Post on 05-Feb-2018
7/21/2019 Prezentare Elisa Pcr654
1/17
Tehnica ELISA
Enzyme
Linked
Immuno
Sorbent
Assay
Biochimie Medicina dentara
7/21/2019 Prezentare Elisa Pcr654
2/17
Ce este ELISA?
Tipuri
Aplicatii
Principiu
ELISA
Biochimie Medicina dentara
7/21/2019 Prezentare Elisa Pcr654
3/17
ELISA
Biochimie Medicina dentara
Ce este?Evaluarea prezentei si concentratiei anticorpilor siantigenilor dintro proba
Primele studii au !ost !acute in "#$" !olosita pentruscreeningul %I&
' tehnica biochimica !olosita in special in imunologie
Primul si cel mai comun test !olosit pentru detectareaunui patogen dintro proba
Avanta(e sensitiva )*+*""*ng,ml- cantitativa reproductibila !ormat de kit
7/21/2019 Prezentare Elisa Pcr654
4/17
ELISA
Biochimie Medicina dentara
Tipuri ELISA Calitativa rezultatele sunt pozitive sau negative
ELISA Cantitativa densitatea optica a probei este comparata
cu un standard
ELISA indirecta competitiva sand.ich )directa-
7/21/2019 Prezentare Elisa Pcr654
5/17
ELISA
Biochimie Medicina dentara
Aplicatii Evaluarea cantitativa,calitativa a anticorpilor si antigenilordintro proba
/edicina0 metoda de diagnostic %I&1 holera1 bolivenerice1 gripa aviara sau porcina1 hormoni )sarcina-
Industria alimentara0 detectarea alergenilor din mancarelapte1 alune1 oua
To2icologie0 detectarea drogurilor
Cercetare
7/21/2019 Prezentare Elisa Pcr654
6/17
ELISA
Biochimie Medicina dentara
Principiu Ce este un antigen?Ce este un anticorp?
Anticorp
Antigen
Epitop
Enzymelinked immunosorbent assay0 numele sugereaza
3 componente Anticorp permite detectia analitului de interes 4aza solida suportul unde are loc adsorbtia Enzima determina schimbarea de culoaresemn
7/21/2019 Prezentare Elisa Pcr654
7/17
ELISA
Biochimie Medicina dentara
Primul anticorp
Antigenul
Al doilea anticorpcon(ugat cu enzima
ELISAsand.ichdirect
Principiu
5
"
3
7/21/2019 Prezentare Elisa Pcr654
8/17
ELISA
Biochimie Medicina dentara
Principiu
substrat
produs
standard
proba
7/21/2019 Prezentare Elisa Pcr654
9/17
Tehnica PC6
Polymerase Chain 6eaction
Biochimie Medicina dentara
7/21/2019 Prezentare Elisa Pcr654
10/17
PC6
Ce este PC6?
Tipuri
Aplicatii
Principiu
Biochimie Medicina dentara
7/21/2019 Prezentare Elisa Pcr654
11/17
PC6
Ce este?
Biochimie Medicina dentara
Polymerase Chain 6eaction )6eactia in lant apolimerazei-
/ullis 7 4aloona 8 Specific synthesis of DNA invitro via a polymerase-catalyzed chain reaction1"#9$
/ullis0 Premiul :obel1 Chimie1 "##3
Ampli!icarea cu a(utorul unei enzime )A;:polimeraza- a numary /ullis
7/21/2019 Prezentare Elisa Pcr654
12/17
PC6
Tipuri
Biochimie Medicina dentara
E2ista multe variatii ale acestei tehnici0 long PC61 late PC6 in situ PC61 colony PC61 single cell PC6
Cele mai !olosite0
standard PC6 6TPC6 ) realtime-
7/21/2019 Prezentare Elisa Pcr654
13/17
PC6
Aplicatii
Biochimie Medicina dentara
Testarea unor mutatii )e2+0 !ibroza chistica1 gene tumorale-
Testare prenatala )si screening preimplantare-
In!ectii virale )%I&-1 bacteriene )>-
Teste de histocompatibilitate
/edicina legala
Teste de paternitate
Identi!icarea de persoane
Cladistica
clade
7/21/2019 Prezentare Elisa Pcr654
14/17
PC6
Principiu
Biochimie Medicina dentara
/ateriale
A;: de ampli!icat0 Sange1 Sperma1 Par1 Periuta dedinti1 Insecte )in chilhlimbar-1 /umii1 Amprente1 @rina
Primeri )oligonucleotide1 amplimeri- 0 5*3* dedezo2iribonucleotide complementare e2tremitatilor
B sau 3B ale !ragmentului de ampli!icat
A;:polimeraza 0 enzima care catalizeazapolimerizarea dT:P in catene A;: )elongareaprimerilor-
d:TP )dezo2iribonucleotid tri!os!ati-
Solutie tampon
Colectare probe A;:
7/21/2019 Prezentare Elisa Pcr654
15/17
PC6
Principiu
Biochimie Medicina dentara
Etapele PC6
;enaturarea A;:ului dublu catenar
Cuplarea primerilor de A;:ul simplucatenar
E2tensia primerilor
7/21/2019 Prezentare Elisa Pcr654
16/17
PC6
Principiu
Biochimie Medicina dentara
;enaturarea A;:
##9 DC1 5*3* de secundeA;:ul este des!asurat in doua
lanturi A;: simplucatenare
complementare
Cuplarea primerilor
* DC1 5** de secunde
Lant dublucatenar hibrid 8primeri si A;: de ampli!icat
E2tensia primerilor
A;:polimeraza0 Se leaga delantul hibrid FCitesteGsecven=a lantului A;:tintaHAlungeste primerii prinadaugarea de d:TP1 pe bazaregulii complementaritatii
7/21/2019 Prezentare Elisa Pcr654
17/17
PC6
Principiu
Biochimie Medicina dentara
Ampli!icarea
/0 dimensiuni cunoscute
"0 J"9* bp50 J9** bp30 nu sa ampli!icat0 J9** bp0 benzi multiple
&izualizare produsi de ampli!icare