Reacția cu acidul azotos:

Ac.reacție poate fi utlizată și pentru dozarea cantitativă a aminoacizilor,prin măsurarea volumului de azot eliberat:un mol eliberează 22,4 l de N2.Ac reacție stă la baza metodei Van Slyke,utilizată pentru determinarea azotului aminic.

Reactivi: NaNO2 10%; HCl 2M; aminoacizi de testat: Gly, Tyr

Reacția cu ninhidrină:

Ninhidrina este un puternic agent antio-xidant,care reactioneaza cu toti l-aminoacizii,in domeniul de pH 4-8,cu formarea unor compusi colorati in albastru violet(purpura lui Ruhemann).Sub actiunea oxidanta a ninhidrinei are loc dezaminarea si decarboxilarea aminoacidului,cu producerea unei grupari carbonil la l-atomul de carbon si eliberearea de CO2 si de NH3.Aminoacidul este dezaminat oxidativ,trecand prin starile intermediare de acid l-iminic si de acid l-cetonic,in timp ce ninhidrina este redusa la hidrindantina,care condenseaza cu amoniacul eliberat cu formarea complexului colorat,denumit Purpura lui Ruhemann.

Reactia xantoproteica:

Aminoacizii care contin in structura lor un radical aril,prin incalzire cu acid azotic concentrat,formeaza nitroderivati de culoare galbena.Sarurile acestor derivati,formate prin aditie de amoniac sunt portocalii.

Reactivi si solutii: aminoacizi( glicina,tirozina,solutie 0,1%); fenol( solutie 0,1%); Acid azotic concentrat; NH4OH concentrat.

Reactia Millon:

Aminoacizii care contin un radical hidroxibenzenic reactioneaza cu reactivul Millon formand un complex de culoare rosie.Numai tirozina si derivatii ei dau o reactie pozitiva.Reactivul Millon original este o solutie de azotat mercuric 50%,in acid azotic.In aceasta metoda este utilizat un reactiv Millon modificat: sulfat mercuric in acid sulfuric.

Solutii:aminoacizi ( glicina,tirozina,solutie 0,1%);reactiv Millon ( Hg SO4 15%) in acid sulfuric 15%; fenol o,1%; azotit de sodiu,solutie 1%.

Reactia cu nitroprusiat:

In prezenta amoniacului ,gruparile SH ale tioaminoacizi reactioneaza cu nitroprusiatul de sodiu Na Fe(CN)5 N0 si formeaza un complex colorat in rosu.

Solutii:Sol de nitroprusiat de sodiu 2%,proaspat preparata;solutie de amoniac;solutie de testare 0,1%(cisteina,cistina,metionina)

Dozarea proteinelor serice cu reactiv Weichselbaum

Compuşii cu legături peptidice reacţionează cu ionii de Cu2+ în mediu alcalin, rezultând un compus de culoare albastru-violet a cărui intensitate este direct proporţională cu numărul de legături peptidice.

Metoda poate fi folosită pentru determinarea concentraţiei proteinelor din serul sanguin. Reactivi:soluţie de NaOH 10%;reactiv Weichselbaum: tartrat dublu de Na + Na OH + sulfat de cupru cristalizat CuSO4 x 5 H2O;soluţie standard proteică cu concentraţia cunoscută (10 mg/ml) de albumină serică bovină (BSA);proba de analizat reprezentată de ser sanguin diluat corespunzător.

Dozarea proteinelor prin metoda biuretului:

Reacţia este utilizată pentru determinarea cantitativă a proteinelor. Asemănător compusului numit biuret, peptidele şi proteinele conţin grupări –CO-NH- care reacţionaeză cu o soluţie alcalină de sulfat Cu (II) şi determină apariţia unei coloraţii albastru-violet.

Intensitatea culorii este o măsură a numărului de legături peptidice prezente într-o proteină.

Reacţia nu este specifică pentru legaturile peptidice compusii cu doua grupari carbonil legate printr-un atom de C sau N dau reactie pozitiva.

Metoda este utilizata pt. determinarea unor cantitati mari de proteine (1-20 mg).

Reactivi:Reactiv biuret; soluţie standard proteică cu concentraţia cunoscută (5 mg/ml) de albumină serică bovină (BSA);proba de analizat reprezentată extract proteic total.

