^joVVjJLQ^QTto0-b hjX>-*SlxsJvwlIlO^ -Qs^O-Sc& CkXosa ouu, A (HUGO).Prima etap a acestui proiect const i descifrarea i alctuirea hriigenetice umane, c alte cuvinte, n determinarea secvenei i iocalizr genelor umane, al cror numr total a fost estim ca fiind de ordinul a 50.000 - 100.000. Aceas presupune, n primul rnd, determinarea secvenei, baz cu baz. Volumul de munc pentru aceasta este enorm dac se folosesc metodele clasice. Tehnica PCR scurteaz considerabil acest proiect, deoarece prin folosirea sa este posibil amplificarea unei regiuni specifice din ADN ntr-un timp foarte scurt. Prin obinerea unei cantiti relativ mari de secvene identice se poate apoi realiza secvenierea precis a acestora.PCR se utilizeaz, de asemenea, n mutageneza experimental, pentru producerea de muiaii punctiforme, adic de modificare a unei singure perechi de baze din secvena de ADN luat n studiu. De exemplu, asemenea mutaii punctiforme sunt foarte utile pentru elucidarea corelaiei dintre structura i funciile proteinelor naturale. Dei uneori este cunoscut secvena exact de baze care codific o protein i, deci, i secvena de aminoacizi a proteinei respective, acest fapt nu d informaii suficient de amnunite cu privire la relaia dintre structura acestei proteine i funciile sale. Dac, ns, gena pentru proteina respectiv a suferit o mutaie, ea va produce o protein anormal, a crei structur este diferit de cea a proteinei naturale. Tehnica PCR permite producerea mutaiilor punctiforme. Pentru aceasta nu este necesar dect sinteza UHr primeri care s conin n secvena lor de ba2e modificarea dorit. Se stabilete, apoi, o temperatur mai sczut pentn ataarea primerilor. Temperatura mai sczui permite hibridizarea primerilor cu o specificiti mai mic, adic la secvene la car< complementaritatea bazelor nu este absolut identic Aceste mici erori de recunoatere a secvene corecte sunt tolerate de temperaturile mai sczute O asemenea secven dublucatenar de star declaneaz reacia de polimerizare n lan producnd fragmente de ADN (gene) care conii primeri modificai, astfel c mutaia punctiformi este amplificat. Dac genele modificate s< insereaz n bacterii, acestea din urm vor produc proteina modificat, deoarece au primit informaii greit. Astfel, se poate studia efectul mutaie asupra funciei acestei proteine.Tehnica PCR a fost rapid acceptat r cercetrile aplicate din medicin, inclusiv pentn diagnostic. Cu ajutorul reaciei de polimerizare r lan pot fi diagnosticate o serie de infecii virale bacteriene, parazitare sau fungice. La oricare dir aceste microorganisme trebuie cunoscut o secven specific de informaie genetic, secven care ni1 este prezent n genomul uman. Secvena poate f detectat cu ajutorul primerilor sintetizai special pentru ea i apoi poate fi amplificat prin reacia de polimerizare n lan. n urma amplificrii PCR, secvena de ADN specific agentului patogen,sintetizat n milioane de copii, se evideniaz uor, dei aceasta se afl iniial n cantiti infime n organismul infectat. Pn nu demult, prezena unui agent patogen n mediile interne ale organismului a putut fi detectat doar prin metode imunologice, adic prin determinarea anticorpilor sintetizai de sistemul imun mpotriva agentului strin. Rspunsul imun apare ns doar dup ce infecia a proliferat suficient pentru a produce stimularea celulelor imunologice. Prin tehnica PCR, prezena virusului sau a bacteriei poate fi detectat practic i atunci cnd reacia imun nu s-a declanat nc.Un exemplu bun pentru a demonstra utilitatea metodei PCR este idetificarea precoce a infeciei cu virusul HIV 1. Acest virus poate exista mult timp n leucocite, n form latent, fr a declana boala. Testele SIDA clasice evideniaz prezena virusului doar pe baza detectrii anticorpilor. ntre momentul infeciei i posibilitatea determinrii anticorpilor virali pot trece sptmni sau chiar luni. n acest interval de timp testul convenional imunologic, pentru persoanele infectate, este negativ. Detectarea timpurie a infeciei este ns foarte important deoarece persoanele infectate cu HIV, fr ca s aib cunotin de aceasta, pot transmite virusul la alte persoane sntoase.,Testul SIDA bazat pe metoda PCR (de exemplu cel elaborat de firma Roche) poate detecta #

#

virusul HIV ntr-o singur celul infectat dde leucocite, stadiu n care teste imunologice sunt negative. El este comercializat s form de kituri standardizate, este rapid i foai sensibil, fiind foarte util, de exemplu, pent detectarea virusului la nou-nscuii a cror mar este HIV pozitiv. n acest caz, este tiut c placer este permeabil pentru anticorpii anti HIV, iar no nscutul poate da reacie pozitiv din cau: anticorpilor materni, dei este posibil ca el s 1 fie purttor de virus.

