analizor instructiuni

1

str. Ceahlãu 11/2, 4300, Tg. Mureº; tel. 0265-163268, tel./fax 0265-123682; e-mail: [email protected]; website: www.haemolab.roReprezentanþe: Bucureºti: 021-3262154, 0722-475466, Constanþa: 0723-577467, Piatra Neamþ: 0744-475175, Cluj-Napoca: 0723-577469, Tg. Mureº: 0723-577464

Reg. Com.: J26-636-07.09.2001; Cod Fiscal: R14166519; Raiffeisen Bank Sovata Cont: 1536780; Trezorerie Tg. Mureº Cont: 506914166519; BRD Tg. Mureº Cont.: 251100996091136

aprilie 2002

INSTRUCTIUNI DE FOLOSIRE A

REACTIVILOR DE BIOCHIMIE

ACID BILIAR .............................................................................................................................................. 3

ACID URIC .................................................................................................................................................. 4

ACID URIC .................................................................................................................................................. 5

ALBUMINA ................................................................................................................................................. 6

ALFA - AMILAZA....................................................................................................................................... 7

ALFA - AMILAZA (EPS) ............................................................................................................................ 8

ALFA-HBDH................................................................................................................................................ 9

ALT ( GPT) ................................................................................................................................................. 10

ALT (GPT) .................................................................................................................................................. 11

AMILAZA PANCREATICA (EPS) ........................................................................................................... 13

ASLO – LATEX ......................................................................................................................................... 14

AST ( GOT) ................................................................................................................................................ 15

AST (GOT) ................................................................................................................................................. 16

CALCIU ..................................................................................................................................................... 18

CALCIU-ARZENAZA III .......................................................................................................................... 19

CALCIU OCPC/AMP ................................................................................................................................ 20

CAPACITATEA DE LEGARE A FIERULUI ............................................................................................ 21

CK-MB ....................................................................................................................................................... 22

CLORURA ................................................................................................................................................. 23

COLESTEROL ........................................................................................................................................... 24

COLESTEROL ........................................................................................................................................... 25

COLESTEROL ADPS................................................................................................................................ 26

COLESTEROL – HDL............................................................................................................................... 28

CHOLESTEROL – LDL ............................................................................................................................ 29

COLINESTERAZA .................................................................................................................................... 30

2

CREATININA ENZIMATICA ................................................................................................................... 31

CREATININA ENZIMATICA ................................................................................................................... 32

CREATIN CHINAZA................................................................................................................................. 33

CREATIN CHINAZA................................................................................................................................. 34

CREATININA ............................................................................................................................................ 35

CRP – LATEX ............................................................................................................................................ 36

CUPRU ....................................................................................................................................................... 37

DIA – QUICK PANOPTIC ........................................................................................................................ 38

FIER (FERROZIN)..................................................................................................................................... 39

FOSFATAZA ACIDA................................................................................................................................. 40

FOSFATAZA ALCALINA ......................................................................................................................... 41

FOSFOR ..................................................................................................................................................... 42

FR – LATEX ............................................................................................................................................... 43

GAMMA – GT ........................................................................................................................................... 44

GAMMA – GT ........................................................................................................................................... 45

GLUCOZA GOD/PAP .............................................................................................................................. 46

GLUCOZA ................................................................................................................................................. 47

GLUCOZA - HK ........................................................................................................................................ 48

HCG – LATEX ........................................................................................................................................... 49

DEHIDROGENAZA ACIDULUI LACTIC (LDH) ................................................................................... 50

LDH ............................................................................................................................................................ 51

ALFA-HBDH.............................................................................................................................................. 52

MAGNEZIU ............................................................................................................................................... 53

PROTEINA TOTALA ................................................................................................................................ 54

PROTEINE (BIURET) ............................................................................................................................... 55

RETI – COUNT.......................................................................................................................................... 56

SLE – LATEX............................................................................................................................................. 57

Syphilis RPR Newmarket ........................................................................................................................... 58

TRIGLICERIDE ADPS .............................................................................................................................. 59

TRIGLICERIDE PAP ................................................................................................................................. 60

TRIGLICERIDE ......................................................................................................................................... 61

UREE (CARBAMIDA) U.V....................................................................................................................... 62

CARBAMIDA (UREE) .............................................................................................................................. 63

3

ACID BILIARConþinut: 12 x 10 ml Nr. cod: 45311

Reactiv folosit pentru determinarea colorimetric-enzimaticã a acidului biliar în ser uman.

PRINCIPIUL DETERMINÃRII:

3-α-hidroxi-acid biliar+NAD >3-oxo-acidbiliar+NADH+H+

NADH+H++NBT >NAD++formazan

3-α-hidroxi-acid biliara în prezenþa NAD ºi 3-α-hidroxisteroid dehidrogenazã se transformã în 3-oxo-derivate, formându-se în acelaºi timp ºi NADH.NADH-ul împreunã cu Nitro-Blue-Tetrazoliu(sãruri NBT) sub acþiunea Diaphorazei formeazãun derivat de Formazan de culoare albastrã.

LITERATURÃ:Mashige F. Imai K. Osuga T.: Clin.Chem.Acta 70,79-86(1976)Mashige F. Tanaka N. Maki A. Kamei S. Yamanaka M.:Clin.Chem. 27,1352-1356 (1981)Osuga T. Mitamura K. Mashige F. Imai K.: Clin.Chem.Acta75,81-90 (1977)

VALORI DE REFERINÞÃ:0-6 µmol/L

REACTIVI:1.Reactiv (R1)

Tampon TRIS 0,1 mmol/L2.Reactiv (R2)

3αHSD 0,62 mmol/LDiaforazã 125 U/LNAD 1 mmol/LNBT 0,3 mmol/L

PROBÃ:Ser nehemolitic sau plasmã heparinizatã.

EFECTUAREA ANALIZEI:Pregãtirea reactivului:Se dizolvã o fiolã de reactiv R2 intr-un flacon dereactiv R1.Stabilitatea soluþiei:

20-25°C 8 ore2-8°C 2 zile

METODA DE LUCRU:

Determinãrile se fac la urmãtoarele parametrii:Lungimea de undã: 540 (500-550) nmTemperaturã: 37°CCuve: 1 cmMod de mãsurare: cinetic

Determinarea:

Martor Standard ProbãApã distilatã 150µL - -Standard - 150µL -Probã - - 150µLReactiv 1 mL 1 mL 1 mL

Dupã amestecare ºi incubare de 2 minute se va citivariaþia absorbanþei in fiecare minut timp de 3minute.

CALCUL:

( ∆A probã

/ ∆A standard

) x C standard

= C probã

A= absorbanþaC= concentraþia

Linearitate:200 µmol/L

Peste aceastã valoare proba se va dilua cu soluþiefiziologicã. La calcule se va lua în considerarefactorul de diluþie.

Observaþie:Metoda se foloseºte doar în cazul diagnosticãriiin vitro.

3 αHSD

diaforazã

DIAGON ROMANIAHAEMOLAB srl

str. Ceahlãu 11/2, 4300, Tg. Mureº;tel. 065-163268, tel./fax 065-123682;

e-mail: [email protected]: www.haemolab.ro

4

ACID URICConþinut: 15x20ml 20x100mlNr. cod: 40921 40962


Uricaza transformã acidul uric din probã înalantoinã, iar în urma reacþiei rezultã CO

2 ºi H

2O

2 .

H2O

2 împreunã cu peroxidaza va reacþiona cu

fenolul ºi în prezenþa 4-amino antipirinei formeazãun complex colorat. Intensitatea coloraþiei, mãsuratãla 520 nm, este direct proporþionalã cu concentraþiaacidului uric din probã.

Acid uric+2H2O+O

2 uricaza alantoina+CO

2+ +H

2O

2

2H2O

2 +4-amino-antipirina+DHBS peroxidaza derivat

chinonã + 4H2O

DHBS=3,5 diclor-2-hidroxi-B-sulfonat

LITERATUR Ã:

Barham., Trinder. Analys. 97,142 (1972)Fossati., Principe. Clin.Chem. 28.227 (1980).

VALORI DE REFERINÞÃ:

SerBãrbaþi 200-416 µmol/L 34-70 mg/LFemei 148-357 µmol/L 25-60 mg/L

Urina 250-750 mg/24h

REACTIVI:

1. Reactiv (R1)

Tampon fosfat, pH=7.5 50 mmol/LDHBS 4 mmol/L

2. Reactiv (R2)

uricazã 80 U/Lperoxidazã 660 U/L4-amino antipirinã 1 mmol/L

Standard de acid uric

PROBA:

Ser nehemolizat sau plasmã heparinizatã, urinã.

EFECTUAREA ANALIZEI:

Pregãtirea amestecului de reactivi: se vadizolva conþinutul unui flacon de reactivi R2 încantitatea corespunzãtoare de reactiv R1.

Stabilitatea soluþiei:20-25 °C 7 zile2-8 °C 28 zile

METODA DE LUCRU:Martor Standard Proba

Apã distilatã 20µL - -Standard - 20µL -Proba - - 20µLAm. de reactivi 1 mL 1 mL 1 mL

Dupã amestecare ºi o incubare de 5 minute la 37°C sau 10 minute la 25°C, se va citi valoareaabsorbanþei (A) la 520 nm (490 -550 nm), în cuvede 1 cm, faþã de martor. Metoda de mãsurare: cinetic(cu punct final).

CALCUL:

(Aproba

/Astandard

) x Cstandard

=Cproba


LINEARITATE:

Pânã la 1800 µmol/L (300mg/L) absorbanþa estedirect proporþionalã cu concentraþia. Dacã sedepãºeºte valoarea menþionatã, proba se va diluacu soluþie fiziologicã în proporþie de 1:5 sau 1:10,iar rezultatul se va înmulþi cu 5 sau 10.

OBSERVAÞIE:

Urina, înainte de determinare se va incuba la60°C timp de 10 minute, timp în care acidul uricse dizolvã. Conþinutul ridicat de acid ascorbicperturbã determinarea, de aceea se va folosi urinãdiluatã. Metoda este recomandatãdiagnosticãrii in vitro.




