a elimina urmele de dezinfectant. Dup dezinfecie materialul vegetal a fost fragmentat n single-nod fragmente care au fost inoculate pe mediul de deschidere (Tabelul 1). Plantule care au rezultat dup iniiere au fost apoi a trecut la faza de multiplicare, n care Woody Plant Medium (Lloyd G. i McCown, 1981) i mijlocii Murashige si mijlocii Skoog au fost utilizate ca mass-media bazale, la care au fost adugate alte componente: regulatori de cretere - BAP, TDZ, 2-IP, zeatine, soluii mam de vitamine: B1, B6, acid nicotinic, zahr cristal ca surs de carbon, Sequestrene 138 sau FeNaEDTA ca surs de fier, agar-agar pulbere (cheson Laboratories, Inc, catalog A038, lot 6308) sau plantagar (Duchefa) 6 g / l. PH-ul de mass-media a fost ajustat la 5 (pentru Plant Medium Woody) sau 5.8 (pentru statele membre mass-media). Toate componentele au fost adugate la mass-media nainte de autoclavation. Mass-media au fost distribuite n Magenta GA7 navele cu capace din polipropilen (50 ml / nav) i autoclavizat pentru 25 de minute la 121o C.

Materialul vegetal folosit pentru multiplicarea a constat din fragmente trage aproximativ 1 cm n lungime, care conin 1-2 noduri (Fig. 1). 9 microcuttings / nav au fost inoculate (Fig. 2). Navele au fost sigilate cu folie Folpack. Lucrari stiintifice din R.I.F.G. Pitesti, Vol.. XXV, 2009_________________________________________________ 208 Incubaie Cultur a fost fcut n camera de cretere, n lumina artificial furnizate de ctre tuburi fluorescente. Intensitatea luminii a fost n jurul valorii de 3000 Lux i temperatura a fost n jurul valorii de 24-26 C. Fragmentele de trage inoculate pe modificat fr hormoni mediu MS sunt nrdcinate n 4-6 sptmni, dup care acestea pot fi transferate franco-vitro pentru aclimatizare. Plantulelor nrdcinat au fost transferate franco-vitro n tvi pline cu perlit sau sol + perlit n 1: 1 de volum pentru a raportului de volum, dup care au fost udate i acoperite cu capace de plastic, n scopul de a menine umiditate. Aclimatizare n hidrocultura a fost, de asemenea, utilizat. Doua tipuri explant au fost utilizate: intreaga in vitro nrdcinate plantulelor, precum i baze de excizate plntu care conin rdcin i 2-3 noduri viabil, mpreun cu frunze cultivate din nodurile, restul plntu fi utilizate n procesul de multiplicare in vitro. Plantulelor au fost aclimatizati in 4-5 saptamani. 3. Rezultate i discuii Dup iniierea, plantele coacz negru au fost multiplicate de 3 cicluri pe hormoni-free MS mediu i rata de multiplicare a fost stabilit dup 2 luni de cultura in vitro. La Varianta 1 (fr hormoni MS), dou soiuri au reacionat aproape identic. Plantulelor au fost extrem de viguros, cu 4.5-8 cm lungime muguri, internoduri lungi la baz i mai scurt n mijloc i pri apicale ale plantulelor, cu frunze mari, de culoare verde stralucitor. Pe acest mediu, plantele au nceput s rdcin dup 4 sptmni n cultur. Rata de multiplicare pe termen mediu fr hormoni MS a fost 2.54 pentru soiul "Perla Neagra" i 2.97 pentru soiul "Amurg" (tabelul 3).

n scopul de a stabili un mediu nutritiv, care ar trebui s ofere o rat de multiplicare mai mare dect cea pe fr hormoni MS, celelalte variante de mass-media din tabelul 2 au fost testate, folosind inoculi din soiul "Amurg". La variantele 2 i 3, cu MS ca mediu bazal i BAP sau TDZ ca regulatori de cretere, foarte scurt i deformate plantulelor au fost obinute, materiale total neadecvate pentru multiplicare sau de aclimatizare. n cazul de variante 4 i 5, cuvinte pe minut + 1 mg / l Zeatin sau 5 mg / l 2-Ip rezultatele au fost similare cu cele obinute pe hormoni-free mediu MS, aceste cytokinins nu a furnizat n proliferarea in vitro din cele 2 soiuri de coacz negru. n cazul de variante 6 i 7, n cazul n care DKW (Driver, JA, Kuniuki, AH, 1984, Bekir SAN et al., 2007, Mehmet Nuri Nas, 2004) a fost folosit ca mediu bazal, fr hormoni sau care conin 10 mg / l 2IP, o uoar cretere a ratei de multiplicare a fost observat, dar la nici una din aceste variante proliferarea lstari axilara a fost stimulat, de un singur trage / inoculum rezultat. n varianta cu 6, fr hormoni DKW, Rata de multiplicare a fost de 3.38 i la Variant 7, DKW 10 mg / l 2-IP, rata de multiplicare a fost de 3.89. Ratele de multiplicare din soiul "Amurg", pe cele 3 variante care a furnizat cele mai bune de multiplicare Tarifele sunt prezentate n Fig. 3. n soiul "Perla Neagra", privind fr hormoni MS ratele de multiplicare i de ratele de supravieuire ale inoculi nodul cu 1 i 2 noduri au fost comparate. Studiile au fost efectuate la 3 Magenta navelor / variant, care conin 8-9 inoculi / nav. n cazul de inocularea cu un singur nod fragmente, de la numrul iniial de 25 inoculi 16 inoculi supravieuit. Rata de Themultiplication n acest caz a fost de 3.58. n varianta cu fragmente binodal, de la

