Post on 04-Jun-2018
8/14/2019 Transferul Genelor Prin Intermediul Vectorilor Biologici Toma Rodica
1/16
UNIVERSITATEA DE TIINE AGRONOMICE I MEDICIN VETERINAR
Toma Rodica Elena
Bucureti, 2013
Transferul genelor prin intermediulvectorilor biologici
8/14/2019 Transferul Genelor Prin Intermediul Vectorilor Biologici Toma Rodica
2/16
Transferul genelor prin intermediul vectorilor biologici se
realizeaza prin:
sistemul Agrobacter ium;
infiltrarea sub vacuum;
virusurile.
8/14/2019 Transferul Genelor Prin Intermediul Vectorilor Biologici Toma Rodica
3/16
Transformarea mediat de
Agrobacterium
Agrobacterium tumefaciens
http://www.ppws.vt.edu/~sforza/prokaryote/agrobacterium1.jpg8/14/2019 Transferul Genelor Prin Intermediul Vectorilor Biologici Toma Rodica
4/16
Evenimentele n care sunt
implicate bacteriile
Perceperea semnalelor moleculare emise de
celulele rnite
Inducerea expresiei genelor de virulen
Procesarea catenei T de la nivelul plasmidei Ti
Exportul catenei T i al proteinelor de virulen
(VIR) n celulele vegetale
8/14/2019 Transferul Genelor Prin Intermediul Vectorilor Biologici Toma Rodica
5/16
Ataarea bacteriilor
Transferul catenei T i al
proteinelor VIR
Transportul i
direcionarea complexului
T, prin citoplasm, spre
nucleu
Integrarea ADN T n
nucleu
8/14/2019 Transferul Genelor Prin Intermediul Vectorilor Biologici Toma Rodica
6/16
Imersia materialului vegetal ntr-o suspensie
bacterian
Cocultura pe medii artificiale in vitro
Transferul pe medii cu antibiotice pentrueliminarea bacteriilor i selecia celulelor
transformate
Metoda
8/14/2019 Transferul Genelor Prin Intermediul Vectorilor Biologici Toma Rodica
7/16
Transformarea mediat de Agrobacterium
asistat de sonicare(SAAT)
Durata sonicrii este
controlat de un timer
(cronometru) digital
electronic
Poate fi folosit orice timer
atta timp ct poate fi
programat la 0.1
secunde.
8/14/2019 Transferul Genelor Prin Intermediul Vectorilor Biologici Toma Rodica
8/16
Factorii care favorizeaz transformarea
Virulena tulpinilor bacteriene
Virulena poate fi stimulat prin utilizarea
acetosiringonei, a unor compui nrudii sau prin
rnirea prealabil a esuturilor vegetale ce trebuie
inoculate (ultrasunete, infiltrare, sonicare)
Sensibilitatea esutului vegetal la inoculareGenotipul plantei
La monocotiledonate au fost folosite plasmide
supervirulente cu mai multe copii ale genelor VIR
8/14/2019 Transferul Genelor Prin Intermediul Vectorilor Biologici Toma Rodica
9/16
Transformare in planta
LaArabidopsis,pentru transformarea
eficient cuAgrobacterium a fost folosit
infiltrarea vacuumi imersia floral
Factorii cei mai importani au fost
sntatea plantelor i stadiul de dezvoltare
al florilor
8/14/2019 Transferul Genelor Prin Intermediul Vectorilor Biologici Toma Rodica
10/16
Florile plantelor de Arabidopsissntoase au fost introdusentr-o suspensie de bacteriiconinut ntr-o pung deplastic.
Prin presarea uoar a prilorlaterale ale pungii cu o mn,bacteria a fost distribuit petoat planta, inclusiv pe lstariiflorali foarte tineri
Plantele au fost scoase dinpung dup zece secunde ipstrate n condiii deiluminare redus i umiditatemare.
Plantele deArabidopsis folosite
pentru transformare prin imersia
florilor
8/14/2019 Transferul Genelor Prin Intermediul Vectorilor Biologici Toma Rodica
11/16
Seminele recoltate lamaturitate au fost semnate,iar plantele transgenice au fostselecionate prin stropire cuerbicidul BASTA 0.1%
Plantele au fost stropite la osptmn dup rsrire i,apoi, la interval de dou zile,de nc patru ori
Plantele transgenice aucontinuat creterea dupaplicarea erbicidului n timp ceplantele netransformate aumurit dup dou sptmni
Plantele care supravieuiesc dup
dou sptmni de selecie cu
BASTA
8/14/2019 Transferul Genelor Prin Intermediul Vectorilor Biologici Toma Rodica
12/16
Organogeneza PMG de cpun in Bioreactoare cu Imersie Temporar.A: Vasul TIB (RITA, Cirad, France) are dou compartimente .npartea inferioar se afl mediul, iarn partea superioar, pe un suportde polysulfone foam, este amplasat materialul vegetal B:Bioreactoarelen camera de cultur conectate la sistemul automat de
introducere a aerului sub presiune Aerul sub presiunempingemediul imersionnd materialul vegetal. Presiunea se scade printr-unalt filtru din capacul containerului, simultan aerisindu-seicontainerul.
8/14/2019 Transferul Genelor Prin Intermediul Vectorilor Biologici Toma Rodica
13/16
8/14/2019 Transferul Genelor Prin Intermediul Vectorilor Biologici Toma Rodica
14/16
Transformarea mediat de virusuri
Utilizarea vectorilor virali pentru transformarea
plantelor, n ciuda numeroaselor eforturi
experimentale, nu a adus rezultate
spectaculoase. Dei, n 1984 a fost posibiltransferul unei gene de rezistena la antibiotic cu
ajutorul unui virus ADN (Brisson i colab., 1984),
cercetrile ulterioare au demonstrat c genomul
viral nu poate accepta i transfera fragmentemai lungi de ADN strin.
8/14/2019 Transferul Genelor Prin Intermediul Vectorilor Biologici Toma Rodica
15/16
Descoperirea faptului c virusurile ARN pot genera
ADNc prin transcripie invers a generat sperena c,mult mai numeroasele virusuri ARN ar putea fi utilizateca vectori de gene pentru celula vegetal. Din pcate,ns, s-au ntmpinat alte dificulti. ADNc viral nu se
integreaz n genomul vegetal iar meristemele,
principala surs de celule totipotente, nu sunt infectatede virusuri. De aceea, vectorii virali sunt mai rar utilizain experimentele de transformare genetic a plantelor.
8/14/2019 Transferul Genelor Prin Intermediul Vectorilor Biologici Toma Rodica
16/16
Va multumesc!