- 1 -

DETERMINAREA INDICELUI DE POLIFENOLI TOTALI (IPT)

SAU INDICELE D280

Nucleele benzenice, caracteristice compuşilor fenolici, absorb puternic lumina

ultravioletă, având un maxim în jur de 275-280 nm.

Aparatură şi materiale

− spectrofotometru care să permită citiri la 280 nm;

− cuve de cuarţ de 1, 2; 5 si 10 mm;

− baloane cotate de 50 si 100 cm3:

− pipete gradate şi cotate de 1; 2; 5 şi 10 mL;

Modul de lucru

În prealabil, este necesar ca vinul să fie limpezit prin centrifugare sau filtrare

prin membrane cu pori de 0,45 - 3μ. Vinul se diluează 1% cu apă distilată. Fie d

factorul de diluţie. Se citeşte absorbanţa (densitatea optică) la 280 nm în cuvă de

cuarţ (sau din plastic) de 1 cm (10 mm) traseu optic în comparaţie cu apă distilată.

Fie D280 (A280) densitatea optică (absorbanţa) citită la spectrofotometru.

Calculul rezultatelor

Indicele de polifenoli totali (IPT) sau indicele D280 este egal cu:

IPT = D280 = D280(A280) × d

Se exprimă cu o zecimală.

La citirea absorbanţei la 280 nm, trebuie deasemeni să se ţină cont de

proteine. Se poate face o dublă citire după ce polifenolii au fost fixaţi pe PVPP.

Această particularitate este interesantă pentru vinurile albe şi roze. Exprimarea

conţinutului de compuşi fenolici în g/L se face cu ajutorul metodei curbei de etaloare.

Pentru aceasta este necesar să se traseze o curbă de etalonare, folosind

soluţii de acid galic de concentraţii de (0; 0,2; 0,4; 0,6; 0,8 şi 1 g/L) sau de D-

catechină, respectând modul de lucru de la determinarea indicelui Folin-Ciocâlteu.

Datele obţinute se înscriu într-un sistem de două axe coordonate astfel:

- în abscisă concentraţia soluţiilor de acid galic;

- în ordonată absorbantele coorespunzătoare fiecărei soluţii.

- 2 -

Unind punctele coorespunzătoare fiecărei perechi de date se obţine curba de

etalonare (Fig. 1), care este o dreaptă care trece prin originea axelor coordonate.

Ecuaţia acestei drepte este descrisă de ecuaţia de gradul I de forma:

y = 1,3238 x - 0,0014

în care:

y - conţinutul de compuşi fenolici (acid galic), g/L;

x - valoarea absorbantei A750 citită la aparat.

Figura 1

- 3 -

DETERMINAREA INDICELUI FOLIN-CIOCÂLTEU

Indicele Folin-Ciocâlteu (Fc) este specific numai compuşilor fenolici cu însuşiri

reducătoare şi are valori cuprinse între 2,5 şi 11,5 la vinurile albe şi între 16 şi 75 la

cele roşii.

Principiul metodei

În mediul bazic şi în prezenţa fenolilor, amestecul de acizi fosfotungistic

(H3PW12040) şi fosfomolibdic (H3PMo12O40) este redus la oxizii albaştri de tungisten

(W8O23) şi molibden (Mo12O23). Această coloraţie albastră posedă un maxim de

absorbţie la λ = 750 nm. Coloraţia este proporţională cu conţinutul de compuşi

fenolici totali.

Reacţia se produce în mediul alcalin, intesitatea colorantă albastră obţinută

este în funcţie de cantitatea de fenoli din mediu. Însă această culoare nu este stabilă

şi evoluează în timp urmând 2 faze:

- o fază rapidă (0 - 30 minute) care conduce la culoarea albastră;

- o fază lentă după 30 minute, cu evoluţia culorii către albastru închis.

Dacă citirea absorbanţei se face după 30 - 45 de minute, eroarea este foarte

mică şi valoarea sa este reproductibilă.

Aparatură şi materiale

- spectrofotometru care să permită citiri la 280 şi 750 nm;

- cuve de cuarţ şi de sticlă de 1, 2, 5 şi 10 mm:

- baloane cotate de 50 şi 100 cm3;

- pipete gradate şi cotate de 1; 2; 5 şi 10 mL;

- hârtie de filtru.

Reactivi

− reactiv Folin- Ciocâlteu preparat astfel:

Se dizolvă 100 g wolframat de sodiu (Na2WO4 · 2 H2O) şi 25 g molibdat de

sodiu (Na2MoO4 2 H2O) în aproximativ 700 mL apă distilată. Se adaugă 50 mL acid

ortofosforic 85% şi 100 mL HCl conc.(ρ = 1,18 - 1,19). Soluţia obţinută se fierbe timp

de 10 ore într-un balon prevăzut cu refrigerent cu reflux. După 10 ore se adaugă

150g sulfat de litiu (Li2SO4 · H2O) şi 5 picături de apă de brom şi se continuă

- 4 -

fierberea, fără refrigerent, timp de 15 minute (până se obţine culoarea galben

deschisă). Se preferă să se utilizeze în momentul folosirii.

− Na2CO3 anhidru, soluţie 20% sau 200 g/L (m/v): 200 g carbonat de sodiu se

dizolvă în 700-800 apă fierbinte, se răceşte şi se aduce la semn cu apă distilată

într-un balon cotat de 1 litru.

Modul de lucru

Într-un balon cotat de 100 mL se introduc:

- 1 mL vin roşu, diluat în prealabil 1/5 (10 mL vin la balon cotat de 50 mL);

- 50 mL apă distilată;

- 5 mL reactiv Folin- Ciocâlteau sub agitare;

- 20 mL soluţie Na2CO3 20%.

Se aduce la semn la 100 mL cu apă distilată, se agită energic conţinutul

balonului si se lasă în repaos timp de 30 minute. Se citeşte absorbanţa (densitatea

optică) la λ= 750 nm cu o cuvă de 10 mm (l cm) prin raportare la un martor preparat

cu apă distilată în loc de vin. Fie A750 absorbanţa probei citită la spectrofotometru.

Pentru a se evita erorile de analiză trebuie ca absorbanţa să aibă valori

cuprinse între 0,3 şi 0,8. În caz contrar se face o diluţie corespunzătoare vinului

pentru a se obţine absorbaţta dorită.

Observaţie: Reactivul Folin-Ciocâlteu reacţionează cu proteinele, zaharurile şi

S02. Este necesar să se facă o diluţie care să nu depăşească 10 g/L zaharuri.

Această determinare este indicată pentru vinurile roşii seci.

Calculul şi exprimarea rezultatelor

Rezultatul în funcţie de tipul vinului analizat, este exprimat sub formă de indice

Folin-Ciocâlteu (Fc) obţinut, înmulţind absorbanţa (densitatea optică) cu 100 în cazul

vinurilor roşii diluate 1/5 (sau prin factorul corespunzător diluţiei folosite) şi prin 20 în

cazul vinurilor albe conform relaţiilor:

Fc = A750 · 100

în care: Fc= indicele Folin-Ciocâlteau şi A750 = absorbanţa (densitatea optică)

citită la 750 nm.

Precizare: Diferenţa între rezultatele a două determinări efectuate simultan şi

rapid de acelaşi analist prin aceiaşi metodă, nu trebuie să fie mai mare ca 1.