Testul este efectuat cu ADN extras d leucoc'te obinute dintr-o prob de snge (dac avut loc infecia cu virus HIV, aceste celule con ADN-ul viral inserat n genomul propriu). ADN- purificat se introduce n aparatul PCR (therm cycler) mpreun cu mixtura complet de reaci Dac secvena specific pentru ADN viral es prezent, se declaneaz reacia de polimcrizare cicluri succesive, pn la obinerea a aproximat 100 milioane de copii. Dup amplificare, ADN vir trebuie identificat. Majoritatea testeb convenionale folosesc izotopi radioactivi ca marcheaz specific moleculele de ADN vira Deoarece aceast procedur necesit o dota: special, dei este foarte sensibil, a fost nlocui astzi cu o metod ce utilizeaz marke neradioactivi care dau o reacie de culoare.Un alt exemplu, privind valoarea tehnicii PCR n medicin, este diagnosticul tuberculozei. Tehnica obinuit presupune identificarea agentului patogen {Mycobacterium tuberculosis) prin microscopie i executarea culturilor pentru acest microorganism. Procedeul este de lung durat (3-4 sptmni), ceeaA.ce constituie un dezavantaj serios. In plus, exist pacieni la care nu se manifest simptomele caracteristice ce sugereaz tuberculoza i de aceea, pn la identificarea bacilului Koch, ei trebuie s urmeze preventiv un tratament cu antibiotice, dei agentul patogen nu a fost identificat. Toate aceste probleme de diagnostic pot fi rezolvate, prin folosirea tehnicii PCR, n cteva ore.Pentru demonstrarea prin tehnica PCR a bolilor ereditare, gena mutanta responsabil pentru o anumit boal ereditar este amplificat. Apoi, secvena de baze a fragmentelor de ADN sintetizate este comparat cu secvena aceleiai gene provenite de la indivizi sntoi. Materialul biologic folosit pentru iniierea reaciei poate fi sngele sau orice alt esut, deoarece defectul genetic se afl n toate celulele bolnavului. Singurul lucru care trebuie cunoscut este localizarea precis i tipul modificrii genetice pentru a fi posibil sinteza primerilor corespunztori. Astzi, se cunosc aproximativ 4.000 de boli genetice cauzate de mutaia unei singure gene. 400 au fost Elucidate biochimic i doar aproximativ 100 sunt cunoscute i n termenii geneticii moleculare. Pe msur ce su: caracterizate noi boli genetice, va fi posibil diagnosticarea lor prin PCR, iar cercetarea n ace domeniu este foarte intens astzi (vezi proiect HUGO).Prima boal diagnosticat cu tehnica PCR fost anemia cu hematii n secer (sikle ce anemia). Alte boli genetice care pot diagnosticate, astzi, cu reacia polimerizrii n lai sunt: hemofilia, fibroza cistic, distrofia muscula]i o form ereditar de leucemie.Un exemplu particular al aplicabilittehnologiei PCR este diagnosticul prenatal s bolilor ereditare. Specialitii pot realiza aceasi prin utilizarea unui numr mic de celule di lichidul amniotic, celule care sunt de provenienj fetal. Acest diagnostic se practic la femeii nsrcinate care prezint un risc crescut, cum ar cele cu sarcin la o vrst de peste 35 de ani sau 1 cele care provin din familii n care este prezent boal ereditar. Tehnica clasic presupun cultivarea celulelor fetale i evidenierea bol genetice prin microscopie. Aceasta nu permit ns, dect identificarea afeciunilor n care sur implicate fragmente mari de ADN. Tehnica PCI a crescut foarte mult sensibilitatea acestor metod pentru a permite identificarea mutaiilo punctiforme, n care este implicat modiifteare unei singure perechi de baze.Probabil c n nici o boal diagnosticul precoce nu este att de important ca n cancer. Majoritatea formelor de cancer nu pot fi detectate ns dect n momentul n care s-a dezvoltat tumora. De cele mai multe ori acest moment este ns tardiv. S-a semnalat c unele forme de cancer debuteaz cu modificri ale informaiei genetice, aceasta fiind cauza care determin proliferarea necontrolat a celulelor afectate. Este cazul, de exemplu, al leucemiilor, cancerului pulmonar, de colon i cancerului de sn. Perioada dintre apariia modificrii genetice i manifestarea clinic a bolii poate fi uneori foarte ndelungat (pn la cinci ani n cancerul de colon). n acest domeniu se ntreprind, astzi, cercetri foarte intense. Odat modificarea genetic elucidat, diagnosticul precoce al formei respective de cancer devine posibil prin identificarea acestei modificri prin tehnica PCR.Tehnica PCR este foarte util astzi n transplantul de organe pentru studiul complexelor HLA implicate n fenomenul de reacie. Aceste complexe difer de la un individ la altul, iar succesul ujui transplant de organ depinde de multe ori de compatibilitatea complexelor HLA de la donator i de la primitor. Cu ct sistemul de antigene HLA este mai asemntor, cu att ansa succesului unui transplant este mai mare. Testele PCR standardizate, accesibile comercial, permit detectarea secvenelor specifice de HLA. Prin compararea acestor secver amplificate, provenite de la donator i de la recept se poate stabili cu exactitate compatibilitatesuturilor la doi subieci.*In medicina legal, tehnica PCR este extre de valoroas pentru probarea vinoviei s; nevinoviei unui suspect. O pictur de sng cteva fire de pr sau fragmente de esuturi preleva de la locul crimei pot constitui o prob biologi* extrem de valoroas pentru stabilirea amprent genetice a presupusului infractor. ADN-ul extr: din asemenea probe poate fi amplificat prin reac polimerizrii n lan i analizat. Identificri provenienei acestui ADN se bazeaz pe analii unor secvene ale acestuia care sunt foarte variabi n populaie i virtual, nu pot fi identice la d< indivizi. Pentru aceasta se pot analiza complexei de gene HLA sau secvenele de ADN repetitiv, cror lungime difer de la un individ la altul. Dac asemenea secvene de ADN de origine necunoscut sunt comparate cu cele ale unui subiect cunoscu rezultatul este ntotdeauna neechivoc. Se poat stabili j astfel cu mare certitudine dac prob biologic provine de la acest subiect sau nu. Metod este foarte util i n testele de paternitate, deoarece de exemplu, genele HLA se transmit pe baza legilo ereditii. Identificarea i compararea acesto secvene probeaz cu exactitate descendena patern; sau matern a unui copil.5 .RECOLTAREA ICONSERVAREA PROBELOR5.1 PROBE BIOLOGICE CARECONSTITUIE SURSE DE ANDDup ce o prob bilogic a fost recoltat, ca trebuie transportat n laborator. Acest fapt nu este att de banal pe ct pare. Condiiile n care exist moleculele biologice n organism sunt foarte strict controlate i specifice. Din momeniul n care materialul biologic ajunge n afara organismului, el se afl ntr-un mediu strin i ncepe s se modifice. AND-ul este foarte strns mpachetat n momentul cromozomii celulari; despachetat, fiecare cromozom are o lungime de aproape un.Ametru. In afara mediului lor natural, protejate, aceste molecule foarte lungi pot fi deosebit de fragile. AND-ul este, astfel, supus degradrilor, fiind rupt n fragmente mai mici, iar aceast degradare poate avea efect asupra posibilitii de obinere a rezultatelor utile pentru tipizarea ADN, n particular prin tehnica RFLP. Cu ct degradarea este ma accentuat, cu att fragmentele devin mai scurte Astfel, lungimea unui fragment degradat poate fi mai mic dect lungimea unui locus RFLP. De exemplu, mrimea fragmentelor unui locus RFLP particular poate fi mai mare de 20.000 baze perechi (bp). Dac mrimea moleculelor de ADN dintr-o prob este de 10.000 bp, nu se pot detecta benzi pentru molecule mai mari i astfel analiza este compromis.Factorii implicai n degradarea ADN cuprind: timpul, temperatura, umiditatea, lumina (att cea vizibil, ct i UV), precum i contaminarea chimic i biologic. Combinaii variate ale acestor factori pot s apar n mediu. Pentru determinarea efectelor acestor condiii, au fost ntreprinse numeroase studii care au demonstrat, cu puine excepii, tendina principal de degradare a probelor n fragmente mai mici.O important concluzie a acestor cercetri este aceea c factorii de mediu nu modific moleculele de ADN dintr-un tip, n alt tip; cu alte cuvinte, mrimea unui fragment RFLP din orice locus nu se poate modifica de la 7000 la 4000 bp, sau tipul HLA DQ& nu se schimb din forma 1.1. n forma 1.2. Adic, degradarea doar modific AND-ul dintr-o prob care poate fi tipizat, ntr-o prob care nu mai poate fi tipizat. Aceast problem consituie o parte foarte important n validarea oricrui sistem de tipizare genetic, n sensul c o component biologic a sistemului s nu produc rezultate pozitive false. Cu alte cuvinte, din cauz c un profil nu se poate modifica n alt profil, nu exist pericolul ca n urma degradrii s se produc un model complet nou de ADN. Se spune, n acest sens, c sistemul este robust. Degradarea poate limita utilitatea tipizrii AND, dar nu o poate invalida, ceea ce constituie un avantaj considerabil al acestor tehnici.O serie de studii au artat, de asemenea, c ADN este mult mai stabil dect markerii genetici convenionali utilizai n medicina legal. Proteinele convenionale i markerii enzimatici se degradeaz ntr-o perioad de 2-3 luni, iar ADN, n condiii de mediu normale, rmne stabil i tipizabil timp de ani de zile. Acest fapt este important mai ales pentru sistemele PCR, care pot tolera un grad mare de degradare. O atenie special trebuie ns acordat situaiei n care este identificat o singur allel a unui locus particular, care de obicei posed cel mai frecvent dou allele. n aceste situaii se pune* ntrebarea dac proba provine de la un homozigot adevrat sau allela evideniat provine de la un heterozigot la care una din allele este degradat. Explicaia celei de-a dou situaii poate fi gsit n faptul c degradarea a survenit doar n cazul alleleimai mari, iar allela mai mic este intact. Ace este unul din motivele pentru care este importa determinarea calitii probei, pentru interpreta corect a rezultatelor.Un scop important n colectarea i prezerva probelor biologice, este oprirea, blocarea procesi degradativ i limitarea degradrilor ulterioare, general, procesele biologice sunt ncetinite p scderea temperaturii i prin deshidratare. De ace prima sarcin a investigatorului este aceea d deshidrata proba i de a conserva la rece ct r repede posibil.5.1.1 CONTA MINAREALa fel de important ca procesul de prezerv a integritii probelor este i luarea n considen a unei posibile contaminri care poate interfera rezultatul n cadrul analizei. Exist mai multe tip de contaminare, iar efectul final asupra probe difer. Contaminrile ne-biologicc (de ex. colora spunuri sau alte chimicale) pot afecta pro interfernd cu rezultatele n procedurile analitkContaminrile biologice neumane si produse de materiale fiziologice i/sau ADN de alte organisme. Dei tipizarea ncruciat e observat ocazional n anumite sisteme, aceasta se interfereaz cu interpretarea final a rezultate) O atenie special trebuie acordat contaminriimicroorganisme. Probele folosite n medicina legal, cum sunt sngele i sperma, reprezint un mediu fertil pentru dezvoltarea bacteriilor i ciupercilor unicelulare. In timpul creterii, aceste microorganisme secret substane biochimice care pot degrada ADN-ul uman din prob. Chiar i n aceast situaie, eventual ADN-ul nu poate fi folosit pentru tipizare, dar nu se transform ntr-un alt tip. AND-ul degradat parial trebuie interpretat cu foarte mare atenie de un specialist calificat; dac proba este de calitate slab, i exist posibilitatea ca o parte a determinrii s fie obscur, cea mai recomandabil concluzie a determinrii este relevana.Cel mai semnificativ tip de contaminare este cea care provine de la o surs uman. n acest sens, contaminarea este definit, fiind determinat de adugarea inadverten a unui material fiziologic / ADN individual pe parcursul colectrii probei. Este important s facem distincia dintre proba amestecat i o prob contaminat. O prob amestecat este aceea care conine ADN de la mai muli indivizi, amestecare ce s-a produs nainte sau n timpul producerii crimei. Proba contaminat este aceea n care materialul a fost contaminat n cursul colectrii, prezervrii, manipulrii sau analizei. Precauiile necesare pentru determinarea posibilitii ca un al doilea tip de ADN s fie detectat, depind de tipul de teste implicate. De exemplu, n testele PCR, n care ADN din probe este copiat n milioane de probe, precauiile trebuii s fie mult mai mari dect n cazul RFLP. Aceast; face ca n testele PCR s fie mult mai probabil a si detecta urme de ADN de alt tip dect al sursei.Dei de rutin, precauiile trebuie ntotdeaun; luate n considerare, n realitate materialul umai strin nu interfer att de uor cu cel din prob Aceasta se ntmpl din cauz c ADN nu s< disemineaz liber prin atmosfer, iar celulele car< sunt eliminate de ctre o persoan sunt relativ puin la numr i nu pot conine ADN strin. Aceasta ni nseamn c nu trebuie luate precauii pentri evitarea contaminrii.Dup ce probele au fost deshidratate refrigerate, ele pot fi contaminate de alte probe daci prelucrrile se fac n acelai timp. Aceasta se poat< ntmpla dac gradul de calificare, antrenament meticulozitate a analistului nu este corespunztor S-a constatat c cel mai grav motiv pentru care s( dau rezultate incorecte n tipizarea ADN est< schimbarea probelor ntre ele de ctre analist.COLECTAREA PROBELORExist, n general, dou metode de colectri a probelor destinate analizelor n laborator: (1 colectarea direct a urmelor, sau (2) transferu urmelor pe un substrat mai bun sau mai uo: manevrabil.

