ASRO

STANDARDUL ROMAN SR EN ISO 11290-1

Aprilie 2000

Indice de calasificare N 01

MICROBIOLOGIA ALIMENTELOR ŞI FURAJELOR

Metodă orizontală pentru detectarea şi numărarea Listeria monocytogenes

Partea 1: Metoda de detecţie

APROBAREAprobat de Directorul General al ASRO la 23 decembrie 1999CORESPONDENŢĂPrezentul standard este identic cu standardul European EN ISO 11290-1:1990, Microbiologia alimentelor şi furajelor. Metodă orizontală pentru detectarea şi numărarea Listeria monocytogenes. Partea 1: Metoda de detecţie.DESCRIPTORI TITProdus agricol, aliment, furaj, analiză microbiologică, detectare, bacterie, listeriaPREAMBUL NATIONALPrezentul standard reprezintă traducerea versiunii engheye a EN ISO 11290-1: 1996.Corespondenţa dintre standardele internationale, la acare se face referire şi pentru care exista standarde române este urmatoarea:ISO 6887:1983Microbiologie – Directive generale pentru prepararea diluţiilor în vederea examenului microbiologicSR ISO 6887:1983 Microbiologie. Directive generale pentru prepararea diluţiilor în vederea examenului microbiologicISO 7218:1996Microbiologia alimentelor şi furajelor – Reguli generale pentru examenele microbiologiceSR ISO 7218:1) in curs de elaborare – Reguli generale pentru examenele microbiologice.

SRANDARD EUROPEAN EN ISO 11290-1

MICROBIOLOGIA ALIMENTELOR ŞI FURAJELOR. Metodă orizontală pentru detectarea şi numărarea Listeria monocytogenes. Partea 1: Metoda de detecţie

Prezentul standard prezintă versiunea română a Standardului European EN ISO 11290-1 :1996. Standardul a fost tradus de ASRO, are acelaşi statut ca şi versiuniile oficiale şi a fost publicat cu permisiunea CEN.Prezentul Standard European a fos adoptat de CEN la 1996 -11-15.Membrii CEN sunt obigaţi săa respecte Regulamentul Intern CEN / CENELEC, care stipulează condiţiile în care prezentului Standard European i se atribuie statutul de standard naţional, făra nici o modificare.Listele actualizate şi referinţele bibliografice referitoare la aceste standarde naţionale pot fi obtinute pe bază de cerere către Secretariatul Central sau orce menbru CEN.Prezentul Standart European exista in trei versiuni oficiale (engleză, franceză, germană). O versiune în orice alta limba, realiyata prin traducere sub responsabilitatea unui membru CEN , în limba national şi notificată ctre Secretariatul Central, are acelaşi statut ca şi versiunile oficiale.Membruii CEN sunt organizaţii nationale de standardizare din : Austria, Belgia, Danemarca, Elveîţia, Finlanda, Germania, Grecia, Irlanda, Islanda, Italia, Luxemburg, Marea Britanie, Norvegia, Olanda, Portugalia, Suedia şi Spania.

CUPRINS Pagina1.Obiect………………………………………...52.Referinte normative………………………...53.Definitii……………………………………….54.Principiu……………………………………..55.Medii de cultura si reactivi…………………66.Aparatura si sticlarie………………………..77.Esantionare………………………………….88.Pregatire esantion pentru analiza…………89.Mod de lucru…………………………………810.Exprimare rezultate………………………..1311.Buletin de analiza………………………….13AnexeA Diagrama modului de lucru………………..14B Compozitie si preparare medii de cultura siReactivi………………………………………….15

 INTRODUCEREDin cauza marii diversitati a alimentelor si furajelor,aceasta metoda orizontala poate sa nu fie aplicabila in toate detaliile ei,anumitor produse pentru care poate fi necesar sa se aplice metode diferite sau specific.Totusi,in toate cazurile,trebuie sa se faca eforturi pentru a se aplica aceasta metoda orizontala,in masura in care este posibil,si sa nu se recurga la derogari decat daca,din motive tehnice,este absolute necesar.

