CERCETĂRI ASUPRA VARIAŢIILOR FARMACOCINETICE ALE UNOR PREPARATE ANTIINFLAMATOARE FOLOSITE TOPIC

7/31/2019 CERCETRI ASUPRA VARIAIILOR FARMACOCINETICE ALE UNOR PREPARATE ANTIINFLAMATOARE FOLOSITE TOPIC

1/52

UNIVERSITATEA DE MEDICIN I FARMACIE

CRAIOVA

REZUMAT

TEZ DOCTORAT

CERCETRI ASUPRA VARIA IILOR

FARMACOCINETICE ALE UNOR PREPARATE

ANTIINFLAMATOARE FOLOSITE TOPIC

CONDUCTOR TIIN IFIC

Prof. univ. dr. FLORICA POPESCU

DOCTORAND

ANI-SIMONA SEVASTRE

CRAIOVA

2011


2/52

2

UNIVERSITATEA DE MEDICIN I FARMACIE - CRAIOVA

REZUMAT

TEZ DOCTORAT

CERCETRI ASUPRA VARIA IILOR

FARMACOCINETICE ALE UNOR PREPARATE

ANTIINFLAMATOARE FOLOSITE TOPIC

CONDUCTOR TIIN IFIC

Prof. univ. dr. FLORICA POPESCU

DOCTORANDANI-SIMONA SEVASTRE

CRAIOVA

2011


3/52

3

CUPRINSI. Introducere....................................................................................................................................5

II. Parte teoretic - Stadiul cunoaterii...........................................................................................7

II.1. Pielea, cale de administrare a formelor farmaceutice semisolide................................................7

II.2. Administrarea topic a medicamentelor..........................................................................7

II.2.1. Forme farmaceutice folosite topic n terapeutic..............................................7II.2.2. Penetrarea medicamentelor administrate topic.................................................8

II.2.3. Metode de testare a difuziei..............................................................................8

II.2.3.1. Metode in vitro...................................................................................8

II.2.3.2. Metode in vivo....................................................................................9

II.3. Antiinflamatoarele nesteroidiene - date actuale din literatur..........................................9

II.3.1. Clasificarea antiinflamatoarelor nesteroidiene.................................................10

II.3.2. Efecte adverse...................................................................................................10

II.3.3. Metabolizarea AINS - retragerea de pe pia a Vioxx i Bextra ..........................11

II.3.4. Aplicarea topic a antiinflamatoarelor nesteroidiene stadiul cunoateriiactuale.......................................................................................................................................11

II.4. Meloxicamul substan medicamentoas test................................................................11

II.4.1. Meloxicamul reprezentant al inhibitorilor de COX2......................................11

II.4.2. Proprieti farmacologice ale Meloxicamului....................................................12

II.4.2.1. Farmacocinetica..............................................................................................12

II.4.2.2. Farmacodinamia..............................................................................................12

II.4.3. Proprieti fizico-chimice...................................................................................13

II.4.4. Modaliti de cretere a difuziei Meloxicamului prin membrane artificiale i piele

animal promotori fizici i chimici........................................................................................13II.4.4.1. Promotori chimici ai absorbiei...........................................................13

II.4.4.2. Promotori fizici ai absorbiei...............................................................13

II.4.5. Formulri Meloxicam.........................................................................................14

II.5. Controlul unguentelor.......................................................................................................14

III. Cercetri personale......................................................................................................................15

III.1. Motivarea alegerii subiectului cercetat............................................................................15

III.2. Design experimental........................................................................................................15

III.3. Studiul I Contribuii personale la obinerea i controlul formelor farmaceutice

semisolide pentru aplicare topic pe baz de Meloxicam. Metode de optimizare a gradului desolubilizare a Meloxicamului................................................................................................................16

III.3.1. Motivaia i obiectivele studiului......................................................................16

III.3.2. Material i metod.............................................................................................17

III.3.3. Rezultate............................................................................................................18

III.3.4. Discuii...............................................................................................................19

III.3.5. Concluzii............................................................................................................20


4/52

4

III.4. Studiul II - Profilul farmacocinetic de cedare in vitro a Meloxicamului prin membrane

artificiale din formele farmaceutice semisolide hidrofile. Influena promotorilor de absorbie

i a pH-ului............................................................................................................................................21

III.4.1. Motivaia i obiectivele studiului......................................................................21

III.4.2. Material i metod.............................................................................................21

III.4.3. Rezultate............................................................................................................23

III.4.3.1. Studiu comparativ: Influena agentului de solubilizare asupra vitezei de

difuzie i procentului de Meloxicam difuzat..................................................................23

III.4.3.2. Studiu comparativ: Influena pH-ului asupra vitezei de cedare..........26

III.4.3.3. Studiu comparativ: Influena pH-ului asupra procentului de Meloxicam

difuzat.............................................................................................................................27

III.4.3.4. Studiu comparativ: Distribuia Meloxicamului n cele trei

compartimente: unguent hidrofil membran - soluie receptoare................................28

III.4.4. Discuii................................................................................................................29

III.4.5. Concluzii.............................................................................................................30

III.5. Studiul III - Profilul farmacocinetic de cedare in vitro a Meloxicamului prin piele animal

din formele farmaceutice semisolide hidrofile. Influena promotorilor de absorbie i a pH-ului.........31

III.5.1. Motivaia studiului..............................................................................................31

III.5.2. Material i metod..............................................................................................31

III.5.3. Rezultate.............................................................................................................32

III.5.3.1. Studiu comparativ: Distribuia Meloxicamului n cele trei

compartimente: unguent hidrofil membran - soluie receptoare................................33

III.5.3.2. Studiu comparativ: Influena agentului de solubilizare i a pH-ului

asupra vitezei de cedare..................................................................................................34

III.5.3.3. Studiu comparativ: Influena agentului de solubilizare i a pH-ului

asupra procentului de Meloxicam difuzat.......................................................................35

III.5.4. Discuii................................................................................................................39

III.5.5. Concluzii.............................................................................................................40

III.6. Studiul IV Compararea difuziei in vitro a Meloxicamului prin membran artificial i

prin piele animal....................................................................................................................................41

III.6.1. Variaia vitezei de difuzie a Meloxicamului n funcie de timp..........................41

III.6.2. Variaia procentului de Meloxicam difuzat n funcie de timp...........................42

III.7. Studiul V - Evaluarea farmacocinetic in vivo a unor preparate cu antiinflamatoare

nesteroidiene aplicate topic folosind experimente pe animale................................................................42III.7.1. Motivaia studiului..............................................................................................42

III.7.2. Material i metod...............................................................................................43

III.7.3. Rezultate..............................................................................................................44

III.7.4. Discuii................................................................................................................45

III.7.5. Concluzii.............................................................................................................46

IV. Concluzii finale.....................................................................................................................46

V. Bibliografie selectiv..............................................................................................................50


5/52

5

I. INTRODUCERE

n prezent se acord un interes din ce n ce mai crescut medicaiei antiinflamatoare. S-a

observat tendina de a evita administrarea antiinflamatoarelor pe cale oral datorit efectelor adverse

multiple i nlocuirea acestei ci pe ct posibil cu o alt cale de administrare. De cele mai multe ori,

pentru tratarea afeciunilor reumatismale se prefer administrarea local, topic a antiinflamatoarelor

nesteroidiene. Numrul studiilor avnd ca interes durerea a crescut semnificativ n ultimul deceniu,

ceea ce arat c acest domeniu are foarte multe resurse neexploatate nc la nivel mondial. Numrul

de apariii n perioada 2000-2010 raportat la numrul de apariii din 1990-2000 este cu aproximativ

25% mai mare.

Din problematica foarte vast a antiinflamatoarelor, aceast tez de doctorat se axeaz pe

studiul farmacocineticii antiinflamatoarelor nesteroidiene.

Teza are o partea teoretic ce reprezint aproximativ 30% din volumul total i o parte

experimental intitulat Cercetri Personale, care ocup 70% din tez.Partea teoretic este mprit n 5 subcapitole. n primul subcapitol sunt prezentate date de

actualitate referitoare la piele, ca i cale de ad ministrare a formelor farmaceutice semisolide. Al doilea

subcapitol al prii teoretice aduce informaii din literatura de specialitate folosite la studierea

administrrii topice a medicamentelor, cu punctarea metodelor de testare a difuziei i a factorilo r care

controleaz absorbia dermic i transdermic. n al treilea subcapitol s-a pus accent pe datele actuale

din literarur referitoare la antiinflamatoarele nesteroidiene, rezervndu-se apoi un ntreg subcapitol

unui reprezentant al acestei clase Meloxicamul un antiinflamator nesteoidian inhibitor de COX2.

Ultimul subcapitol al prii teoretice se axeaz pe prezentarea metodelor utilizate n controlulunguentelor, ca i reprezentante ale formelor farmaceutice semisolide.

A doua parte a tezei intitulat Cercetri Personale este structurat n 7 subcapitole.

Contribuiile personale sunt justificate n primul subcapitol n care se motiveaz alegerea

subiectului cercetat. n ara noastr, Meloxicamul (cod ATC M01AC06) se gsete doar sub form de

comprimate, supozitoare i soluii injectabile potrivit ANM Romnia, nu in preparate topice.

Designul experimental face obiectul celui de-al doilea subcapitol. Prin varierea parametrilor:

form farmaceutic, agent de gelificare, agent solubilizant, promotor de absorbie, pH form

farmaceutic, pH soluie receptoare, temperatur, membran utilizat, au fost planificate 21experimente, dintre care doar 16 experimente au fost efectuate, utiliznd doar formele farmaceutice

cu Meloxicam care s-au dovedit a fi optime calitativ.

Fiecare dintre cele 5 studii reprezint cte un subcapitol:

1. Studiul I Contribuii personale la obinerea i controlul formelor farmaceutice semisolide

pentru aplicare topic pe baz de Meloxicam. Metode de optimizare a gradului de solubilizare a

Meloxicamului;


6/52

6

2. Studiul II - Profilul farmacocinetic de cedare in vitro al Meloxicamului prin membrane

artificiale din formele farmaceutice semisolide hidrofile. Influena promotorilor de absorbie i a pH -

ului;

3. Studiul III - Profilul farmacocinetic de cedare in vitro al Meloxicamului prin piele animal

din formele farmaceutice semisolide hidrofile. Influena promotorilor de absorbie i a pH -ului;

4. Studiul IV Compararea difuziei in vitro a Meloxicamului prin membran atificial i prin

piele animal;

5. Studiul V - Evaluarea farmacocinetic in vivo a unor preparate cu antiinflamatoare

nesteroidiene aplicate topic folosind experimente pe animale;

Concluziile finale i bibliografia fac obiectul ultimelor dou capitole.

Lucrarea de fa este un rspuns la necesitatea observat prin studierea literaturii de specialitate

n ceea ce privete formularea unor preparate cu antiinflamatoare aplicate topic. Acest domeniu este

n continuu cercetat i are foarte multe aspecte neexploatate nc.

La finalizarea acestei teze, vreau sa exprim sincere mulumiri Doamnei Prof. univ. dr.