Este preferat ntotdeauna prima metod pentru c aceasta nu presupune pierderi prin manipulare i se bazeaz pe prelevarea probei, mpachetarea ei n mod corespunztor i transportul acesteia n laborator pentru conservare i analiz. Este cea mai potrivit pentru probele depuse pe haine sau pe orice alt material, care poate fi introdus ntr-o cutie sau pung. ndeprtarea de pe suport este lsat pe seama analistului, care se afl ntr-o situaie mult mai bun pentru a evalua i a procesa corect proba.A doua metod const n a transfera materialul biologic pe un substrat mai bun (de ex. transferul unei picturi de snge de pe asfalt pe un tampon de vat). Aceasta implic fe rzuirea probei cu un sclapel steril sau un forceps, fie rehidratarea probei cu ap sau soluie fiziologic i apoi absobia ei pe un tampon de vat. Rzuirea nu implic rehidratarea probei i prin urmare, este mai puin probabil degradarea acesteia. Totui aceast modalitate presupune pierderea unei pri din prob. Rehidratarea i transferul pe un substrat de vat are avantajul c micoreaz cantitatea de prob ce se poate pierde i permite prelucrarea mai uoar n laborator. Totui, dezavantajul const n faptul c n prob se introduce o soluie, care trebuieAndeprtat ct de repede posibil. In mod uzual aceasta se face prin introducerea suportului cu probantr-o eprubet deschis, ceea ce permite uscar rapid. Dac proba este lsat umed mai mult tim atunci procesele degradai ve se accelereaz.Fiecare din aceste metode i are utilizri sale i alegerea uneia sau alteia depinde de opium investigatorului. Ambele sunt utile dac su aplicate corect.Amintim cteva indicaii generale cu privi la modul de recoltare, ambalare i trimitere probelor ADN la laboratoarele de specialitate :din cauza marii sensibiliti a probei biologice la condiiile de mediu (umezeal, cldui mucegaiuri) i la trecerea timpului, prelevarea transportarea trebuie s aib loc ct mai rapid;se evit ambalarea suporturilor purttoa de probe biologice n pungi de plastic;fiecare suport se ambaleaz separat n hrl alb, cu etichet, pe care se specific coninut ambalajului i locul din care a fost prelevat probadresa care nsoete coletul va preci; laboratorul destinat examinrii, data prelevr condiiile n care s-a produs infraciunea, ntrebri la care trebuie s rspund expertul de laboratt Organul de anchet trebuie s formuleze ntrebri nc de la nceput clar i concret, deoarece probe sunt de regul n cantiti mici, uor i rap degradabile, nct problemelor ridicare ulterior 1 i se mai poate da rspuns.