Atunci cand aceasta parte a ISO 11290 va fi revizuita,se va tine seama de toate informatiile disponibile,referitoare la gradul in care a fost aplicata aceasta metoda orizontala si care au fost motivele pentru care au fost necesare derogari de la ea,in cazul anumitor produse.Armonizarea metodelor de analiza nu poate fi facuta imediat si,pentru anumite grupe de produse,exista poate standarde internationale si/sau nationale care nu corespund cu aceasta metoda orizontala.Este de dorit ca,atunci cand aceste standarde vor fi revizuite,ele sa fie armonizate cu aceasta parte a ISO 11290 astef incat singurele abateri de la aceasta metoda orizontala sa fie cele necesare din motive tehnice intemeiate. AVERTIZARE-In scopul protejarii sanatatii personalului de laborator,se recomanda,in mod deosebit,ca lucrarile de detectare a Listeria monocytogenes sa se execute in laboratoare echipate corespunzator,sub supravegherea unui microbiology priceput si sa se acorde atentie tuturor materialelor incubate.In mod deosebit se recomanda ca femeile gravide sa nu manipuleze culture de Listeria monocytogenes.1.OBIECTPrezenta parte ISO 11290 descrie metoda orizontala pentru detectarea Listeria monocytogenes.Exceptand limitarile mentionate in introducere,aceasta parte ISO 11290 se aplica la produsele destinate consumului uman si hranirii animalelor.2.REFERINTE NORMATIVEStandardele urmatoare contin prevederi care,prin referinta din acest text,constituie prevederi ale acestei parti a ISO 11290.In momentul publicarii,editiile indicate erau in vigoare.Toate standardele sunt supuse revizuirii si partile care incheie acorduri bazate pe aceasta parte a ISO 11290 sunt incurajate sa caute posibilitatea aplicarii celor mai recente editii ale standardelor indicate mai jos.

Membrii CEI si ISO detin catalogul standardelor internationale in vigoare.ISO 6887:1983, Microbiology-General guidance for the preparation of dilutions for microbiological examination.ISO 7218:1996, Microbiology of food end animal feeding stuffs-General rules for microbiological examinations.3.DEFINITIILa utilizarea acestei parti a ISO 11290 se aplica urmatoarele definitii:3.1 Listeria monocytogenes:Microorganise care formeaza colinii tipice pe mediile selective solide si care prezinta caracteristicile morfologice,fiziologice si biochimice descries,cand testele se efectueaza in conformitate cu prevederile prezentei parti a ISO 11290.3.2 Detectarea Listeria monocytogenes:Determinarea prezentei sau absentei acestor microorganism intr-o masa sau volum dat de produs, cand testele se executa in conformitate cu prevederile prezentei parti a ISO 11290.4.PRINCIPIU

In cadrul limitelor acestei parti a ISO 11290,detectarea Listeria monocytogenes necesita 4 faze succesive(a se vedea schema din anexa A).NOTA 1-Listeria spp.pot fi in numar mic si insotite deseori de un numar foarte mare de alte genuri de microorganism,de aceea este necesara imbogatirea selective.De asemenea,este necesara detectarea Listeria spp.vatamate sub letal,iar mediile de imbogatire selective primare cu o concentratie redusa de inhibitori,cel putin in parte,aceasta functie.4.1 Imbogatire primara intr-un mediu de imbogatire lichid selective,cu concentratie redusa de agenti selectivi(bullion semi-Fraser).

Insamantarea unui mediu de imbogatire primara selective,care contine un volum de clorura de litiu si jumatate dintr-un volum de acriflavina si acid nalidixic(bullion semi-Fraser),este folosit si ca lichid de dilutie pentru proba de testat(9.1).Incubarea bulionului semi-Fraser insamantat,la 30EC timp de 24 h.

