GENUL SALMONELLA. MICROBIOLOGIA I DIAGNOSTICUL DE LABORATOR AL SALMONELOZELORCLASIFICARE Genul: Salmonella (Daniel Elmer Salmon, veterinar american, care a descoperit bacteria n 1885)Specii: Salmonella enterica, Salmonella bongoriSubspecii ale speciei S.enterica: enterica, salamae, arizonae, diarizonae, houtenae, indicaSe cunosc peste 2500 Serovariante, majoritatea tulpinilor izolate din patologii umane (99,5%) aparin ss. S.enterica enterica: S. London, S. Enteritidis, S. Typhi, S. Paratyphi A, S. Paratyphi B, S.Choleraesuis, etc Salmonellaenterica subspecia enterica serovar Typhi Salmonella Typhi

CLASIFICAREA KAUFFMANN-WHITE (conform structurii antigenice)Ag O 67 varieti antigenice (O1, O2, O3, ... O65, etc), permite repartizarea salmonelelor in serogrupe (A, B, C, D, E,...Z, O51,...)

Fracii antigenice majore desemneaz grupa:O2 A; O4 B, O6 C, O9 D, etcFracii antigenice minore comune O1, O12,Ag H definete serovariante n cadrul grupei. Structura flagelinei este determinat de 2 gene cromozomiale diferite, care se exprim alternativ (variaie de faz, frecvena 10-4)

Ag H faza 1 (specific) Ha; Hb; Hc; Hd; Hg,m Ag H faza 2 (nespecific) H1,2; H1,5; H1,7;

Serovar monofazic: O1,2,12:Ha (S.Paratyphi A)Serovar difazic: O1,4,12:HbH1,2 (S.Paratyphi B)Ag Vi (K), termolabil, prezent la S.Typhi, S.Paratyphi C, S.Dublin. Este concentrat la polii bacteriei.

S. Typhi O9,12:HdVi+ / O9,12:HdVi- Conform patogenitii pentru gazd se disting:Salmonele monopatogene (umane) (S.Typhi, S.Paratyphi A)Salmonele bipatogene (patogene pentru om i animale, ubicvitare) - majoritatea

GrupaSerovarulAntigenul OViAntigene Hfaza 1 faza 2AParatyphi A1,2,12a- BParatyphi B1,4,5,12b1,2Wien1,4,12,27bl,wTyphimurium1,4,5,12i1,2Derby1,4,12f,g- CParatyphi C6,7+c1,5Virchov6,7r1,2Infantis6,7r1,5Bovismorbificans6,8r1,5DTyphi9,12+d- Enteritidis1,9,12g,m- Panama1,9,12l,v1,5Dublin1,9,12+g,p- Gallinarum1,9,12- - ELondon3,10l,v1,6Anatum3,10e,h1,6

Caractere morfologiceSalmonella bacterii gram-, mobile peritriche (S.Gallinarum, imobil), asporogene.

Caractere de cultur

Medii de mbogire : Muller, Kauffmann (medii cu bil, tetrationat), bulion cu selenit de NaMedii DD de izolare a culturii pure: Endo, Levin , Ploskirev (colonii S, lactozo-); mediul cu sulfit de bismut Wilson-Blair (colonii negre) Medii DD de acumulare i difereniere: Olkeniki, Kligler (glucoza AG, lactoza-, H2S+, ureaza-)Teste primare: utilizeaz citratul de Na, produc H2S, MR+, LDC+, mobilitate+, celelalte teste negative. Teste secundare: scindeaz glucidele AG, indol-, ornitindecarboxilaza+, etcEXCEPIE: S.Typhi citrat-, H2S-, scindeaz glucoza pn la acid;S.Paratyphi A H2S+/-, LDC-

FACTORI DE PATOGENITATEFimbrii (adeziune)Capacitatea de a penetra n celule i de multiplicare intracelular (Macrofage, celule epitel)Endotoxina Citotoxine (SLT) inhib sinteza proteic (necroz)Enterotoxine (LT, ST) activeaz adenilat/guanilatciclazele membranare (diaree)Siderofori (captarea Fe)Ag Vi (antifagocitar, inhib activarea C, rezisten la activitatea bactericid a serului)

Majoritatea salmonelelor (98%) sunt sensibile la bacteriofagul O1. Exist bacteriofagi cu specificitate de specie i variant.Habitat: intestinul omului, animalelor, psrilor. Rezistena n mediul extern: salmonelele rezist la 70C 30 min., rezistente la concentraii mari de sare. Se nmulesc n produse alimentare la temperatura camerei.