5

ACID URICReactiv lichid în doi componenþi

Conþinut: 1x120ml 1x600mlNr. cod: 46761 46762


Determinarea enzimaticã-colorimetricã aactivitãþii acidului uric:

acid uric+2H2O+O

2 uricaza alantoina+CO

2+ +H

2O

2

2H2O

2 +4-amino-antipirina+ADPS peroxidaza derivat

chinonã + 4H2O

LITERATUR Ã:

Trivedi R.C.,Rebar R.,Berka E.,Strong L.:Clin.Chem.,1978,24:1908


Ser, plasmã 178-345µmol/LUrinã 4760-5960 µmol/L

REACTIVI:

1. Reactiv (R1)

Tampon Pipes, pH=7,0 50 mmol/L4-amino-antipirinã 0,37 mmol/Lperoxidazã 1500 U/Lascorbat-oxidazã 1600 U/L

2. Reactiv (R2)

Ferocianidã 240 µmol/LADPS 1,1 mmol/LUricazã 140 U/L

Standard de acid uric

Hemoliza deranjeazã determinãrile.Reactivii conþin azotit de sodiu 0,1%.

PROBA:

Ser nehemolizat. Plasmã heparinizatã.Urinã diluatã cu apã distilatã în proporþie de 1:10.


• Pregãtirea reactivului cu un singur compo-nent: se vor dizolva douã pãrþi din reactivulR1 într-o parte din reactivul R2.

Stabilitatea soluþiei:20-25 °C 2 sãpt.2-8 °C 4 sãpt.

• Reactivii cu doi componenþi sunt gatapentru folosire.

METODA DE LUCRU:

Metoda de lucru cu un singur reactiv:Martor Standard Proba

Am. de reactiv 1 mL 1 mL 1 mLApã distilatã 50 µL - -Standard - 50 µL -Proba - - 50 µLDupã amestecare ºi o incubare de 5 minute la 37°C se va citi valoarea absorbanþei (A) la 546 nm(520 -570 nm), în cuve de 1 cm, faþã de martor.

Metoda de lucru cu doi componenþi:Martor Standard Proba

Am. de reactiv 1 mL 1 mL 1 mLApã distilatã 50 µL - -Standard - 50 µL -Proba - - 50 µLDupã amestecare ºi incubare de 1 minut se maiadaugã:Reactiv R2 500 µL 500 µL 500 µL

Se amestecã ºi dupã o incubare de 5 minute la 37°C se va citi valoarea absorbanþei la 546 nm (520 -570 nm), în cuve de 1 cm, faþã de martor.

CALCUL:

(Aproba

/Astandard

) x Cstandard

=Cproba

LINEARITATE:

Metoda este linearã pânã la 1487,5 µmol/L.




6

ALBUMINAContinut: 1x250ml 4x250mlNr. cod: 41251 41252


In mediul alcalin verdele - bromcrezol se leagãcantitativ de albuminã.

LITERATURÃ:

Doumas, B. et al.:Clin. Chim. Acta 31, 87, (1971)Doumas, B. et. A: In Standard Methods of ChimicalChemistry, Acad Press N.Y., 7,175, (1972)Drupt, F.: Pharm. Biol. 9, 777 (1977)


Albumina:38-54 g/L

REACTIVI:

1. Reactiv (R1)

Verde de bromcrezol 0.15 mmol/LTampon succinat pH=4.2 75 mmol/LBrij 35 7 mmol/L

2. Reactivi (R2)

Soluþie standard (albumina din ser de bovinã)

PROBA:

Ser nehemolizat, plazmã obþinutã din sângerecoltat pe heparinã sau EDTA.


Reactivii sunt gata de folosinþã.

La 2-8 °C îºi pãstreazã stabilitatea pânã la datamenþionatã pe pachet.

METODA DE LUCRU:

Martor Standard ProbaReactiv 1 mL 1mL 1mLStandard - 10 µL -Proba - - 10 µL

Se amestecã ºi, dupã o incubare de 5 minute seciteºte valoarea absorbanþei faþã de martor la 578sau 628 nm, în cuve de 1 cm, la 20-25 °C, 30 °C,37 °C. Metoda de mãsurare este cu punct final.

CALCUL:

(Aproba

/Astandard

) x Cstandard

=Cproba


LINEARITATE:

Metoda este linearã pânã la 69g/L.

OBSERVAÞIE:

Metoda este recomandatã diagnosticãrii in vitro.




7

α - AMILAZAReactiv lichid cu un component

Conþinut: 20x3ml 12x10ml 1x100ml 1x600ml 20x100mlNr. cod: 45801 45811 45861 45863 45862

PRINCIPIUL DETERMINÃRII:Reactivul conþine 2-clor-4- (nitro-fenil)- alfa-galactozil-maltozid (GALG2-CNP). Amilaza dinprobã dislocã 2-clor-4-nitrofenolul (CNP) de pesubstrat, ce poate fi mãsurat fotometric. Viteza dereacþie este proporþionalã cu activitatea amilazei.

GALG2-CNP alfa-amilaza GALG2 + CNP

LITERATURA:

Street, H.V. and Close, J.R.:Clin Chem.Acta 1:256 (1956)Henry, R.J. and Chiamori, N.:Clin Chem. 6:434 (1960)David, H.,Clin Chem. 28:1485, 1985McCroskey R.,Chang, T., David, H. and Winn, E. ClinChem. 28:1787,1982Young D.S.,Effects of Drugs on Clinical Laboratory Tests,third edition, AACC Press, Wasington, D.C. 1990

DOMENIUL DE REFERINÞÃ:

Ser :Calibrat la valoarea lichidului BoehringerCFAS: 15-77 U/LCalibrat la valoarea Boehringer EPS:

43-220 U/LDomeniul de referinþã variazã în funcþie de vârstã,sex, condiþii de trai. Se recomandã ca fiecarelaborator sã-ºi fixeze propriul domeniu de referinþã.

REACTIVI:

GALG2-CNP 4.55 mmol/LAcetat de calciu 5.0 mmol/LClorurã de sodiu 51.5 mmol/LTampon, pH=6Conservanþi

PROBA:Ser nehemolitic, plasmã heparinizatã, lichid duo-denal.Urina: se va colecta într-un recipient curat ºi uscat.Se va pãstra la 2-8°C, pânã la efectuareadeterminãrii.


Pregãtirea reactivului: reactivul nu necesitã opregãtire prealabilã. A nu se reintroduce în sticlãcantitatea rãmasã dupã determinare!A se pãstra la 2-8°C.

METODA DE LUCRU:

Reactiv 3 mLProba 50 µL

Se amestecã ºi se incubeazã timp de 1 minut la 37°C.Variaþia absorbanþei se va citi la 405 nm, în cuve de1 cm, timp de 2 minute, din 30 în 30 de secunde. Seva determina variaþia de absorbanþã pe minut.Mod de mãsurare: cinetic, crescãtor.

CALCUL:

∆A/min. x 21630=U/L (CFAS EPS)∆A/min. x 7570=U/L (CFAS liquid)

∆A/min.= variaþia de absorbþie pe minut

LINEARITATE:

Metoda este linearã pânã la 2000 U/L. Dacã variaþiaabsorbanþei pe minut depãºeºte 0,25, proba se vadilua cu ser fiziologic, în proporþie de 1:3. La calculse va þine cont de aceastã diluþie.

OBSERVAÞIE:

A se întrebuinþa numai la diagnostizãri in vitro.Compuºii care formeazã chelaþi, pot tulbura mersulreacþiei. A nu se utiliza anticoagulanþi ca EDTA,citrat sau oxalat. Reactivul conþine calciu, care poatecauza precipitarea fibrinogenului din plasmã.




8

α - AMILAZA (EPS)Reactiv lichid în doi componenþi


PRINCIPIUL DETERMINÃRII:Determinarea cineticã a activitãþii α -amilazei:5-etilidinã-G7-pNP+5H

2O α-amilaza 2-etilidinã- G5+2- G2-

pNP +2-etilidinã-G4+2-G3-pNP +etilidinã-G3 + G4-pNP

2-G2-pNP + 2 G3-pNP + G4-pNP + 14H2O α-glicozidazã

5pNP + 14G

G = glucozãpNP = p-nitrofenol

LITERATURA:

A.Kurrie-Weittenhiller, W.Holzel, D.Engel, J.Finke,G.Klein: Clin. Chem. 42, 598 (1996)


La 37°C– cu calibrator lichid Boehringer CFAS ≤ 100 U/L– cu calibrator EPS Boehringer CFAS ≤ 230 U/Lfactor de conversie: lichid x 2,3 = EPS

REACTIVI:

1.Reactiv (R1)

Tampon HEPES, pH= 7,15 50 mmol/LNaCl 70 mmol/LMgCl

2 10 mmol/L

α- glicozidazã ≥ 4 kU/L

2.Reactiv (R2)

4,6-etilidinã-G7-pNP(EPS) 3 mmol/LTampon HEPES pH= 7.15 50 mmol/L

Reactivii conþin azotit de sodiu 0,1%.

PROBA:Ser nehemolizat, urinã.

STABILITATEA REACTIVILOR:Ferite de luminã ºi pãstrate la 2-8°C, reactiviisunt stabili pânã la data menþionatã pe ambalaj.


• Pregãtirea reactivului cu un singur compo-nent: se vor dizolva cinci pãrþi din reactivul R1cu o parte din reactivul R2.

Stabilitate:20-25°C 5 zile2-8°C. 4 sãpt.

• Reactivii cu doi componenþi sunt gata defolosire.

METODA DE LUCRU:Metoda de lucru cu un singur component

Amestec de reactivi 600 µLProba 8 µL

Se amestecã ºi dupã o incubare de 1 minut la 37°Cse va citi valoarea absorbanþei la 405 nm(400-420nm), în cuve de 1 cm, faþã de apã distilatã, timp de3 minute.

Metoda de lucru cu doi componenþi:

Reactiv R1 500 µLProba 8 µL

Se amestecã ºi dupã o incubare de 3 minute semai adaugã:

Reactiv R2 100 µLSe amestecã ºi dupã o incubare de 3 minute la 37°Cse va citi valoarea absorbanþei la 405 nm(400-420nm), în cuve de 1 cm, faþã de apã distilatã, timp de3 minute.

CALCUL:

∆A/min. x 16744=U/L (CFAS EPS)∆A/min. x 7280=U/L (CFAS liquid)

∆A/min.= variaþia de absorbþie pe minut

LINEARITATE:

Dacã valoarea absorbanþei pe minut la 405 nmdepãºeºte 0,15, proba se va dilua cu ser fiziologicde NaCl în proporþie de 1:10, dupã care se va repetadeterminarea.Metoda este recomandatã diagnosticãrii in vitro.




9

ALFA-HBDHConþinut: 20x3ml 15x20ml 60x20mlNr. cod: 42901 42921 42922

Afinitatea izoenzimelor LDH se deosebeºte esenþialfaþã de substratul α-cetobutirat. Marea afinitate aizoenzimei LDH-1(α- hidroxibutirat �dehidrogenaza) ne ajutã la determinarea rapidã aactivitãþii sale enzimatice.