 4.2 Imbogatire secundara intr-un mediu de imbogatire lichid selective,concentratie normal de agenti selective(bullion Fraser)Insamnatarea uni mediu lichid de imbogatire secundara cu concentratie normal(bullion Fraser),cultura obtinuta in faza 4.1Incubarea bulionului Fraser la 35EC sau 37EC ,timp de 48 h.4.3 Strierea si indentificareaDin culturile obtinute in fazele 4.1 si 4.2,se striaza pe suprafata a doua medii solide selective:a)agar Oxfordb)agar PALCAM.Incubarea la 30EC,35EC sau 37EC si examinarea dupa 24h si dupa 48h,daca este necesar,pentru a verifica prezenta coloniilor caracteristice, prezumate a fi Listeria monocytogenes.4.4 ConfirmareaSubcultivarea coloniilor prezumptiv Listreia monocytogenes,obtinute conform 4.3 si cofirmarea lor prin teste morfologice,fiziologice si biochimice adecvate.5 MEDII DE CULTURA SI REACTIVI5.1GeneralitatiPentru practca uzuala de laborator.a se vedea ISO 7218.NOTA2-Din cauza numarului mare de medii de cultura si reactivi,s-a considerat preferabil,pentru claritatea textului sa se prezinte compozitia si prepararea lor in anexa B.5.2 Mediu selective de imbogatire primara:bullion Fraser cu concentratie redusa de agenti selective (bullion semi-Fraser)A se vedea B.15.3 Mediu selective de imbogatire secundara, cu concentratie normal de agenti selective(bullion Fraser).A se vedea B.25.4 Medii solide selective pentru striere

5.4.1 Primul mediu:agar OxfordA se vedea B.35.4.2 Al dilea mediu:agar PALCAMA se vedea B.45.5Mediu de cultura solid:agar cu extract de drojdii,soia,trptona(TSYEA)A se vedea B.5 5.6 Mediu de cultura lichid:bullion cu extract de drojdii,soia,trptona(TSYEB)A se vedea B.65.7 Agar cu sange de oaieA se vedea B.75.8 Bulion penntru utilizarea hidratilor de carbon(ramnoza si xiloza)A se vedea B.85.9 Agar pentru mobilitate(optional)Ase vedea B.95.10 Mediu si tulpini pentru testu CAMP(Christie,Atkins,Munch-Petersen)A se vedea B.105.11 Solutie de peroxide de hydrogenA se vedea B.115.12 Solutie salina tamponata cu fosfati(PBS)A se vedea B .126 APARATURA SI STICLARIEEchipment obisnuit pentru lucrari de microbiologie(a se vedea ISO 7218)si,in special,urmatorul:6.1 Aparate pentru sterilizare uscata(etuva) sau pentru sterilizare umeda(autoclava)A se vedea ISO 72186.2 Etuva pentru uscare sau termostat,capabile sa fie mentinute intre 25E C ± 1E C si 50E C ± 1E C.6.3 Termostate,pentru mentinerea mediilor insamantate,a cutiilor si eprubetelor la urmatoarele nivele termice:a)25E C ± 1E Cb)30E C ± 1E C;sic)35E C ± 1E C sau 37E C ± 1E C.6.4 Baie de apa,capabila sa fie mentinuta la 47E C ± 2E C.6.5 Anse bacteriologice,de platina-iridiu sau nichel-crom,cu diametrul buclei de aproximativ 3 mm sau baghete de sticla pentru etalare say anse de unica folosinta.6.6 pH-metru, capabil sad ea citiri de 0,01 unitati de pH la 25E C sis a masoare cu o acuratete de ± 0,1 unitati de Ph. 6.7 Epeubete sau flacoane,de capacitate adecvata,pentru sterilizarea si pastrarea mediilor de cultura si incubarea mediilor lichide6.8 Cilindri gradati,cu capacitate de 50 ml…1.000 ml,pentru prepararea dilutiilor complete

