Obiectivele stiintifice ale proiectului de cercetare si relevanta lor in contextul cercetarilor din domeniu pe plan international sunt adaptate contextului actual al globalizarii lumii stiintifice romanesti. Prin obiectivele vizate proiectul urmareste descoperirea unor date originale cu inalt impact in cercetarea de baza privind patogenia oncologica a pancreasului. De asemenea, un alt beneficiu il constituie implementarea de noi tehnologii moderne de biologie si genetica moleculara cu formarea de tineri specialisti in domeniu.

Proiectul urmareste realizarea urmatoarelor obiective majore care vor fi atinse prin activitati generale si specifice.

Obiective specifice:

1. Studiu molecular de inhibare transcriptionala a ETS-1 utilizand o molecula specifica de ETS-1 siRNA

Activitati:

• Cultura linii celulare tumorale de cancer pancreatic (Panc-1, MiaPaCa2, BxPC3).

• Transfectia liniilor celulare cu molecula siRNA-ETS-1 • Confirmarea rezultatelor obtinute la nivel de mARN folosind tehnici specifice

(RT-PCR, Real-Time PCR, Western-bloting). • Hibridizarea microarray • Prelucrarea statistica partiala a rezultatelor.

2. Studiu statistic de interpretare a datelor

Activitati:

- Prelucrarea statistica a rezultatelor de expresie genica - Identificarea de clustere genice avand functie biologica comuna - Generarea de ipoteze de interactiune inter-genica

3. Analiza bionformatică Activitati:

- integrarea genelor selecţionate prin tehnica microarray în reţele de mecanisme moleculare la diferite nivele celulare. - analiza relevanţei biologice a reţelelor obţinute pe baza unei evaluări probabilistic.

4. Studiul genetic pentru identificarea functiei biologice a genelor izolate

Activitati:

- Clonarea genelor candidate - Evaluarea interactiunii genice directe prin EMSA si Luciferase Assays - Introducerea constructului intr-un vector - Transfectarea constructului in celule normale si tumorale - Evaluarea functionala a efectului genei transfectate (proliferare, invazivitate,

tumorigeneza, metastazare).

5. Evaluarea impactului si valorificarea rezultatelor

Activitati:

- Prezentarea rezultatelor in cadrul conferintelor, discutiilor consultative cu experti in domeniu si evaluarea feed-back-ului primit de la specialistii in domeniu

- Generarea de articole si publicarea acestora in articole ISI de varf (1 articol pentru fiecare membru al echipei)

- Redactarea manuscrisului in format publicabil/raportarea lui catre ANCS.

Obiective generale:

1. Obtinerea unor rezultate stiintifice de varf, compatibile cu cele de nivel European

2. Cresterea vizibilitatii si recunoasterea internationala a cercetarii romanesti: Activitati:

- Initierea unor activitati suport (workshopuri, perioade de training), in care vor fi implicati partenerii straini (corespunde activitatii 1.4 din 2009: training RT-PCR si 2.4 din 2009: Training Microarray din planul de realizare a proiectului). Prin acest obiectiv se are in vedere crearea unui nucleu interdisciplinar de cercetare fundamentală şi aplicativă avansată in domeniul cancerului de pancreas, dar si creşterea vizibilităţii internaţionale prin publicaţii internaţionale şi participarea la propuneri de proiecte europene în acest domeniu. Nucleul va permite dezvoltarea cercetarii fundamentale pentru dobandirea de cunostinte avansate, in vederea asigurarii rezervorului de metode, tehnici, proceduri, modele si teorii, pentru cresterea valorii si notorietatii stiintifice pe plan international. Indicatorul de realizare al obiectivului va fi reprezentat de obtinerea de publicatii stiintifice, elaborare teze de doctorat si generarea de training pentru formarea si atragerea tinerilor cercetatori.

- Dezvoltare infrastructura IT. Baza de date nou creata va contine informatii numerice, dar si informatii complexe, cum ar fi microfotografii ale sectiunilor de patologie, reprezentari grafice ale rezultatelor cercetarii.

- Crearea paginii web. Se va constitui astfel un mediu virtual de diseminare a

rezultatelor care sa poata fi actualizat si sa faciliteze accesul la acestea a unui numar cat mai mare de specialisti precum si comunicarea si monitorizarea la scara nationala si europeana a rezultatelor cercetarii ce face obiectul prezentului proiect.

3. Obiective manageriale: - Stabilirea agendei de lucru si a mecanismelor manageriale - Stabilirea procedurilor specifice si a mecanismelor de urmarire a progresului

proiectului, a fluxului de comunicare intre membrii echipei, redactarea rapoartelor de progres, controlul calitatii proiectului

- Intalnire Comitet de Etica si buna practica pentru a analiza posibilitatea realizarii experientelor propuse cu respectarea legislatiei existente

- Activitati de diseminare: echipa de conducere va asigura diseminarea corespunzatoare a activitatilor pe masura desfasurarii proiectului

- Redactare raportului de progres pentru proiect, buletine de analiza, testari, analize statistice ale rezultatelor obtinute experimental.