Urmele biologice ce conin AND ( snge, sperm, fir de pr, oase etc.) se pot gsi pe suporturi conservante sau neabsorbante ( metal, lemn lcuit, materiale plastice etc. ) i absorbante sau neconservante (textile, pmnt, tencuial, crmid etc.)Toate probele, indiferent pe ce suport se gsesc, se ridic i se conserv dup toate regulile criminalistice cunoscute, inndu-se cont de cele expuse mai sus.n continuare vom reda normele internaionale de recoltare, conservare i trimitere a probelor ( dovezilor ) biologice n vederea analizrii ADN.INTRODUCERE

Exist sute de varieti de doVezi fizice care sunt aduse la laboratoarele de medicin legal de ctre organele juridice. Dovezile care ar putea fi supuse analizei ADN n general sunt limitate la produse biologice.Prezentm n continuare o list de materiale biologice din cae ADN a fost izolat i analizat:snge pete de snge:sperm i pete de sperm;esuturi i celule;oase i organe;pr cu foliculi;urin i saliv ( cu celule nucleate );

Alte materiale biologice cum sunt lacrimiletranspiraia, serul, materiale iar celule nucleate ni pot fi supuse analizei ADN.MODALITATEA PRIN CARE

DOVEZILE BIOLOGICE AU FOSTTRANSFERATETipurile de dovezi biologice, enumerate mai sus, pot fi folosite pentru a conecta o persoan de alta, de un obiect, sau de un loc. Acestea pot fi, de asemenea, folosite pentru a asocia sau a disocia c persoan cu o crim. Dovezile biologice sunt r general transferate prin una sau dou modaliti (direct sau secundar).A. Depozitarea directSngele, sperma, esuturile, oasele, prul, urina i saliva, pot fi transferate de pe corpul sau hainele unei persoane sau de pe obiecte de la locul faptei. Dup ce materialele biologice au fosl depozitate, ele devin pete i ader la o suprafa sau la un substrat. Dovezile biologice care nu sunt lichide, cum ar fi esuturi, oase sau pr, pot fi de asemenea transferate prin contact direct i depozitate. Transferul i depozitarea direct pot fi ntlnite n una din urmtoarele situaii:ADN suspectului, depozitat pe victim (corp sau haine);ADN suspectului, depozitat pe un obiect;ADN suspectului, gsit la locul faptei;ADN victimei, depozitat pe suspect (corp sau mbrcminte);ADN victimei, depozitat pe un obiect;ADN victimei, aflat la locul faptei;ADN martorilor, aflat pe victim sau pe suspect;ADN martorilor, aflat pe un obiect;ADN martorilor, aflat la locul faptei.

B. Transferul secundarSngele, sperma, esuturile, prul sau urina pot fi transferate de pe victim, suspect, martor, obiect, sau de la locul faptei printr-un mediu intermediar. n cadrul transferului secundar nu exist contact direct ntre sursa original (donor de ADN) i suprafaa int. Transferul intermediar ar putea fi o persoan sau un obiect. Transferul secundar nu furnizeaz dovezi pozitive despre legtura direct a unui individ cu crima.RECOLTAREA I CONSERVAREA DOVEZILOR BIOLOGICE

Capacitatea de a efectua analize succesi de ADN din dovezile biologice de la locul fapt depinde foarte mult de tipul de material biolog i de felul n care acesta a fost conservat. Astft tehnica folosit pentru a recolta asemem dovezi, cantitatea i tipul materialului biolog care trebuie recoltat, modalitatea prin ca materialul trebuie mpachetat i modul < conservare al acestuia reprezint puncte sensibile ale programului medico-legal de testa a AND-ului. Pe de o parte, dac material biologic nu este recoltat corect, activitatea biologic se poate pierde, i nu va ndepli condiiile tiinifice i legale pentru a fi adir n justiie. Pe de alt parte, dac acesta nu es corect furnizat, originea sa poate fi pus si semnul ntrebrii, deoarece fiind transport incorect, poate aprea contaminarea secundai In cazul n care, materialul biologic cu ADN i este conservat corect, acesta poate s deterioreze. Toate aceste efecte vor afecta seri analiza ADN.Prezentm n continuare un ghid pent furnizarea, transportul i conservarea dovezilor ADA. Ghid pentru furnizarea dovezilor ADNFazele iniiale ale examinrii dovezilor fizice presupun activiti care se desfoar att la locul faptei, ct i n laboratoarele de medicin legal. n medicina legal, documentarea este important din dou puncte de vedere : tiinific i legal.Nu trebuie deteriorat nimic pn cnd poziia sa iniial nu a fost nregistrat.Sunt valabile cteva modaliti diferite deAfurnizare. In general, se recomand folosirea mai multor metode. Fiecare pies major a dovezilor trebuie nregistrat.Dovezi la locul fapteiFotografierea i filmarea dovezilor nainte de a fi atinse, deplasate sau recoltate;Observarea poziiei i condiiilor n care

se afl dovezile; Observarea i schiarea distanelor dintre dovezi i alte obiecte de la locul faptei;Observarea i schiarea condiiilor dovezilor biologice.

