Coloratii
-
Upload
alexandra-maria -
Category
Documents
-
view
89 -
download
0
Transcript of Coloratii
Coloraii i colorani
1
COLORAREAetapa prin care se urmrete creterea contrastului dintre diferitele componente tisulare prin modificarea indicilor de refracie ai substratului morfologic cu ajutorul
coloranilor .
2
COLORAREATehnica de colorare depinde de natura fixatorului utilizat i de esutul pe care dorim s l examinm.
3
COLORANTUL HISTOLOGICsubstan chimic colorat, de obicei de natur organic, ce poate intra n celul atandu-se la nivelul componentelor celulare i permind astfel diferenierea lor optic. Nu toate substanele colorate sunt colorani!4
COLORANI- grupri cromofore purttoare de culoare- grupri auxocrome capacitatea de a colora
5
GRUPARILE AUXOCROME1. Ionizate ( principale ) formeaz legturi electrochimice cu substratul 2. Neionizate ( secundare) formeaz legaturi de hidrogen cu substratul. Acest tip de legatur mrete stabilitatea colorantului.6
CLASIFICAREA COLORANILOR- natura lor - caracterele chimice
7
CLASIFICAREA COLORANILOR
Dup natura lor
Naturali - vegetali : hematoxilina ,safranina , orceina , turnesolul - animali : carminul Sintetici : albastru de metil
8
CLASIFICAREA COLORANILOR
Dupa caracterele chimice
Acizi sunt de obicei sruri de acizi organici , gruparea auxocrom principal fiind ncrcat electric negativ.
- se ataeaz pe un substrat morfologic ncrcat electric pozitiv9
CLASIFICAREA COLORANILOR
Dupa caracterele chimice
Bazici gruparea auxocroma principal ncrcat electric pozitiv , deci se va ataa pe un substrat ncrcat negativ
10
CLASIFICAREA COLORANILOR
Dupa caracterele chimice
Neutri grupri auxocrome principale ncrcate electric pozitiv i negativ, fiind soluii apoase de colorani bazici i acizi ntr-o anumit proporie
11
MECANISMUL COLORRIIPROTEINELE - substratul molecular la nivelul crora se fixeaz coloranii prin legturi electrochimice i de hidrogen.
12
MECANISMUL COLORRIIIn funcie de tipul gruprilor ionizabile din structur , proteinele sunt 1 acide 2 bazice 3 neutre13
MECANISMUL COLORRIIColorant bazic substrat (=proteina) acid (ex: hemalaunul)Nucleul caracter bazofil: albastru-nchis / violet14
MECANISMUL COLORRIIColorant acid substrat bazic (ex: eozina) Citoplasma caracter acidofil: roz/rou
15
Evidentierea componentelor celulare ( hemalaun-eozin)
16
ETAPELE COLORRII1. 2. 3. 4.
5.6. 7.
Deparafinarea Hidratarea Mordansarea ( la nevoie) Colorarea propriu-zis Splarea Deshidratarea Clarificarea17
METODE DE COLORARE1. In funcie de momentul colorrii2. 3.
4.5.
Dupa nr. de coloranti utilizai Dup mecanism Dup metoda de obinere a coloraiei optime In funcie de raportul dintre rezultatul colorrii i culoarea colorantului18
Momentul colorrii
Vitale - colorant vital care este ncorporat de animal n timpul vieii; persist numai att timp ct celulele supravieuiesc n vitro Permanente pentru colorarea preparatelor permanente19
Numr de colorania
Simple folosete un singur colorant Combinate (policrom) 2 sau mai muli colorani i. Succesiv ii. Simultan, ex . : hemalaun - eozin, azan20
b
Mecanism- direct
simplu contact dintre colorant si substrat - indirect necesit prezena unui mediator sau MORDANT , ntre colorant i substrat. Acesta fixeaz colorantul de componentele celulare.21
Metoda de obinere a coloraiei optime- progresive
prin adugri succesive pna se ajunge la momentul optim de colorare
- regresive - prin aciunea prelungit a colorantului pn la obinerea unei supracolorri , apoi se acioneaz cu un agent chimic decolorant (difereniator) (ex. Coloratia Nissl).
22
Rezultatul colorrii i culoarea colorantului- Ortocromatic substratul se
coloreaz n aceeai culoare ca i cea a colorantului
- Metacromatic - substratul se coloreaz n alt culoare ca cea a colorantului23
IMPREGNARI METALICEPRINCIPIU: precipitat de metal care se depune pe diferitele elemente de tesuturi evideniind structuri care n mod obisnuit nu se coloreaz cu colorani.
