Familia Enterobacteriaceae

Caractere generale:

• enterobacterium = bacterie intestinală

• habitat: tractul intestinal om/animale

Caractere morfo-tinctoriale:

• Bacili Gram-negativ

• Mobili/imobili

• Unii au capsulă: Klebsiella

pneumoniae

• Nu formează endospori

Caractere de cultură:• Facultativ anaerobe • Tulbură uniform mediul de cultură lichid• Au necesităţi nutriţionale reduse → se

dezvoltă şi pe geloză nutritivă • Colonii tip S• Uneori colonii mucoase: Klebsiella

pneumoniae • Medii selective, majoritatea au lactoză:

• Drigalski, Levin, Leifson, Istrate-Meitert, MacConkey

Mediul Levine

• Categoria: Mediu selectiv şi diferenţial

• Componente: geloză simplă + eozină + lactoză + albastru de metilen

• Utilizare: cultivarea enterobacteriilor (E.coli)

ADCL (Leifson)

• Categoria: Mediu selectiv şi diferenţial

• Componente: geloză simplă + săruri biliare + lactoză + roşu neutru

• Utilizare: cultivarea shigelelor şi salmonelelor

Caractere biochimice:~ Încadrarea în familie pe baza a trei

teste biochimice:• Fermenteză glucoza cu producere de acid

şi gaz • Testul oxidazei negativ• Reduc nitraţii la nitriţi

~Pe baza testelor biochimice şi a caracterelor antigenice → genuri → specii → variante serologice

OXIDAZA• Scop: evidentierea citocromoxidazei• Substrat: benzi indicatoare (alfanaftol- clorhidrat

de dimetilparafenilendiamina)• Tehnica:

- se umecteaza banda indicatoare cu apa distilata - se descaraca o colonie bacteriana cu ajutorul ansei pe banda indicatoare

• Interpretare: test+ coloratie albastra

Testul oxidazei

REDUCEREA NITRATILOR LA NITRITI

• Substrat: apa peptonata + KNO3

• Incubare: 24h la 37 C

• Substanta indicatoare: ac sulfanilic/acid acetic, alfanaftilamina/ac acetic

• Interpretare: test + viraj spre rosu al indicatorului (Enterobacteriaceae)

CoproculturaIzolarea- Medii de cultură pentru enterobacterii - Medii selective şi de diferenţiere

*Drigalski*Levin*Leifson*Istrate-Meitert*MacConkey

Caractere morfo-tinctoriale

Bacili Gram-negativ

Proprietăţi de cultură

•Colonii S •Lactozo-negative

Proprietati biochimice

TSI

UTILIZAREA CITRATULUI SIMMONS

• Substrat: mediu minimal cu citrat de sodiu solidificat in eprubeta in pozitia inclinata

• Tehnica: inocularea bacteriei de testat pe panta agarului. Incubare 18h la 37 C

• Interpretare: test +dezvoltarea coloniilor bacteriene si viraj verdealbastru al culorii mediului

testul citrat – mediul Simmons

UTILIZAREA CITRATULUI SIMMON’S

Structura antigenică

- Aglutinări pe lamă cu seruri anti-O

Teste de patogenitate

Testul Sérèny

Caractere morfo-tinctoriale

Bacili Gram-negativMobili (preparat nativ)

Proprietăţi de cultură

Colonii S Geloză nutritivă

Proprietăţi de cultură

Mediul DrigalskiColonii lactozo-negative

Proprietăţi de cultură

- lactozo-negativ- Agar EMB (Levin)

Proprietăţi de cultură

- Agar McConkey

Proprietati de cultura

Geloza HektoenH2S

GENUL SALMONELLAAGAR AGAR CROMOGENICCROMOGENICADCLADCL--HH22SS

Genul Salmonellapeste 2200 serotipuri

Infecţii (salmoneloze): ~ Febra tifoidă – S.typhi~ Febra paratifoidă – S.paratyphi A, B~ Toxiinfecţii alimentare şi enterite (copii)

S.typhymuriumS.enteritidisS.paratyphi BS.panama

~ Stări septico-piemiceS.paratyphi CS.choleraesuis

Clasificarea serotipurilor de Salmonella

1. Adaptate la om

• S.schottmuelleri– S.typi– S.paratypi A,B

• S.hirschfeldii– S.paratypi C

2. Adaptate la gazde altele decât omul

• exc. tulpini → boli om– S.dublin– S.choleraesuis

3. Fără adaptate la o gazdă specifică

• S.enteritidis → >2000 serotipuri → gastroenterite

Caractere generale:

