Universitatea de tiine Agronomice i Medicin Veterinar Facultatea de Biotehnologii

Carbonic AnhidrazaCoordonator,Doctor, Studenta,Asistent abrea IoanaSimion Vasilica Grupa 6201Universitatea de tiine Agronomice i Medicin Veterinar Facultatea de BiotehnologiiEnzimele sunt macromolecule de natur proteic,ce au rol de catalizatori n reaciile din organismele vii.Anhidraza carbonica este enzima care activeaza deshidratarea reversibil a anhidridei carbonice. Este prezent ntr-un numr mare de esuturi i n globulele roii. Aceast enzim a fost identificat n anul 1993 n globulele roii ale vacilor. De atunci, a fost gasit n cantitate mare n esutul mamar,plante,alge i bacterii.

IntroducereCarbonic anhidraza(E.C. 4.2.1.1.) denumit si carbonat dehidrataza, cu denumirea sistematica carbonat hidro-laza. Centrul su catalitic conine Zn2+. Face parte din clasa liaze care sunt enzime ce catalizeaz reacii de scindare nehidrolitic a unor legturi chimice dinmolecula substratului.Sunt cunoscute apte izoenzime ale anhidrazei carbonice(AC) izolate din vertebrate ct i unele enzime izolate din plante sau microorganisme, dintre care patru sunt forme citosolice (AC I, II, III i IV); doua sunt asociate membranelor (AC IV i V; AC V este asociat membranei mitocondriale) i AC VI este singura form secretat (n saliv).

Capitolul i

Carbonic anhidrazele fac parte dintr-o familie de enzime care catalizeaz reacia dintre dioxid de carbon si ap rezultnd acid carbonic.Reacia reversibil este relativ nceat deoarece lipsete catalizatorul. De aceea, o bautur carbogazoas nu ii pierde imediat gazul atunci cnd se deschide sticla,dar gazul se va pierde repede atunci cnd lichidul este introdus in gur pentru c va intra n contact cu saliva care conine carbonic anhidraza.O anhidraz este definit ca fiind o enzim care catalizeaz reaciile n care se pierde o molecul de ap,aadar reacia reversibil ne arat cum acidul carbonic pierde o molecul de ap datorit carbonic anhidrazei.

Reactia de catalizareImportanaCarbonic anhidraza are un rol important n respiraie pentru c influeneaz transportul dioxidului de carbon n snge,dar i n secreia gastric i asupra pH-ului intracelular.

Principiul metodei Are ca punct de plecare metoda de determinare colorimetric a modificrilor de pH. Este msurat timpul n care pH-ul amestecului de reactani scade de la valoarea iniial la valoarea final. Urmrirea reaciei se face spectofotometric utiliznd indicatori de culoare care variaz n domeniul de pH ales.

Capitolul iiReactivi i soluiiIndicator de culoare:p-nitrofenol n concentraie de 0,2 mMSoluie tampon:4-2-hidroxietil H2SO4, s-a utilizat o concentraie de 20mMSoluia stoc de anhidraza carbonic,s-au preparat soluii stoc de AC I si AC II n concentraii de 3,44x10-6M. Concentraiile de AC au fost verificate prin msurarea spectofotometric la 280nm. Soluia de CO2 se obine prin barbotarea pn la saturare a CO2 gaz n ap distilat. Soluia astfel obinut este pstrat ntr-un vas nchis,sub presiune,iar concentraia de lucru este de 15mM.Na2SO4 n concentraie de 0,1M pentru meninerea constant a triei ioniceSoluii stoc de activatori sau inhibitori preparate n concentraii de 2x10-2 prin solubilizarea substanelor respective n ap distilat