FLORICA POPESCU, conductorul meu de doctorat, un om deosebit care m -a ndrumat la fiecare

pas n elaborarea prezentei lucrri.

Experimentele din cadrul acestei teze de doctorat nu ar fi fost posibile fr ajutorul unor

persoane speciale crora le aduc mulumiri pe aceast cale. Mulumesc din suflet Domnului Prof.

univ. dr. farm. DUMITRU LUPULEASA Decanul Facultii de Farmacie UMF Carol Davila

Bucureti, Domnului Prof. univ. dr. JOHNY NEAM U Decanul Facultii de Farmacie UMF

Craiova, Domnului Prof. univ. dr. FLORIN GORUNESCU i Doamnei ef lucr. IONELA

BELU de la disciplina Tehnologie Farmaceutic.

Mulumesc persoanelor speciale pe care le am n jurul meu care ma ncarc n fiecare moment

cu optimism i de la care am n fiecare zi cte ceva nou de nvat.

Cuvinte cheie: Meloxicam, topic, difuzie, poteniatori de penetrare.


7/52

7

II. PARTE TEORETIC - STADIUL CUNOATERII

II.1. PIELEA, CALE DE ADMINISTRARE A FORMELOR

FARMACEUTICE SEMISOLIDE

Pielea este un esut particular, accesibil ce cntarete pn la 20% din greutatea total aorganismului. Din punct de vedere al compoziiei chimice, pielea conine aproximativ 70% ap, 25%

proteine i 2% lipide, restul de 3% fiind reprezentat de minerale, acizi nucleici, glicozaminoglicani,

proteoglicani i alte substane chimice. Pielea este format din 3 straturi principale: epiderm, derm i

hipoderm.

pH-ul suprafeei pielii unde hidratatrea este uor de reglat prin secreia glandelor s udoripare, are

valoarea de aproximativ 4,5. Aceasta reprezint de fapt mantaua acid a pielii.

Valoarea pH-ului este influenat de diferii factori precum: sex, vrst, temperatur corporal,

transpiraie excesiv, lumin solar, alimentaie, digestie. Pielea sntoas are capacitatea de atampona variaiile de pH provocate n special de produsele alcaline prin intermediul secreiilor

naturale i produse de metabolism care refac mantaua acid, dar aceasta constituie un efort care poate

provoca oboseala imbatrnirea precoce a pielii [1].

Exist chiar i variaii individuale ale structurii i aspectului pielii. Dupa coninutul n lipide,

aceste diferene se pot clasifica n patru tipuri de piele: piele normal; piele uscat (alipidic i

deshidratat); piele seboreic i piele mixt [1].

II.2. ADMINISTRAREA TOPIC A MEDICAMENTELOR

II.2.1. FORME FARMACEUTICE FOLOSITE TOPIC N TERAPEUTIC

Pentru utilizare topic, se folosesc urmtoarele forme clasice, tradiionale:

forme lichide: soluii, loiuni, emulsii, supensii, tincturi, aerosoli, spunuri lichide, spume [2];

forme semisolide: unguente, spume rigide, spunuri moi, linimente semisolide;

forme solide: pulberi, microsfere, comprimate, granulate.

Datorit caracteristicii comune de a adera pe piele sau pe mucoase, rmnnd un timp mai lung

sau mai scurt pe zona de tratat, au fost denumite forme bioadezive sau sisteme de eliberare bioadezive

a substanelor medicamentoase [1, 3, 4].

Din categoria formelor farmaceutice cu aplicare topic, experimentele din aceast tez s-au

orientat asupra formelor farmaceutice semisolide pentru aplicaii cutanate (unguente).

Unguentele sunt forme farmaceutice semisolide destinate administrrii pe piele sau pe mucoase,

n scop terapeutic sau de protecie. Sunt constituite din excipieni sau baze de unguent n care se

disperseaz substane medicamentoase[4].


8/52

8

Substanele active sunt ncorporate n baza de unguent, iar prin aplicarea local se dorete

exercitarea unui efect terapeutic la nivelul muchilor i esutului nvecinat. n cazul aplicrii locale a

antiinflamatoarelor nesteroidiene (AINS) sub forma unor unguente, concentraia local a substanei

active este mult mai mare dect n esutul netratat. Cantitatea necesar de AINS pentru a produce

efect terapeutic prin administrare local este mult mai mic dect la administrarea oral. Pot totui s

apar efecte secundare la aplicare topic de genul iritaiilor locale.

Formele farmaceutice topice cu antiinflamatoare nesteroidiene sunt foarte raspndite n ntreaga

lume. Printre cele mai folosite antiinflamatoare se regsesc: diclofenacul, indometacinul, piroxicamul,

fenilbutazona, ibuprofenul, ketoprofenul. Asigurarea unei aciuni terapeutice optime depinde foarte

mult de alegerea vehiculului i a poteniatorilor de penetrare, substane care faciliteaz penetrarea prin

alterarea reversibil a structurii pielii [5].

II.2.2. PENETRAREA MEDICAMENTELOR ADMINISTRATE TOPIC

Pentru ca substanele medicamentoase s ajung n straturile profunde ale epidermei i dermului

sau n circulaia sistemic, trebuie ca n prima etap s se produc penetrarea acestora.

Datorit permeabilitii reduse a pielii, o mic fraciune din substane este realmente absorbit,

deci numai substanele foarte active pot avea o aciune general, dup administrarea topic.

Ptrunderea medicamentelor n, i prin piele se poate face pe dou ci:

1. fie prin pori pereii foliculilor piloi (transfolicular) i mai puin prin glandele sudoripare;

2. fie transepidermal strbtnd epiderma [1, 6].

Factorii care influeneaz penetrarea medicamentelor administrate topic i implicit

biodisponibilitatea i aciunea formei farmaceutice sunt n numr de trei:

1. factori legai de structura i condiiile pielii;

2. factori legai de caracteristicile substanei active;

3. factori legai de compoziia formulei topice aplicate, un rol special avndu-l vehiculul

excipientul sau baza de unguent.

Un caz deosebit l reprezint preparatele transdermice, urmrindu -se ca viteza de difuziune din

vehicul s fie cea care controleaz absorbia, iar pielea s acioneze numai ca un canal de scurgere,

meninnd la zero concentraia substanei active care penetreaz i trece rapid n circulaie

[1, 6]

.

II.2.3. METODE DE TESTARE A DIFUZIEI

II.2.3.1. METODE IN VITRO

Studiile de eliberare i penetrare transdermic in vitro sunt cele mai simple i mai necostisitoare

metode de a caracteriza absorbia i profilurile de penetrare la nivelul pielii. Ele sunt efectuate n

timpul formulrii formelor farmaceutice topice pentru selectarea celor cu profil optim de absorbie i


9/52

9

cedare a substanei active. Prima etap n cazul aplicrii topice este etapa eliberrii substanei active

din forma farmaceutic aplicat.

Celulele de difuzie simuleaz difuzia transdermic. Acestea sunt constituite din dou

compartimente separate de membrana de difuzie. Compartimentul donor este cel care permite

aplicarea formei farmaceutice de testat, iar cel receptor este umplut cu lichidul n care trebuie s

difuzeze substana activ. Ca membrane de difuzie pot fi folosite membranele artifici ale (de nylon sau

celuloz), sau naturale (pielea de animal sau cea uman). Aceste studii pot fi efectuate n condiiile

asigurrii i meninerii viabilitii pielii animale folosite sau se poate folosi piele moart de animal.

n studiile din literatur, au fost efectuate comparaii ntre difuzia transdermic prin mai multe

tipuri de piele animal. Difuzia depinde de tipul de substan testat. n general, difuzia crete n

urmtoarea ordine: om=porc


10/52

10

Antiinflamatoarele nesteroidiene sunt folosite n farmacoterapia durerii alturi de alte clase de

medicamente, avnd un efect analgezic moderat, dar i antiinflamator i antipiretic putern ic.

Acioneaz favorabil n dureri reumatice, tromboflebite, abcese, dismenoree. Formele orale se

administreaz dup mese, deoarece sunt puternic iritante gastric.

Mecanismul de aciune principal al AINS este reprezentat de blocarea ciclooxigenazei (COX),

cu inhibarea sintezei de mediatori proinflamatori (leucotriene, tromboxani, prostaglandine).

II.3.1. CLASIFICAREA ANTIINFLAMATOARELOR NESTEROIDIENE[10,11]

n funcie de selectivitatea pentru enzima ciclooxigenaza 2, antiinflamatoarele nesteroidiene pot

fi clasificate astfel:

-Antiinflamatoare nesteroidiene clasice (generaia I)

-Acizi carboxilici:

-Derivai de acid salicilic: acid acetilsalicilic, diflunisal, benorilat.

-Derivai de acid acetic:-derivati de acid fenilacetic: diclofenac, alclofenac

-derivai de acizi carbociclici i heterociclici acetici: indometacin, sulindac,

lonazolac, ketorolac

-Derivai de acid propionic: ibuprofen, flurbiprofen, naproxen, ketoprofen,

dexketoprofen.

-Derivai de acid fenamic: acidul flufenamic, acid mefenamic, acid niflumic, acid

tolfenamic, etofenamat.

-Acizi enolici -Pirazolone: fenilbutazona -Oxicami: piroxicam,tenoxicam, lornoxicam.

-Antiinflamatoare nesteroidiene inhibitoare selective sau specifice de COX2 (generaia a II-a)

-Blocante selective:Meloxicam, nimesulid, nabumeton, etodolac

-Blocante specifice (coxibi):rofecoxib(retras de pe pia), celecoxib,parecoxib, etoricoxib,

valdecoxib, lumiracoxib

II.3.2. EFECTE ADVERSE

Efectele adverse menionate n literatur sunt efecte gastro-intestinale[12], efecte hematologice[13],

efecte cardiorenale[14], efecte hepatice[15], efecte asupra aparatului respirator, efecte asupra vindecrii

plgilor i asupra esutului osos [16], reacii de hipersensibilitate [17].


11/52

11

II.3.3. METABOLIZAREA AINS - RETRAGEREADE PE PIA A VIOXX I

BEXTRA

La puin timp dup introducerea lor pe pia, datorit efectelor adverse aprute, au fost retrase

dou dintre antiinflamatoarele nesteroidiene: rofecoxib (Vioxx) i valdecoxib (Bextra). Acest fapt a

dus la o mai mare atenie acordat efectelor adverse a AINS, chiar si a celor mai puin agresive

inhibitori COX2 selectivi [18].

II.3.4. APLICAREA TOPIC A ANTIINFLAMATOARELOR NESTEROIDIENE

STADIUL CUNOATERII ACTUALE

n general, n zilele noastre prescrierea antiinflamatoarelor nesteroidiene intr n

responsabilitatea medicilor, iar responsabilitatea eliberrii lor aparine farmacitilor care, din punct de

vedere farmacologic, trebuie s cunoasc n amnunt medicamentele eliberate i s sftuiasc

pacienii referitor la modul de administrare, contraindicaii, efecte adverse posibile i co-asocierea cualte medicamente. Spre deosebire de formele farmaceutice cu administrare oral, formele

farmaceutice semisolide pentru aplicare topic cu antiinflamatoare nesteroidiene pot fi eliberate fr

prescripia medicului i pot constitui o prim masur aplicat n cazul unor dureri acute i chiar

cronice [19].