Izoenzima LDH-1 în prezenþa NADH+H+

transformã alfa-cetobutiratul în alfa-hidroxibutiratcu formare de NAD. Schimbarea absorbanþei esteproporþionalã cu activitatea enzimei.

α-cetobutirat + NADH + H+ α-HBDH α - hidroxibutirat+ NAD+

LITERATUR Ã:

Rec.GSCC(DGKC): J. Clin.Chem.Clin.Biochem .,.8:658,(1970)

Rec.GSCC(DGKC): J. Clin.Chem.Clin.Biochem .,10:182,(1972).


25°C 30°C 37°CAdulþi 55-145U/L 70-190U/L 80-220U/L

REACTIVI:

1. Reactiv (R1)

Tampon fosfat, pH=75 50 mmol/LL- cetobutirat 3 mmol/L

2. Reactiv (R2)

NADH 0.18 mmol/L

PROBA:

Ser nehemolizat sau plasmã obþinutã din sângerecoltat pe EDTA.


Pregãtirea amestecului de reactivi: se va dizolvaconþinutul unui flacon de reactiv R2 în cantitateacorespunzãtoare de reactiv R1.

Stabilitatea soluþiei:20-25 °C 2 zile2-8 °C 1 sãpt.

METODA DE LUCRU:

Amestec de reactivi 3 mLProba 100 µL

Dupã amestecare ºi o incubare de 1 minut la 25°C(30,37 °C) se va citi valoarea absorbanþei (A) la340 nm (334 -365 nm), în cuve de 1 cm, faþã de aer.Se va urmãri variaþia absorbanþei pe minut (∆A/min)timp de 3 minute.Metoda de mãsurare: cinetic (descrescãtor).

CALCUL:

340nm: ∆A/min x 4921 =U/L334nm: ∆A/min x 5016 =U/L365nm: ∆A/min x 9118 =U/L

LINEARITATE:

Dacã variaþia absorbanþei pe minut la 340 nmdepãºeºte 0.1 sau la 365nm 0.05, proba se va diluacu soluþie fiziologicã de NaCl în proporþie de 1:10,dupã care se va repeta determinarea ºi rezultatul seva înmulþi cu 10.

OBSERVAÞIE:

Hemoliza perturbã determinarea .Metoda este recomandatã diagnosticãrii in vitro.




10

ALT ( GPT)Conþinut: 20x3ml 15x20ml 9x50ml 20x100mlNr. cod: 41101 41121 41131 41162


Substraturile participante la reacþia catalizatã dealanin- aminotransferazã (ALAT/ALT) sunt: L-alanina ºi 2-cetoglutaratul. Piruvatul format în primareacþie, în prezenþa LDH va reacþiona cu NADHducând la formarea de NAD+ ºi L-lactat . Variaþiaabsorbanþei mãsuratã la 340nm este proporþionalãcu activitatea ALAT.

L-alanina+ 2-cetoglutarat GPT L-glutamat + piruvatPiruvat + NADH+H+ LDH L-lactat + NAD+

LITERATUR Ã:

Bergmeyer et all. Clin. Chem. 24,58- 73 (1978)Bergemeyer et all. Clin. Chem. Acta 105,147F (1980)Expert Panel on enzyme of the IFCC, Clin. Chem. Acta, 70, f-19 (1976)


25 °C 30 °C 37 °C<21 U/L <35 U/L <49 U/L

REACTIVI:

1. Reactiv (R1)

Tampon TRIS, pH=75 110mmol/LL- alaninã 550mmol/L

2. Reactiv (R2)

NADH 0.2mmol/LLDH 1200 U/Lα- cetoglutarat 16 mmol/L

PROBA:

Ser nehemolizat sau plazmã obþinutã din sângerecoltat pe heparinã.


Pregãtirea reactivului de lucru: se va dizolvaconþinutul unui flacon de reactiv (R2) în cantitateacorespunzãtoare de reactiv (R1).


METODA DE LUCRU:


Dupã amestecare ºi o incubare de 1 minut la 30 °C(37 °C) se va citi valoarea absorbanþei (A) la 340nm (334 -365 nm), în cuve de 1 cm, faþã de apadistilatã. Se va urmãri variaþia absorbanþei pe minut(∆A/min) timp de 3 minute.Metoda de mãsurare: cinetic (descrescãtor).

CALCUL:


LINEARITATE:

Dacã variaþia absorbanþei pe minut la 340 nmdepãºeºte 0.17 respectiv la 365nm 0.095, proba seva dilua cu soluþie fiziologicã de NaCl în proporþiede 1:10, dupã care se va repeta determinarea ºirezultatul se va înmulþi cu 10.

OBSERVAÞIE:

Testul nu conþine fosfat de piridoxal.Hemoliza ºi lipemia perturbã determinarea .Metoda este recomandatã diagnosticãrii in vitro.




11

ALT (GPT)Reactiv lichid în doi componenþi


PRINCIPIUL DETERMINÃRII:Determinarea cineticã a activitãþii alanin- amino-transferazei:L-alanin + 2- cetoglutarat ALT piruvat +

L-glutamatPiruvat + NADH+H+ LDH L-lactat + NAD+

LDH= dehidrogenaza acidului lactic

LITERATURA:

Expert Panel on enzyme of the IFCC, Clin. Chim. Acta.1976,70:F19


25°C 30°C 37°C21 U/L 35 U/L 49 U/L

REACTIVI:

1..Reactiv (R1)

Tampon TRIS, pH=7,50 110 mmol/LL-alaninã 600 mmol/LLDH 1500 U/L

2.Reactiv (R2)

α- cetoglutarat 16 mmol/LNADH 240 µmol/L


STABILITATEA REACTIVILOR:

Ferite de luminã ºi pãstrate la 2-8°C, reactiviisunt stabili pânã la data menþionatã pe ambalaj.

PROBA:

Ser nehemolizat, plasmã obþinutã din sângerecoltat pe EDTA sau heparinã.


• Pregãtirea reactivului cu un singur compo-nent: se vor dizolva douã pãrþi din reactivul R1într-o parte din reactivul R2.

Stabilitate:20-25°C 5 zile2-8°C. 4 sãpt.

• Reactivii cu doi componenþi sunt gata defolosire.

METODA DE LUCRU:Metoda de lucru cu un singur component:


Se amestecã ºi dupã o incubare de 1 minut la 37°Cse va citi valoarea absorbanþei pe minut la 340 nm(334-365 nm), timp de 3 minute, în cuve de 1 cm,fatã de apã distilatã.Metoda de lucru cu doi componenþi:

Reactiv R1 1 mLProba 150 µL

Se amestecã ºi dupã o incubare de 1 minut se maiadaugã:

Reactiv R2 500 µLSe amestecã ºi dupã o incubare de 1 minut la 37°Cse va citi valoarea absorbanþei pe minut la 340nm(334-365 nm), în cuve de 1 cm, fatã de apãdistilatã, timp de 3 minute.

CALCUL:

340 nm: U/L=∆A/min. x 1750334 nm: U/L=∆A/min. x 1750365 nm: U/L=∆A/min. x 3240

LINEARITATE:

Dacã valoarea absorbanþei pe minut la 340 nmdepãºeºte 0,15, proba se va dilua cu ser fiziologicde NaCl în proporþie de 1:10, dupã care se va repetadeterminarea.Metoda este recomandatã diagnosticãrii in vitro.




12

AMILAZÃ PANCREATICÃReactiv lichid cu un singur component

Conþinut: 1 x 120 mlNr. cod: 47861

Reactiv folosit pentru determinarea cantitativã a amilazeipancreatice în ser uman folosind ca substrat Gal-G2-CNP.

Mãsurarea amilazei este folosit primordial în diagnosticareaºi tratarea bolilor pancreasului.

Amilaza se gãseºte în primul rând în pancreas ºi glandelesalivare. În momentul eliberãrii sale în tractul digestivîncepe hidrolizarea enzimei. Determinarea amilazei esteutilã în diagnosticarea afecþiunilor pancreasului ºiparotidelor. Nivelul ridicat al alfa-amilazei indicãpancreatitã acutã sau alte afecþiuni ale pancreasului, ºi alteafec þiuni ca: oreionul, parotidite bacteriene. Izoenzimasalivarã este neutralizatã de cãtre anticorpi monoclonali.


Amilaza pancreaticã hidrolizeazã legãturile 1-4 glicozidicedin amidon ºi alte polizaharide, cu formarea unor lanþuriscurte de oligozaharide. Reactivul utilizeazã ca substrat 2-clor-4-nitrofenIL-?-galactosilmaltosida (Gal-G2-CNP). Ratade formare a p-nitrofenolului este direct proporþionalã cuactivitatea amilazei din probã. Creºterea absorbanþei poatefi mãsurat fotometric la 405 nm.

LITERATURÃ:

Street, H.V. and Close, J.R.: Clin.Chem.Acta 1: 256 (1956)Henry, R.J. and Chiamori,N.: Clin.Chem. 6 : 434 (1960)David,H., Clin. Chem. 28 : 1485,1985McCroskey R., Chang,T., David,H. and Winn,E.,:Clin.Chem. 28:1787,1982Young,D.S., Effects of Drugs on Clinical Laboratory Tests,third edition, AACC Press, Washington, D.C. 1990


Calibrat la nivelul lichidului Boehringer CFAS: 8-53 U/L.

Domeniul de referinþã diferã în funcþie de vârstã, sex, condiþiide trai, aria geograficã. Se recomandã ca fiecare laborator sã-ºi fixeze propriul sãu domeniu de referinþã.

REACTIVI:

Gal-G2-CNP 4,55 mmol/LAcetat de calciu 5,0 mmol/LNatriu-clorid 51,5 mmol/LTampon, pH=6,0ConservanþiAnticorpi monoclonali

PROBÃ:

Ser nehemolitic, plasmã heparinizatã, lichid duodenal.

Urina: se va colecta într-un recipient curat ºi uscat. Se vapãstra la 2-8°C, pânã la efectuarea determinãrii.


Pregãtirea reactivului: reactivul nu necesitã o pregãtireprealabilã. A nu se reintroduce în sticlã cantitatea rãmasãdupã determinare!