Dovezi la laboratorul de medicin legalObservarea mpachetrii etichetrii i sigilrii probelor;Pachetul iniial cu mrci unice de

I'identificare, numrul cazului i data;Verificarea numrului i compararea c\ forma admis pentru a se asigura c a fost primi articolul corect;Observarea, schiarea i fotografiere articolului primit;Verificarea articolului dac ndeplineti condiiile de admitere i dac descrierea lui est< corect;Fotografierea, schiarea i notare; localizrii dovezilor biologice nainte d< eantionare;Dac a fost efectuat o testare preliminar se va nregistra felul testului i rezultatele obinute ntotdeauna trebuie purtate mnui pentru a preven contaminarea.

B. Recoltarea, transportuli conservarea dovezilorDup ce dovada biologic a fost transferat direct sau secundar, aceasta va rmne pe suprafa;Ainut prin absorbie sau prin aderen. In general materialele biologice lichide vor fi absorbite iar cel solide vor adera. Metoda de recoltare depinde d starea n care se afl materialul biologic. Prezentr n continuare cteva noiuni generale despr recoltarea dovezilor biologice pentru analiza ADTSt. Snge i pete de sngeEantioanele de snge lichidSnge de la o persoanSngele lichid de la o persoan trebuie recoltat de personal medical calificat;Se recolteaz n dou eprubete dc cte 5 ml. Fiecare, folosind EDTA ca anticoagulant;Fiecare eprubet trebuie etichetat cu data, ora, numele persoanei, numele celui care recolteaz, numrul cazului i numrul de expunere;Probele de snge se introduc n frigider (nu ngheate) i trebuie date n lucru ct mai curnd posibil.

Snge lichid de la locul fapteiSngele lichid se recolteaz cu o sering curat (de preferin steril) sau cu o pipet i se transfer ntr-o eprubet curat (de preferin steril);Un cheag de snge poate fi transferat ntr- o eprubet curat cu spatul curat;O bucat de bumbac curat poate fi folosit pentru a absorbi sngele lichid sau cheagul de snge;Eantioanele vor fi etichetate cu numrul cazului, numrul articolului, data ora i numele celui care recolteaz;Dac sunt recoltate eantioane de snge uscat, acestea trebuie s fie conservate pe unanticoagulant, pstrate la frigider i aduse ct m curnd posibil la laborator.

Eantioane de snge lichiddin zpad sau din apEantioanele de snge gsite pe zpad s< n ap trebuie recoltate imediat, pentru a preve diluarea;Se recolteaz o cantitate ct mai mare, d aceste eantioane, ntr-un recipient curat, pentru preveni contaminarea;Eantioanele se eticheteaz aa cum s artat anterior;Se nghea;Se aduc la laborator ct mai curnd posib

Pete de snge umedembrcmintea cu pete de snge umede*mbrcmintea care are pete de sn umede trebuie pus pe o suprafa curat i lsa s se usuce;.Aceasta nu va fi niciodat pus ntr-un sj de plastic sau ntr-un recipient nchis ermetic;Lucrul acesta ar putea determir contaminarea si nmulirea bacteriilor i implic deteriorarea probei;,Dup ce mbrcmintea i petele s-au usc trebuie mpachetate ntr-un recipient de hrtie ca va fi etichetat corect.

Obiecte cu pete de snge umedeObiectele mici cu pete de snge umede trebuie uscate i apoi recoltate;.Trebuie pstrat integritatea petelor de snge n timpul mpachetrii i transportului;.Ta locul faptei pot s existe obiecte mari cu pete de snge umede. Acestea trebuie transferate pe o bucat de bumbac curat;Respectiva bucata de bumbac trebuie lsat s se usuce nai nte de a fi mpachetat ntr- un recipient de hrtie;Fiecare dintre obiecte i recipiente trebuie etichetate corect.

Pete de snge uscatePete de snge uscatede pe articole transportabilePetele de snge uscate de pe arme, mbrcminte i alte obiecte transportabile trebuie recoltate separat;Fiecare articol s fie plasat individual ntr- un recipient de hrtie care trebuie sigilat i etichetat.

Petele de snge uscate pe suprafee solide ne-absorbante ale obiectelor netransportabileModelul petelor de snge trebuie s fie documentat i schiat pentru necesarul respectiv;Pata poate fi recoltat prin rzuire pe < bucat de hrtie curat;Respectiva bucala de hrtie trebuie pus; ntr-un plic i sigilat;Fiecare prob trebuie etichetat corect.

Pete de snge uscate de pe obiecte mari sai netransportabile, de unde petele nu pot fi rzuit* i de pe obiecte care nu pot fi tiateModelul petelor de snge trebuie s fi documentat i schiat pentru necesarul respectiv;.Pata de snge poate fi dizolvat ntr-< soluie salin sterilizat, prin frecarea bucii d< bumbac pe zona ptat;Bucata este lsat s se usuce i este pui apoi ntr-un pachet de hrtie;Apoi pachetul este pus ntr-un plic care' si sigileaz i se eticheteaz;Acest procedeu poate f controlat prii recoltarea unei pete dintr-o zon adiacent, da neptat.

Pete de snge de pe covoare, tapierii i alt obiecte care nu pot fi tiateAriile ptate trebuie pregtite aa cum s- descris anterior;O poriune din obiect pe care se afl pet< de snge poate f ndeprtat cu un instrumen ascuit curat;Fiecare bucat decupat trebuie mpachetat separat i etichetat;Pentru control trebuie recoltat i o poriune fr pete de snge.

Picturi de snge mici, uscateAdesea este difcil de recoltat picturile de snge. Este posibil, ca acestea s fie recoltate folosind metoda benzii adezive;Dup pregtirea corespunztoare, poate fi folosit metoda benzinei adezive pentru picturile de snge de pe anumite suprafee;Fiecare pies trebuie mpachetat i etichetat;Apoi se pune ntr-un recipient de plastic;Se suspend banda cu picturile de snge la mijlocul recipientului;Se sigileaz i se eticheteaz recipientul.