Aplicarea topic de antiinflamatoare nesteroidiene ofer mijloace atractive de a reduce reaciile

adverse prim maximizarea eliberrii locale a substanei active cu minimizarea rspndirii ei

sistemice[20].

II.4. MELOXICAMUL SUBSTAN MEDICAMENTOAS TEST

II.4.1. MELOXICAMUL REPREZENTANT AL INHIBITORILOR DE COX2

Meloxicamul este un antiinflamator nesteroidian (AINS) din clasa oxicamilor cu proprieti

antiinflamatoare, analgezice, antipiretice si uricozurice. Este o enolcarboxamid nrudit cu

piroxicamul.

Solubilitatea, timpul de njumtire biologic i utilizarea n boli inflamatorii cronice, l fac un

candidat potrivit pentru forme farmaceutice cu cedare prelungit. n tratamentul afeciunilorreumatice se pot utiliza capsule sau comprimate cu cedare modificat cu Meloxicam administrate

oral.

Pentru aplicrile topice, Meloxicamul ar putea fi formulat n forme farmaceutice cu apl icare

local. n ara noastr nu exist nici o form farmaceutic cu aplicare topic pe baz de Meloxicam.

Meloxicamul are o activitate terapeutic ridicat n doze sczute i o tolerabilitate mai bun

dect a altor AINS.


12/52

12

Putnd fi administrat pe majoritate cilor de administrare, Meloxicamul este indicat n

tratamentul simptomatic de lung sau de scurt durat al afeciunilor precum: reumatismul,

rahnoidita, artrita, lombalgiile, sciatica, Zona Zoster si alte tulburri dureroase care afecteaz pielea,

dureri de intervenie chirurgical, dureri n zona temporomandibular, posttraumatice.

II.4.2. PROPRIET I FARMACOLOGICE ALE MELOXICAMULUI

II.4.2.1. FARMACOCINETICA

n studiile anterioare de farmacocinetic s-au folosit ca indicatori ai inflamaiei: temperatura

local, testele de locomoie, volumul edemului de la nivelul labuei.

Biodisponibilitatea Meloxicamului la administrare topic a fost de 1.05% fa de administrarea

oral. Aceste concentraii mici fac aceast cale optim pentru evitarea efectelor adverse

gastrointestinale i de prim pasaj hepatic [21].

Majoritatea AINS se leag puternic de albumin, n cazul Meloxicamului, acesta avnd unprocent de 99% de legare (cu preferin n snge, ficat, rinichi). Acest procent mare de legare duce la

restricionarea volumului de distribuie. 40-45% din concentraia steady state plasmatic se regsete

n lichidul sinovial adiacent. n literatur s-a observat o concentraie mai mare a Meloxicamului n

esutul inflamat dect n zonele neafectate de inflamaie [22].

Meloxicamul este aproape n totalitate eliminat sub form de metabolii. Eliminarea are loc n

mod egal la nivel renal si digestiv, i doar 0.25% eliminat prin urin. Meloxicamul este metabolizat

prin reacii din faza I, fr a fi detectai metabolii conjugai ai acestuia [23].

Meloxicamul administrat oral are un clearance total de 0.42-0.48 1/h i un timp de eliminare t

de 20 ore [24].

Afeciunile care nsoesc procesul inflamator pot influena farmacocinetica meloxicamului n

oricare dintre etape n sensul grbirii sau ncetinirii proceselor, cu apariia efectelor adverse sau toxice

ori a pierderii efectului terapeutic [25, 26].

II.4.2.2. FARMACODINAMIA

Comparativ cu alte AINS, Meloxicamul prezint o activitate sczut asupra COX 1, el avnd o

aciune de 18 ori mai slab dect a Indometacinului i de 29 ori mai slab dect a Diclofenacului.

Aceste studii au fost efectuate pe celule macrofage peritoneale de cobai prin inducerea expresiei

COX1 i COX2 cu ajutorul lipopolizaharidelor (LPS) [27].

Inhibiia preferenial a COX2 de ctre Meloxicam este strns legat de structura sa.

Modificarea structurii Meloxicamului prin schimbarea poziiei gruprii metil de pe grupul tiazolic din

poziia 5 n poziia 4 duce la o scdere semnificativ a selectivitii sale pentru COX2 i preferarea

enzimei COX1 [28].


13/52

13

II.4.3. PROPRIET I FIZICO-CHIMICE

Meloxicamul, un derivat de oxicam, este un AINS cu grupare acid enolic. Denumirea chimic

a Meloxicamului este 4-hidroxi-2-metil-N-(5-metil-2-tiazolil)-2H-1,2-benzotiazin-3-carboxamid-1,1-

dioxid. Are masa molecular 351,4. Formula sa empiric este C14H13N3O4S2.

Din punct de vedere al proprietilor fizice, Meloxicamul are structur cristalin, de culoare

galben deschis, practic insolubil n apa, cu o solubilitate crescut n acizi i baze puternice. Este foarte

puin solubil n metanol. Meloxicamul are un coeficient de partiie aparent (log P) app = 0.1 n n-

octanol/tampon pH 7.4. Valorile pKa ale Meloxicamului sunt 1.1 i 4.2 [29].

Solubilitatea sczut a Meloxicamului la pH acid poate sugera existena unor efecte secundare

gastrice mult diminuate n comparaie cu alte AINS. La pH -uri sczute, Meloxicamul este mult mai

lipofilic decat AINS cele mai apropiate ca structur: piroxicamul i tenoxicamul [30].

II.4.4. MODALIT I DE CRETERE A DIFUZIEI MELOXICAMULUL PRIN

MEMBRANE ARTIFICIALE I PIELE ANIMAL PROMOTORI FIZICI I CHIMICI

Pentru a avea o difuzie optim a unei substane printr -o membrana artificial sau natural

trebuie ca substana medicamentoas sa fie cedat cu uurin de ctre forma farmaceutic n care este

ncorporat i n acelai timp, s fie uor absorbit de ctre esutul receptor. Creterea difuziei la

nivelul pielii se poate face cu ajutorul promotorilor chimici i fizici (enhanceri chimici i fizici).

II.4.4.1. PROMOTORI CHIMICI AI ABSORB IEI

Solubilitatea Meloxicamului crete cu creterea pH-ului. Unul din factorii responsabili dedizolvarea unui compus organic este capacitatea sa de a disocia n ioni, fapt care la rndul su

depinde de pH. Deoarece Meloxicamul este un acid, solubilitatea sa e dependent de gradul de

disociere n ioni i deci de pH.

Solubilitatea Meloxicamului poate fi mbuntit i prin folosirea unor ageni de cretere a

solubilitii precum: alcooli (alcool laurilic, alcool stearilic, hexidecanol, octildodecanol, alcool

izostearilic), acizi grai (acid caproic i stearic), esteri (dietil cebacat, diizopropil adipat, izopropil

miristat, triacetin), terpene (eucaliptol, mentol), amine (di i trietanolamina, di i

triizopropanolamina), surfactani (glicerinmonocaprilat, polisorbat 80)[31]

.

II.4.4.2. PROMOTORI FIZICI AI ABSORB IEI

Din categoria promotorilor fizici ai absorbiei face parte metoda aplicrii curentului electric

pentru facilitarea transportului transdermic, metoda numit iontoforez. Alturi de iontoforez, din

aceast clas mai fac parte i electroporaia, magnetoforeza i undele fotomecanice.


14/52

14

II.4.5. FORMULRI MELOXICAM

Meloxicamul este un antiinflamator nesteroidian ce inhib selectiv COX2.

Dei a fost demonstrat selectivitatea sa, efectele adverse gastrointestinale nedorite pot s apar

dup administrare oral. Aplicarea topic a Meloxicamului poate s ofere avantaje prin eliberarea

medicamentului direct la locul dureros, cu producerea unui efect local. Cu toate acestea, funcia de

barier a pielii limiteaz difuzia multor substane active.

Pentru a contracara aceste neajunsuri, este necesar stabilirea unei formulri pe baz de

Meloxicam care s conin un vehicul optim din care substana activ s fie cedat dup un p rofil

prestabilit. Recent au fost efectuate studii pe diferite forme farmaceutice de genul: microemulsii,

lipogeluri, hidrogeluri [32].

Studiile anterioare efectuate n diverse centre universitare sunt axate pe determinarea efectului

promotorilor de permeabilitate asupra difuziei transdermice, efectul diverselor amestecuri de solveni

asupra cedrii substanei active i pe obinerea unor matrici din care Meloxicamul s fie cedat ntr-un

mod controlat. La momentul actual, nu exist la noi pe pia nici o formul pe baz de Meloxicam

care s fie aplicat topic [33].

II.5. CONTROLUL UNGUENTELOR

Controlul organoleptic: omogenitate, culoare i miros caracteristic componentelor.

Omogenitatea se controleaz prin ntinderea unguentului pe o plac i observarea cu lupa 4.5X. Se

determin mrimea particulelor pentru unguentele suspensii (obinuite i oftalmice).

Determinarea pH-ului se realizeaz poteniometric, n faz apoas i trebuie s fie cuprins ntre4,5-8,5.

Pentru a aprecia consistena unguentelor sunt patru tipuri de probe reologice: probe de

viscozitate; probe de penetraie; probe de ntindere i probe de elasticitate. [1].


15/52

15

III. CERCETRIPERSONALE

III.1. MOTIVAREA ALEGERII SUBIECTULUI CERCETAT

Folosind anumite cuvinte cheie (pain, year) i motoarele de cutare www.pubmed.com,

www.google.com i www.interscience.wiley.com am analizat evoluia interesului artat studierii

proceselor fizio-patologice ale durerii.

Evolutia studiilor despre durere (2)

1.2

1.3

1.4

1.5

1.6

1.7

1.8

1.9

2

pain

2003

pain

2004

pain

2005

pain

2006

pain

2007

pain

2008

pain

2009

pain

2010

Perioada

Procentstudiilegatede

dureredindintotalul

studiilor

w w w .interscience.w iley.com

GRAFIC 1 - EVOLU IA ANUAL A STUDIILOR DESPRE DURERE

N PERIOADA 2003-2010 (surse: www.interscience.wiley.com)

Numrul studiilor avnd ca interes durerea a crescut semnificativ n ultimul deceniu, ceea ce

arat c acest domeniu are foarte multe resurse neexploatate nc la nivel mondial. Numrul de apariii

n perioada 2000-2010 raportat la numrul de apariii din 1990-2000 este semnificativ mai mare,

raportul fiind de 1,244845, adic cu aproape 25% mai mult.

n ara noastr antiinflamatoarele nesteroidiene administrate topic pot fi formulate sub forma de

unguente lipofile, creme, geluri, spray-uri cutanate, ape de gur, picturi oftalmice. Avnd ca surs

siteul Ageniei Naionale a Medicamentului, am centralizat informaiile referitoare la formele

farmaceutice ce conin antiinflamatoare nesteroidiene aplicate topic utilizate n ara noastr [159-162].