A se pãstra reactivul la 2-8°C

METODA DE LUCRU:

Determinãrile se fac la urmãtoarele parametrii:Lungimea de undã: 405 nmTemperaturã: 37°CCuve: 1 cmMod de mãsurare: cinetic, crescãtor

Determinarea

Reactiv 3 mL

Probã 50 µL

Se amestecã ºi se incubeazã timp de 1 minut la 37°C.Variaþia absorbanþei se va citi la 405 nm, în cuve de 1 cm,timp de 2 minute, din 30 în 30 de secunde. Se va determinavariaþia de absorbanþã pe minut.

CALCUL:

∆ A/min X 2292 = U/L (CFAS liquid)

∆ A/min = variatia de absorbþie pe 1 minut

LINEARITATE:

Pânã la 3000 U/L.

OBSERVAÞIE:

Compuºii care formeazã chelaþi, pot tulbura mersul reacþiei.A nu se utiliza anticoagulanþi ca EDTA, citrat sau oxalat.Reactivul conþine calciu, care poate cauza precipitareafibrinogenului din plasmã.

A se utiliza numai în diagnosticãri in vitro.




13

AMILAZÃ PANCREATICÃ (EPS)Reactiv lichid în doi componenþi

Conþinut: 1 x 100ml + 1 x 20 ml Nr. cod: 47961


Reactiv folosit pentru determinarea amilazeipancreatice cu metoda cineticã in IFCC, cu blocareamonoclonarã a amilazei în salivã.

5-etiliden-G7-pNP+5H2O >2 etiliden-G5

2 G2-pNP+2G3-pNP+G4-pNP+14H2O >

5pNP + 14 G

G = glucozã, pNP = p-nitrophenol

LITERATURA:A.Kurrie-Weittenhiller,W.Hölzel, D.Engel,J.Finke,G.Klein:Clin.Chem.

42,598 (1996)

VALORI DE REFERINÞÃ:La o temperaturã de 37°C:- cu lichid calibrator Boehringer CFAS: ≤ 53 U/L- cu calibrator Boehringer CFAS EPS : ≤ 115 U/L- factor conversie: lichid x 2,3 = EPS

REACTIVI:1. reactiv (R1):

tampon HEPES, pH 7.15 50 mmol/LNaCl 70 mmol/LMgCl

210 mmol/L

anticorp monoclonal ≥ 4 kU/Lα - glucozidazã

2. reactiv (R2)4,6-etiliden-G7-pNP (EPS) 3 mmol/Ltampon HEPES, pH 7,15 50 mmol/L

Concentraþia se întelege la reactivul-lucru.

PROBÃ:Urinã, serum nehemolitic.

STABILITATEA REACTIVILOR:În întuneric, la o temperaturã de 2-8ºC, reactiviisunt stabile pâna la data menþionatã pe ambalaj.

EFECTUAREA ANALIZEI:Prepararea reactivului cu un singur component: seamestecã 5 volume de R1 cu un volum de R2.

Stabilitatea la: 5 zile la 20-25ºC4 zile 2-8ºC

Prepararea reactivului cu doi componenþi: reactiviisunt gata pentru folosire.

METODA DE LUCRU:Lungimea de undã: 405 nm (400-420)Temperaturþã: 37ºCCuve: 1 cm

Citirea în comparaþie cu apã distilatã.Reactiv R1 500µLProba 8µL

Se amestecã ºi se incubeazã 3 minute.Reactiv R2 100µL

Se amestecã ºi se incubeazã 3 minute, dupã carese citeºte variaþia absorbanþei în fiecare minut (∆A/minut), timp de 3 minute.

CALCUL:405 nm:activitate (U/L) = ∆A/minut x 3858

(CFAS lichid)= ∆A/minut x 8874 (CFAS EPS)

LINEARITATE:Metoda este linearã pânã la concentraþia de 1800U/L. Dacã ∆A/minut ajunge la 0,15, repetaþi testulfolosind soluþie fiziologicã de NaCl în proporþiede 1/5 sau 1/10.La calcularea rezultatului luaþi în considerareproporþia de diluare.

OBSERVAÞIE:Folosirea reactivului tulbure este strict interzisã.Pentru obþinerea rezultatelor bune, se folosescnumai instrumente de laborator curate.Reactivii conþin 0,1% azotat de amoniu.


+2G2-pNP+2 etiliden-G42 G3-pNP+etiliden-G3+G4-pNP

α - glucosidase

Amilazã pancreaticã




14

ASLO � LATEXConþinut: 50 teste 100 testeNr. cod: 1200101 1200102

Kitul serveºte la punerea în evidenþã pe lamã aanticorpilor antistreptolizinã-O (ASLO) din ser nediluat,la determinarea semicantitativã a acestora. ReactivulASO-Latex este o suspensie de particule uniforme delatex, sensibilizate în prealabil cu streptolizina-Ostabilizatã. În cazul infecþiilor cu streptococ hemolitic,se elibereazã din bacterii streptolizina-O, care induce oproducþie de anticorpi antistreptolizinã-O. La populaþiaadultã sãnãtoasã valoarea sericã ASLO este de 166-250UI/mL, în medie 200 UI/mL. Valorile de peste 200 UI/mL indicã o infecþie cu streptococi. Pentru un diagnos-tic mai precis este indicat � ca în general la probeleserologice � repetarea examinãrii serurilor recoltate îndiferite zile de dupã infecþie.

PRINCIPIUL DETERMINÃRII:Dacã serul de cercetat conþine anticorpi antistreptolizinã-O în cantitate suficientã, aceºtia formeazã punþi anti-gen-anticorp între particulele latex sensibilizate custreptolizina-O, suspensia îºi pierde aspectul omogen,aglutinarea devenind observabilã ºi cu ochiul liber.

LITER ATURÃ:Badin, J. and Harillac, A: J.L. ab. Clin. Med, 75, (1970)

CONÞINUTUL KITULUI:• Suspensie de latex sensibilizat cu streptolizina-O• Control pozitiv: soluþie de gamaglobulinã umanã cu

titru ASLO peste 200 UI/mL• Control negativ: soluþie de gamaglobulinã umanã

cu titru ASLO sub 200 UI/mL• Plãci de unicã folosinþã

MOD DE PÃSTRARE, STABILITATE:

Congelarea este strict interzisã. Kitul îºi pãstreazãstabilitatea la temperatura 2-8°C, pânã la data indicatãpe etichetã. Sedimentarea este posibilã, dar dupã agitareobþinem o suspensie omogenã. Deºi conþine conservant,pentru evitarea contaminãrii se recomandã manipulareacu precauþie a produsului.

Materiale necesare, neincluse în kit:Centrifugã, pipete serologice sau automate, cronometru,baghete de sticlã, eprubete, ser fiziologic, sursã deluminã de intensitate mare.

PROBA:Ser centrifugat. Sã nu se foloseascã seruri hemolizate,lipemice sau infectate. Sã nu se foloseascã plasmã.

METODOLOGIE:- Prealabil efectuãrii analizei, substanþele se lasã la

temperatura camerei sã se încãlzeascã- reactivul se omogenizeazã prin agitare- se efectueazã de fiecare datã ºi controlul pozitiv �

negativ- în cercul trasat pe lamã se pune o picãturã din serul

de cercetat nediluat. Pipeta se pãstreazã pentruamestecare

- se adaugã o picãturã de reactiv- se amestecã cele douã picãturi cu partea platã a

pipetei, astfel ca sã acopere toatã suprafaþa cercului- se roteºte lama exact 2 minute- se observã apariþia � sau absenþa � aglutinãrii- Evaluarea dupã uscarea picãturii dã rezultate eronate- se spalã lama pentru examinarea urmãtoare.

INTERPRETARE:O granulaþie, care depãºeºte pe cea a controlului negativ,indicã prezenþa de cel puþin 200UI/mL ASO. Lipsaaglutinãrii indicã un conþinut ASO sub 200 UI/mL. Dacãcontrolul pozitiv ºi negativ nu dau rezultatul aºteptat,examenul nu se poate interpreta, iar kit-ul trebuieschimbat.În cazul infecþiilor cu streptococ hemolitic de grupaA, în primele 4 sãptãmâni dupã infecþie creºte titrulASO. Dupã vindecare, valoarea revine la cea normalãîn decurs de 6 luni. Valori foarte scãzute apar însindromul nefrotic ºi deficienþe de anticorpi.




15

AST ( GOT)Reactiv lichid în doi componenþi

Conþinut: 1x120ml 1x600mlNr. cod: 4626146262


Determinarea activitãþii aspartat-aminotransferazei prin metoda cineticã:

L-aspartat + alfa-cetoglutarat ASAT acetat oxalic +L – glutamatAcetat oxalic + NADH+H+ MDH L-malat + NAD+

MDH = malat dehidrogeneza

LITERATURÃ:

Expert Panel on enzyme of the IFCC, Clin. Chim. Acta,1976, 70:F19

VALORI NORMALE:

25 °C 30 °C 37 °C<20 U/L <30 U/L <46 U/L

REACTIVI:

1. Reactiv (R1)

Tampon TRIS, pH= 7.8 88 mmol/LL-aspartat 260 mmol/LLDH 1500 mmol/LMDH 900 mmol/L

2. Reactivi (R2)

α- cetoglutarat 12 mmol/LNADH 240 mmol/LReactivii conþin azotit de sodiu 0,1%

PROBA:Ser nehemolizat sau plasmã obþinutã din sângerecoltat pe heparinã sau EDTA.


Ferite de luminã ºi pãstrate la 2- 8 °C, reactiviisunt stabili pânã la data indicatã pe ambalaj.


Prepararea amestecului de reactivi ºi stabilitatealor:• Pregãtirea reactivului cu un singur compo-

nent: se vor dizolva douã pãrþi din reactivul R1într-o parte din reactivul R2.

Stabilitate:20 - 25 °C 5 zile2 – 8 °C 4 sãpt.

• Reactivii cu doi componenþi sunt gata pentrufolosire.

Metoda de lucru cu un singur reactiv:Amestecul de reactivi 1mLProba 100 µL

Dupã amestecare ºi o incubare de 1 minut la 25 °C(30,37 °C), se va citi valoarea absorbanþei pe minutla 340 nm (334 � 365) timp de 3 minute, în cuve de1 cm, faþã de apa distilatã.

Metoda de lucru cu doi componenþi:Reactiv R1 1mLProba 150 µL

Dupã amestecare ºi o incubare de 1 minut la 25 °C(30,37 °C), se va citi valoarea absorbanþei pe minutla 340nm timp de 3 minute, în cuve de 1 cm, faþã deapa distilatã.