2.Sperma i petele de spermProbele de lichid spermatic gsitela locul fapteiSe catalogheaz dovezile de sperm prin observare, nregistrare video i desenat;.Se folosete o sering curat pentru a transfera lichidul spermatic ntr-o eprubet steril;Se eticheteaz eprubet cu nr. cazului, data, ora, localizarea i numele celui care recolteaz;.Proba se pstreaz la frigider i se aduce laborator ct mai curnd posibil;.In mod alternativ, lichidul spermatic poa fi transferat pe o bucat curat de bumbac pr absorbie. Bucata de bumbac este apoi uscat mpachetat, sigilat i etichetat.

Pete de spermde pe obiecte transportabilePetele de sperm de pe mbrcmint lenjerie de pat, perne i alte obiecte transportabi trebuie recoltate, ca atare;.Dac un obiect are pe el pete umed acestea trebuie lsate s se usuce nainte de a recoltate;Fiecare obiect trebuie mpachetat separ ntr-un recipient de hrtie curat;Fiecare obiect trebuie sigilat i etichetaObiectele trebuie inute la frigider trimise la laborator ct mai curnd posibil.

Pete de sperm de peobiecte mari care pot fi tiateExemple de obiecte care pot s aib pe de sperm i care pot fi tiate sunt covoarel lenjeriile de pat i tapieriile;Se catalogheaz proba aa cum am desci mai sus;Se folosete o lam sau un cuit curat pentru a tia zona cu pete;Se mpacheteaz proba pentru a o asigura i a preveni orice contaminare;Acest pachet se pune ntr-un recipient, se sigileaz i se eticheteaz.

Pete de sperm de pesuprafee neabsorbantei netransportabileExemple de asemenea suprafee sunt podelele, tejghelele i suprafeele de metal;Se catalogheaz petele de sperm aa cum am mai descris;Se folosete un bisturiu curat pentru a rzui petele de sperm pe o hrtie curat i se pun ntr-un recipient;Se cur bisturiul nainte de fiecare folosire, pentru a evita contaminarea;Fiecare recipient trebuie sigilat i etichetat.

Probele de spermde la victimele atacurilor sexualeVictimele atacurilor sexuale sunt ntotdeauna examinate n spital;Probele fizice trebuie recoltate dup procedurile stabilite;procedur standard n viol 6 reprezint

recoltarea probelor vaginale, orale i anale;Fiecare prob trebuie mpachetat, sigilai i etichetat;Probele trebuie aduse la laborator ct mi curnd posibil.

esuturi, organe i oaseesuturi, organe i oase proaspeteFiecare prob trebuie descris : documentat prin schiare, fotografiere i filmareAcest tip de prob poate fi recoltat cu u forceps curat;Fiecare articol trebuie pus ntr-un recipiei curat, fr fixatori adugai;Fiecare recipient trebuie sigilat, etichet; i depozitat ntr-un congelator;Probele trebuie aduse la laborator ct m; curnd posibil.

esuturi, organe i oase vechiAnainte de a fi recoltat, fiecare prob trebuie fotografiat i schiat. Se noteaz mrime! forma i distanele dintre probe;Fiecare prob trebuie recoltat cu mnu: curate;Trebuie s fim ateni s nu contaminm prob de la alta; de aceea, pentru fiecare prob mnuile se schimb;Fiecare prob trebuie pus ntr-un recipient curat, care se sigileaz i se eticheteaz;Probele pot fi depozitate la temperatura camerei i duse la laborator ct mai curnd posibil.

Urina, saliva i altelichide ale organismuluiProbe lichideUrina lichid sau saliva trebuie transferate ntr-un recipient curat ct mai curnd posibil;Recipientul trebuie sigilat i etichetat;Probele trebuie pstrate la frigider i duse la laborator ct mai curnd posibil.

PetePetele de urin i saliv pot fi recoltate ca atare sau prin rzuire;Fiecare prob se pune ntr-un recipient de hrtie curat. Petele recoltate prin rzuire se pun ntr- un plic de hrtie curat care, apoi, este pus ntr-un recipient de hrtie;Probele trebuie sigilate i etichetate;Probele trebuie aduse la laborator ct mai curnd posibil.

Probele de prL Probele de pr trebuie recoltate cu ajutorul unei pensete curate;Fiecare prob de pr trebuie mpacheti separat i apoi sigilat i etichetat;Recoltarea trebuie fcut cu atenie, peni a nu deteriora rdcina Firului de pr;Prui amestecat cu snge, esuturi sau a lichide ale organismului, trebuie tratate cu aten Fiecare prob trebuie pus ntr-un recipient cur dup care se sigileaz i se eticheteaz;Probele se depoziteaz n frigider i se d la laborator, ct mai curnd posibil.

GHID DE LABORATOR PENTRU PRELUCRAREA PROBELOR DE ADN

A. Primirea probelor la laboratorDup ce probele au fost recoltate transportate la laboratorul medico-legal, penti prelucrarea lor se fac urmtoarele recomandriProbele fizice trebuie admise la laborat< cu ordonana n care este notat tipul de examina solicitat;Toate probele primite dup procedui standard a laboratorului respeciv.(vb.)Numrului cazului trebuie verificat naini de a fi primit;Se va verifica modul n care sur mpachetate, sigilate i etichetate. Va trebui notai fiecare incorectitudine semnalat;Se va nota orice semn de murdrie de pe ambalaj;Se va nregistra orice informaie privitoare la tipul de test ADN i la cazul respectiv;La primirea probelor se vor nota data, ora, numele laboratorului, numele celui care primete proba, a celui care o aduce, nr. cazului;Probele fizice care vor fi supuse testrii ADN trebuie aduse la laborator ct mai curnd posibil.

B. Metode de laboratorpentru prelucrarea iniialDup ce s-a primit cazul, nainte de analiza propriu-zis a AND-ului pentru prelucrarea iniial sc recomand urmtoarele :Se folosete o form de examinare a probelor pentru a nregistra prelucrarea iniial a fiecrui articol. Informaiile necesare pentru fiecare prob sunt:

descrierea pachetuluietichetarea

c ) descrierea probeid ) orice alt articol de prob n acelai pachete ) nr. cazului i al articoluluif) data i numele examinatoruluiSe localizeaz zonele cu pete, folosind fotografii, notie i schie;Se nregistreaz localizarea, mrimea i5.1.3. EVALUARE A PROBELOR