Mergnd mai departe, am observat c nu exist nici o form farmaceutic aplicat topic avnd ca

substan activ Meloxicamul. Meloxicamul (cod ATC M01AC06) se gsete doar sub form de

comprimate, supozitoare i soluii injectabile [34]

Aceast tez are ca interes principal obinerea unor forme farmaceutice semisolide originale i

stabile, coninnd ca substan activ un antiinflamator nesteroidian COX2 selectiv Meloxicamul,formulate astfel nct s aib un profil farmacocinetic optim de cedare.

III.2. DESIGN EXPERIMENTAL

Experimentele efectuate n cadrul aceastei teze s-au desfurat n mai multe etape care au

urmrit:
http://www.pubmed.com/http://www.google.com/http://www.interscience.wiley.com/http://www.interscience.wiley.com/http://www.interscience.wiley.com/http://www.interscience.wiley.com/http://www.interscience.wiley.com/http://www.interscience.wiley.com/http://www.interscience.wiley.com/http://www.interscience.wiley.com/http://www.interscience.wiley.com/http://www.interscience.wiley.com/http://www.interscience.wiley.com/http://www.google.com/http://www.pubmed.com/


16/52

16

1. gsirea unor ageni de cretere a solubilitii Meloxicamului, substan test cu un grad de

dizolvare foarte mic n solvenii uzuali de genul: ap, tampoane fosfat, citrat, borat, solveni lipofili;

2. includerea soluiilor de Meloxicam preparate n etapa 1 n forme farmaceutice

semisolide hidrofile i hidrofobe, cu pstrarea gradului de dispersie molecular;

3. controlul formelor f armaceutice obinute din punct de vedere organoleptic, al aspectului,

al vscozitii i al plasticitii;

4. obinerea standardelor de Meloxicam i a curbei de calibrare utilizat n determinrile

calitative i cantitative cu ajutorul spectrofotometrului UV -Vis;

5. efectuarea studiilor de farmacocinetic care au constat n determinarea profilului

farmacocinetic de cedare i difuzie al Meloxicamului in vitro prin

- prin membran artificial;

- prin piele animal

6. efectuarea de studii comparative ale profilului farmacocinetic de de cedare i difuzie al

Meloxicamului in vitro la pH fiziologic 7.5 i la pH-ul acid al pielii 4.5 utiliznd aceleai membrane:

artificial i animal;

7. efectuarea studiilor in vivo, pe experimente pe animal.

n urmtoarele dou tabele este prezentat designul experimental, care a inut cont de urmtorii

parametrii:.

Prin varierea parametrilor: form farmaceutic, agent de gelificare, agent solubilizant, promotor

de absorbie, pH form farmaceutic, pH soluie receptoare, temperatur, membran utilizat, au fost

planificate 21 experimente, dintre care doar 16 experimente au fost efectuate, utiliznd doar formele

farmaceutice cu Meloxicam care s-au dovedit a fi optime n urma controlului de calitate.

III.3. STUDIUL I CONTRIBU II PERSONALE LA OB INEREA I

CONTROLUL FORMELOR FARMACEUTICE SEMISOLIDE PENTRU

APLICARE TOPIC PE BAZ DE MELOXICAM. METODE DE OPTIMIZARE A

GRADULUI DE SOLUBILIZARE A MELOXICAMULUI

III.3.1.MOTIVA IA I OBIECTIVELE STUDIULUIn aceasta tez unul dintre obiective a fost acela de a prepara forme farmaceutice semisolide din

categoria unguentelor hidrofile i lipofile cu o concentraie de 0.3% Meloxicam substan activ.

Deoarece mai departe, s-a urmrit profilul farmacocinetic al Meloxicamului i innd cont c acesta

este mult mai uor eliberat din forme farmaceutice n care se gsete dispersat la nivel molecular, un

alt scop al acestei teze a fost obinerea unor forme farmaceutice unguente de tip soluie (substana

activ s fie dizolvat n baza de unguent) [35].


17/52

17

S-a cercetat ncorporarea Meloxicamului cu ajutorul diverilor ageni de cretere a solubilitii n

formele farmaceutice semisolide hidrofile i lipofile mai sus amintite.

III.3.2.MATERIAL I METOD

Substanele i soluiile folosite au fost: Meloxicam (Unichem Laboratories LTD), Carbopol 990

(Medchim T.M.), Metilceluloz (Medchim T.M.), Lanolin (Medchim T.M.), Vaselin (Medchim

T.M.), Tween 80 (Merck), Trietanolamin (Fluka Chemie AG), Polietilenglicol 400 (Merck),

Polietilenglicol 4000 (Merck), Glicerin (SC Chimreactiv SRL), Hidroxid de sodiu (Merck), Fenosept

(Medchim T.M.), Ser fiziologic 0,9% m/v (BBraun), Nipagin (Medchim T.M.), Nipasol (Medchim

T.M.).

Ca aparatur i ustensile, s-au folosit: mojare farmaceutice, balane electronice, pipete

electronice 1-5 ml, seringi 1 ml 20 ml, vscozimetru Thermo Scientific HAAKE, Tester de

determinare a plasticitaii dispozitivul Ojeda i Arbussa, pH-metru Consort. Unguentele obinute au

fost condiionate n cutii de polietilen bine nchise, la cel mult 250C. Pentru preluarea imaginilor

fotografice acestea au fost transferate n seringi cu o capacitate de 20ml. S-a folosit un aparat foto

CANON PowerShot G9.

Pentru prepararea unguentelor s-a folosit metoda manual de pulverizare a substanei active,

obinerea soluiei i omogenizarea manual cu restul componentelor. S-au folosit:

-agent de cretere a solubilitii: tween 80, polietilenglicol 400 i 4000, trietanolamina, octilsulfat

de sodiu;

-agent de gelificare: Carbopol 990, metilceluloz;

-agent de meninere a umiditii: glicerin;

-agent conservant: borat de fenilmercur;

-vehicul: ap distilat.

2.1. CONTROLUL ORGANOLEPTIC: omogenitate, culoare i miros caracteristic

componentelor. Omogenitatea se controleaz prin ntinderea unguentului pe o plac i observarea cu

lupa 4.5X. Se determin mrimea particulelor pentru unguentele suspensii.

2.2. DETERMINAREA pH-ULUI se realizeaz poteniometric, n faz apoas i trebuie s fie

cuprins ntre 4,5-8,5.2.3. CONTROLUL REOLOGIC:n acest studiu am cuantificat vscozitatea i plasticitatea.

Determinarea vscozitii. Unguentele sunt corpuri plastice i tixotrope, vscozitatea

modificndu-se dependent de temperatur i forele de forfecare aplicate. S-a folosit vscozimetrul

rotaional Thermo Scientific HAAKE 550 [4].

Determinarea plasticitii. Se folosete dispozitivul Ojeda i Arbussa, alctuit din 2 plci de

sticl de anumite dimensiuni. Se obin date numerice (curba extensiometric reprezint suprafaa


18/52

18

ocupat n funcie de greutatea aplicat) , care permit aprecierea valorilor orientative ale plasticitii

unguentelor.

III.3.3. REZULTATE

S-au obinut nou formulri cu o concentraie de 0.3% Meloxicam:gelurile: G1, G2P1, G2P2,

G3, G4, G5, G6 i unguentele U1 i U2 .

Metodele de preparare i control au avut la baza principiile de preparare i control ale

unguentelor prevzute n FRX i utilizate n literatur [1, 36].

Unguentele preparate au fost transvazate n seringi transparente cu o capacitate de 20ml, au fost

analizate din punct de vedere organoleptic, al pH-ului, al vscozi tii i al plasticitii. Toate

unguentele preparate au fost captate fotografic.

Formulrile G1, G2P2 i G4 cu un coninut de 0.3 % Meloxicam au fost translucide, fr

particule n suspensie i cu o consisten bun. Spre deosebire de acestea, restul formulrilor cu acelai

coninut de Meloxicam s-au prezentat sub forma unor unguente de tip suspensie, n care s-au putut

observa particule aflate n suspensie i care au avut o consisten mai mic.

FIGURA 1 GEL FORMULA G1 (1% CBP 990, 0.3% Meloxicam, 0.1%Tween 80)pH-ul s-a ncadrat n prevederile Farmacopeei Romne a X-a ntre 4.5 i 8.5.

Formul G1 G2P1 G2P2 G3 G4 G5 G6 U1 U2

pH 8.4 8.2 8.2 8.1 8 8.1 8.3 7.3 6.8

TABEL 1 - pH-UL FORMULELOR PREPARATE

Variatia vascozitatii unguentelor utilizate, in functie de

temperatura

0

5

10

15

20

25

Fr 0.3%

Mx

Fr 0.3%

Mx

Fr 0.3%

Mx

Fr 0.3%

Mx

Fr 0.3%

Mx

Fr 0.3%

Mx

Fr 0.3%

Mx

Fr 0.3%

Mx

Fr 0.3%

Mx

G1 G2P1 G2P2 G3 G4 G5 G6 U1 U2

Tipul formularii

Vascozitatea(mPAs

Vascozitatea la 23.5C

Vascozitatea la 37.5C

GRAFIC 2 VARIA IA VSCOZIT II

N FUNC IE DE FORMULARE I TEMPERATUR


19/52

19

Se poate observa c unele din preparate precum G2P1, G3, G5 i G6 au valori ale vscozitii

mult mai mici dect ale celorlaltor formulri. Acest lucru poate fi datorat unui pH inadecvat, la care

gelificrile Carbopolului respectiv Metilcelulozei nu au loc n totalitate.

VARIATIA SUPRAFETEI DE INTINDERE IN FUNCTIE DE GREUTATEA APLICATA SI DE

TIPUL DE FORMULARE

0

500

1000

1500

2000

2500

3000

3500

4000

4500

5000

50 g 100g 200g 250g 500g 750g

GREUTATE APLICATA (g)

SUPRAFATADEINTINDERE(mm2

G1 G1 cu Mx 0.3% G2P2 G2P2 cu Mx 0.3% G4 G4 cu Mx 0.3% U1 U1 cu Mx 0.3% U2 U2 cu Mx 0.3%

GRAFIC 3 VARIA IA SUPRAFE EI DE NTINDERE

N FUNC IE DE GREUTATEA APLICAT

Curba extensiometric arat c la adugarea de Meloxicam, ntinderea are loc pe o suprafa uor

mai mare (p=4.83191E-07


20/52

20

pH-ul este important pentru stabilitatea sistemului dispers i a substanelor active. El poate

influena vscozitatea gelurilor i poate scdea activitatea conservanilor . Dac se gsete n afara

limitelor impuse de FRX, pH-ul preparatelor semisolide aplicate topic poate influena negativ structura

pielii.