4. Evaluarea rezultatelor: Fiecare etapă se va încheia cu un raport care va analiza stadiul de realizare a proiectului şi va stabili activităţile etapei următoare. Managementul proiectului va fi urmărit permanent pe baza graficului de desfăşurare a activităţilor pe faze şi termene (vezi Anexa).

Proiectul de investigare genomică si proteomică a neoplasmului pancreatic va avea multiple implicaţii:

Impact tehnologic si ştiinţific: Proiectul va implica dotare cu tehnologii de vârf de genomică (siRNA, microarray, RT PCR cantitativ, baza tehnică bioinformatică complexă (hard si software), tehnici de proteomică (ELISA, imunohistochimie). In ansamblu, proiectul este competitiv cu cele mai avansate tehnologii pe plan internaţional. Acestea sunt faţete importante, din punct de vedere al formării ştiinţifice, pe care acest proiect le aduce fiecărui participant şi in special tinerilor angajaţi.

Impact economic: Este pentru prima dată când un asemenea proiect global va fi realizat în România, toate etapele for fi executate în România. Baza de cercetare va evolua si va atrage cadre de cercetare. De asemenea, rezultatele acestui proiect vor avea impact economic şi social pozitiv prin facilitarea integrării cercetărilor româneşti în efortul european de cercetare prin diseminarea rezultatelor şi eficientizarea modalităţilor de cooptare în cadrul grupurilor de cercetare interdisciplinară.

Impact social: Proiectul va avea consecinţe sociale. Metodologia instituirii unei terapii cel putin adjuvante va aduce o ameliorare a reţelei de supraveghere si îngrijire medicală a pacienţilor cu neoplasm pancreatic. Acest studiu pilot va fi un exemplu pentru alte domenii ale cancerologiei. Prin acest proiect se urmareste

introducerea unor tehnici inovative de tratament ce au ca rezultat cresterea sperantei de viata si a calitatii vietii acestor pacienti. In concluzie, aplicarea metodelor moderne de investigare cu orientare terapeutica tintita in tumorile digestive si in special in adenocarcinomul pancreatic, va determina o crestere a nivelului investigatiilor diagnostice realizate pe acest tip de tumori in Romania, apropiindu-ne de standardul european, cu cresterea posibilitatii aplicarii unui tratament de inalta specificitate.

Pentru realizarea obiectivelor impuse acestui proiect am ales sa o echipa interdisciplinara complexa, cu experienta in biologie moleculara care sa asigure competenta necesara acoperirii unui proiect pe care il consider ambitios avand un grad important de originalitate.

Neoplasmul pancreatic va fi investigat folosind tehnologii avansate, bazate pe un grad inalt de expertiza al echipelor componente, care vor asigura multidisciplinaritatea studiului. Colectivul de cercetatori are o structura mixta si complexa in ceea ce priveste specialitatile medicale (chirurgie, anatomopatologie, biochimie si biologie moleculara) membrii selectati in echipa fiind doctoranzi si cadre didactice, asfel incat proiectul propus reprezinta o buna oportunitate pentru dezvoltarea capacitatii de cercetare si aprofundarea unui domeniu de interes medical de varf.

Cercetarile privind relatia dintre ETS1 cu alte oncogene celulare si supresoare tumorale pot prezenta o mare importanta pentru intelegerea mecanismelor de transformare celulara maligna.

Acest proiect se înscrie in aria de cercetarea completă, urmărind stimularea progresului experimental in cercetarea biomedicala, prin îmbunătăţirea generării, standardizării, achiziţiei şi analizei datelor.

Proiectul isi propune sa contribuie la transferarea rezultatelor cercetărilor fundamentale in tratarea afecţiunilor majore precum cancerul pancreatic, acesta fiind unul din scopurile esenţiale ale proiectului.

Raspunde cerintelor nationale si internationale de optimizare a abordarii terapeutice in cancerul de pancreas, prin crearea bazelor fundamentale necesare potentialei aplicari de terapii inovative

Alegerea membrilor s-a realizat in urma unor interviuri directe si pe baza referintelor primite individual de la sefii de catedre. Unul din criteriile de selectie a fost dorinta efectiva de implicare intr-o munca de echipa, de a invata tehnici noi de cercetare fundamentala care sa le permita apoi aplicarea lor directa atat in studiul

propus cat si in proiecte viitoare inclusiv a celor incluse in tezele personale de doctorat.

Prin tema propusa se urmareste pregatirea a doi tineri cercetatori in tehnologii de mare performanta pentru cercetarea din Romania in tehnici de genomica si proteomica, vizand integrarea acestora in viitoare aplicatii de granturi europene.