6.9 Pipete gradate cu scurgere completa,cu capacitati nominale de 1 ml si 10 ml,cu diviziuni de 0,1 ml,respective de 0,5 ml6.10 Cutii Petri,cu diametrul de 90 mm…100 mm6.11 Recipiente,corespunzatoare pentru incubare microaeroba (optional).6.12 Amestec de gze (optional),cu compozitie specifica incubatiei microaerobe:5%...12% CO2,5%...15% O2 si 75% N26.13 Echipament pentru testul de iluminare Henry (optional)Ase vedea anexa C.6.14 Microscop,preferabil cu contrast de faza,lame,lamele7. ESANTIONAREEste important ca laboratorul sa primeasca un esantion cat mai reprezentativ care sa nu fi fost modificat sau schimbat in timpul transportului sau pastrarii.Esantionarea nu face parte din metoda specificata in aceasta parte a ISO 11290.Daca nu exista standard international specific pentru esantionarea produsului respective,se recomanda ca partile implicate sa convina asupra acestui subiect.8.PREGATIRE ESANTION PENTRU ANALIZAEsantionul de examinat se pregateste conform standardului international specific produsului in cauza.Daca nu exista standard international specific,se recomanda ca partile interesate sa convina asupra acestui subiect9. MOD DE LUCRU9.1 Proba de analizat si suspensie initialaA se vedea ISO 6887 si orice standard international specific,adecvat produsului de examinat.Pentru prepararea suspensiei initiale,se foloseste ca lichid de dilutie mediul selectiv de imbogatire primar mentionat la 5.2In general pentru a prepara suspensia initiala se adauga o portiune din esantionul de examinat,de x g sau x ml,la 9 x ml mediu selective de imbogatire primara(5.2),pentru a obtine un raport intre produsul examinat si mediu de 1/10(masa/volum sau volum/volum).9.2 Imbogatie primaraSe incubeaza (6.3 b) suspensia initiala,obtinuta conform 9.1,la 30E C,timp de 24 h ± 2 hNOTA 3-In timpul incubarii poate sa apara o colaborare neagra a mediului9.3 Imbogatire secundara9.3.1 Dupa incubarea suspensiei initiale(imbogatire primara)timp de 24h±2h(9.2),se transfera 0,1ml din cultuura obtinuta la 9.2 (fara ase tine seama de culoarea ei),intr-o eprubeta(6.7) cu 10ml mediu de imbogatirea secundara(bullion Fraser)(5.3).9.3.2 Se incubeaza mediu insamntat(9.3.1),timp de 48h±2h la 35˚C sau 37˚CNOTA 4-Temperatura de incubare a mediului insamntat se allege prin consensul partilor interesate si se mentioneaza in buletinul de analize.9.4Striere si identificare9.4.1 Din cultura obtinuta prin imbogatire primara si incubate timp de 24h±2h la 30˚C(9.2),se ia o portiune cu o ansa bacteriologica sau cu o bagheta de sticla(6.5) si se insamnteaza,prin