~ bacili Gram-negativ~ mobili (flageli peritrichi)~ lactozo-negativi~ identificarea antigenelor O, H, Vi →

reacţii de aglutinare

Recoltarea produselor patologice:

1) Febre tifo-paratifoide:

– S1 hemocultură

– S2 urocultură, coprocultură

2) Gastroenterite– coprocultură– lichid de

vărsătură– alimente

Teste biochimice

H2S

Teste biochimice

Creste pe mediul Simmons, cu citrat

Proprietăţi antigenice

- Schema de identificare antigenică Kauffmann-White

Ag “O” – caracteristică de GRUP Ag “H” - caracteristică de TIP (variaţie de

fază)Ag Vi <=> Ag K – de suprafaţă Serotip = enumerarea completă a Ag O, Vi

şi H1,2

Reacţia Widal

- r. aglutinare în tuburi

- Febre tifo-paratifoide - Creşterea titrului de anticorpilor

aglutinanţi anti-O şi anti-H

Enterobacterii oportuniste

Escherichia

Klebsiella – Enterobacter – Hafnia –Serratia

Proteus – Providencia – Morganella

Arizona – Edwarsiella – Citrobacter

Enterobacterii oportuniste

Escherichia coli~ 80% flora normală a colonului~ bacili Gram-negativi~ lactozo-pozitivi ~ luciu metalic – mediul Levin

Escherichia coli

~ Tipuri de îmbolnăviri:

~ boli diareice

~ infecţii urinare

~ infecţii ale plăgilor

~ septicemii

Escherichia coli

Tulpini care produc boli diareice:

~ ETEC (E.coli enterotoxigen)

~ EIEC (E.coli enteroinvaziv)

~ EPEC (E.coli enteropatogen)

~ EHEC (E.coli enterohemoragic)

~ VTEC (E.coli produce toxină Shiga-like) → O157:H7

GENUL ESCHERICHIA

E. coli – non pathogenE. coli - EPEC

- EHEC- EIEC- ETEC

pathogenpathogen

GENUL ESCHERICHIAE. coliE. coli

Cultura puraCultura pura

E. coli E. coli --ADCLADCL

E. coliE. coli

LEVINELEVINEDRIGALSCHIDRIGALSCHI

Fermentarea lactozei pe geloză lactozată

E. coliE. coli

MEDIU CROMOGENMEDIU CROMOGEN

COLONII ROZCOLONII ROZ

Escherichia coliIdentificare biochimică

IMViC~ Testul indol~ Testul roşu metil~ Reacţia Voges-Proskauer~ Testul citrat

OXIDATIE-FERMENTATIE

DEGRADARE MIXTADEGRADARE MIXTA

MEDIU NEDAGRADATMEDIU NEDAGRADAT

TESTE REZULTATE DIN TIPURILE DE FERMENTATIE

• TESTUL ROSU-METIL

• TESTUL VOGES-PROSKAUER

TESTUL ROSU-METIL

• Scop: fermentarea substratului si scaderea pH-ului sub 5• Tehnica:

– tulpina bacteriana testata se insamanteaza in apa peptonata glucozata. – Incubare 18h la 37 C. – Developare cu solutie rosu fenol

• Interpretare: – Test + culoare rosie (pH<5): E. coli– Test - culoare galbena (pH>5): Klebsiella

TESTUL VOGES-PROSKAUER

• Scop: evidentierea fermentatiei acetoinice

• Tehnica: – tulpina bacteriana se insamanteaza in apa peptonata glucozata. – incubare 18h la 37 C. – Se alcalinizeaza. – Developare cu alfanaftol.

• Interpretare:– test + inel rosu-violaceu la interfata de contact: Klebsiella– Test - : E.coli

TESTUL VOGES-PROSKAUER

TESTUL INDOL• Scop: evidentiaza prezenta triptofanazei• Tehnica:

– cultura bacteriana de 24h in apa peptonata – benzi indicatoare cu reactiv indol.