CALCUL:340 nm: U/L= ∆A/min x 1746334 nm: U/L= ∆A/min x 1780365 nm: U/L= ∆A/min x 3236

LINEARITATE:

Dacã valoarea absorbanþei pe minut la 340 nmdepãºeºte 0.15, proba se va dilua cu ser fiziologicde NaCl în proporþie de 1:10, dupã care se va repetadeterminarea.




16

AST (GOT)Conþinut: 20x3ml 15x20ml 9x50ml 90x50ml 20x100mlNr. cod: 41001 41021 41031 41032 41062


La reacþia catalizatã de aspartat � amino - transferazã(ASAT/AST) participã douã substraturi: α-aspartatul ºi oxoglutaratul. Oxalacetatul rezultat dinprima reacþie în prezenþa malatdehidrogenazei, vareacþiona cu NADH ducând la formarea NAD+ ºi L� malat. Variaþia absorbanþei mãsuratã la 340 nmeste proporþionalã cu activitatea ASAT.

L-aspartat + α-cetoglutarat ASAT L-glutamat +acetat oxalicAcetat oxalic + NADH+H+ MDH L-malat + NAD+

LITERATURÃ:

Bergmeyer et ell. Clin. Chim. Acta70,F19-42(1976), F21-22(1978)Bergmeyer et all. Clin. Chem. 24,58 – 73 (1978)Expert panep on enzyme of the IFCC,Clin Chem. Acta,70,F-19 (1976)

VALORI DE REFERINÞÃ:25 °C 30 °C 37 °C<20 U/L <30 U/L <46 U/L

REACTIVI:

1. Reactiv (R1)

Tampon TRIS, pH=7,8 88 mmol/LL – alaninã 260 mmol/L

2. Reactiv (R2)

NADH 0.22 mmol/LLDH 900 U/LMDH 600 U/Lα - cetoglutarat 12 mmol/L

PROBA:Ser nehemolizat sau plasmã obþinutã din sângerecoltat pe heparinã sau EDTA.

EFECTUAREA ANAILZEI:

Pregãtirea reactivului de lucru: se va dizolvaconþinutul unui flacon de reactiv (R2) în cantitateacorespunzãtoare de reactiv (R1).Stabilitatea soluþiei:

20 – 25 °C 5 zile2 – 8 °C 28 zile


Dupã amestecare ºi o incubare de 1 minut la 30 °C(37 °C) se va citi valoarea absorbanþei (A) la 340nm (334 � 365 nm), în cuve de 1 cm, faþã de apãdistilatã. Se va urmãri variaþia absorbanþei pe minut(∆A/min) timp de 3 minute.Metoda de mãsurare: cinetic (descrescãtor)

CALCUL:

340 nm: ∆A/min x 1746 =U/L334 nm: ∆A/min x 1780 =U/L365 nm: ∆A/min x 3235 =U/L

LINEARITATE:

Dacã variaþia absorbanþei pe minut la 340 nmdepãºeºte 0.15 se va repeta determinarea cu seruldiluat cu soluþie fiziologicã de NaCl în proporþiede 1:10, ºi rezultatul se va înmulþi cu 10.

OBSERVAÞIE:

Testul nu conþine fosfat de piridoxal.Hemoliza ºi lipemia perturbã determinarea.Metoda este recomandatã diagnosticãrii in vitro.




17

BILIRUBINATotalã ºi directã

Continut: 2x125mlNr. cod: 42741


Acidul sulfanilic împreunã cu azotitul de sodiuformeazã acidul sulfanilic diazotat. In prezenþadimetilsulfoxidului, acidul sulfanilic diazotatreacþioneazã cu toate bilirubinele, formândazobilirubina. In lipsa dimetilsulfoxidului, numaibilirubina directã formeazã azobilirubina.Intensitatea coloraþiei mãsuratã la 550 nm este di-rect proporþionalã cu concentraþia bilirubinei.

LITERATURA:

Hijmans Van den Bergh A.A., Muller P.:Biochem ,77;90,(1916)Walters M.I., Gerarde R.W: Microchem,15;231(1970)

VALORI DE REFERIN ÞÃ:

Ser:Bilirubina totalã <10 mg/L <17 µmol/LBilirubina directã < 3 mg/L <5,1 µmol/L

REACTIVI:

Pentru bilirubina totalã:1. Reactiv (RT1) acid sulfanilic 3,2 mmol/L acid clorhidric 165 mmol/L dimetilsulfoxid 7 mmol/L2. Reactiv (R2) azotit de sodiu 8,6 mmol/L

Pentru bilirubina directã:1. Reactiv (RD1) acid sulfanilic 3,2 mmol/L acid clorhidric 165 mmol/L2. Reactiv (R2) azotit de sodiu 8,6 mmol/LPachetul de reactivi nu conþine standard.

CALIBRARE: ser de control cu conþinutcunoscut de bilirubinã.

PROBA:Ser nehemolizat.

EFECTUAREA ANALIZEI:Proporþia de amestecare a reactivilor:A. Bilirubina totalã: RT1+R2=125ml/20mlB. Bilirubina directã: RD1+R2=125ml/20mlStabilitatea soluþiei: la 2-8 ºC 5 zileMETODA DE LUCRU:A. Bilirubina totalã:

Martor Proba Martor Probacalibr. calibr.

RT2 - 1.0 ml - 1.0 mlRT1 1.0 ml - 1.0 ml -Proba 75µl 75µl - -Sercontr. - - 75µl 75µl

B. Bilirubina directã:Martor Proba Martor Proba

calibr. calibr.

RD2 - 1.0 ml - 1.0 mlRD1 1.0 ml - 1.0 ml -Proba 75µl 75µl - -Sercontr. - - 75µl 75µl

Dupã amestecare ºi o incubare de exact 5 minute la37 oC, se va citi valoarea absorbanþei faþã de apadistilatã, la 555 nm. Stabilitatea coloraþiei, ferit deluminã, este de 1 orã.Mod de mãsurare: cu punct final ( faþã de martor).

CALCUL:[(A

proba – A

martor )/(A

pr.calib. – A

martor calib. )] x C

calib.

C= concentraþie

LINEARITATE:Intensitatea coloraþiei pânã la 200 mg/L (340 mol/L) este direct proporþionalã cu concentraþiabilirubinei. Peste aceastã valoare se va dilua probacu ser fiziologic. La calcule se va lua în considerarefactorul de diluþie.

OBSERVAÞIE:Reactivii se vor folosi in vitro.




18

CALCIUConþinut: 2x125mlNr. cod: 41541

Calciul se gãseºte în organismul uman în proporþiede 98-99%, în dinþi ºi os. În sânge, 50% din calciucirculã sub formã ionizatã, iar restul legat deproteine. Concentraþia ionilor de calciu esteinfluenþatã de mediul acido-alcalic; în mediul acidnivelul de Ca este mai mare, iar în mediul alcalinmai mic.

PRINCIPIUL DETERMIN ÃRII:

Ionii de Ca2+ cu ortocrezoftaleinã în mediul bazicformeazã un complex de culoare roºie. Intensitateacoloraþiei este direct proporþionalã cu concentraþiacalciului din probã.

LITERATURÃ:

Stern J.,Lewis W.P.:Clin. Chem. Acta 2, 576 (1957)


SerNoi nãscuþi 2,3-2,5 mmol/LCopii 2,5-3,0 mmol/LAdulþi 2,25-2,75 mmol/L

Urinã 3,0 mg/kg/24h

REACTIVI:

1.Reactiv (R1)

Dietilaminã 500 mmol/L

2.Reactiv (R2)

o-crezoftaleinã 0,62 mmol/L8-hidroxichinolinã 69 mmol/L

3. Reactiv (R3)

Standard de calciu

PROBA:

Ser nehemolitic sau plasmã heparinizatã. Urinãdiluatã cu apã distilatã în proporþie de 1:3, ºi cu pHadus la valoarea de 3-4 cu HCl 0,1 N.


Pregãtirea amestecului de reactivi: se vaamesteca o parte din reactivul R1 cu o parte dinreactivul R2.Stabilitatea soluþiei:

20-25°C 4 ore2-8°C 20 ore

METODA DE LUCRU:

Martor Standard ProbaApa distil. 10µL - -Standard - 10µL -Proba - - 10µLReactiv R1 1mL 1mL 1mL

Dupã amestecare ºi o incubare de 5 minute la 20-25°C, se va citi absorbanþa probei ºi a martoruluila 570 nm (550-590 nm), în cuve de 1 cm, faþã demartor.Modul de mãsurare: cu punct final

CALCUL:

(Aproba

/Astandard

) x Cstandard

=Cproba


LINEARITATE:

Pânã la valoarea de 3,4 mmol/L absorbanþa estedirect proporþionalã cu concentraþia calciului. Pesteaceastã valoare proba se va dilua cu soluþiefiziologicã. La calcule se va lua în considerarefactorul de diluþie.

OBSERVAÞIE:





19

CALCIU-ARZENAZA IIIConþinut: 2 x 125 mlNr. cod: 43941

Reactiv folosit pentru determinarea calciului în ser uman,plasmã ºi urinã.

PRINCIPIUL DETERMINÃRII:Ionii de Ca++ într-un mediu cu pH neutru formeazãîmpreunã cu arsenaza III un complex colorat. Intensitateaculorii acestuia este direct proporþionalã cu concentraþiacalciului din probã.

LITERATURÃ:Baver P.J.: Anal.Biochem. 110;61, (1981)


Ser, plasmã2,2-2,55 mmol/L88-102 mg/LUrinã2,5-10 mmol/24h100-400 mg/24h

REACTIVI:

1.Reactiv (R1)Arzenazo III 200 µmol/LMES pH 6,50 mmol/L

Standard

PROBÃ:

Ser nehemolitic sau plasmã heparinizatã.Urinã diluatã cu apã distilatã în proporþie de 1: 3, ºi cu pHadus la valoarea de 3-4 cu HCl 0,1 N.

EFECTUAREA ANALIZEI:A se folosi unelte din material plastic de unicã folosinþã.

Pregãtirea reactivului:Nu necesitã o pregãtire prealabilã, sunt gata pentru utilizare.Stabilitatea soluþiei:La 2-25°C, ferit de luminã se poate folosi pânã la data deexpirare menþionatã pe cutie.

METODA DE LUCRU:

Determinãrile se fac la urmãtoarele parametrii:Lungimea de undã: 650 nm (600 nm)Temperaturã: 25, 30, 37°CCuve: 1 cmMod de mãsurare: cu punct final

Determinarea:

Martor Standard Probã

Apã distilatã 150µL - -

Standard - 150µL -

Probã - - 150µL

Reactiv 1 mL 1 mL 1 mL

Dupã amestecare ºi incubare de 1 minut se va citi absorbanþaprobei ºi a standardului faþã de martor. Culoarea obþinutã prindeterminare este stabilã timp de 1 orã.