Incubare 10’/ 37°C . Citire la spectrofotometru în cuva cu drum optic de 1 cm la lungimea de undă 54 0 nm . Citirea se face fata de A.D

Glucoza

Fructoza

Pellucid cu caracter reducator - glucoza

Echilibrul intre forma piranozica si cea cu lant deschis este directionat catre aceasta din urma pentru a se produce reactia de oxidare.

Dozarea zaharurilor reducatoare din extractul de portocala cu o-toludina

In prezenta acidului acetic, la cald, zaharurile reducatoare formeaza cu o-toluidina un complex colorat care prezinta un maxim de absorbtie la 630 nm.

Metoda poate fi folosită pentru determinarea concentraţiei glucozei din serul sanguin.

Reactivi:Reactiv o-toluidina; Solutie standrad de glucoza 100 mg%;proba de analizat reprezentată de extract de portocala diluat corespunzător.Incubare 10’/ baie de apa la fierbere . Citire la spectrofotometru în cuva cu drum optic de 1 cm la lungimea de undă 630 nm fata de blanc .

Reactia glucozei cu o-toluidina

Dozarea lactozei din lapte

Lactoza – dizaharid cu caracter reducator, 4-6% din laptele de vacă şi 2-3% din laptele uman .

Concentraţia lactozei poate fi determinată prin orice metodă caracteristică pentru zaharuri reducătoare, după deproteinizarea laptelui.

În cazul acestui experiment, se realizează deproteinizarea laptelui cu o soluţie de wolframat de sodiu, dozarea efectivă realizându-se prin metoda Nelson. În cazul acestei metode, ionii de Cu (II) sunt reduşi la ioni de Cu (I), care la rândul lor reduc acidul fosfomolibdenic la un produs de reacţie albastru.

Reactivi:reactiv alcalin de cupru; reactiv fosfomolibdenic;soluţie 10% de wolframat de sodiu;soluţie M/3 de H2SO4;soluţie stoc de lactoză 1%.Densităţile optice fiind proporţionale cu concentraţiile este valabilă relaţia:

D.O.proba 1/ D.O.proba 2 = C1/C2 , unde C1 este concentraţia lactozei din 0,01 ml lapte, iar C2 este concentraţia lactozei din standard (0,6 mg).

Concentraţia lactozei din lapte, exprimă în g/100 ml este dată de relaţia:

 (D.O.proba 1/ D.O.proba 2) X ( 0,6/1000) X (100/0,01)

Dozarea lipidelor serice totale

Metoda Zolner-Kirsch care sta la baza acestei determinari,consta in reactia de culoare pe care o dau dublele legaturi din straturile lipoizolor plasmatici cu reactivul unic vanilina acid-fosforic( reactia sulfofosfo vaniliniei).Rezulta un compus roz care se determina spectrofotometric la 530nm.

Reactivi:acid sulfuric concentrat,reactiv de culoare,solutie standard pt lipide ( triolina in cloroform cu concentratie 760 mg %) coresp la 1000mg lipide/100ml.

Standardul se păstrează la congelator ,deoarece cloroformul se evapora rapid ceea ce determina concentratia solutiei standard. Concentratie de 760 mg % triolina produce o reactie de culoare de aceeasi intensitate ca si cea data de lipidele serice in concentratie de 1000mg%.Astfel,valoarea standardului luat in calcul va fi de 1000 mg% in loc de 760mg %,cat este concentratia de triolina din solutia considerata standard.

Dozarea vitaminei E din uleiul de măsline

Vitamina E se oxidează în prezența clorurii ferice,iar ionii feroși rezultați reacționează cu orto-fenantrolina rezultând un compus roșu cu absorbanță maximă la 510nm.

Reactivi:sol de orto-fenantrolina 0,12 %,in alcool etilic absolut;n-Heptan;solutie de cloruca ferica anhidra 0,12% in alcool etilic absolut;acetat de vitamina E standard 1000ug/ml in n-heptan.

Dozarea activitatii glutamat piruvat transaminazei ( GPT)

Enzima glutamat piruvat transaminazei are denumirea știițifică L-alanin:2 oxoglutarat aminotransferaza și catalizeaza reactia:

Alanina+ 2 oxoglutarat=-= piruvat+glutamat

Și se găsește alaturi de GOT in toate tesuturile procariotelor si eucariotelor.Aceste enzime au o deosebita imp in organism facand legatura dintre metabolismul

glucidelor,lipidelor( prin intermediul cetoacizilor) si metabolismul proteic( prin intermediul aminoacizilor).