Din punct de vedere reologic, au fost analizate vscozitatea i plasticitatea. Aceste caracteristici

sunt strns legate de bazele de unguent folosite, dar pot fi cu uurin influenate de excipienii

utilizai. Hidrogelurile pe baz de Carbopol se obin prin neutralizarea dispersiilor macromoleculelor

mbibate anterior cu vehicul, cu ajutorul solu iilor alcaline. Carbomerii cunoscui i ca acizi poliacrilici

sau polimeri carboxivinilici sunt ntlnii cel mai frecvent cu denumirea de Carbopoli. Sunt polimeri

sintetici ai acidului acrilic, cu caracter anionic i mas molecular mare. Se prezint ca pudre de

culoare alb, fine, cu densitate foarte mic. Vscozitatea maxim este obinut la pH ntre 6 i 11. Ea

scade n prezena electrolizilor i crete n prezena glicerolului, propilenglicolului sau alcoolului [35].

Analiznd valorile vscozitii tuturor preparatelor, se poate trage concluzia c adugarea unei

cantiti mici de Meloxicam (0.3%) duce la o scdere uoar a vscozitii preparatelor (p=0.134034).

n cazul preparatelor G1, G2P2, G4, U1 i U2, aceasta ramne totui n valori optime. Preparatele cu

vscozitate bun au fost selectate pentru a fi studiate n urmtoarea etap, din punctul de vedere al

profilului farmacocinetic de cedare al Meloxicamului. n studiul publicat n 2010 de Shashikant et al.

care folosete baz de unguent gelul de Carbopol, iar ca agent de cretere a solubilitii

Trietanolamina, testele de reologie au condus la obinerea unor rezultate asemntoare cu cele obinute

n aceast tez, suprafaa de ntindere fiind n intervalul 17 -28 cm2[37].

III.3.5. CONCLUZII

n urma acestui studiu pot fi trase mai multe concluzii:

1. n absena unor ageni de cretere a solubilitii atent alei, Meloxicamul nu poate fi formulat sub

forma unor preparate semisolide hidrofile sau lipofile cu aplicare topic;

2. n urma numeroaselor testri, am determinat c Tween-ul 80 n concentraie 0.1%,

Trietanolamina 30% i Polietilenglicol-ul 400 3% au capacitatea de a crete gradul de solubilizare al

Meloxicamului. Acetia au fost singurii dintre cei testai, care adugai n unguente alturi de substana

activ, au dus la solubilizarea Meloxicamului i la obinerea unor unguente transparente, de tip soluie;3.Dintre agenii presupui a crete solubilitatea, octilsulfatul de sodiu, un agent tensioactiv cu

proprieti umectante i de scdere a tensiunii superficiale lichid - solid, nu a reuit s solubilizeze

Meloxicamul;

4.Au fost formulate 9 unguente hidrofile i lipofile, de tip soluie (geluri: G1, G2P2, G4 i

unguentul U2), dar i de tip suspensie (gelurile: G2P1, G3, G5, G6 i unguentul U1);


21/52

21

5.Foarte important n procesul de solubilizare este protocolul de lucru, drept urmare, folosind exact

aceleai componente n aceleai cantiti, am obinut dou formule diferite ca grad de dispersie:

formula G2P1 hidrogel tip suspensie, iar formula G2P2 hidrogel tip soluie;

6.Din punct de vedere organoleptic, unguentele obinute au caracteristicile componentelor. pH -ul

lor s-a ncadrat n limitele impuse de Farmacopeea Romn a X-a;

7.Analiznd vscozitatea preparatelor obinute, doar formulele G1, G2P2, G4, U1 i U2 au fost

considerate a fi corespunztoare. Restul preparatelor nu au avut o consisten potrivit;

8.Vscozitatea preparatelor a sczut uor dup adugarea substanei medicamentoase testate -

Meloxicam 0.3%;

9.Din punct de vedere al capacitii de ntindere, toate preparatele pe baz de Carbopol au avut un

comportament asemntor;

10. Pentru a determina profilului cinetic de cedare al Meloxicamului, n urmtoarea etap a u fost

alese preparatele cu caracteristicile optime, i anume: G1, G2P2, G4, U1 i U2.

III.4. STUDIUL II - PROFILUL FARMACOCINETIC DE CEDARE IN

VITRO AL MELOXICAMULUI PRIN MEMBRANE ARTIFICIALE DIN

FORMELE FARMACEUTICE SEMISOLIDE HIDROFILE. INFLUEN A

PROMOTORILOR DE ABSORB IE I A pH-ULUI

III.4.1.MOTIVA IA I OBIECTIVELE STUDIULUI

Studiul a avut n vedere observarea profilului farmacocinetic prin determinarea concentraieiMeloxicamului n soluia receptoare dup aplicarea pe membran artificial de celuloz a celulei de

difuzie Franz.

Prin adugarea de ageni de cretere a solubilitii, s-a putut ncorpora Meloxicamul n hidrogel,

obinndu-se un unguent hidrofil de tip soluie din care substana activ se elibereaz mult mai uor

comparativ cu unguentele de tip emulsie sau suspensie.

Am optat pentru obinerea unor unguente hidofile datorit proprietilor fizice ale agenilor de

solubilizare, precum i datorit rspndirii mult mai largi n ultima perioad a acestei forme

farmaceutice. Dintre formulrile obinute n cadrul Studiului I, doar cteva dintre ele au fost selectatepentru studierea profilului farmacocinetic al Meloxicamului prin membran artificial. Acestea sunt

gelurile G1, G2P2, G4 i unguentul U2, pastrndu-se codificarea din studiul anterior.


Substanele i soluiile folosite au fost: Meloxicam (Unichem Laboratories LTD), Carbopol 990

(Medchim T.M.), Tween 80 (Merck), Trietanolamin (Fluka Chemie AG), Polietilenglicol 400


22/52

22

(Merck), Glicerin (SC Chimreactiv SRL), Hidroxid de sodiu (Merck), Fenosept (Medchim T.M.), Ser

fizioliogic 0,9% m/v (BBraun).

S-a folosit o celul de difuzie vertical Hanson Research 58-001-455 cu o capacitate de 7ml, un

orificiu de difuzie de 15 mm (recomandat FDA i SUPAC SS) i cu agitator Helix, iar absorbiile au

fost citite la spectofotometrul UV-Vis JASCO V530.

Au fost folosite membrane metilcelulozice cu un diame tru de 25 mm i o dimensiune a porilor de

0,45 m, suprafa de cedare 3.14cm2 Teknokroma.

S-a folosit celula de difuzie vertical Hanson Research 58-001-455 cu o capacitate de 7ml, un

orificiu de difuzie de 15mm (recomandat FDA i SUPAC SS) i cu agitator Helix. Toate

experimentele au fost efectuate n triplicat.

FIGURA 2 FIGURA 3

CELUL DE DIFUZIE SCHEMA APARATURII DE DIFUZIE IN VITRO

Soluia receptoare pentru testele de difuziune efectuate pe celula de difuzie cu o capacitate de

7ml a fost Serul fiziologic 0.9%, steril i apirogen, cu un adaos de Tween 0.1% pentru a favorizaumectarea substanei de difuzat. Toate experimentele au fost efectuate n triplicat. Timpul 0 este

considerat momentul n care a fost aplicat forma farmaceutic pe membran, cu asamblarea imediat

a celulei de difuzie. Pentru fiecare experiment s-au aplicat cte 0.3g gel cu un coninut de 0.3%

substan activ Meloxicam. La 5min, 10min, 15min, 30min, 1h, 2h, 3h, 6h, 24h de la nceperea

experimentului, au fost prelevate probe de cte 0.5ml. Fiecare prob prelevat a fost diluat pn la

2.5ml cu soluie receptoare. Cantitatea prelevat a fost nlocuit cu soluie receptoare, aa nct

volumul receptor din celula de difuzie s rmn neschimbat. Cantitatea de gel rmas pe membran la

finalul experimentului a fost diluat cu soluie receptoare i a fost citit la spectofotometrul JASCOV530 alturi de probele prelevate la intervalul de timp specificat.

Probele au fost citite la spectofotometru JASCO V530 la lungimea de und 362nm specificat n

literatur. S-a determinat media triplicatelor, deviaia standard, iar gradul de ncredere a fost evaluat

folosind testul TTEST Microsoft Excel. Standardele au fost obinute folosind Meloxicam n diverse

concentratii la un pH alcalin.


23/52

23

III.4.3. REZULTATE

Soluiile standard au fost obinute prin dizolvarea a 0.01g Meloxicam n 10g Ser fiziologic

alcalinizat cu 0.1g NaOH20%. n funcie de absorbiile diluiilor la lungimea de und 362nm, a fost

trasat curba de calibrare (slope= 0.182418223).

FIGURA 4-. SPECTRUL MELOXICAMULUI(Picul se observ la 362nm)

Absorbtia in functie de concentratie

Valori semnificative

0

0.2

0.40.6

0.8

1

1.2

1.4

0 0.5 1 1.5 2 2.5 3 3.5

Concentratia mg/100ml

Abso

rbtia

Absorbtia

GRAFIC 4 - VALORILE SEMNIFICATIVE ALE ABSORB IEI STANDARDELOR

SLOPE = 0.0279931

III.4.3.1. STUDIU COMPARATIV: INFLUEN A AGENTULUI DE SOLUBILIZARE

VITEZEI DE DIFUZIE I PROCENTULUI DE MELOXICAM DIFUZAT

Graficele prezint evoluia vitezei de difuzie a Meloxicamului, precum i pro centul difuzat,

pentru toate cele 4 formulri studiate.


24/52

24

Influenta agentului de solubilizare asupra vitezei de difuzie a Meloxicamului din

unguente hidrofile

pH fiziologic 7.5

0

0.002

0.004

0.006

0.008

0.01

0.012

0.014

0.016

0.018

0.02

0 5 10 15 30 60 120 180 360 1440

Timp (min)

Vitezaded

ifuzie(mg/min)

EXP 1 G1 (DESIGN 1)EXP 2 G2P2 (DESIGN 2)EXP 3 E14 PEG 400 CBP (DESIGN 14)EXP 4 E16 PEG 400 PEG 4000 (DESIGN 16)

GRAFIC 5 - INFLUEN A AGENTULUI DE SOLUBILIZARE ASUPRA VITEZEI DE DIFUZIE A

MELOXICAMULUI DIN UNGUENTE HIDROFILE

PRIN MEMBRAN ARTIFICIAL LA pH FIZIOLOGIC 7.5

Viteza maxim de difuzie a Meloxicamului se poate observa n cazul formulei care conine caagent de cretere a solubilitii Trietanolamina. Viteza atinge valori maxime de aprox 0.018mg/min la

10 minute de la aplicare.

n cazul formulei care conine Tween 80, picul este observat tot la 10 minute, dar este mult

sczut comparativ cu cel al formulei G2P2.

Cele mai mici valori ale vitezei de difuzie sunt atinse n cazul hidrogelului cu Polietilenglicol

400.