total de 26 de inoculi 24 au supravieuit i rata de multiplicare a fost de 6.07 (tabelul 4). n ceea ce privete tipul de explant, n cultivar "Perla Neagra" este vzut ca un singur nod explantelor sunt mai puin viabile, avnd ca rezultat plante mai puin viguroase n comparaie cu cele rezultate din explantelor binodal. Din stem piese care conin internoduri lungi si bine dezvoltate muguri axilar, cu un singur nod poate fi microcuttings excizat i utilizate cu succes, ntruct din zonele care conin internoduri scurte, este recomandat s accizabile 2-nod fragmente. n coacz negru nrdcinare a avut loc n acelai timp ca multiplicare, cu privire la variantele de aceeai mass-media (fig. 4). Procentaj rmat fost de peste 90%. Plantele pot fi transferate franco-vitro pentru aclimatizare dup 6-8 sptmni, atunci cnd acestea sunt bine nrdcinate. n aceast faz, metoda clasica de aclimatizare n perlit a fost testat (Fig. 5), n tvi de plastic acoperite cu capace transparente, folosind plantule ntregi nrdcinate, non-nrdcinate mpuc sau fragmente trage i plntu rdcini baze cu 2-3 noduri i frunze. Pentru plantule ntreaga nrdcinate in vitro, procentul de aclimatizare a fost de 100%, pentru nonnrdcinate lstari procentaj de aclimatizare a fost 0 i bazele a avut o rat de aclimatizare de peste 90%. Tvi care conine o amestec de sol + perlit au fost, de asemenea, folosite pentru adaptarii plantulelor nrdcinate i rata de aclimatizare a fost de 100%, de asemenea, (fig. 6). Deoarece metoda de aclimatizare clasic necesit mult de munc, medii speciale i este mai costisitoare, metoda de aclimatizare n hidrocultura a fost de asemenea testate. n acest scop, n vitrorooted plantulelor au fost transferate franco-vitro n tvile care conin ap, cu pH neutru. Plantulelor au fost procedeaz la aclimatizarea n 3 sptmni ntr-un procent de 100% i au crescut spectaculos, devenind foarte energic

(Fig. 7). Deoarece rata de multiplicare n coacz negru este foarte sczut, metoda de adaptarii baze de rdcini rezultate din faza de multiplicare a fost de asemenea testate, prile de mijloc i apical a Lucrari stiintifice din R.I.F.G. Pitesti, Vol.. XXV, 2009_________________________________________________ 209 plantulelor fiind folosite pentru viitoare nmulire in vitro. Din aceste baze, de asemenea, plante viguroase au fost cultivate, Rata de aclimatizare, de asemenea, fiind foarte ridicat. Plantele aclimatizarea au fost apoi plantate n vase care conin amestec ghiveci, rata de supravietuire fiind mai mult de 90% (Fig. 8). 4. Concluzii 1. Coacz negru poate fi cu succes propaga in vitro, dar rata de multiplicare este foarte sczut, variind ntre 2.60 i 6.02, n funcie de tipul de mass-media nutritive i explantelor. 2. Mass-media bazal care a dat rezultate bune n n nmulire in vitro a coacz negru sunt state membre, WPM i n special DKW. 3. Regulatori de cretere utilizat, BAP, TDZ, Zeatin i 2-Ip, n diferite concentraii, nu au dus la proliferarea de muguri axilare, i BAP si TDZ a dus la creterea de deformate, foarte scurt plantulelor, cu calus bazal i frunze deformate, total nepotrivit pentru nmulire suplimentare sau aclimatizare. 4. Mass-media pe care cele mai bune rezultate au fost obinute au fost fr hormoni MS i fr hormoni DKW. 5. n coacz negru, nrdcinare in vitro se face n acelai timp cu multiplicarea in vitro, n massmedia fr regulatori de cretere. 6. Aclimatizare se poate face fie prin metoda clasic n perlit sau in hidrocultura. n ambele variante, rata de aclimatizare poate ajunge la 100%. Aclimatizare n hidrocultura este mai economic, se

necesit spaiu mic i a forei de munc.