CALCUL:

( A probã

/ A standard

) x C standard

= C probã


LINEARITATE:

Pânã la valoarea de 4 mmol/L (160mg/L) intensitatea culoriieste direct proporþional cu concentraþia de calciu. Ân cazulfolosirii urinei valorea obþinutã se înmulþeºte cu factorul dediluþie.

OBSERVAÞIE:

Metoda se foloseºte doar în cazul diagnosticãrii in vitro.




20

CALCIU OCPC/AMPConþinut: 1 x 125 ml + 1 x 125 mlNr. cod: 45241

Reactiv folosit pentru determinarea concentraþiei de calciu înser uman, plasmã ºi urinã. Este o metodã colorimetricã, bazatãpe un complex de ortocrezolftaleinã.

Calciul se gãseºte în organismul uman în proporþie de 98-99%,în dinþi ºi os. În sânge, 50% din calciu circulã sub formãionizatã, iar restul legat de proteine. Concentraþia ionilor decalciu este influenþatã de mediul acido-alcalic; în mediul acidnivelul de calciu este mai mare, în mediul alcalin este maimic.

În cazul unor boli ca hyperparatiroidism primar, cancer mamar,cancer bronhial, cancer al pancreasului, osteoporozã, maladiilePaget ºi Addison, supradozã de vitamina A ºi D, hipertiroidism,nivelul calciului este ridicat.

Nivel scãzut al calciului se mãsoarã în cazulhypoparatiroidismului, perturbaþii ale absorbþiei, insuficienþãrenalã acutã, sindrom nefrotic, cirozã hepaticã, pancreatitãacutã.


Ionii de Ca2+ cu ortocrezolftaleinã în mediu bazic formeazãun complex de culoare roºie. Intensitatea coloraþiei este di-rect proporþionalã cu concentraþia calciului din probã.

Literaturã:

SternJ.,Lewis W.P.: Clin.Chim.Actab 2,576 (1957)

VALORI DE REFERINÞÃ:SerNoi nãscuþi 2,3-2,5 mmol/LCopii 2,5-3,0 mmol/LAdulþi 2,25-2,75 mmol/L

Urinã 3,0 mg/kg/24h

REACTIVI:

1.Reactiv (R1)Tampon AMP 400 mmol/L

2.Reactiv (R2)o-crezoftaleinã 0,62 mmol/L8-hidroxichinolonã 69 mmol/L

3.Reactiv (R3)Standard de calciu

PROBÃ:

Ser nehemolitic sau plasmã heparinizatã.Urinã diluatã cu apã distilatã în proporþie de 1: 3, ºi cu pHadus la valoarea de 3-4 cu HCl 0,1 N.


Pregãtirea reactivului: se amestecã o parte din reactivul R1cu o parte din reactivul R2Stabilitatea soluþiei:20-25°C 24 ore2-8°C 4 zile

METODA DE LUCRU:

Determinãrile se fac la urmãtoarele parametrii:Lungimea de undã: 570 (550-590) nmTemperaturã: 25, 30, 37°CCuve: 1 cmMod de mãsurare: cu punct final

Determinarea:

Martor Standard Probã

Apã distilatã 10µL - -Standard - 10µL -Probã - - 10µLReactiv R1 1 mL 1 mL 1 mL

Dupã amestecare ºi incubare de 5 minute la temperaturacamerei, se va citi absorbanþa probei ºi al martorului la 570nm (550-590 nm), în cuve de 1 cm, faþã de martor. Culoareaapãrutã la determinare este stabil o orã.

CALCUL: ( A

probã/ A

standard) x C

standard = C

probã


LINEARITATE:Pânã la valoarea de 3,4 mmol/L absorbanþa este directproporþionalã cu concentraþia calciului. Peste aceastã valoareproba se va dilua cu soluþie fiziologicã. La calcule se va lua înconsiderare factorul de diluþie.

OBSERVAÞIE:Reactivii pot fi utilizaþi ºi fãrã o amestecare prealabilã. În cazulacesta în condiþiile menþinerii proporþiilor iniþiale, se adaugã0,5 mL R1 ºi 0,5 mL R2 la probã.EDTA ºi alte compuºi care formeazã chelaþi pot turba mersulreacþiei.A se avea grijã ca la determinare sã se foloseascã vase curate,fãrã urme de calciu.

Metoda se foloseºte doar în cazul diagnosticãrii in vitro.




21

CAPACITATEA DE LEGARE A FIERULUIConþinut: 1x50 mLNr. cod: 42351

Set de reactivi utilizat la determinarea capacitãþiide legare a fierului din ser.


Etapele determinãrii capacitãþii de legare a fierului:la probã se adaugã o cantitate cunoscutã de fierpentru saturarea transferinei. Surplusul de fier seadsoarbe cu carbonat de magneziu, dupã care secentrifugheazã, iar cantitatea de fier din supernatantse determinã cu metoda de determinare a fieruluicu cromazurol B.

LITERATURÃ:

Ramsay, W.N.M.: Clin. Chim. Acta, 2; 221 (1957)

VALORI NORMALE:

Bãrbaþi 46,5-68,8 µmol/L 2,6-3,9mg/LFemei 37,5-60,9 µmol/L 2,1-3,4mg/L

REACTIVI:

1. Reactiv (R1)

Soluþia de saturare cu fier 89,5 µmol/L (5 mg/L)

2. Reactiv (R2)

Adsorbant, bicarbonat de magneziu (o spatulãretezatã de mãsurare=aproximativ 100 mg debicarbonat de magneziu)

PROBA:

Ser nehemolitic sau plasmã obþinutã din sângerecoltat pe heparinã.


Reactivii sunt gata pentru folosire.

Stabilitate:

Reactivii pãstraþi la 2-8°C sunt stabili pânã la dataindicatã pe etichetã.Se va feri de impuritãþi!Apa distilatã ºi vasele folosite trebuie ferite deimpuritãþi cu conþinut de fier. Vasele ºi materialelecontaminate cu fier vor afecta bunul mers alanalizei.

METODA DE LUCRU:

Analiza se efectueazã în eprubete de centrifugã:

Proba 500 µLReactiv R1 1 mL

Se amestecã ºi se aºteaptã 5 minute, dupã care seadaugã:

Reactiv R2 1 spatulã de mãsurare

Se scuturã de mai multe ori timp de 20 minute, apoise centrifugheazã 10 minute la turaþia de 3000 rot/min. Cantitatea de fier din supernatant se vadetermina cu metoda de cromazurol B. Deoarececu adãugarea soluþiei de saturare proba se dilueazãde 3 ori, rezultatul se va înmulþi cu 3.

Setul de reactivi se va utiliza in vitro.




22

CK-MBConþinut: 20x3ml 12x10mlNr. cod: 42801 42811

Creatin-chinaza are trei izoenzime. Aceste izoenzimesunt DIMERII a 2 subunitãþi: subunitatea M (muscle-muºchi) ºi subunitatea B (brain-creier). Se descriuurmãtoarele forme: CK-MM, CK-MB, CK-BB.


Reactivul conþine un anticorp policlonal care inhibãactivitatea subunitãþii M din enzima CK-MB ºi prinurmare, se va determina numai activitatea subunitãþiiB. Valoarea acesteia este de 2 ori mai mare decâtactivitatea enzimei CK-MB din ser.

Fosfat de creatinã + ADP CK creatinã + ATP

ATP + D-glucozã HK D-glucozã-6-fosfat +ADP

D-glucozã-6-fosfat + NAD+ G-6-PDH D-glucozã-6-fosfat+ NADH + H+

LITERATURÃ:

Morisok I.M.,Clayson J.: Clin. Chem., 34 (1988), 535Morin L.: Clin. Chem., 2314, (1977), 646


37°C 0-24 U/L30°C 0-14 U/L% CK-MB < 5 %

REACTIVI:

1. Reactiv (R1)

Anticorpi policlonali anti-umani pentru inhibarea a2000 U/L de subunitãþi M.Azotit de sodiu 0,1%.

2. Reactiv (R2)

Tampon imidazol, pH=6,7 100 mmol/LAcetat de magneziu 10 mmol/LN-acetil-cisteinã 20 mmol/LADP 2 mmol/LAMP 5 mmol/LNAD 2 mmol/LD-glucozã 20 mmol/LPentafosfat de diadenozinã 10 mmol/LEDTA 2 mmol/LHexochinazã ≥3500 U/L6-fosfat dehidrogenazã de glucozã 2000 U/Lfosfat de creatinã 30 U/L

PROBA:

Ser nehemolitic (serul poate fi pãstrat 1 sãptãmânãla 2-8°C).


Pregãtirea amestecului de reactivi: se va dizolvaconþinutul unui flacon de reactiv R2 în cantitateacorespunzãtoare din reactivul R1.Stabilitatea soluþiei:

2-8°C 3 zile20-25°C 24 ore

METODA DE LUCRU:


Se amestecã ºi se incubeazã timp de 5 minute la37°C. Variaþia absorbanþei se va citi la 340 nm, încuve de 1 cm, timp de 3 minute, faþã de apã distilatã.Se va determina variaþia absorbanþei pe minut(∆A/min).Mod de mãsurare: cinetic, crescãtor.

CALCUL:

1. Activitatea CK-B: ∆A/min. x 3367=U/L2. Activitatea CK-MB: CK-B x 2 =U/L3. CK-MB %: Act. CK-MB/Act. CK total ã x 100

LINEARITATE:

Dacã activitatea CK totalã depãºeºte 1200 U/L, probase va dilua cu soluþia fiziologicã de NaCl. La calcul seva lua în considerare diluþia.

OBSERVAÞIE:A se întrebuinþa numai la diagnostizãri in vitro.

Metoda determinã ºi activitatea izoenzimei CK-BB.Aceastã activitate fiind neglijabilã, rezultatul reprezintãactivitatea CK-MB. Dacã activitatea CK-MB%depãºeºte cu mai mult de 20% activitatea CK, acest faptpoate semnala prezenþa macro-BB.




23

CLORURAConþinut: 2x125mlNr. cod: 41641


În mediu alcalin, ionii de clor formeazã un com-plex colorat cu tiocianitul (II) de mercur, în prezenþaazotatului de fier (III). Intensitatea coloraþiei esteproporþionalã cu concentraþia ionilor de clor.