Comparnd din punct de vedere al vitezei de difuzie a Meloxicamului la pH 7.4 G2P2 cu G1, G4

i U2, utiliznd TTESTau fost obinute valorile 0.001843, 0.00477282, 0.00537582 (p


25/52

25

Comparnd formularea G2P2 din punct de vedere al vitezei de difuzie a Meloxicamului difuzat

la pH 4.5 cu G1, G4 i U2, folosind TTEST au fost obinute valorile 0.00141029, 0.00365196,

0.00485342 (p


26/52

26

Influenta agentului de solubilizare asupra procentului de Meloxicam difuzat din

unguente hidrofile

pH fiziologic 4.5

0

10

20

30

40

50

60

70

80

90

0 5 10 15 30 60 120 180 360 1440

Timp (min)

Procent

difuzat(%)

EXP 9 G1 (DESIGN 5)EXP 10 G2P2 (DESIGN 6)EXP 11 E15 PEG 400 CBP (DESIGN 15)EXP 12 E19 PEG 400 PEG 4000 (DESIGN 19)

GRAFIC 8 - INFLUEN A AGENTULUI DE SOLUBILIZARE ASUPRA PROCENTULUI DE

MELOXICAM DIFUZAT DIN UNGUENTE HIDROFILE

PRIN MEMBRAN ARTIFICIAL LA pH-UL PIELII 4.5

Comparnd formularea G2P2 din punct de vedere al procentului de Meloxicam difuzat la pH 4.5

cu G1, G4 i U2, folosind TTEST au fost obinute valorile 0.00082431, 0.00024356, 0.00018774

(p


27/52

27

vitezelor de difuzie a Meloxicamului prin membrana artificial n soluia salin cu pH 4.5 este

asemntoare cu cea din soluia cu pH 7.5, picurile aprnd ceva mai trziu, cu o laten de 10-15

minute comparativ cu cele aprute la pH 7.5.

III.4.3.3. STUDIU COMPARATIV: INFLUEN A pH-ULUI ASUPRA PROCENTULUI

DE MELOXICAM DIFUZAT

0

10

20

30

40

50

60

70

80

90

Procentuldifuzat(%)

0 5 10 15 30 60 120 180 360 1440

Timp (min)

Influenta pH-ului asupra procentului de Meloxicam difuzat

FORMULA G2P2

EXP 2 G2P2 (DESIGN 2) EXP 10 G2P2 (DESIGN 6)

GRAFIC 10 - INFLUEN A pH-ULUI ASUPRA PROCENTULUI

DE MELOXICAM DIFUZAT FORMULA G2P2 p=6.28864E-05

Se poate observa c n toate experimentele, procentul de Meloxicam difuzat este mai mic n

cazul folosirii soluiei saline cu pH 4.5 dect n cazul folosirii soluiei saline cu pH 7.5. Procentul mai

mic difuzat n cazul soluiilor receptoare cu pH acid 4.5 poate fi datorat unei mai mici solubiliti aMeloxicamului n aceste soluii, dar i unei posibile degradri a acestuia la acest pH. Orientarea ctre o

ipotez sau alta, trebuie s in cont i de cantitatea de Meloxicam care nu a fost regsit n n ici unul

dintre compartimente: gel, membran, soluie receptoare. Aceast cantitate neregsit poate fi datorat

pierderilor inevitabile din timpul manipulrii, dar i unor eventuale procese de degradare ale

Meloxicamului, care astfel nu mai poate fi detectat la lungimea de und corespunztoare (362nm).

Procentul de Meloxicam difuzat la pH 4.5 atinge valori mai mici comparativ cu cele ntlnite la

pH fiziologic 7.5. Procentul cel mai mare de Meloxicam difuzat pn la ncheierea experimentului (24

ore de la aplicarea unguentului) este ntlnit la formula G2P2 (aproximativ 90%),comparativ cu 80%ntlnit pentru aceeai formulare n cazul folosirii unui pH acid 4.5.

n studii asemntoare n care s-a lucrat cu geluri de Meloxicam, cantitatea de substan activ

difuzat in vitro prin membran artificial a atins valori pn la 500 g/cm 2, n condiiile aplicrii unei

cantiti de 0.5g Meloxicam 0.3% [38].


28/52

28

III.4.3.4. STUDIU COMPARATIV: DISTRIBU IA MELOXICAMULUI N CELE TREI

COMPARTIMENTE: UNGUENT HIDROFIL MEMBRAN - SOLU IE RECEPTOARE

Dintre toate formulrile, formularea G2P2 a avut cel mai mic procentaj de Meloxicam rmas n

forma farmaceutic aplicat.

Procentul de Meloxicam ramas in unguentul aplicat

0

10

20

30

40

50

60

70

G1 G2P2 G4 U2

Tipul de formulare

Procent(%)

pH 7.5 pH 4.5

GRAFIC 11 PROCENT DE MELOXICAM RMAS N UNGUENTUL APLICAT p=0.15937284

0%

10%

20%

30%

40%

50%

60%

70%

80%

90%

100%

Procentaj(%)

G1 G2P2 G4 U2

Tip formulare

Evolutia Meloxicamului la pH 7.5

pH 7.5 procent difuzat pH 7.5 procent nedifuzat pH 7.5 procent pierdut

GRAFIC 12 EVOLU IA MELOXICAMULUI PRIN MEMBRAN ARTIFICIAL LA pH 7.5

0%

10%

20%

30%

40%

50%

60%70%

80%

90%

100%

Procentaj(%)

G1 G2P2 G4 U2

Tip formulare



GRAFIC 13 EVOLU IA MELOXICAMULUI PRIN MEMBRAN ARTIFICIAL LA pH4.5


29/52

29

III.4.4. DISCU II

La fel ca i celelalte antiinflamatoare nesteroidiene, Meloxicamul a ridicat probleme la

ncorporarea n forma farmaceutic datorit solubilitii sczute n baza de unguent. Studiile arat c

solubilitatea AINS poate fi crescut cu ajutorul alcoolilor, propilenglicolului, DMSO. Concentraia n

substan activ nu depete 10 % n cazul antiinflamatoarelor nesteroidiene for mulate pentru aplicare

topic si comercializate pe pia [39]. Pentru aplicrile topice Meloxicamul ar putea fi formulat n forme

farmaceutice cu aplicare local. n ara noastr nu exist nici o form farmaceutic cu aplicare topic

pe baz de Meloxicam.

Agenii folosii n acest studiu pentru creterea difuziei prin membrana artificial au mai multe

mecanisme de aciune:

1. Trietanolamina crete solubilitatea substanei active n vehicul. Creterea solubilitii

compuilor greu solubili se bazeaz uneori pe transformarea lor n sruri mult mai uor solubile, cu

condiia pstrrii efectelor terapeutice. Pe acest gen de mecanism se bazeaz folosirea etanolaminelor

pentru creterea solubilitii compuilor antiinflamatori nesteroidieni [31].

2. Polietilenglicolii cresc coeficientul de partiie,

3. Tween 80 crete gradul de dizolvare al Meloxicamului, dar poate aciona i prin solubilizarea

lipidelor din stratum corneumn cazul administrrii pe piele.

Studiul a constat n determinarea in vitro a vitezei de cedare, a procentului de Meloxicam

difuzat, precum i a modului de repartizare a substanei active n cele trei compartimente.

Viteza de difuzie (mg/ml) a Meloxicamului prin membrana artificial a crescut n toate

experimentele foarte mult n intervalul de timp 0 - 30 minute, dup care a sczut treptat, cantiti de

Meloxicam putnd fi decelate chiar i dup o perioad de 24 ore de la aplicarea unguentului pe

membrana artificial. Aceste rezultate au fost n concordan cu cele gsite n literatura de

specialitate[132]. n studiul efectuat de Nagia et al. n 2006 folosind diferite geluri cu Meloxicam,

cantitatea de substan activ difuzat prin membran artificial a atins cote maxime pn la 2 ore de la

momentul aplicrii, iar la 9 ore dup aplicare, aceasta a fost de 133.6 g/cm2 pentru un gel de carbopol

cu 0.5% Meloxicam[32].

n alt studiu efectuat de Jantharaprapap et al. n 2007, cantitatea difuzat a atins valori de

500g/cm

2

n condiiile aplicrii a 0.5g gel Meloxicam 0.3%

[38]

.Vitezele de difuzie obinute n cadrul Studiului II au putut fi optimizate prin testarea mai multor

ageni de cretere a difuziei prin membran. Dintre toi agenii, trietanolamina a avut cea mai mare

influen asupra vitezei de difuzie, aceasta atingnd valori de 0.018mg/min la 10 minute de la aplicare.

Picurile vitezelor de difuzie prin membrana artificial utiliznd soluia salin cu pH 4.5 apar ceva mai

trziu, cu o laten de 10-15 minute comparativ cu cele aprute cnd s-a utilizat soluia salin pH 7.5.


30/52

30

Studiile recente arat continua preocupare a cercettorilor pentru creterea gradului de

solubilizare i de difuzie prin diferite membrane artificiale i naturale a Meloxicamului, un

antiinflamator cu un potenial ridicat din punct de vedere al aciunii terapeutice la aplicare topic [31] .

III.4.5. CONCLUZII

1.Viteza de difuzie (mg/ml) a Meloxicamului prin membrana artificial a crescut n toate cazurilefoarte mult n intervalul de timp 0 - 30 minute, dup care a sczut treptat, cantiti de Meloxicam

putnd fi decelate chiar i dup o perioad de 24 ore de la aplicarea unguentului pe membrana

artificial.

2.Viteza maxim de difuzie a Meloxicamului se nregistreaz n cazul formulei care conine ca

agent de cretere a solubilitii Trietanolamina. Viteza atinge valori maxime de aprox 0.01 8mg/min la

10 minute de la aplicare. Evoluia vitezei de difuzie pentru hidrogelul G2P2 ar putea fi explicat prin

transformarea Meloxicamului n sarea sa, un compus mai uor solubil i deci care poate difuza mai

uor prin membrana artificial.3.Adugarea de PEG 400 solubilizeaz Meloxicamul i duce la formarea unui unguent de tip

soluie, dar evoluia vitezei de difuzie sugereaz o afinitate foarte mare a Meloxicamului pentru

agentul de solubilizare PEG 400, respectiv PEG 4000 n cazul formulrilor G4, res pectiv U2.

4.Evoluia vitezelor de difuzie a Meloxicamului prin membrana artificial n soluia salin cu pH

4.5 este asemntoare cu cea din soluia cu pH 7.5, valorile maxime aprnd ceva mai trziu, cu o

laten de 10-15 minute comparativ cu cele aprute la pH 7.5.

5.Procentul cel mai mare de Meloxicam difuzat pn la ncheierea experimentului (24 ore de la

aplicarea unguentului) este ntlnit la formula G2P2 (aproximativ 90%), formul la care s -au observat

i cele mai mari valori ale vitezei de difuzie. Restul formulelor au avut un procent de Meloxicam

difuzat n medie de 40%.

6.Procentul mai mic difuzat n cazul soluiilor receptoare cu pH acid 4.5 poate fi datorat unei

solubiliti mai reduse a Meloxicamului n aceste soluii, dar i unei posibile degradri a acestuia la

acest pH. Orientarea ctre o ipotez sau alta, trebuie s in cont i de cantitatea de Meloxicam care nu

a fost regsit n: gel, membran sau soluia receptoare. Aceast cantitate neregsit poate fi datorat

pierderilor inevitabile din timpul manipulrii.