5.1.3. EVALUARE A PROBELOR

#

#

#i

starea oricrei pete biologice;Trebuie nregistrate rezultatele oricrui tei preliminar;Se vor consemna corect rezultatele testeloi pentru fiecare articol;Se va folosi o form de nregistrare a informaiilor pentru fiecare prob care va fi supus analizei ADN. Informaiile care trebuie incluse sunt urmtoarele :

a ) nr. cazuluib ) descrierea articolului i nr.c ) localizarea peteid ) mrimea i fonna peteie ) starea de amestec a petei cu alte lichidef) cantitatea probeig ) nr. eprubetei n care a fost pus;Fiecare prob de ADN testat trebuie recoltat cu grij pentru a preveni contaminarea ;Se va pstrat o parte din prob pentru o posibil analiz viitoare;Fiecare prob pentru analiza ADN trebuie pus ntr-o eprubet pachet sau recipient separat;nainte de a fi extras, fiecare prob- testare de ADN trebuie inventariat;Pentru articolele care vor fi analizate prin metoda PCR se va recolta o prob de control;Poriunile nefolosite din probe trebuie nregistrate, reambalate, resigilate, etichetate i depozitate ntr-un congelator.nainte ca probele s fie analizate pentru tipizarea ADN, uneori se efectueaz teste de confirmare pentru stabilirea tipului de material biologic. De asemenea, exist o serie de teste de culoare pentru variate lichide biologice cum ar fi sngele, sperma sau saliva, care se pot efectua la locul crimei, nainte ca probele s fie recoltate.

Dup identificarea probei, prin testare sau investigaii, se efectueaz teste preliminarii pentru stabilirea strii ADN care se afl n prob. Este posibil, s se efectueze teste care s releve calitatea ADN (n ce stare de degradare se afl), ce cantitate de AND exist n prob i ct din aceasta este de origine uman. Electroforeza pe gel de agaroz poate permite aprecierea cantitii de ADN i, n acelai timp, d informaii despre starea de degradare a sa. Cuantificarea componentei umane din totalul de ADN se poate face prin metoda sloi blot Evaluarea calitii ADN este esenial pentru luarea deciziei privind investigarea unei probe individuale, i anume, dac este posibil folosirea metodei RFLP sau dac metoda PCR este mai indicat.

#

#

5.1.4. RFLP

#

Testul RFLP necesit un minimum de Al cu o greutate molecular relativ mare (HMW DN Acest ADN presupune fragmente de aproxima- 25.000 bp. (20 - 25 kb). Cu alte cuvii degradarea nu trebuie s fi produs fragmente r mici dect acestea. Dup cum am stabilit anten dac ADN-ul care a fost mai pregnant degradat e folosit pentru tehnica RFLP, exist pericolul s poat fi evideniate benzile cu ADN cu greut molecular mare. De exemplu, un model cu 2 bei poate fi tipizat eronat cu o singur bam Necunoaterea gradului de degradare a probei po duce la excluderi false.

Pentru efectuarea cu succes a unei anali RFLP este, totui, necesar o cantitate minii de AND. Nivelul acestei cantiti minime e: oarecum dependent de laborator i variaz funcie de metoda de marcare a prob (radioactiv sau chemiluminescent) i tinde se afle ntre valorile de 10 pn la 50 ng. Cu a cuvinte, sunt necesare 10-50 ng de ADN greutate molecular mare pentru a se obi rezultate corespunztoare prin RFLP.5.1.5. LABORATORUL DEIDENTIFICRI GENETICEPRIN AMPRENTA ADN(LIGAA) CRAIOVAPrimul de acest gen din Romnia, laboratorul i are sediul la Universitatea de Medicin i Farmacie Craiova, lucrnd n colaborare i pe baz de contract cu Institutul de Medicin Legal Craiova. A luat fiin n baza adresei Ministerului Justiiei nr. AMA / 1454 /31.08.2000, n care se precizeaz c cele dou instituii, fostul Laborator Exterior de Medicin Legal Craiova, actualul Institutul de Medicin Legal Craiova i Universitatea de Medicin i Farmacie Craiova, pot efectua, ncepnd cu data de 15 august 2000, la cererea instanelor de judecat, a organelor judiciare i a persoanelor interesate, contra cost, potrivit prevederilor legale n vigoare, toat gama de investigaii asupra ADN-ului uman, utilizate pentru stabilirea filiaiei, identificriipe baz de fragmente de esuturi i organe, ori alte produse biologice ce conin ADN.Prin adresa nr. XI / C / GH / 9118 /15.12.2000 a Ministerului Sntii, Direcia Strategie, Dezvoltare i Management, s-a aprobat funcionarea acestui laborator.n noiembrie 1997, Biroul Federal de Investigaii ( FBI ) din SUA a anunat selectarea a 13 loci STR care s constituie baza de date pentruStatele Unite i care a fost numit CODIS 13 Combined DNA Index System ). Toii locii SI din sistemul CODIS 13 sunt formai din secver tetramericc repetate. Laboratoarele care utilizea acest sistem pot contribui la alctuirea bazelor date internaionale. Corporaia Promega a fost prir companie care a nceput s livreze sisteme detecie pentru cei 13 loci introdui n sistem CODIS, cum ar fi sistemul multiplex STR s sistemul megaplex STR.Noul sistem de tipizare ADN prin folosir locilor STR prezint o serie de avantaje. Prim avantaj este acela c permite amplificarea simulta a mai multor loci (reaciile multiplex), iar cel de doilea c allelele pot fi detectate direct i raj: prin tehnici de fluorescen. Aceasta perm simultan elcctroforeza i detecia a pn la 9-10 k n acelai timp. De asemenea, utilizar fluorcscenei a permis automatizarea deteci Astzi, sunt produse o serie de kituri pentru detec automat. O trecere n revist a acestei tehnolo poate fi gsit n referinele 10 i 11.Funcia de baz a tuturor testelor, fie ele paternitate sau de identificare, este de a exclu numrul maxim posibil de indivizi. Aceasta impu o serie de calcule statistice care includ frecveni populaionale ale adelelor determinate.Experiena personalului din LaboratorulIdentificri Genetice prin Amprentarea AND (LIGAA) care funcioneaz n cadrul UMF Craiova, precum i aparatura modern de care dispune acest laborator permit stabilirea amprentei genetice a unei persoane, prin analiza locilor STR inclui n sistemul CODIS 13, LIGAA i poate procesa simultan un numr mai mare de probe. Analizele pot fl prelucrate n funcie de urgena fiecrui caz i dureaz ntre dou sptmni i o lun. Datorit acurateei metodelor utilizate, certitudinea de paternitate sau de provenien a unei probe este de peste 99,99 %.Putem da astzi cteva exemple privind unele rezultate obinute, care au fcut posibil identificarea unor infractori, punnd pe masa justiiei probe incontestabile :Cazul V.O. de la Parchetul Satu Mare, acuzat de viol la minore, din 05.06.2001, n care s- a fcut n premier naional identificarea unei persoane pe baza ADN-ului extras din fir de pr. Concluziile actului de expertiz au precizat urmtoarele :

