Proiectul ADER 6.2.1. Studii privind efectul nutrienților/contaminanților din hrana suinelor
asupra funcțiilor de absorbție/barieră imună a tractusului gastro-intestinal; dezvoltarea de noi strategii nutriționale în vederea
îmbunătățirii statusului imun
Faza 3/2017
Scopul proiectului ADER 6.2.1.:
Dezvoltarea prin cercetare fundamentala si aplicativa a unor solutii
nutritionale bazate pe utilizarea de subproduse/reziduuri vinicole bogate in
nutrienți bioactivi care pot fi asimilate ca noi surse furajere care să
îmbunatățească statusul imun și procesele de absorbție intestinală la purcei
după înțărcare, performatele de spor si consum de hrana, precum si sa
contracareze actiunea unor contaminanti din furaje si nutreturi combinate
Etapa a 3-a/2017: Investigarea efectelor unor retete de nutret combinat continând
faina de tescovina asupra performantelor si a unor biomarkeri sanguini, intestinali
si hepatici importanti pentru purcei in perioada post intarcare (experimentare in
vivo-purcei dupa intarcare- Experiment in vivo 2).
Parteneri implicați:
Coordonator proiect (CO): -INCDBNA-IBNA Balotesti,
Partener 1 (P1): – ICA R&D SRL)
Activitati realizateActivitati realizate (I)(I)
• Activitatea 3.1. Conditionarea si pregatirea (teste macinare) tescovinei; fabricare retete nutret combinat experimentale
-Determinarea compozitiei chimice a tescovinei macinate
-Extractia de polifenoli si determinarea continutului fenolic total al extractului de tescovina
-Determinarea activitatii antioxidante (antiradicalica) a extractului de tescovina
-Determinarea compozitiei si concentratiei in polifenoli a tescovinei macinate, prin metoda
HPLC cuplata cu spectroscopie de masa (HPLC –MS)
-Determinarea compozitiei recepturilor de nutret combinat
-Determinarea compozitiei si concentratiei in polifenoli a furajelor experimentale, prin
metoda HPLC cuplata cu spectroscopie de masa (HPLC –MS)
Item %
Substanta uscata (SU) 87.63
Proteina bruta (PB) 10.32
Extract eteric (EE) 5.14
Celuloza bruta (CB) 25.01
NDF (neutral detergent fiber) 58.01
ADF (acid detergent fiber) 52.26
Cenusa (CEN) 5.75
Energia metabolizabila (EM,
kcal/kg)
1912
Compozitia chimica a tescovinei macinate (g/100 g)
Item %
Polifenoli totali (mgGAE/100g) 3619.80
DPPH (µM TRE/g proba) 27.05
Continutul in polifenoli si activitatea antiradicala a
extractului de tescovina
FAINA DE TESCOVINA CARACTERIZARE (I)
Cantitatile de compusi fenolici din faina de tescovina, exprimate in mg/100g
0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 20 22 24 26
10
20
30
40
50
Ab
so
rba
nce
(m
AU
)
Retention time (min)
12
4
5
13
18
Cromatograma extractului de tescovina
uscata si macinata (absorbtie la 280 nm).
FAINA DE TESCOVINA CARACTERIZARE (II)
Nr crt. Analit (clasa de polifenoli) Proba (tescovina uscata)
1 Gallic acid-glucoside 2,223
2 Gallic acid 2,709
3 Resveratrol -
4 Procyanidin trimer 10.62
5 Procyanidin trimer 10.16
6 Catechin 11.63
7 Procyanidin dimer 0.0
8 Epicatechin 51.96
9 Gallocatechin 6.90
10 Epigallocatechin 9.20
11 Procyanidin dimer 22.79
12 Malvidin 3-O-glucoside 6.75
13 Malvidin 3-O-(6’’- coumaroyl –glucoside) 7.44
14 Isorhamnetin 3-O-glucoside 0.0
15 Delfinidin 16,73
16 Quercetin 3-β-D-glucozida 1,10
17 Quercetin 5,04
18 Acid elagic 5,13
19 Miricetin 1,10
0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 20 22 24 26
0
50
100
150
200
250
300
350
Ab
so
rba
nce
(m
AU
)
Rtention time (min)
220
21
22
23
24
25
2627
28
0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 20 22 24 26
0
50
100
150
200
250
300
350
Ab
so
rba
nce
(m
AU
)
Retention time (min)
4132
20
21
22
23
24
25
2627
28
Cromatograma extractului de furaj Control (A) si cel cu adaos (5%) de faina de tescovina (B) (absorbtie la 280 nm).