2Cl- + Hg(SCN)2 → HgCl

2 + 2SCN-

SCN- + Fe+++ → Fe(SCN) ++

LITERATURÃ:

Schoenfeld, R. G., et. al.: Clin. Chem. 10; 533, (1964).


Ser, plasmã 98-107 mmol/LLiquor (LCR) 119-131 mmol/L

REACTIVI:

1.Reactiv (R1)

tiocianat de mercur (II) 2 mmol/Lazotat de fier (III) 200 mmol/Lacid azotic 29 mmol/L

2.Reactiv (R2)

soluþie standard (clorurã)

PROBA:

Ser nehemolitic sau plasmã heparinizatã, urinã,liquor (LCR).


Reactivul este gata pentru folosire.Stabilitatea soluþiei: la 20-25°C pânã la dataindicatã pe etichetã.

METODA DE LUCRU:

Martor Standard ProbaApa distil. 10µL - -Standard - 10µL -Proba - - 10µLReactiv 1 mL 1 mL 1 mL

Dupã amestecare, la 20-25°C se va citi absorbanþaprobei ºi a martorului la 480 nm, în cuve de 1 cm,faþã de martor.Modul de mãsurare: cu punct final

CALCUL:

(Aproba

/Astandard

) x Cstandard

=Cproba


LINEARITATE:

Intensitatea culorii este direct proporþionalã cuconcentraþia clorurii pânã la 130 mmol/L.

OBSERVAÞIE:





24

COLESTEROLConþinut: 15x20ml 9x50ml 20x250mlNr. cod: 40121 40131 40152

Biosinteza colesterolului are loc în primul rând în ficatºi în mucoasa intestinelã, dar este sintetizat de aproapetoate celulele. Este elementul component a mai multormembrane a bilei, a hormonilor steroide. În sânge, circulãsub formã de esteri legaþi de betalipoproteine.


Din esterii de colesterol hidrolizaþi de colesterol esterazã(ChEH) rezultã colesterol, care este transformat decolesterol-oxidazã (ChOD) în colestenonã. H

2O

2

rezultat, în prezenþa de fenol ºi 4-amino-antipirinã, laadãugarea peroxidazei (POD), dã un produs, numit roºude chinonã.

Ester de colesterol +H2O ChEH colesterol + acizi graºi

Colesterol + O2 ChOD delta-4-colestenonã + H

2O

2

2H2O

2 + fenol+4-amino-antipirinã POD roºu de

chinonã + 4H2O

LITERATUR Ã:

Trinder P.Ann. Clin. Biochem 5, 24 (1969)Richmond Clin. Chem.19, 1350 (1973)Fasce CF. Clin. Chem. 18, 901 (1982)


Ser 3,87-6,71 mmol/L 1,5-2,6 g/L

REACTIVI:

1. Reactiv (R1)

Tampon PIPES, pH=6,9 90 mmol/LFenol 26 mmol/L

2. Reactiv (R2)

Colesterol esterazã 300 U/LColesterol oxidazã 300 U/LPeroxidazã 1250 U/L4-aminoantipirina 0,4 mmol/L

3. Reactiv (R3)

Standard de colesterol

PROBA:

Ser sau plasmã heparinizatã.


Pregãtirea amestecului de reactivi: se va dizolvaconþinutul unui flacon de reactivi R2 în cantitateacorespunzãtoare de reactiv R1.

Stabilitatea soluþiei:20-25 °C 15 zile2-8 °C 4 luni

METODA DE LUCRU:

Martor Standard ProbaApã distil. 10µL - -Standard - 10µL -Proba - - 10µLReactiv 1 mL 1 mL 1 mL

Dupã amestecare ºi o incubare de 10 minute la 37°C,se va citi absorbanþa probei ºi a standardului la 505 nm(500 -550 nm) sau în cazul unei lãmpi de vaporizare deHg la 546 nm, în cuve de 1 cm, faþã de martor.Metoda de mãsurare: cinetic (cu punct final).

CALCUL:

(Aproba

/Astandard

) x Cstandard

=Cproba


LINEARITATE:

Absorbanþa este direct proporþionalã cu concentraþiapânã la 20 mmol/L (7,8 g/L). Dacã se depãºeºteaceastã valoare, proba se va dilua cu soluþiefiziologicã de NaCl, se repetã determinarea iarrezultatul se va înmulþi cu valoarea diluþiei.

OBSERVAÞIE:





25

COLESTEROLReactiv lichid cu un component



Din esterii de colesterol hidrolizaþi de colesterol-esterazã (ChEH) rezultã colesterol, care estetransformat de colesterol-oxidazã (ChOD) încolestenonã, din care rezultã H

2O

2. H

2O

2, sub

activarea peroxidazei (POD), la adãugarea fenoluluiºi 4-amino-antipirinei, rezultã un produs numit roºude chinonã.



2O

2

2H2O

2 + fenol+4-amino-antipirinã POD roºu de

chinonã + 4H2O

LITERATUR Ã:

Allain C.C and al., Clin. Chem., 20, (1974), 470.


Ser 3,87-6,71 mmol/L 1,5-2,6 g/L

REACTIVI:

1. Reactiv (R1)

Tampon PIPES, pH=6,7 50 mmol/LFenol 24 mmol/LColesterol esterazã 180 U/LColesterol oxidazã 200 U/LPeroxidazã 1000 U/L4-amino-antipirin 0,5 mmol/L

Standard de colesterol

PROBA:

Ser nehemolizat sau plasmã heparinizatã.


Feriþi de luminã ºi pãstraþi la 2-8°C, reactivii suntstabili pânã la data indicatã pe ambalaj.



METODA DE LUCRU:


Dupã amestecare ºi o incubare de 5 minute la 37°C,se va citi absorbanþa probei la 500 nm (492 -550nm), în cuve de 1 cm, faþã de martor.

CALCUL:

(Aproba/Astandard) x Cstandard=Cproba


LINEARITATE:

Metoda este linearã pânã la 15,5 mmol/L.





26

COLESTEROL ADPSReactiv lichid în doi componenþi



Din esterii de colesterol hidrolizaþi de colesterol esterazã(ChEH) rezultã colesterol, care este transformat decolesterol-oxidazã (ChOD) în colestenonã, din carerezultã H

2O

2. H

2O

2 cu ajutorul peroxidazei (POD), a

fenolului ºi 4-amino-antipirinei dã un produs numit roºude chinonã.



2O

2

2H2O

2 + fenol+4-amino-antipirinã +ADPS POD

roºu de chinonã + 4H2O

LITERATUR Ã:

Allain C.C and al., Clin. Chem., 20, (1974), 470.


Ser 3,87-6,71mmol/L 1,5-2,6 g/L

REACTIVI:

1. Reactiv (R1)

Tampon PIPES, pH=6,7 50 mmol/LADPS 1 mmol/LColesterol esterazã ≥180 U/LAscorbat oxidazã ≥3000 U/LPeroxidazã ≥1000 U/L

2. Reactiv (R2)

4-amino-antipirin 0,9 mmol/LColesterol oxidazã ≥200 U/LStandard de colesterol

PROBA:



Feriþi de luminã ºi pãstraþi la 2-8°C, reactivii suntstabili pânã la data indicatã pe ambalaj.


Prepararea amestecului de reactivi ºi stabilitatea lor:• Pregãtirea reactivului cu un singur component:

se vor dizolva douã pãrþi din reactivul R1 într-o partedin reactivul R2.

Stabilitate:20 - 25 °C 2 sãpt.2-8°C 2 luni


METODA DE LUCRU:• Metoda de lucru cu un singur reactiv:

Martor Standard ProbaApã distil. 10µL - -Standard - 10µL -Proba - - 10µLReactiv 1 mL 1 mL 1 mLDupã amestecare ºi o incubare de 5 minute la 37°Cse va citi absorbanþa probei la 546 nm (50 -570 nm),în cuve de 1 cm, faþã de martor.• Metoda de lucru cu doi componenþi:

Martor Standard ProbaApã distil. 15µL - -Standard - 15µL -Proba - - 15µLReactiv R1 1 mL 1 mL 1 mLDupã amestecare ºi incubare de 1 minut se maiadaugã:Reactiv R2 500µL 500µL 500µLDupã amestecare ºi o incubare de 5 minute la 37°Cse va citi absorbanþa probei la 546 nm (50 -570 nm),în cuve de 1 cm, faþã de martor.

CALCUL:



LINEARITATE:

Metoda este linearã pânã la 15,5 mmol/L.





27

CHOLESTEROL – HDLReactiv lichid în doi componenþi

Conþinut: 1 x 45ml + 1 x 15 mlNr. cod: 47661

Metodã directã pentru determinarea cantitativã a lipopro-tein-cholesterolului cu densitate mare (HDL-C) în ser.


Anticorpi anti β-lipoproteinici umani din Reactivul 1 leagãtoate lipoproteinele din ser (LDL, VLDL ºi chilomicronii)cu excepþia HDL � C. Complexul Ag-Ac format nureacþioneazã cu enzimele când Reactivul 2 este adãugat.Cholesterol esteraza (CHE) ºi Cholesterol oxidaza (CO) dinReactivul 2 reacþioneazã numai cu HDL � C. Hidrogenperoxidaza rezultatã din reacþia enzimelor cu HDL � C, pro-duce un complex colorat albastru dupã reducere oxidativã cuN-etil-n-(2-hidroxi-3-sulfopropil)-3,5-dimetoxi-4-fluoroanilinã sare Na (F-DAOS) ºi 4-aminoantipirinã (4AA)în prezenþa de peroxidazã. Mãsurând absorbanþa complexuluicolorat albastru, la 593 nm, se poate calcula concentraþia HDL� C din probã prin comparare cu absorbanþa Calibratoruluipentru HDL � C.

LITERATURA:

1.Rifai N, Warnick G.R. (eds.) Laboratory Measurement of Lipids,Lipoproteins and Apolipoproteins. AACC Press,Washington D.C.,USA,1994.

2. Burtis C.A., Ashwood E.R. (eds.) Tiets Textbook of Clinical Chemistry.2nd ed. Saunders, Philadelphia, 1994.

3. Gordon T., Castelli W.P., Hjortland M.C., et.al., Am.J.Med. 62,707-714(1977).

VALORI DE REFERINTA:

bãrbaþi: 35,3 - 79,5 mg/dL (0,92 - 2,07 mmol/L)

femei: 42,0 - 88,0 mg/dL (1,09 - 2,29 mmol/L)

REACTIVI:1. Reactiv 1: se pãstreazã între 2-10°C. Nu congelaþi.30 mmol/L Good-Puffer, (pH 7,0), care conþine: 0,9 mmol/L4-AA, 2.400 U/L POD, 2.700 U/L oxidaza ascorbaticã ºi anti-human β-lipoproteinã anticorp.