7.Dintre toate formulele, hidrogelul pe baz de Carbopol 990 cu agent de cretere a solubilitii

Trietanolamin a avut cel mai bun profil farmacocinetic, comparativ cu celelalte 3 formulri.


31/52

31

III.5. STUDIUL III - PROFILUL FARMACOCINETIC DE CEDARE IN

VITRO AL MELOXICAMULUI PRIN PIELE ANIMAL DIN FORMELE

FARMACEUTICE SEMISOLIDE HIDROFILE. INFLUEN A PROMOTORILOR

DE ABSORB IE I A pH-ULUI

III.5.1.MOTIVA IA STUDIULUI

Foarte multe dintre studiile in vitro efectuate au ca scop corelarea valorilor obinute cu cele

determinate prin studiile in vivo, aa nct treptat s poat fi eliminate studiile ce implic animale vii.

Uneori aceste corelri sunt dificil de realizat.

Acest experiment are ca obiectiv determinarea profilului farmacocinetic al Meloxicamului ca

reprezentant al clasei antiinflamatoarelor nesteroidiene, utiliznd metoda in vitro din studiul anterior,

dar prin folosirea unei membrane naturale (pielea de oarece).

Din gama variat a preparatelor utilizate n studiul anterior, au fost s electate pentru a fi testate nacest studiu formulele cu cele mai bune profile de cedare a substanei active. Diferenele care au aprut

n profilul de cedare al Meloxicamului s-au datorat prezenei unor substane cu rol de promotori de

absorbie. Am determinat influena diferitelor substane auxiliare asupra difuziei Meloxicamului la

dou pH-uri diferite: unul acid, asemntor cu al pielii - 4.5 i unul neutru, fiziologic, asemntor cu al

plasmei - 7.5.


Substanele i soluiile folosite au fost: Meloxicam (Unichem Laboratories LTD), Carbopol 990(Medchim T.M.), Tween 80 (Merck), Trietanolamin (Fluka Chemie AG), Polietilenglicol 400

(Merck), Polietilenglicol 4000 (Merck) Glicerin (SC Chimreactiv SRL), Hidroxid de sodiu (Merck),

Fenosept, Ser fizioliogic 0,9% m/v (BBraun), Nipagin, Nipasol, Lanolin, Vaselin, Metilceluloz.

Pentru testele de difuzie in vitro s-a folosit celula de difuzie Franz termostatat ntr-o baie de ap

cu recirculare, meninndu-se o temperatur de 320C.

Ca membrane biologice naturale au fost folosite poriuni de piele proaspt recoltat de la oarece

adult.

Pielea dorsal a fost obinut de la oareci Swiss albino aduli cu o greutate de aproximativ 30g.

Toate experimentele au fost efectuate n acord cu regulile bioetice de cercetare tiinific de la nivelul

instituiei noastre Universitatea de Medicin i Farmacie Craiova. oarecii au fost anesteziai cu eter

i apoi sacrificai prin tierea venei jugulare. Pielea dorsal a fost prelevat, iar blana a fost ndeprtat

prin radere cu ajutorul unui aparat de ras. Grosimea pielii abdominale de oarece a fost de

1.83x10-2cm. Pielea fost secionat n fracii de cte 15 mm diametru. nainte de fixarea pe celula de


32/52

32

difuzie, fiecare fracie de piele a fost analizat din punct de vedere al integritii fizice, urmrindu-se s

nu fie prezente zone de piele prin care cederea s se fac neuniform.

FIGURA 5 - OARECE SWISS ALBINO UTILIZAT N EXPERIMENTE

FIGURA 6 FIGURA 7

ZON INTEGR DE PIELE DORSAL ZON DE PIELE UTILIZAT N

TESTELE DE DIFUZIE

Protocolul de difuzie a fost identic cu cel utilizat n Studiul II anterior.

III.5.3. REZULTATE

Absorbtia in functie de concentratie

0

0.5

1

1.5

2

2.5

3

0 20 40 60 80 100 120

concentratia mg/100 ml

Absorbtia

Absorbtia

GRAFIC 14 - ABSORB IA STANDARDELOR N FUNC IE DE CONCENTRA IE


33/52

33

III.5.3.1. STUDIU COMPARATIV: DISTRIBU IA MELOXICAMULUI N CELE TREI

COMPARTIMENTE: UNGUENT HIDROFIL MEMBRAN - SOLU IE RECEPTOARE

n cazul experimentului efectuat, se poate observa c formularea G2P2, are cea mai mic valoare

a procentului de Meloxicam rmas n piele (aproximativ 20%). Chiar i n condiiile unui pH acid 4.5,

dei valorile sunt ceva mai mari, se pstreaz aceeai tendin, formula G2P2 avnd cel mai mic

procent nedifuzat(aproximativ 25%).

Procentul de Meloxicam ramas in unguentul aplicat pe piele

0

10

20

30

40

50

60

70

G1 G2P2 G4 U2

Tipul de formulare

Procent(%)

pH 7.5 pH 4.5

GRAFIC 15 - PROCENT DE MELOXICAM RMAS N UNGUENTUL APLICATp=0.14526511

0%

10%20%

30%

40%

50%

60%

70%

80%

90%

100%

P

rocentaj(%)

G1 G2P2 G4 U2

Tip formulare



GRAFIC 16 - EVOLU IA MELOXICAMULUI PRIN PIELE ANIMAL LA pH 7.5

0%

10%

20%

30%

40%50%

60%

70%

80%

90%100%

Procentaj(%)

G1 G2P2 G4 U2

Tip formulare



GRAFIC 17 - EVOLU IA MELOXICAMULUI PRIN PIELE ANIMAL LA pH 4.5


34/52

34

II.5.3.2. STUDIU COMPARATIV: INFLUEN A AGENTULUI DE SOLUBILIZARE I

A pH-ULUI ASUPRA VITEZEI DE CEDARE

Graficele reprezint evoluia vitezei de cedare a Meloxicamului pentru cele patru formulri cu

compoziie diferit n dou condiii de lucru diferite: pH 4.5 i pH 7.4.

0

0.0001

0.0002

0.0003

0.0004

0.0005

0.0006

0.0007

Vitezadedifuzie(mg/min)

0 5 10 15 30 60 120 180 360 1440

Timp (min)

Influenta pH-ului asupra vitezei de cedare

EXP 5 vs EXP 13 - G1 PIELE

EXP 5 G1 PIELE (DESIGN 9) EXP 13 G1 PIELE (DESIGN 12)

GRAFIC 18 - INFLUEN A pH-ULUI ASUPRA VITEZEI DE CEDARE FORMULA G1 p=0.0322959

0

0.0002

0.0004

0.0006

0.0008

0.001

0.0012

0.0014

0.0016

V

itezadedifuzie(mg/min)

0 5 10 15 30 60 120 180 360 1440

Timp (min)


EXP 6 vs EXP 14 - G2P2 PIELE

EXP 6 G2P2 PIELE (DESIGN 8) EXP 14 G2P2 PIELE (DESIGN 11)

GRAFIC 19 - INFLUEN A pH-ULUI ASUPRA VITEZEI DE CEDARE FORMULA G2P2 p=0.029771

0

0.0002

0.0004

0.0006

0.0008

0.001

0.0012

0.0014

Viteza

dedifuzie

(m

g/min)

0 5 10 15 30 60 120 180 360 1440

Timp (min)


EXP 7 vs EXP 15 - PEG 400 CARBOPOL - PIELE

EXP 7 PEG 400 CARBOPOL PIELE (DESIGN 17) EXP 15 PEG 400 CARBOPOL PIELE (DESIGN 20)

GRAFIC 20 - INFLUEN A pH-ULUI ASUPRA VITEZEI DE CEDARE FORMULA G4 p=0.0002639


35/52

35

0

0.0002

0.0004

0.0006

0.0008

0.001

0.0012

0.0014

Vitezade

difuzie

(mg/m

in)

0 5 10 15 30 60 120 180 360 1440

Timp (min)


EXP 8 vs EXP 16 - PEG 400 PEG 4000 - PIELE

EXP 8 PEG 400 PEG 4000 PIELE (DESIGN 18) EXP 16 PEG 400 PEG 4000 PIELE (DESIGN 21)

GRAFIC 21 - INFLUEN A pH-ULUI ASUPRA VITEZEI DE CEDARE FORMULA U2 p=0.0006772

Influenta substantelor auxiliare asupra variatiei vitezei de difuzie in vitro a

Meloxicamului din unguente hidrofile prin piele animala la pH 7.5

0

0.0002

0.0004

0.0006

0.0008

0.001

0.0012

0.0014

0.0016

0 5 10 15 30 60 120 180 360 1440

TIMP (MIN)

VITEZADEDIFUZIE(mg/min

EXP 5 G1 PIELE (DESIGN 9) EXP 6 G2P2 PIELE (DESIGN 8)

EXP 7 PEG 400 CARBOPOL PIELE (DESIGN 17) EXP 8 PEG 400 PEG 4000 PIELE (DESIGN 18)



PRIN PIELE ANIMAL LA pH FIZIOLOGIC 7.5

Comparnd G2P2 din punct de vedere al vitezei de difuzie a Meloxicamului prin piele de

oarece, cu G1, G4 i U2 la pH 7.5, utiliznd TTEST, au fost obinute urmtoarele valori ale p:

0.0002864, 0.0090254, 0.0140013.