INTERPRETAREA REZULTATELOR: Din firele de pr prelucrate s-a reuit extracia ADN. Acest ADN s-a folosit pentru analiza a 9 gene (loci), folosite n sistemul internaional de identificri genetice.Allele determinate la probele 2 i 3 (fire de pr pubian recoltate pe fesele victimei) coincid n totalitate cu allelele bnuitului (proba 4), aceast coinciden fiind de 100 %. Nu exist nici o coinciden de allele ntre proba 1 (victima) i probele 2 i 3.Lund n calcul frecvenele allelelor prezente la probele 2 i 3, respectiv 4, probabilitatea de coinciden cu o alt prob ntmpltoare este de 1 la 621 miliarde de indivizi Concluzie final:Firele de pr din probele 2 i 3 provin de laO. (proba 4).Cazul P.K. de la Parchetul dc pe lng Curtea Suprem de Justiie, acuzat de omor i jaf, n care s-a determinat amprenta genetic a unei victime de pe o pat de snge, de pe pantaloni bnuii c ar aparine fptuitorului.

INTERPRETAREA REZULTATELOR: Din#probele prelucrate s-a reuit extracia de ADN din probele 68A, 68B. 68D, i 68E. Acest ADN s-a folosit pentru analiza a 9 gene (loci), folosite n sistemul internaional dc identificri genetice, precum i pentru determinarea sexului genetic (Amelogenina). Allele determinate la probele 68 A, 68 B i 68 E coincid n totalitate, aceast coinciden fiind de 100 %, fapt ce atest c sngele care a produs aceste probe provine de la acelai individ, care este de sex masculin.Probabilitatea statistic de coinciden, adic probabilitatea ca o alt prob ntmpltoare s coincid cu amprenta ADN determinat de noi la probele 68 A, 68 B i 68 E, este de 1 la 13,6 miliarde. Concluzii finale:Petele de snge de pe pantalonii bnuitului P. K. (probele 68 A i 68 B) provin de la victima M. V, probabilitatea de coinciden cu o alt prob ntmpltoare fiind de 1 la 13,6 miliarde.Cazul .N. de la Judectoria Craiova, acuzat de incest asupra celor dou fiice: s-a determinat amprenta genetic pe tampoane vaginale recoltate de la cele dou victime i pe snge de la bnuit.

INTERPRETAREA REZULTATELOR: Din probele prelucrate s-a reuit extracia ADN. Acest ADN s-a folosit pentru analiza a 9 gene (loci), folosite n sistemul internaional de identificri genetice. Tamponul vaginal (proba 91 A), avnd n vedere c are celule din dou proveniene (celule epiteliale vaginale de la .L.C. i respectiv spermatozoizi de la autorul violului), prin analiza genetic a evideniat dou amprente ADN suprapuse. Una din aceste amprente corespunde in proporie de 100 % cu amprenta genetic a numitei .L.C.(proba 91 C), iar cealalt amprent coincide n proporie de 100 % cu amprenta numitului .N, (proba 91 B). Probabilitatea statistic de coinciden, adic probabilitatea ca o prob? ntmpltoare s coincid cu amprenta ADN ? probei 91 B, este de 1 la 1484 de miliarde. Concluzii finale:Spermatozoizii coninui n tamponu vaginal recoltat de la numita .L.C. (proba 91 At provin de la numitul .N. (proba 91 B) probabilitatea de coinciden cu o alt probi ntmpltoare fiind de 1 la 1484 miliarde indiviziCazul P.M. de la Parchetul Iai, acuzat d< viol i uciderea victimei, unde amprenta genetic, (ADN) s-a fcut pe baza unui tampon vaginal de 1 victim, a sngelui recoltat de la cadavrul victime precum i a petelor de snge gsite pe hainei agresorului i a sngelui integral al agresorului.

INTERPRETAREA REZULTATELOR: Di probele prelucrate s-a reuit extracia AND. Ace: ADN s-a folosit pentru analiza a 9 gene ( loci utilizate n sistemul internaional de identific genetice. Tamponul vaginal (proba 87 D), cai conine celule din dou proveniene (celui epiteliale vaginale de la P.E. i respeci spermatozoizi de la autorul violului), prin analiza genetic a evideniat dou amprente ADN suprapuse. Una din aceste amprente corespunde n proporie de 100 % cu amprenta genetic a victimei P.C. (proba 87 B i 87 C), iar cealalt amprent coincide n proporie de 100 % cu amprenta numituluiP. M. ( proba 87 A ). Probabilitatea statistic de coinciden, adic probabilitatea ca o prob ntmpltoare s coincid cu amprenta ADN a probei 87 A, este de 1 la 36,1 de miliarde. Pata dc snge din proba 87 E provine de la victim. Concluzii finale:Spermatozoizii coninui n tamponul vaginul recoltat de la victima P.E. (proba 87 D) provin de la numitul P. M. (proba 87 A), probabilitatea de coinciden cu o alt prob ntmpltoare fiind de 1 la 36,1 miliarde indiviziCazul cadavrului neidentificat ntr-o eav de irigaii agricole de la I.P.J. Piteti, n care trebuia s demonstrm dac acest cadavru este de sex feminin i dac este rud (sor) cu 5 (cinci) persoane bnuite de a fi frai naturali.

INTERPRETAREA REZULTATELOR: Din probele prelucrate s-a reuit extracia ADN. Acest ADN s-a folosit pentru analiza a 9 gene ( loci ), folosite n sistemul internaional dc identificriv#

v#

genetice, precum i pentru determinarea sexuli genetic. Pe baza amprentelor ADN determinate 1 fraii notai cu 96P2 ... 96P6, s-a putut deduc constituia genetic a prinilor acestora. n toat cele 9 gene analizate reiese c genele probei 96P ( cadavrul neidentificat ), sunt motenite de 1 aceiai prini, probabilitatea de paternitate fiin de 99.999 %. Probabilitatea de coinciden cu u alt individ din populaie luat ntmpltor, adie probabilitatea ca o prob ntmpltoare s coincid cu amprenta ADN a probei 96P1, este de 1 la 29 miliarde de indivizi.Concluzii finale:Cadavru! de sex feminin reprezentat d proba 96P1 este sora persoanelor notate cu 96P'1 96P3, 96P4, 96P5, 96P6, cu o probabilitate d 99,999 % i cu o probabilitate de coinciden cu alt prob ntmpltoare de 1 la 296 miliarde a indivizi