Data ______ Lucrarea de laborator nr. 4

Subiectul: FIZIOLOGIA MICROORGANISMELOR. METODA BACTERIOLOGICĂ

DE DIAGNOSTIC.

Abilități :

Caracterizarea compoziției chimice a celulei microbiene.

Clasificarea microorganismelor după tipul de nutriție. Factorii de creștere. Transportul

substanțelor nutritive.

Identificarea tipurilor de respirație la microorganisme.

Determinarea rolului biologic al enzimelor și aplicarea practică.

Enumerarea etapelor de multiplicare a microorganismelor.

Aplicarea practică a pigmentogenei şi aromat genezei bacteriilor.

Materiale şi utilaje: medii de cultură, colonii R,S în cutii Petri, eprubete; diverse produse

alimentare (brânzeturi sărate, lactate, borcane cu dulceață, vin)

Sarcina I Caracterizează compoziția chimică , nutriția , respirația , tipul de enzime

a celulei microbiene.

Sarcina II. Pentru cultivarea microorganismelor din produsele patologice recoltate sunt

necesare substraturi deosebite, numite medii de cultură.

a) explică cerințele fată de mediile de cultură:

1. 2.

3. 4.

b) Identifică clasificarea mediilor de cultură și finalizează scopul utilizării

Fiziologia microorganisme

lor

Compoziția chimică

Respirația microorganis

melor

Enzimele

Nutriția microorganis

melor

Multiplicarea bacteriilor Pigmenți,

substanțe aromatizante

Clasificarea mediilor după scopul utilizării Exemple

Medii

uzuale

pe care se dezvolta majoritatea germenilor

patogeni aerobi si anaerobi;

Medii

speciale

destinate izolării, cultivării și cercetării

însușirilor biologice ale anumitor specii

bacteriene;

medii cu ser, sânge Pasteurella,

Corynebacterium

medii cu glicerina, cu cartof, cu ou

Mycobacterium

c) Determină procesele de transport a substanțelor nutritive Abia în 1952 oamenii de știință

au putut observa complexitatea membranelor celulare,

folosindu-se de microscopul electronic, care „privește” mult mai adânc decât un microscop

fotonic. Vorbim astăzi despre cel mai cunoscut rol al membranei: transportul.

Proba: În paharul Berzelius pe centru cu

membrană semipermeabilă pentru apă, se

introduc soluții cu osmolarități diferite:

izotonic, hipotonică.

Cantitatea unei soluții (după caz) va prevala

față de cealaltă. Atingerea stării de echilibru

osmotic este asociată cu modificarea

volumelor celor doua soluții. In acest caz,

gradientul de presiune osmotica asigura

difuziunea neta a apei în sensul gradientului

sau de concentrație

d) Identifică tipurile de transport a

substanțelor nutritive în celula bacteriană

Sarcina III. Însămânțează prelevatele pe

medii de cultură conform metodelor

descrise. a) Epuizarea semicantitativă a inocuului pe suprafața plăcilor Petri.

Medii de

îmbogăți

re

conțin substanțe care stimulează

dezvoltarea unor germeni patogeni:

medii hiperclorurate (tip Chapman)

Stafilococi;

mediul Kauffmann-Muller enterobacterii;

Medii

selective

favorizează, prin compoziția lor chimic,

dezvoltarea anumitor germeni de interes,

inhibând în același timp dezvoltarea altora,

prezente în număr redus

mediul Istrati-Meitert E.coli, Shigella,

Salmonella;

mediul Lowenstein-Jensen mycobacterii;

mediul Czapek, Sabouraud ciuperci.

mediul Muller Hinton pentru

antibiograme

Medii

diferenți

ale

permit creșterea diferențiată a unor specii

microbiene sau pun în evident anumite

particularități metabolice cu semnificație

diagnostic:

fenomene proteolitice, zaharolitice,

oxidoreductoare;

diferențierea speciilor lactozo-pozitive;

detectarea formării de H2S;

producerea de indol etc.

Mediul Hiss

Medii de

transport

_______________________________

_______________________________

________________________________

1. Placa Petri cu mediu de

cultură se menține circa 30

secunde la 370 C cu capacul

întredeschis pentru evaporarea

condensului.

2. Cu mâna stângă se

întredeschide capacul, cu mâna

dreaptă se ține ansa, ca un

creion, oblic pe suprafața

mediului şi se plimbă ușor,

pentru a evita zgârierea acestuia.

3. Inocuul este dispersat în

patru cadrane, descriind cu ansa

striuri conform imaginei, în

ultimele cadrane se obțin colonii

izolate după incubare.

b) Însămânțarea coloanei prin înțepare, indicat pentru

testarea mobilității sau conservare. se încarcă firul cu

inocul și se înțeapă central coloana de agar nutritiv aproape

de fundul tubului. La testarea mobilității se retrage pe

același traiect.

c) Însămânțarea pantei prin striuri în ”S”

Indicat pentru testarea activității biochimice. Se încarcă

firul cu inocul, se înțeapă coloana, se retrage și pe pantă se

însămânțează prin mișcări ”S”.

e) Însămânțarea în medii lichide se face direct cu seringa

de prelevare, cu pipeta, ansa încărcată cu prelevat.

A. Înclină tubul și descarcă ansa pe peretele tubului cum

indică figura.

B. Când readuci tubul la verticală, inoculul ajunge submers

și difuzează în mediu.

d) Incubarea culturilor

constă în menținerea mediilor însămânțate în condițiile

necesare dezvoltării (structura termostatului).

Sarcina IV. Identifică tipul de respirație la

microorganisme. Descrie principiul construcției a aerostatului (GasPacul) şi

asigurarea tipului de respirație:

______________________________________________________

______________________________________________________

______________________________________________________

În dependență de necesitatea microorganismelor în oxigenul liber

se subîmpart:

1. ______________________________ 3. __________________________________

2. ______________________________ 4. __________________________________

Sarcina V. Determină rolul biologic al enzimelor și aplicarea practică.

(din imagine)

(produsele alimentare)

Bifează enzimele agresive, de patogenitate

hialuronidaza izomeraza dezoxiribonucleaza liaza oxireductaza

neurominidaza hidrolaza Beta lactamaza ligaza transferaza

Activitatea fermenților depinde de următorii factori:

_________________________________________________________________________

_________________________________________________________________________

Sarcina VI. Aplicarea practică a pigmentogenei şi aromat genezei bacteriilor.

În două eprubete cu conținut de apă și alcool descărcați ansa încărcată din culturile

demonstrate. Etalează, determină solubilitatea pigmenților, argumentează.

__________________________________________________________________________

__________________________________________________________________________

Sarcina VII . Descrie proprietățile culturale ale microorganismelor (macroscopic).

a) Bifează trăsăturile prezente din tabel conform aspectului coloniei demonstrate în laborator.

Forma punctiformă circulară filamentoasă neregulată dendritică lenticulară

Relief plat convex bombat acuminat ombilicat papilat

Marginea întregi ondulate lobate erodate filamentoase ondulat

invazive

Sarcina VIII. Realizează testul final

Concluzie