striere,suprafata primului mediu selective de striere (agar Oxford)(5.4.1),in asa fel,incat sa se obtina colonii isolateSe procedeaza lafel cu al doilea mediu selective de striere(agar PALCAM)(5.4.2)NOTA 5-Strierea se executa fara a tine seama de culoarea mediului9.4.2 Din mediu de imbogatire secundara,incubat timp de 48h±2h la 35EC sau 37˚C(9.3.2),se repeat procedeul descries la 9.4.1,cu cele doua medii selective de striere.9.4.3 Cutiile Petri cu mediile solide isamntate conform 9.4.1 si 9.4.2 se intorc cu capacul in jos si se introduce in thermostat (6.3),la 30EC,35EC sau 37EC.Cutiile Petri cu agar PALCAM se incubeaza fie in conditii microaerobe,intr-un recipient(6.11)care contine amestecul de gaze (6.11),fiind conditii aerobe.NOTA 6-Incubarea agarului OXFORD la 30˚C este adecvata pentru alimentele contaminate slab cu microflora de asociatie.Pentru produsele contaminate masiv cu microflora de asociatie,este preferabil ca agarul OXFORD sa se incubeze la 35˚C sau la 37˚C ,deoarece Listeria spp. Tinde sa se dezvolte in acelasi timp cu microflora de asociatie.in toate cazurile,temperature de incubare a agarului se stabileste prin acordul partilor interesate si se mentioneaza in buletinul de analiza.9.4.4 Dupa incubare timp de 24h si o prelungire de inca 18h…24h(daca dezvoltarea este slaba sau daca nu se observa nici o colonie dupa 24h de incubare),se examineaza cutiile Petri insamntate (9.4.3),pentru prezenta coloniilor presupuse a fi Listeria spp.9.4.4.1 Agarul OXFORD :coloniile tipice de Listeria spp. Dezvoltarea pe agarul OXFORD dupa o incubare de 24h,sunt mici(1mm),de culoare gri inconjurate de un halou negru.Dupa 48h,coloniile devin mai inchise la culoare,cu posibila tenta verzuie,cu diametrul de 2mm,cu halou negru si centru concave.9.4.4.2 Agarul PALCAM:cutiile Petri incubate microaerob,dupa incubare ,se expun la aer timp de 1h,pentru ca mediu sa recastige culoarea ca rosie-purpurie.Dupa 24h ,listeria spp.formeaza colonii de culoare verde-oliv sau gri-verzui,mici sau fpoarte mici,cu diametru de 1,5mm…2mm,uneori cu central negru dar todeauna cu haloul negru.Dupa 48h coloniile de Listeria spp.cu diametru de 1,5mm…2mmsunt de culoare verzuie concave in centru inconjurate de un halou negru .9.5 Confirmarea Listeria spp.9.5.1 Alegerea coloniilor pentru confirmare9.5.1.1 Pentru cnfirmare se aleg din fiecare cutie si din fiecare mediu selective (9.4.4.1 si 9.4.4.2),cate 5 colonii presupuse a fi Liateria spp.Daca intr-o cutie sunt mai putin de 5 colonii suspecte,se iau toate pentru confirmare.9.5.1.2 Se striaza fiecare colonie selectata,pe suprafata agarului cu extract de drojdii,soia,triptona(TSYEA)(5.5)in asa fel,incat sa se dezvolte colonii isolate.Se introduce cutiile in thermostat[6.3 c)],la 35˚C sau la 37˚C,timp de 18h…24h sau pana cand caresterea este satisfacatoare.NOTA 7-temperatura de incubare se allege prin inteegere intre partile interesate sise mentioneaza in buletinul de analiza.

Coloniile tipice au diametrul de 1 mm…2mm sunt convexe,incolore,si opace,cu marginile regulate.Daca nu exista colonii isolate,se repica o colonie tipica pentru Listeria spp. Intr-o alta cutie cu TSYEA.La culturile pure obtinute din fiecare colonie pe TSYEA se executa testele care urmeaza.NOTA 8-Se poate efectua daca este necesar,testul de iluminare Henry(a se vedea anexa C).Pentru acest test,este important ca stratul mediului de agar sa fie subtire(15ml/cutie).9.5.2 Reactia catalazeiSe ia o colonie izolata,obtinuta conform 9.5.1.2 si se suspenda intr-o picatura de solutie de peroxid de hydrogen(5.11),depuse pe o lama microscopic.Aparitia bulelor de gaze indica o reactive pozitiva.9.5.3 Colorarea GramSe coloreaza prin metoda Gram,un frotiu preparat dintr-o colonie izolata conform 9.5.1.2 Listeria spp. Apar ca bastonase subtiri,scurte,Gram positive.9.5.4 Testul mobilitatii(daca este necesar)Se ia o colonie izolata obtinuta conform 9.5.1.2 si se disperseaza intr-o eprubeta care contine TSYEB (5.6).Se incubeaza in thermostat [6.3 a)],la 25E C timp de 8 h…24 h,pana cand mediul se tulbura usor.Se pune,cu ansa (6.5),o picatura de cultura,pe o lama microscopic.Se acopera picatura de cultura cu o lamela si se examineaza la microscop(6.14).Listeria spp. Apar ca bastonase subtiri,scurte,si prezinta miscari de rostogolore caracteristice.Culturile dezvoltate la temperaturi mai mari de 25E C pot fi lipsite de mobilitate.Totdeauna acestea se compara cu o cultura cunoscuta.Cocii,bacilii mari sau bacilii cu miscari rapide de inot nu sunt Listeria spp.Ca un test alternative pentru mobilitate se foloseste insamantarea prin intepare cu un ac de insamantare(6.5)a unei coloane drepte de agar semisolid(5.9),cu cultura luata dintr-o colonie tipica de TSYEA(9.5.1.2),care se incubeaza timp de 48 h,la 25 E C,in termostat [6.3 a)].Se examineaza coloana pentru a constata cresterea in jurul intepaturii.Listeria spp. Sunt mobile,dezvoltandu-se sub forma unei umbrele tipice.In cazul in care cultura nu sa dezvoltat suficient,incubarea se prelungeste inca cinci zile.