ROLUL SALMONELELOR N PATOLOGIA UMANSALMONELOZE:

Febre tifo-paratifoide (S.Typhi, S.Paratyphi A, B, C)Salmoneloze digestive (toxi-infecii alimentare, gastro-enterite)Manifestri extra-digestive: - bacteriemii nontifoidice - infecii pleuro-pulmonare - afeciuni osteo-articulare (osteite, osteomielite, artrite septice, etc) - infecii cardio-vasculare (pericardite, arterite) - infecii urinare - infecii abdominale (colecistite, abces al ficatului, splinei) - infecii ale SNC (meningite, abces al creierului, abces epidural, etc)

FEBRELE TIFO-PARATIFOIDEAgenii cauzali S.Typhi, S.Paratyphi A, B, (C)Sursa de infecie omul bolnav, purttorul Contaminarea fecal-oral (ap, alimente), contact directDoza infectant 105 bacterii

PATOGENEZA Traversarea epiteliului intestinal intact Invazia i multiplicarea intracelular la nivelul plcilor Peyer i esutului limfoid al tubului digestiv (perioada de incubaie)Ptrunderea n ganglionii limfatici mezenterici cu multiplicarea salmonelelor (perioada prodromal)

I sptmn de boal (bacteriemie). Invadarea fluxului sangvin, via sistemul limfatic (diseminarea germenilor cu eliberarea endotoxinei). Endotoxina pe cale sangvin parvine la centrii neurovegetativi ai ventriculului 3, determinnd febr, stare de tifos, colaps cardio-vascular, leziuni intestinaleII sptmn de boal (difuzie parenchimatoas)Bacteriile sunt fixate n organele SRE i se multiplic n ficat, splin, mduv osoas, esut limfoid, etc III-IV sptmn de boal (faza alergic). Din ficat salmonelele ptrund n cile biliare, apoi iari n intestin. La nivelul plcilor Peyer se dezvolt o reacie de hipersensibilitate tip 4 - necroz, ulceraiiDin aceast perioad ncepe eliminarea salmonelelor cu saliva, materiile fecale, urina, bila, etc.

Manifestri clinice

Perioada de incubaie - 1-3 sptmniPerioada prodromal (de invazie) 1-3 zilePerioada de stare. Debut brutal, cu frison, febr 39-41 grade, cefalee, stupoare, somnolen, delir, com. Erupii cutanate (rozeole) apar pe abdomen, torace, spate n ziua a 8-9 de boal (embolii limfatice cu bacterii). Diaree, constipaie, tulburri cardiovasculare. Durata 7-10 zile Complicaii: hemoragii intestinale, perforarea intestinului, peritonit, miocardit, meningit, psihoz etc. Perioada de reconvalescen (1-3-6 luni)

Imunitatea celular, umoral5-10% convalesceni purttori pn la 3 luni (cu depistarea salmonelelor n bil sau/i urin)3-5% convalesceni (cu litiaz biliar) purttori cronici (1-10 ani toat viaa)Recidive sunt posibile (descrcri bacteriemice din focare profunde, forme L), se caracterizeaz prin simptome atenuate i evoluie de scurt durat

DIAGNOSTICUL DE LABORATORPRELEVATE: snge (perioada febril, n special I sptmn de boal), urin (ncepnd cu a II sptmn), materii fecale (II-III sptmn de boal), exudat din rozeole, ser sangvin (din ziua a 7-ea), bil, mduv osoas

METODE DE DIAGNOSTICExamenul microscopic RIF

Examenul bacteriologicHemocultura 10-15 ml snge se insmneaz n 100 ml bulion biliat, mediul Rappoport, bulion glucozat 1% pentru mbogirea salmonelelor. Se incubeaz la 37 grade i n zilele 1, 2, 3, 5, 7 i 10 se repic pe mediile DD (Endo, Levin, Ploskirev, W-B) pentru izolarea culturii pure. Coloniile lactozo- se repic pe mediul Kligler (Olkeniki) pentru acumularea culturii pure i identificarea preliminar.

Identificarea final n baza studiului caracterelor morfotinctoriale, de cultur, biochimice, antigenice (RA pe lam cu seruri imune polivalente ABCDE, seruri monovalente anti-O de grup (O2, O4, O6, O9, etc) , seruri monospecifice anti-H (de variant), seruri anti-Vi, sensibilitatea la bacteriofagi). Rezultatul definitiv negativ n ziua a 11.