A B
FURAJE EXPERIMENTALE – CARACTERIZARE (I)
Nr crt. Analit (clasa de polifenoli) Proba
Furaj cu 5% faina de tescovina Furaj Control
1 Gallic acid-glucoside - -
2 Gallic acid 4,611 4,601
3 Resveratrol - -
4 Procyanidin trimer 2,118 -
5 Procyanidin dimer 1,803 -
6 Ferulic acid derivate (Ferulic ac dehydrotrimer) 12,919 12,917
7 Caffeoylquinic acid 43,983 43,973
8 Daidzin (Daidzein-7-O-glucoside) 14,239 14,231
9 p-Coumaroylquinic acid 24,566 24,556
10 6”-O-Malonyldaidzin 11,882 11,879
11 Genistin( Genistein-7-O-glucoside) 16,224 16,214
12 Ferulic acid 15,331 15,321
13 6”-O-Malonylgenistin 17,266 17,252
14 Dicaffeoylquinic acid 18,965 18,960
Cantitatile de compusi fenolici din furajele experimentale, exprimate in mg/100g
FURAJE EXPERIMENTALE – CARACTERIZARE (II)
Activitatea 3.2. Evaluarea efectelor nutreturilor combinate cu tescovina (analize zootehnice,
biochimice si imunologice).
-parteneri implicați: CO, P1
Activitati desfasurate:
• -pregatire loturi de animale
• -supravegherea desfasurarii experimentului in vivo
• -recoltarea de probe biologice (sange si organe)
• -evaluare parametri zootehnici, biochimici si imunologici:
- Analiza biochimica a markerilor biochimici plasmatici
- Analiza parametrilor plasmatici ai raspunsului imun umoral (subclasele de imunoglobuline
- Masurarea activitatii principalelor enzime antioxidante din probele de organe
- Evaluarea efectului NC-TSV asupra inmagazinarii de polifenoli la nivel plasmatic si in diferite organe (ficat, splina)
- Evaluarea efectului NC-TSV asupra concentratiilor de elemente minerale din ficat, splina
Activitati realizateActivitati realizate (II)(II)
Experiment in vivo (biobaza INCDBNA Balotesti)
2 loturi de purcei aflati in
perioada post-intarcare :
TSS
Parametri masurati: Performantele animale (CO)
Markeri biochimici plasmatici (CO)
Molecule cu rol in raspunsul inflamator general (CO)
Markeri cu rol in raspunsul inflamator local intestinal (CO)
Enzime antioxidante (CO)
Acumularea de polfenoli in plasma si in tesuturi (CP)
Acumularea de oligoelemente in tesuturi (P1)
control
30 zile
Efectele nutretului combinat cu adaos de faina de tescovina asupra performantelor purceilor la intarcare
Evolutia greutatii medii (kg) a animalelor luate in studiu evaluata la
inceputul experimentului (greutatea initiala), la jumatatea perioadei
experimentale (greutatea intermediara) si la sfarsitul experimentului
(greutatea finala)
Lot
experimental
spor mediu zilnic (kg)
valoare medie ± SEM
spor total (kg)
valoare medie ± SEM
lot NC-Control 0,587 ± 0,033 20,556 ± 1,171
lot NC-T 0,659 ± 0,025 22,100 ± 1,260
Sporul mediu zilnic (kg/zi) si sporul total (kg) in cadrul celor doua
loturi luate in studiu.
NC-T
Lot experimental Glicemie
(mg/dL)*
Colesterol
(mg/dL)*
Trigliceride
(mg/dL)*
NC- Control 89,1 ± 3,2 83,3 ± 1,4 62,9 ± 3,8
NC-T 83,9 ± 5,2 85,6 ± 1,6 48,1 ± 3,4
t-test vs NC-Control 0,421 0,299 0,011
Efectele NC-T asupra profilului glucidic si lipidic
plasmatic al purceilor la intarcare
Analiza efectelor NC cu adaos de faina de tescovina (5%)
asupra starii generale de sanatate a animalelor
analize biochimice
Lot experimental Proteina totala
(g/dL)*
Albumina
(g/dL)*
Bilirubina totala
(mg/dL)*
Creatinina
(mg/dL)*
Uree
(mg/dL)*
NC- Control 5,1 ± 0,1 3,9 ± 0,0 0,1 ± 0,0 0,9 ± 0,0 21,0 ± 1,3
NC-TSV 5,2 ± 0,1 3,9 ± 0,0 0,1 ± 0,0 1,0 ± 0,0 19,1 ± 1,6
t-test vs NC-Control 0,635 0,419 0,628 0,214 0,381
Efectele NC-T asupra profilului proteinelor plasmatice in cazul purceilor la intarcare