9.6 Confirmarea Listeria monocytogenes9.6.1 Testul hemolizeiIn cazul in care caracteristicile morfologice si fiziologice si reactia catalazei sunt specific pentru Listeria spp.,se insamanteaza cultura pe suprafata agarului cu sange de oaie(5.7),pentru a determina reactia hemolitica.Se usuca bine suprafata agarukui cu sange,inainte de folosire.Se ia o colonie izolata conform 9.5.1.2 si se striaza,cu ansa (6.5),pe suprafata agarului cu sange.In acelasi timp,se striaza o cultura martor pozitiv(Listeria monocytogenes)si o cultura martor negative(Listeria inocua).Dupa incubare la 35EC sau 37EC,timp de 24 h ± 2h,se examineaza culturile de testat si culturile martor.Listeria monocytogenes prezinta zone clare,inguste de ß hemoliza;Listeria innocua nu

prezinta zone clare in jurul liniei de striere.Listeria seeligeri prezinta o zona mica de hemoliza;Listeria ivanovii prezinta,in mod obisnuit,zone mari,delimitate clar,de ß hemoliza.Cutiile se examineaza la o lumina puternica,pentru a compara culturile de testat cu culturile martor.NOTA 9-Reactia hemolitica se poate efectua ,deasemenea,folosind globule rosii de sange.se suspenda colonia in 150 μl TSYEB(5.6);se incubeaza la 35EC sau 37EC timp de 2h.Se adauga 150μl suspensie 2‰ de globule rosii de oaie in PBS(5.12).Se incubeaza la 35EC sau 37EC,timp de 15 min…60min,apoi se raceste la 3EC±2EC,timp de 2h.Se examineaza pentru perzenta sau absenta hemolizei.Daca reactia nu este clara, se lasa cultura la 3EC±2EC ,inca 24h.9.6.2 Utilizarea hidratilor de carbonSe insamnteaza cu ansa bacteriologica(6.5),fiecare din bulioanele cu substante hidrocarbonate(5.8)cu o cultura de TSYEB(9.5.4).Se incubeaza la 35EC sau la 37EC ,pana la cinci zile.Reactiile positive(formare de acid) se manifesta prin aparitia culorii galbene si au loc ,de regula in 24h..48h.

 9.6.2. Testul CAMP

Se triza fiecare din culturile de Staphylococcus aureus si Rhodococcus equi (B.10.4), pe suprafata agarului cu sange de oaie(5,7 sau B.10.3 ), in cate o linie fata in fata astfel incat cele doua culturi sa fie paralele si diametral opuse. Este necesar un inocul uniform, subtire. Acestea se obtine folofind o ansa bacteriologica, tinuta in unghi drept fata de agar.

In mod asemanator, se striaza in unghi drept, pe aceste culturi, tulpina de testat, separata, conform 9.5.1.2, astfel incat sa nu se atinga cultura de testat cu culturile de Staphylococcus aureus si Rhodococcus equi, dar punctele lor cele mai apropiate sa fie la distanta de 1 mm...2mm. Pe aceeasi cutie poti fi striate mai multe tulpini de testat.