• Interpretare: – test + culoare rosu-violaceu (E.coli)

TESTUL INDOL

Grupul Klebsiella – Enterobacter – Hafnia – Serratia

Klebsiella pneumoniaeKlebsiella rhinoscleromatisEnterobacter cloacaeEnterobacter aerogenesHafnia alveiSerratia marcescens

Grupul KEHSTipuri de îmbolnăviri:

~ Dobândite în spital~ Infecţii cu localizări <=> E.coli~ Cauze imp. de bacteriemii~ Klebsiella pneumoniae – inf. pulmonară~ Majoritatea → tulpini cu rezistenţă multiplă

la antibiotice

Klebsiella pneumoniae

~ cantităţi moderate în intestinul omului /animalelor

~ infecţii respiratorii, urinare, otite~ bacili Gram-negativi~ capsulă polizaharidică ~ colonii mari mucoase , fenomen de

cameleonaj

KLEBSIELLAKLEBSIELLA

Frotiu coloratia tuş de China

Klebsiella pneumoniae

KLEBSIELLAKLEBSIELLAColonii mucoaseColonii mucoase

KLEBSIELLA

Proprietati biochimiceProprietati biochimice

Proteus vulgaris, P.mirabilis

~ saprofiţi (materie organică în descompunere)

~ flora intestinală normală~ infecţii urinare, alte tipuri de infecţii~ bacili Gram-negativi, mobili~ lactozo-negativi~ invadează suprafaţa mediilor gelozate

GENUL PROTEUS

Proteus Proteus vulgarisvulgaris

FlageliFlageli

GENUL PROTEUS GENUL PROTEUS -- migrare

PROTEUS

Proteus spp.

PRODUCEREA DE H2S

TESTUL UREAZEI

• Scop : evidentierea ureazei, enzima ce scindeaza ureea cu formare de amoniac

• Substrat: mediu de cultura ce contine uree si indicator colorimetric (de Ph).

• Tehnica:– tulpina bacteriana testata se inoculeaza in mediu. – Se incubeaza 18h la 37 C.

• Interpretare:– test+ viraj corespunzator al zonei bazice: Proteus

Proteus spp.Ureaza +

H2S

TESTUL FENILALANINDEZAMINAZEI

• Scop: evidentierea prezentei FAD

• Substrat: agar inclinat ce contine fenil-alanina

• Tehnica:– tulpina bacteriana se insamanteaza pe panta agarului. – Developarea reactiei cu FeCl3

• Interpretare: test+ aparitia culorii verzi (Proteus)

TESTUL FENILALANINDEZAMINAZEI

Yersinia pestis

~ ciuma (pesta)

~ bacili Gram-negativ

~ capsulă proteică

Yersinia enterocolitica

~ Sdr. Diareic febril

Yersiniapseudotuberculosis~ Inf. la păsări,

rozătore, rar om~ Lez. tipică: noduli

asemănători celor tbc în intestin, org. parenchimatoese

Bacili Gram negativi aerobi glucozo-nefermentativi

Pseudomonade

- bacili Gram negativi

- strict aerobe, metabolism oxidativ

- catalazo-pozitivi si oxidazo-pozitivi

Bacili Gram negativi aerobi glucozo-nefermentativi

Pseudomonadespecii fluorescente, care produc pigmenti difuzibili fluorescenti:

P. aeruginosa (bacilul piocianic)P. putida, P. fluorescens;

specii non-fluorescente: P. alcaligenes, P. pseudoalcaligenes.

Pseudomonas aeruginosa (b. piocianic)

• patogen nosocomial (10% din totalul infectiilor nosocomiale)

• Bacterie oportunistă• Habitat:

– sol, apă – Poate coloniza tubul digestiv şi pielea

persoanelor sănătoase

Pseudomonas aeruginosa (b. piocianic)

• ITU• infectii de tract respirator• infectii ale plagilor, suprainfectii ale

arsurilor• bacteriemie, septicemie, infectii sistemice,

mai ales la pacientii imunocompromisi• otite externe la inotatori ; • infectii oculare dupa interventii chirurgicale

Pseudomonas aeruginosa (b. piocianic)

Proprietati microscopice:

• bacili Gram negativi

• mobili

Pseudomonas aeruginosa (b. piocianic)

Proprietati de cultura:

• pigment difuzibil fluorescent de mai multe tipuri:* piocianina, albastra, cu proprietati antibacteriene fata de alte specii bacteriene* pioverdina, galben-verde culoarea verde, stralucitoare* piorubina, rosie, ocazional*piomelanina, bruna, ocazional

• cultura degaja o aroma caracteristica, aromata, asemanatoare cu florile de tei, iasomie, mere verzi

• strict aeroba

Pseudomonas spp.► Bacil Gram-negativ,

mobil► Nefermentativ

► Se dezvoltă pe medii simple, geloză nutritivă → producere de pigment difuzibil

Pseudomonas aeruginosa (b. piocianic)

Antibiograma – obligatorie • foarte rezistenta la antibiotice;• are rezistente naturale multiple, datorate structurii

peretelui celular.• Carbapenemi• Penemi • Unele Cefalosporine gen. III; gen. IV• Quinolone• Aminoglicozide • Polimixine.• In caz de monoterapie dezvolta rapid rezistenta.