Lot experimental Fosfor
(mg/dL)
Calciu
(mg/dL)
Magneziu
(mg/dL)
Fier
(µg/dL)
NC- Control 8,6 ± 0,1 8,9 ± 0,3 1,9 ± 0,0 130,2 ± 8,6
NC-T 8,6 ± 0,1 9,2 ± 0,3 1,4 ± 0,0 127,3 ± 3,0
t-test vs NC-Control 0,717 0,617 0,754 0,761
Efectele NC-T asupra parametrilor plasmatici ai
metabolismului mineral in cazul purceilor la intarcare
Lot experimental ALAT (TGP)
(U/L)*
ASAT (TGO)
(U/L)*
Fosfataza
alcalina (U/L)*
Gamma- glutamil
trasferaza (U/L)*
LDH
(U/L)* Creatin kinaza (U/L)*
NC- Control 52,3 ± 2,5 46,8 ± 2,7 138,0 ± 8,3 26,1 ± 2,2 1324,8 ± 63,2 2034,2 ± 382,5
NC-T 56,5 ± 4,1 28,7 ± 3,0 140,4 ± 5,1 26,8 ± 2,4 1407,1 ± 81,7 1706,3 ± 310,3
t-test vs NC-Control 0,394 0,000 0,807 0,821 0,437 0,515
Efectele NC-T asupra profilului enzimelor plasmatice la purceii la intarcare
Efectele NC- T asupra raspunsului imun prin anticorpi in cazul
purceilor aflati in perioada post-intarcare (I)
Efectul NC- T asupra sintezei de IgA, IgM si IgG plasmatice la purceii la intarcare
Loturi
IgA
(mg/mL)
IgM
(mg/mL)
IgG
(mg/mL)
NC-control 1,60 ± 0,17 2,87 ± 0,26 19,35±1,15
NC-T 1,64 ± 0,18 2,79 ± 0,33 17,87±1,06
Efectele NC- T asupra raspunsului inflamator in cazul
purceilor aflati in perioada post-intarcare (I)
0
5000
10000
15000
duoden colon
Co
nc
en
tra
tie
IL
-8 (
pg
/ml)
NC- Control
NC- TSV
0
100
200
300
400
500
600
700
duoden colon
Co
nc
en
tra
tie T
NF
-α (
pg
/ml)
NC- Control
NC- TSV
0
200
400
600
800
1000
1200
1400
duoden colon
IL-1
be
ta (
pg/
mL)
NC-Control
NC-T
0
500
1000
1500
2000
2500
duoden colon
IL-6
(p
g/m
L)
NC-Control
NC-T
NC-T NC-T
Efectele NC-T asupra activitatii enzimelor antioxidante in ficat si splina
Efectele NC-T asupra peroxidarii lipidice la nivel de organ
Lot experimental
CATALAZA
activitate enzimatica
(µmol/min/g tesut)
GPx
activitate enzimatica
(µmol/min/g tesut)
SOD
Activitate enzimatica
(U/g tesut)
duoden Ficat splina duoden ficat Splina duoden ficat splina
NC- Control 2,12±0,3 464,4 ± 21,6 6,2 ± 0,1 1,18±0,2 15,1 ± 0,6 3,9 ± 0,4 437,8±5,6 3186,4 ± 80,1 1920,2 ± 27,2
NC-T 2,36±0,4 517,6 ± 11,5 7,2 ± 0,2 1,28±0,1 15,1 ± 0,9 4,1 ± 0,3 479,4±6,3 3620,0 ± 66,2 2447,9 ± 53,7
t-test vs NC-
Control NS NS 0,042 NS NS NS < 0.006 0,019 < 0.001
Efectul NC- T asupra capacitatii totale antioxidante in tesuturi
0
100
200
300
400
500
Co
nc
en
tra
tie
pla
sm
ati
ca p
oli
fen
oli
to
tali
(m
g/L
GA
E)
NC- Control
NC- TSV
0
100
200
300
400
500
600
Ficat Splina
Co
nc
en
tra
tie p
olife
no
li t
ota
li i
n
org
an
e (
mg
/L
GA
E)
Lot Control
Lot TSV
Efectul NC- T asupra concentratiei polifenolilor totali la purceii
aflati in perioada post-intarcare in plasma (A), respectiv organe
(ficat si splina –B)
A B NC-T
NC- Control
NC-T
Efectele NC-T asupra concentratiilor de elemente minerale
din ficat, splina
0
20
40
60
80
100
Ficat Splina
Co
nc
en
tra
tie
Fie
r (m
g/k
g)
NC- Control
NC- TSV
0
2
4
6
8
10
Ficat Splina
Co
nc
en
tra
tie
Cu
pru
(m
g/k
g)
NC- Control
NC- TSV
0
10
20
30
40
50
Ficat Splina
Co
nc
en
tra
tie
Zin
c (m
g/k
g)
NC- Control
NC- TSV
NC-T
NC-T
NC-T
Rezultatele obținute în acestă etapa au aratat ca
reziduurile vinicole, respectiv faina de tescovina prin
continutul in compusi bioactivi de tipul polifenolilor este o
sursa alternativa furajera avand capacitatea de a reduce
raspunsul inflamator prin scaderea nivelului moleculelor
pro-inflamatoare si a stresului oxidativ prin cresterea
capacitatii antioxidante totale si a activitatii enzimelor
antioxidante la purcei dupa intarcare.
CONCLUZII
Top Related