Rozeolocultura (exudatul din rozeole se ntroduce n 3-5 ml bulion biliat)Mielocultura (0,5 ml mduva osoas din stern n 3-5 ml bulion biliat)Bilicultura (dup 3-6 luni de la vindecare, 5-10 ml bil se ntroduc n BP)

Se examineaz ca i hemoculturaCoprocultura (din spt. 2) 3-5 g materii fecale se nsmneaz direct pe medii DD i pe medii de mbogire.Urocultura (10 ml urin se centrifugheaz, sedimentul se examineaz ulterior ca i coprocultura)

Serodiagnostic (din II sptmn)

1. RA Widal (la diluii ale serului bolnavului se adaog diagnosticuri OH din S.Typhi, ParatyphiA i B). Titrul diagnostic 1/200 sau creterea n dinamic a titrului 2. RA modificarea Felix (utilizarea separat a diagnosticurilor O i H). Anticorpii anti-O (Ig M) apar primii (ncepnd cu ziua 7-8) i dispar dup 2-3 luni (maximum spt. II-III).Anticorpii anti-H (Ig M, apoi Ig G) apar mai trziu (10-12 zi) i persist o durat mai lung. n debut de reconvalescen (sptmna a IV) titrul Ac anti-O i anti-H se egaleaz.3. RHAI (cu diagnosticuri eritrocitare O)

INVESTIGAREA PURTTORILORCoproculturi repetateUroculturaBilicultura Serodiagnostic

Reacia de Vi-aglutinare (eritrocite sensibilizate cu Ag Vi). Titrul diagnostic - 1/40Reacia de latex-aglutinareDeterminarea claselor de imunoglobuline Ig M sau Ig G

TRATAMENTUL I PROFILAXIATratament: FluorochinoloneCefalosporine de generaia IIICloramfenicolAmpicilin CotrimoxazolProfilaxia specific: vaccinarea selectiv (zone endemice, militari, personal medical, etc)Vaccinul chimic TABTe Vaccinul atenuat Ty2 (administrare oral, imunitate local sIg A), contraindicat gravidelor, copiilor, imunodeprimailor - vaccinul subunitar din Ag Vi (areactogen, imunitate 3-5 ani)

SALMONELOZE DIGESTIVE (gastro-enterite, toxi-infecii alimentare)Consecutive consumului de alimente contaminate cu salmonele (ou, maionez, patiserie cu crem, carne, etc).Agenii cauzali: salmonele bipatogene

Gr. B (S. Typhimurium, S. Paratyphi B, S. Heidelberg, S. Derbi)Gr. C (S. Choleraesuis, S. Newport, S. Paratyphi C)Gr. D (S. Enteritidis, S. Dublin)Gr. E (S. Anatum)

PATOGENEZA GASTROENTERITELOR Sursa de infecie: animalele domestice i psrile (bolnave sau purttori cronici)Transmiterea pe cale alimentar (alimente contaminate direct de la surs sau pe parcursul procesului tehnologic), prin ap sau contact direct.Doza infectant 106-108 salmoneleSalmonelele colonizeaz mucoasa intestinului subire, fiind entero-invazive provoac distrugerea epiteliului (SLT) i o reacie inflamatoare intens (gastroenterit, gastroenterocolit acut). Enterotoxina provoac diaree (activeaz adenilatciclaza sau guanilatciclaza enterocitelor), endotoxina absorbit acioneaz asupra SNC semne de intoxicaie. Gastroenteritele pot fi urmate de bacteriemii.

Manifestri clinice:

Perioada de incubaie 8 - 48 oreDebut brusc i evoluie acut (1-3 zile) cu diaree, vom, febr, cefalee, stare de ru.Evoluie sever la sugari, btrni, imunodeprimai (n special cu SIDA).

TOXIINFECII ALIMENTARE

Survin ca urmare a ingestiei unui aliment n care s-au acumulat cantiti mari de mi/o (105 107). Nimerind n intestin, bacteriile ptrund n snge, se distrug, iar endotoxina eliberat provoac semnele clinice de intoxicare.Alte forme de salmoneloze (septicemii, meningite, infecii urinare, etc) se dezvolt la persoane cu rezistena sczut

Diagnosticul de laborator al salmonelozelorPrelevate: mase fecale, mase vomitive, snge, splturi gastrice, urin, resturi de alimente suspecte.Metode de diagnostic:

Examenul bacteriologic de baz (coprocultur, hemocultur, urocultur...)RIF pentru diagnostic rapidSerodiagnostic - RHAI

Profilaxia salmonelozelor nespecificTratamentul simptomatic, antibioterapie la necesitate