Genul Vibriobacterii Gram-negative

foarte mobile (cil polar)

formă de bastonaş încurbat

facultativ anaerob

majoritatea speciilor saprofite, unele produc îmbolnăviri uşoare

Specia tip: Vibrio cholerae

două biotipuri holerigene: ►cholerae clasic► El Tor

V. cholerae O139 "Bengal" (1992, Bangladesh → derivate din biotipul El Tor

mai multe biotipuri neholerigene (sindroame diareice benigne)

Habitat: apa de mare, apa de suprafaţă

Contaminare:► apă, alimente

contaminate ► fecal-orală

Infecţie:Holera = infecţie

acută, intestinală

► diaree► deshidratare

masivă► stare generală

alterată► evoluţie severă

Structuta antigenică

variaţia antigenică → rol în epidemiologia

holerie şi virulenţa vibrionilor holerici

Ag H (flagelar) → specificitate largă

Ag O (somatic) → strict specific

Şase serogrupuri O1 → O6 Vibrionii holerigeni = serogrup O1 conţin trei factori antigenici: A, B, C

► 3 serotipuri: → Ogawa (AB)→ Inaba (AC)→ Hikojima (ABC)

► Fiecare serotip poata exprima fenotip „clasic” sau El Tor

► V. cholerae O139 "Bengal" este singurul serotip non-O1

Recoltarea produselor patologice

► Materii fecale → mediu de transport Cary-Blair

► Lichid de vărsătură

►Apă potabilă, alimente

Izolare

► apă peptonată alcalină (mediu de îmbogăţire)

► mediu cu săruri biliare (BSA)

a) Caractere morfo-tinctoriale:bacili Gram-negativiîncurbaţi

b) Caractere de cultură:► Mediul BSA: Colonii tip S, transparente

c) Caractere antigenice:► vibrionii holerigeni aglutinează cu ser

anti-O1► vibrionii neholerigeni nu aglutinează cu

ser anti-O1 (neaglutinabili – NAG)

d) Caractere de patogenitate:testul ansei ligaturate

Tratament

reechilibrare hidro-elecrolitică

antibiotice: ex. Tetraciclină

Genul Helicobacter

• bacili Gram negativi, incurbati pana la spiralati

• mobili prin unul/mai multi flageli• microaerofili• speciile gastrice se caracterizeaza prin

producerea de ureaza in cantitati mari.

Helicobacter pylori

Recoltarea produselor patologice: biopsie din mucoasa gastrica (endoscopie); prelevarea de probe multiple=>4 fragmente din antru, regiunea fundica.

• Important: cel putin o luna fara tratament inainte de recoltarea probei.

un fragment plasat direct in mediu cu uree si indicator de pH (rosu fenol)+ureaza preformata a HP =>virarea indicatorului de pH in galben;

examen histopatologic

Helicobacter pylori

Recoltarea produselor patologice: biopsiedin mucoasa gastrica (endoscopie); prelevarea de probe multiple=>4 fragmente din antru, regiunea fundica. frotiu: bacili Gram negativi, incurbati; IF

pentru diagnostic diferential cu Campylobactercultura: colonii mici, transparente, apar in

3-7 zile; permite testarea sensibilitatii la antibiotice.

Helicobacter pylori

Metode neinvazive:• testul respirator cu uree marcata :

– ingerare uree marcata cu C13 (neradioactiv) sau C14 (radioactiv) => intensa activitate a ureazei, daca exista HP in stomac => eliberare de CO2 marcat, absorbit in circulatia sanguina si eliminat prin respiratie => detectat si cuantificat in aerul expirat (spectroscopie de masa);

– dezavantaj: este foarte costisitor.

Helicobacter pylori

• detectarea anticorpilor specifici, in special de tip IgG;

• ELISA; • cost relativ scazut, • indicat preferential in studii epidemiologice.

Helicobacter pylori - Tratament

• Macrolide (Claritromicina), • Amoxicilina,• Metronidazol, • Quinolone.