LABORATOR 43. METODE DE NSMNARE A MEDIILOR DE CULTUR
nsmnarea reprezint trecerea unei culturi microbiene sub form de inocul, care conine microorganisme, pe un mediu de cultur favorabil dezvoltrii speciei microbiene. Condiia esenial de lucru este asepsia.
n funcie de consistena mediului i de tipul de cultur pe care vrem s o nsmnm, exist mai multe tehnici,: nsmnarea pe medii solide
nsmnarea n medii lichide3.1. nsmnarea pe medii solidea) nsmnarea prin epuizare (fig.3.1)
Mod de lucru: se ncarc ansa sterilizat cu produs
se descarc ansa pe mediul de cultur:
se nsmneaz un prim sector [1]
din primul sector nsmnat se traseaz cteva striuri paralele n sensul acelor de ceasornic [2]
se continu nsmnarea prin striuri paralele [3], terminndu-se printr-un striu n zig-zag [4]
dup fiecare etap se sterilizeaz ansa, fr a se ncrca n produs patologic n ultimul sector bacteriile sunt dispersate, astfel nct dup incubare se vor forma colonii izolate Fig. 3.1. nsmnarea prin epuizare
b) nsmnarea n sector (fig.3.2.)
Mod de lucru:
pe o plac pot fi nsmnate mai multe specii bacteriene (prin nsmnare n sector nu se obin colonii izolate)
se ncarc ansa sterilizat cu produs se descarc ansa pe mediul de cultur sub forma unui sector de cerc
Fig. 3.2.nsmnarea mediilor de cultur n sector
c) nsmnarea prin nepare (fig.3.3)
Mod de lucru: se practic pentru nsmnarea mediilor solide turnate n coloan dreapt
se ncarc ansa de inoculare cu produs se neap mediul n direcie vertical pe o distan de din nlimea coloanei
Fig. 3.3. nsmnarea prin nepare
3.2. nsmnarea n medii lichide
nsmnarea unui mediu lichid cu o cultur microbian dezvoltat n mediu lichid - se realizeaz cu pipeta gradat (pentru un volum fix) i pipeta Pasteur (pentru un volum oarecare) nsmnarea unui mediu lichid cu o cultur microbian dezvoltat pe mediu solid se realizeaz cu ajutorul ansei bacteriene (fig.3.4)Mod de lucru: se recolteaz aseptic o poriune de cultur microbian n bucla ansei
se introduce ansa n mod aseptic n eprubeta cu mediu lichid
se depune materialul pe peretele eprubetei, la nivelul interfeei cu mediul lichid, apoi se spal peretele eprubetei cu cteva picturi din mediul de cultur
se omogenizeaz inoculul cu mediul de cultur prin rsucirea eprubetei ntre palme
pe gtul eprubetei se noteaz numele culturii i data incubrii
se termostateaz la temperatura optim de incubaie de 28- 37 oC
dup inoculare se observ tulburarea mediului de cultur datorit multiplicrii celulelor bacteriene
se obine o cultur bacterian n mediu lichid.
Fig. 3.4. nsmnarea n medii lichide
3.3. Studiul caracterelor morfologice coloniale
Dup obinerea culturilor izolate de microorganisme i apoi a culturilor pure, mediile nutritive introduse n termostat, sunt observate zilnic notndu-se:
- momentul de apariie al coloniilor
- gradul de uniformitate al acestora
- forma coloniilor
3.3.1. Studiul caracterelor morfologice coloniale pe medii solide i lichiden cazul germenilor cu cretere rapid (timp de generaie 20-30 minute) dup 18 ore de incubare la 35-370 C, dintr-o singur bacterie ia natere colonia. La colonii se noteaz:
mrimea
forma: rotunde, stelate etc.
aspectul marginilor: regulate, neregulate, cu prelungiri n cap de meduz.
suprafaa coloniei: bombat, granulat, plat, cu depresiune central, cu ridictur central, sau marginal etc.
aspectul: lucios, mat, mucoid, aspect curgtor uleios, vitros etc.
consistena: vscoas, filant
dac se emulsioneaz uor sau nu n ser fiziologic transparena sau opacitatea coloniei
pigmentarea coloniei
apariia unei zone colorate sau incolore n jurul coloniei
eventual lichefierea mediului
Tipuri de colonii pe medii solide: Colonii tip S (smooth = neted, lucios) (fig.3.5.)
colonii rotunde
margini regulate, bombate
suprafaa neted, translucid
caracteristice pentru germeni patogeni
Fig. 3.5. Colonii tip S
Colonii tip R (rough = rugos, aspru, zbrcit) (fig.3.6)
colonii neregulate
suprafaa plat, rugoas
uscate, mate
aderente de mediu
este caracteristic, n general, bacteriilor nepatogene exist i trei excepii la care forma R caracterizeaz specii patogene: Bacillus anthracis, (fig.3.7) Mycobacterium tuberculosis, Corynebacterium diphtheriae Fig.3.6. Colonii tip R Fig.3.7.Colonii R (Bacillus anthracis) Colonii tip M (mucoid) (fig.3.8) suprafa neted
foarte mari, bombate, foarte lucioase
cu tendin de curgere i de confluare
caracteristice bacteriilor care posed capsul ( Klebsiella)
Fig.3.8. Colonii tip M
Colonii pufoase (fig.3.9) caracteristice mucegaiurilor
reea de filamente (hife) aeriene Fig. 3.9.Colonii pufoase Tipuri de colonii n medii lichide (fig.3.10): tulburarea uniform a mediului: Staphylococcus, Salmonella etc.
depozit grunjos sau nisipos la fundul tubului, mediul rmne clar: Streptococcus spp.
depozit floconos, mediul rmne clar: B. anthracis
mediul prezint vl subire la suprafa: Corynebacterium diphtheriae
membran groas rugoas, plisat la suprafa, restul lichidului limpede: Mycobacterium tuberculosis inel aderent pe pereii tubului: Escherichia coli
pelicul la suprafa, sub aceasta mediul este colorat verde-albastru: Pseudomonas spp.
inel aderent de recipient Escherichia coli
Fig. 3.10. Aspectul culturilor pe medii lichide
Top Related