Simultan, se striaza culturile martor de Listeria momocytogenes, Listaria innocus si Listaria ivanovii. Daca se foloseste agarul cu sange (5.7), cutiile se incubeaza la 35 0C sau 370C timp de 18 h...24h. Daca se folosesc cutii cu strat dublu (B.10.3), se incybeaza la 35 0C..370C, timp de 12 h..18 h.

O zona intensa de ß-hemoliza, la intersectia tulpinii de testat cu fiecare dintre culturile se Staphylococcus aureus si Rhodococcus equi, este considerata ca o reactie pozitiva.

Reactia pozitiva cu Rhodococcus equi apare ca un ”cap se sageata” lat (5mm...10mm) de hemoliza. Reactia esste considerata negativa, daca o zona mica de hemoliza slaba se extinde numai cu aproximatin 1 mm la intersectia luminii de testat cu zona difuza culturii Rhodococcus equi.

O reactie pozitiva cu Staphylococcus aureus apare ca o zona mica de hemoliza intensa care se extinde numai cu aproximativ 2 mm de la tlpina de testat si in interiorul zonei de hemoliza slaba data de cultura de Staphylococcus aureus. Nu se produc zone largi de hamoloza in aria Staphylococcus aureus si Listeria monocytogenes.

9.7. Interpretarea proprietatilor morfologice si fiziologice si a reactiilor biochimice

Toate speciile de Listeria au forma de bastonase mici, G – Pozitive, sunt mobile catalază positive.

Listeria monocytogenes se deosebeste de celelalte specii prin caracteristicile mentionate in Tabelul 1

Specii Hemoliza Producere de acid din Tstul CAMP

Ramnoză Xiloză S. aureus R. equiListaria momocytogenes

+ + - + -

Listaria innocua - V - - -Listaria ivanovii + - + - +Listaria seeligeri (+) - + (+) -Listaria welshimeri - V + - -Listaria grayi subsp. grayi

- - - - -

Listaria grayi subsp. murrayi

- V - - -

V : reactive variabila(+) : reactive slaba+ : > 90 % cu reactii positive-: nici o reactieNota: Exista rare tulpini de Listaria monocytogenes care nu dau ß- hemoliza sau test CAMP pozitiv, in conditiile descries in aceasta parte a ISO 11290

9.8. Confirmare definitiva Tulpinile considerate a fi Listeria molocytogenes (9.7) pot fi trimise la un laborator de

refetinta pentru listeria, pentru tipizara serologica sau daca este posibil si lisogenica. Trimiterea trebuie insotita de toate informatiile necesare, referitoare la tilpina (i). 9.9. Cultuti martor

In scopul verificarii capacitatii mediilor de inbogatire, izolare si identificare de a asigura dezvoltarea selectiva a listeria monocytogenes, o dilutie de cultura de referinta din tulpini recent izolate de listeria molocytogenes si tulpini de cultura martor negativa (bacili, Streptococcus) se introduc intr-un recipient cu mediul de imbogatite primara selectiv ( a se vedea 9.2). Se adauga 10 celule...100 celule de Listeria monocytogenes sau de tlpini martor negativ per flacon.

Se progedeaza cu flacoanele martor la fel ca si cu culturile de terstat pentru a se demonstra ca procedeul de lucru este capabil sa detecteze cultura martor pozitv.

10. Exprimare rezultateConform interpretarii rezultatelor se raporteaza prezenta sau absenta Listaria

monocytogenes in proba testata, specificand masa in grame, sau volumul in ml al probei testate.Nota 10 – Daca se izoleaza alte specii de listeria, acestea se mentioneaza in buetinul de analiza daca sa convenit intre partile interesate.

11. Bulatin de analizaIn buletinul de analiza trebuie sa se mentioneze matoda folofita, temperaturra de incubare

si rezultatele obtinute. Se mentioneaza, deasemenea orice amanunt al modului de lucru care nu este cu prins in acest standard sau este considerat optional, impreuna cu detaliile oricarui incident posibil a infulenta rezultatele.

Buletinul de analiza trebuie sa includa toate informatiile necesare indentificarii complete a esantionului.