36/52

36

Influenta substantelor auxiliare asupra variatiei vitezei de difuz ie in vitro a

Meloxicamului din unguente hidrofile prin piele animala la pH 4.5

0

0.0002

0.0004

0.0006

0.0008

0.001

0.0012

0.0014

0 5 10 15 30 60 120 180 360 1440

TIMP (MIN)

VITEZADEDIF

UZIE(mg/min





PRIN PIELE ANIMAL LA pH-UL PIELII 4.5

Comparnd G2P2 din punct de vedere al vitezei de difuzie a Meloxicamului prin piele de

oarece, cu G1, G4 i U2 la pH 4.5, utiliznd TTEST, au fost obinute urmtoarele valori ale p:

7.06278E-05, 0.000316052, 1.53073E-05 (p


37/52

37

0

10

20

30

40

50

60

70

Procentuldifuzat(%)

0 5 10 15 30 60 120 180 360 1440

Timp (min)


EXP 6 vs EXP 14 - G2P2 PIELE

EXP 6 G2P2 PIELE (DESIGN 8) EXP 14 G2P2 PIELE (DESIGN 11)


DE MELOXICAM DIFUZAT FORMULA G2P2 p=0.0188565

0

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

Procentuldifuzat(%

)

0 5 10 15 30 60 120 180 360 1440

Timp (min)


EXP 7 vs EXP 15 - PEG 400 CARBOPOL - PIELE

EXP 7 PEG 400 CARBOPOL PIELE (DESIGN 17) EXP 15 PEG 400 CARBOPOL PIELE (DESIGN 20)


DE MELOXICAM DIFUZAT FORMULA G4 p=0.0226368


38/52

38

0

10

20

30

40

50

Procentul

difuzat(%)

1440

Timp (min)


EXP 8 vs EXP 16 - PEG 400 PEG 4000 - PIELE

EXP 8 PEG 400 PEG 4000 PIELE (DESIGN 18) EXP 16 PEG 400 PEG 4000 PIELE (DESIGN 21)

GRAFIC 27 - INFLUEN A pH-ULUI ASUPRA PROCENTULUIDE MELOXICAM DIFUZAT FORMULA U2 p=0.0181545

Influenta substantelor auxiliare asupra variatiei procentului de Meloxicam difuzat in v itro

din unguente hidrofile prin piele animala la pH 7.5

0

10

2030

40

50

60

70

0 5 10 15 30 60 120 180 360 1440

TIMP (MIN)

PROCENT

DIFUZAT(%





PRIN PIELE ANIMAL LA pH FIZIOLOGIC 7.5

Comparnd G2P2 din punct de vedere al procentului de Meloxicam difuzat prin piele de oarece,

cu G1, G4 i U2, la pH 7.5, utiliznd TTEST, au fost obinute urmtoarele valori ale p: 0.0193025,

0.0520875, 0.0652805 (p


39/52

39

Influenta substantelor auxiliare asupra variatiei procentului de Meloxicam difuzat in

vitro din unguente hidrofile prin piele animala la pH 4.5

0

10

20

30

40

50

60

0 5 10 15 30 60 120 180 360 1440

TIMP (MIN)

VITEZADEDIFUZIE(mg/min





PRIN MEMBRAN ARTIFICIAL LA pH-UL PIELII 4.5

Comparnd G2P2 din punct de vedere al procentului de Meloxicam difuzat prin pie le de oarece,

cu G1, G4 i U2, la pH 4.5, utiliznd TTEST, au fost obinute urmtoarele valori ale p: 0.020147496,

0.063803846, 0.047039375 (p


40/52

40

200 g/cm2/h, n condiiile utilizrii unor geluri de Carbopol 934P cu adaos de trietanolamin,

propilenglicol sau DMSO[195]. n acelai studiu, procentul de Meloxicam difuzat a atins valori de 90%.

Studiul a decelat Meloxicamul din soluia receptoare doar pn la 12 ore de la aplicare. Comparativ cu

acesta, rezultatele obinute n cadrul prezentei teze au fost satisfctoare, procentul de Meloxicam

difuzat atingnd i valori de 70% n cazul formulei G2P2. n literatur sunt menionate i procente mai

mici de 70% de Meloxicam difuzat prin piele animal.

Viteza de cedare a Meloxicamului atinge valori mai mari cnd se lucreaz la pH fiziologic

comparativ cu pH-ul acid unde se obin valori de aproximativ 1.1g/min. Fluxul se ncadreaz n

valorile gsite n literatur de aprox 50-100 g/cm2/h [32].

Comportamentul la cele dou pH-uri diferite a fost similar, observndu-se pierderi aproximativ

egale. Pierderile de Meloxicam observate n anumite cazuri, ar putea fi datorate afinitii foarte mari a

Meloxicamului pentru agentul de solubilizare polietilenglicolul 4000. n aprilie 2010, un studiu

publicat n Scientia Pharmaceutica a artat o posibil afinitate a substanei active pentru

polietilenglicoli [41].

III.5.5. CONCLUZII

1. Formele farmaceutice topice cu piroxicam, substan cu structur i aciune farmacologic

similar cu a Meloxicamului, au un coninut n substan activ de 0.5 1.5%. Deoarece Meloxicamul

este de 2-3 ori mai puternic din punct de vedere al aciunii terapeutice, am optat pentru o concentraie

de 0.3% Meloxicam n formele farmaceutice studiate.

2. Factorii care au variat n experimentele efectuate au fost: agentul de solubilizare i pH -ul (7.4

i 4.5).

3. Formula la care s-au obinut cele mai mari valori ale vitezei de cedare a Meloxicamului

(mg/min) a fost G2P2 (gel de carbopol cu adaos de trietanolamin), fapt explicat prin creterea

gradului de solubilizare a Meloxicamului. Evoluia vitezei de difuzie pentru hidrogelul G2P2 ar putea

fi explicat prin transformarea Meloxicamului n sarea sa cu Trietanolamina, un compus mult mai uor

solubil i deci care poate difuza mai uor prin membran natural.

4. n cazul difuziei prin piele de oarece, se remarc dou valori maxime ale vitezei de difuzie: la

5-10 minute i la 3 ore de la nceperea experimentului. Aceste picuri apar n cazul tuturor celor patruformulri testate, maximele fiind atinse tot n cazul formulrii G2P2. Ele s-ar putea datora

mecanismelor diferite de difuzie implicate n transportul substanei active. Concentraiile de

Meloxicam obinute n soluia receptoare sunt n concordan cu cele gsite n literatur.

5. Procentul de Meloxicam difuzat prin pielea de oarece s-a ncadrat ntre 30 i 70%, cu valori

mai bune n cazul utilizrii pH-ului neutru i a agentului de solubilizare trietanolamina (formula

G2P2). Totui, comparativ cu datele din literatur, procentele difuzate in vitro au fost mai mici.


41/52

41

III.6. STUDIUL IV COMPARAREA DIFUZIEI IN VITRO A

MELOXICAMULUI PRIN MEMBRAN ATIFICIAL I PRIN PIELE ANIMAL

Folosind datele obinute n cadrul studiilor anterioare efectuate pe membran artificial i pe

piele dorsal de oarece, se pot trage cteva concluzii referitoare la profilul farmacocinetic al

Meloxicamului difuzat prin diferite tipuri de membrane naturale sau artificiale utiliznd teste in vitro.

Se poate analiza variaia vitezei de difuzie, a procentului de Meloxicam difuzat i a distribuiei

Meloxicamului n cele trei compartimente: form farmaceutic, membran i soluie receptoare.

Suprafaa de difuzie a fost n toate experimentele aceeai.

III.6.1. VARIA IA VITEZEI DE DIFUZIE A MELOXICAMULUI N FUNC IE DE

TIMP

Formularea farmaceutic cu cele mai bune rezultate s-a dovedit a fi G2P2 care are n compoziie

Meloxicam 0.3%, Trietanolamin 3%, Carbopol 990 1%, Glicerin 12 %, Soluie NaOH 10% - 6.5% iSoluie Fenosept 1% (g/g).

Variatia vitezei de difuzie a Meloxicamului in functie de timp

0

0.002

0.004

0.006

0.008

0.01

0.012

0.014

0.016

0.018

0.02

0 5 10 15 30 60 120 180 360 1440

Timp (min)

Viteza

dedifuzie(mg/min)

EXP 2 G2P2 (DESIGN 2) EXP 6 G2P2 PIELE (DESIGN 8)

GRAFIC 30 - VARIA IA VITEZEI DE DIFUZIE A MELOXICAMULUI

N FUNC IE DE TIMP PENTRU FORMULA G2P2 pH 7.4 p=0.003375384

Comparnd difuzia prin cele dou tipuri de membran, se poate observa c viteza de difuzie ia

valori mult mai mari n cazul difuziei prin membrana artificial dect prin cea animal, ceea ce era deateptat, innd cont de caracteristicile celor dou tipuri de membran: grosime, compoziie, tipuri de

difuzie implicate. Se mai poate remarca faptul c n cazul difuziei prin piele animal, viteza de difuzie

are dou picuri la 5-10min i la 3 ore dup aplicare, spre deosebire de membrana artificial unde

aceasta crete pn la 15 minute, dup care ncepe s scad pn la 24 ore. Trebuie avut n vedere i

faptul c membrana artificial poate avea o grosime cu pn la de 10 ori mai mic dect pielea

recoltat de la oarece.


42/52

42

III.6.2. VARIA IA PROCENTULUI DE MELOXICAM DIFUZAT N FUNC IE DE

TIMP

Variatia procentului de Meloxicam difuzat in functie de timp

0

10

20

30

40

50

60

70

80

90

100

0 5 10 15 30 60 120 180 360 1440

Timp (min)

Procentdifuzat(%)

EXP 2 G2P2 (DESIGN 2) EXP 6 G2P2 PIELE (DESIGN 8)

GRAFIC 31 - VARIA IA PROCENTULUI DE MELOXICAM DIFUZATN FUNC IE DE TIMP PENTRU FORMULA G2P2 pH 7.4 p=0.0002125

Procentul de Meloxicam difuzat a atins valori asemntoare cu cele din literatur pentru

experimente similare, el incadrndu-se n jurul valorii de 80-90% pentru difuzia prin membran

artificial i 60% pentru cele ce au utilizat pielea animal. Procentul de Meloxicam neregsit n cazul

experimentelor prin piele animal a fost ceva mai mare, oferind ipoteza unei retenii a substanei active

n mostra de piele utilizat, fracia aceasta putnd avea i rol dept.

Nu au aprut diferene semnificative la utilizarea unui pH 4.5 diferit de cel fiziologic.

Urmtoarea etap ar fi efectuarea unor teste in vivo cu aplicarea acestei forme farmaceuticedirect pe pielea unui animal viu, cu determinarea variaiei concentraiei plasmatice.

III.7. STUDIUL V - EVALUAREA FARMACOCINETIC IN VIVO A UNOR

PREPARATE CU ANTIINFLAMATOARE NESTEROIDIENE APLICATE TOPIC

FOLOSIND EXPERIMENTE PE ANIMALE

III.7.1.MOTIVA IA STUDIULUI

Antiinflamatoarele nesteroidiene aplicate topic prezin efecte terapeutice locale similare, dar

efectele adverse gastrice sunt mult reduse comparativ cu efectele secundare aprute dup administrare

oral sau injectabil.

n acest studiu s-a dorit determinarea concentraiilor plasmatice a ctorva dintre

antiinflamatoarele nesteroidiene dup administrarea percutan n doz unic la animale de laborator i


43/52

43

monitorizarea acestor concentraii plasmatice n decurs de 24 ore. Determinrile cantitative i calitative

au fost efectuate prin cromatografie de lichide.

Studiul i-a mai propus s determine:

- dac la administrarea cutanat AINS se absorb i ating nivele plasmatice similare cu nivelele

plasmatice descrise n literatur ca fiind terapeutice;

- dac preparatele cu eliberare lent administrate cutanat n priz unic prezint o eficien i o

tolerabilitate bun.

Proporia de AINS absorbit prin piele depinde de timpul de contact, de aria acoperit, precum i

de doza total i de hidratarea pielii.

S-a determinat cantitatea de substan activ absorbit prin piele, prin determinarea

c

CERCETĂRI ASUPRA VARIAŢIILOR FARMACOCINETICE ALE UNOR PREPARATE ANTIINFLAMATOARE FOLOSITE TOPIC

Documents

Transcript of CERCETĂRI ASUPRA VARIAŢIILOR FARMACOCINETICE ALE UNOR PREPARATE ANTIINFLAMATOARE FOLOSITE TOPIC