- cele mai folosite sunt : Ag , Au , Os , Hg.24
IMPREGNARE ARGENTIC- folosit pentru evidenierea elementelor din esutul epitelial, conjunctiv i n cercetarea sistemului nervos. Rezultate: structurile vizate sunt colorate n negru.25
Coloraia
Componeni Rezultate
26
COLORAIA HEMALAUN EOZIN2 colorani: 1 - hemalaunul colorant bazic 2 - eozina colorant acid
REZULTATE - nuclei albastru - violet - citoplasma roz- rosu27
HEMALAUN-EOZIN
28
COLORAIA HEMALAUN EOZINA CU ALBASTRU DE METIL - coloratie REZULTATE tricrom 1. Nuclei violet 1. hemalaun 2. Citoplasma albastru cenusiu 2. eozina 3. Fibrele de 3. albastru de colagen albastru metil intens29
COLORAIA HEMALAUN EOZINA CU ALBASTRU DE METIL
30
COLORATIA VAN GIESON- coloratie
REZULTATE 1. Nuclei negri tricrom 1. hematoxilina 2. Citoplasma galben feric 3. Fibre de 2. acidul picric colagen rou 3. fuxina acid intens31
VAN GIESON
32
COLORATIA MASSON- coloratie
tricrom 1. hematoxilin feric 2. soluia colorant A ce conine fuxin acid 3. soluia colorant B ce conine albastru de anilin
REZULTATE 1. Nuclei negru 2. Citoplasma rou violet deschis 3 Fibrele de colagen albastru intens33
COLORATIA MASSON
34
COLORATIA MALLORYSe utilizeaz : 1. fuxin acid 2 albastru Mallory ( contine albastru de anilina i orange G )
REZULTATE 1. Nuclei - rou intens 2. Citoplasma roie 3. Fibre de colagen i reticulin albastru 4. esut muscular neted - violet 5. esut muscular striat - rou portocaliu35
COLORATIA MALLORY
36
COLORATIA AZAN- azocarmin C
- albastru Heidenhein , cu anilin i orange G
REZULTATE Nuclei rou viu Citoplasma rou Fibre de colagen i reticulin albastru deschis esut muscular striat rou , orange sau galben37
COLORATIA AZAN
38
COLORATII CITOLOGICE- utilizate pentru evidenierea anumitor organite celulare
39
METODA CAJAL DA FANO- evidenierea complexului GolgiREZULTATE Nuclei necolorai Aparatul Golgi reea perinuclear de culoare neagr Citoplasma aurie40
METODA CAJAL DA FANO
41
METODA HEMATOXILINA FERICA REGAUD- evidenierea
mitocondriilor
REZULTATE Nucleu necolorat Nucleol negru Mitocondrii puncte negre42
METODA HEMATOXILINA FERICA REGAUD
43
TEHNICI DE EXAMINARE A TESUTULUI EPITELIAL IMPREGNAREA ARGENTICA RANVIER- evidentierea interstiiului dintre celulele epiteliului din seroase limitele intercelulare apar net n culoarea neagr44
IMPREGNARE ARGENTICA ESUT EPITELIAL
45
TEHNICI SPECIALE DE EXAMINARE A TESUTULUI CONJUNCTIVCOLORAIA CU ALBASTRU DE TOLUIDIN - granulaiile din mastocite prin coloraie metacromatic n rou violet
46
47
TEHNICI SPECIALE DE EXAMINARE A TESUTULUI CONJUNCTIVMETODE PENTRU EXAMINAREA FIBRELOR CONJUNCTIVE
1.
Fibrele de reticulin se examineaz folosind o metoda electiv - IMPREGNAREA ARGENTICA i apar colorate n negru 2. Fibrele elastice se poate utiliza coloraia cu a. Rezorcin fuxina - albastre b. Orcein cafeniu - roscate 48
Fibre elastice orcein Fibre reticulin impregnare argentic
49
TEHNICI SPECIALE PENTRU EXAMINAREA ESUTULUI MUSCULARMETODA HEIDENHEIN (cu hematoxilina ferica) - evidentiaz structura periodic a miofibrilelor. Se remarc alternana de zone clare i ntunecate.
50
METODA HEIDENHEIN
51
Metode speciale pentru evidenierea esutului nervos- metoda Nissl-
impregnare argentic Evidenierea tecii de mielin prin fixare cu tetraoxid de osmiu
52
Impregnare Ag
Nissle
53
54