2. Reactiv 2: se pãstreazã între 2-10°C. Nu congelaþi.30 mmol/L Good-Puffer, (pH 7,0), care conþine: 4.000 U/LCHE, 20.000 U/L Co si 0,8 mmol/L F-DAOS.

PROBÃ:Folosiþi ser pentru probã. Se recomandã mãsurarea imediatãa HDL-C-ului dupã preluarea probei. Acidul ascorbic,bilirubina ºi hemoglobina nu influenþeazã mãsurãtorile.


Pregãtirea soluþiei:Reagentul 1 si 2 este gata pentru preparare. Soluþia rãmânestabilã 8 sãptãmâni dupã desfacerea sticlei, dacã este þinutîntre 2-10°C.

Determinãrile se fac la urmãtoarele parametrii:Filtru primar: 600 nmFiltru secundar: 700 nmTemperaturã: 37°CCuve: 1 cm

METODA DE LUCRU:

Martor Standard Proba

Reagent R1 270µL 270µL 270µL

Standard − 3µ −

Proba − − 3µL

Apa distilata 3µ − −

Se amestecã ºi se incubeazã 5 minute.

Reagent R2 90µL 90µL 90µL

Se amestecã ºi se incubeazã 5 minute ºi se citeºte absorbanþaprobei faþã de martor.

CALCUL:

(Aproba

/Astandard

) x Cstandard

= Cproba


OBSERVAÞIE:

Nu folosiþi reactiv, care în prealabil a fost congelat.Dacã concentraþia trigliceridelor din probã depãºeºte 1200mg/dL (13,4 mmol/L), proba se va dilua cu soluþie fiziologicãde NaCl, dupã care se va repeta determinarea, iar rezultatulse va înmulþi cu factorul de diluþie.

Metoda este folositã doar în cazul diagnosticãrii in vitro.




28

COLESTEROL � HDLConþinut: 3x10ml 1x100mlNr. cod: 41411 41461

Lipoproteina High Density (HDL) are un rol im-portant în studierea metabolismului lipidelor, fiindconsiderat “colesterolul bun”.


Acidul fosfowolframic precipitã din serlipoproteinele de densitate foarte micã (VLDL) ºilipoproteinele de densitate micã (LDL), în prezenþaionilor de magneziu. Lipoproteinele de densitatemare (HDL) rãmân în supernatant.

LITERATURÃ:

Burstein M.,Selvenick H.R.:Lipid Res. 11,583(1970)Lopez-Virella,M..: Clin. Chem.23,882(1977)Friendewald, W.T.: Clin. Chem. 14,449(1972)

VALORI DE REFERINÞÃ:La o valoare normalã de colesterol total(5,18 mmol/L) sau uºor mãritã(5,18-6,22 mmol/L) avem:

Risc scãzut Normal Mãrit

Bãrbaþi > 1.4 0.9-1.4 < 0.9 mmol/L

> 0.55 0.35-0.55 <0.35 g/L

Femei > 1.7 1.2-1.7 <1.2 mmol/L

> 0.65 0.45-0.65 <0.45 g/L

REACTIVI:

1.Reactiv (R1): reactiv de precipitare

acid fosfowolframic 14 mmol/Lclorurã de magneziu 2 mmol/L

2.Reactiv (R2)

Trusã de reactivi pentru determinarea enzimaticã,colorimetricã a colesterolului.

3.Reactiv (R3)

Standard

PROBA:

Ser nehemolitic sau plasmã heparinizatã.


Reactivul de precipitare este gata pentru folosire.Stabilitatea soluþiei: la 2-25°C pânã la data indicatãpe etichetã.

METODA DE LUCRU:

Separarea fracþiilor de lipoproteine(precipitarea):

Ser 500µLReactiv de precipitare R1 50µL

Amestecul se va incuba timp de 10 minute latemperatura camerei, apoi se va centrifuga la 4000rpm timp de 20 minute.

Reacþia propriu-zisã:Martor Standard Proba

Standard - 20µL -Proba - - 20µLReactiv R2 1 mL 1 mL 1 mL

Dupã amestecare ºi o incubare de 5 minute la 37°Csau 10 minute la temperatura camerei se va citiabsorbanþa probei ºi a standardului la 505 nm (500-550nm), în cuve de 1 cm, faþã de martor.Mod de mãsurare: cu punct final.

CALCUL:

(Aproba

/Astandard

) x Cstandard

=Cproba


LINEARITATE:

Metoda este linearã pânã la o concentraþie de 7,15mmol/L(2750mg/L).LDL – colesterolul se poate calcula conformformulei Friedewald:

LDL=Colesterol total-(Triglicerid/5)-HDL Colesterol




29

Metodã directã de imunoinhibiþie, dupã protecþie selectivã,pentru determinarea lipoprotein-cholesterolului cu densitatemicã (LDL � C) în ser ºi plasmã.


Când proba este amestecatã cu Reactivul 1, reactivul de protecþieleagã LDL-ul ºi îl protejeazã de acþiunea enzimelor. Cholesterolesteraza (CHE) ºi Cholesterol oxidaza (CO) reacþioneazã cu non-LDL cholesterol: Chylomicroni (CM), VLDL, HDL. Hidrogenperoxidaza rezultatã din reacþia enzimaticã cu non-LDLcholesterolul este descompusã da catalaza din Reactivul 1. CândReactivul 2 este adãugat, se elibereazã LDL ºi catalaza este inactivatãde azida de Na (NaN3). În acest proces secundar, CHE ºi COreacþioneazã numai cu LDL � Cholesterolul. Hidrogen peroxidaza,rezultatã din reacþia enzimaticã cu LDL-C, produce un complexcolorat dupã reducerea oxidativã cu N-(2-hidroxi-3-sulfopropil 0-3,5-dimetoxiani linã (HDAOS) ºi 4-aminoantipirinã (4AA) înprezenþa peroxidazei (POD). Mãsurând absorbanþa complexuluicolorat albastru, la 600 nm, se poate determina concentraþia LDL �C în probã prin comparaþie cu absorbanþa Calibratorului pentru LDL� C.

LITERATURA:

Burtis C.A, Ashwood E.R: Tietz Textbook of Clinical Chemistry. 2nd ed. Saunders, Phila-delphia, 1994

Rifai,N.,Warnick,G.R.,Dominiczak,M.H.: Handbook of Lipoprotein Testing,AACCPress,Washington, D.C, USA, 1997

Friedewald,W.T., Levy R.I., Fredericson D.S.: Estimation of the concentration of lowdensity lipoprotein cholesterol in plasma without use of the ultrecentrifuge.Clin.Chem 18,449-502 (1972).

The Expert Panel. Raport of the National Cholesterol Education Program Expert panelon Detection, Evaluation and treatment of High Blood Cholesterol in Adults.Arch.Intern.Med. 148,36-69 (1988).

The Expert Panel on Detection, Evaluation and treatment of High Blood Cholesterolin Adults. Summary of the Second Report of the National Cholesterol Educa-tion Program (NCEP) Expert Panel on Detection, Evaluation and Treatmentof High Blood Cholesterol in Adults (Adult Treatment Panel II). Jama, 269,3015-3023 (1993).


Valori normale <130 mg/dl <3,36 mmol/L

Risc crescut 130-159 mg/dl 3,36-4,1 mmol/l

Risc mare ≥160 mg/dl ≥4,13 mmol/L

REACTIVI: Reactiv 1: 25 mmol/L tampon�Good, pH6,8, care conþine 5000 U/LChE; 5000 U/L ChO; 0,64 mmol/L HDAOS; 1000000 U/Lcatalaza. Se va pãstra la 2-10°°C. A nu se congela. Reactiv 2: 25 mmol/L tampon-Good, pH7,0, care conþine 3,4mmol/L 4AA; 20000 U/L POD; 0,1 % NaN3. Se va pãstrala 2-10°°C. A nu se congela.

EFECTUAREA ANALIZEI :

Reactivii sunt gata de folosire. Fãrã desfacere, la o temperaturãde 2-10°C se poate þine pânã la expirarea termenului înscrispe cutie. Stabilitatea soluþiei dupã deschiderea sticlei la 2-10°°C, este de 1 lunã.

Determinãrile se fac la urmãtoarele parametrii:Filtru primar: 600 nmFiltru secundar: 700 nmTemperaturã: 37°CCuve: 1 cm

METODA DE LUCRU:

Martor Standard Proba

Reactiv R1 270 µmL 270 µmL 270 µmL

Standard - 3 µmL -

Proba - - 3 µmL

Apã dist. 3 µmL - -

Se amestecã ºi dupã o incubare de 5 minute se mai adaugã:

Reactiv R2 90 µmL 90 µmL 90 µmL

Dupã amestecare ºi o incubare de 5 minute se va citiabsorbanþa probei ºi a standardului.

CALCUL:


A= absorbanþa

C= concentraþia

LINEARITATE:

Metoda este linearã pânã la 400 mg/dl. Peste aceastã valoareproba se va dilua cu soluþie fiziologicã de NaCl în raport de 1: 1, iar calculul se repetã. Rezultatul se va înmulþi cu 2.

OBESERVAÞIE:

Nu folosiþi reactivul dupã expirarea termenului.

Produsele, soluþiile de test ºi reactivii se folosesc numai laefectuarea testelor de mai sus.

Dupã folosire, clãtiþi bine chiuvetele.

A se întrebuinþa numai la diagnosticãri in vitro.

CHOLESTEROL � LDLReactiv lichid cu doi componenþi

Conþinut: 1 x 45 ml + 1 x 15 mlNr. cod: 47761




30

COLINESTERAZAConþinut: 20x3 mL 2x100 mLNr. cod: 1001100 1001109

Set de reactivi utilizat la determinarea cineticã aactivitãþii colinesterazei din ser:


butil-tiocolina + H2O colinesterazã tiocolina + butirat

tiocolina + DTNB → nitro-2-mercapto-5-benzoat

LITERATUR Ã:

Knedel, M.: Klin. Wschr (1967)


25°C 30°C 37°CCopii, bãrbaþi, femei > 40 ani:3500-8500U/L 4300-10500U/L 5400-13200U/LFemei*:2800-7400U/L 3500-9200U/L 4300-11500U/LFemei**:2400-6000U/L 3000-7400U/L 3700-9300U/L

* femei 16-39 ani, nu sunt gravide, nu folosescanticoncepþionale.** femei gravide sau care folosesc anticoncepþionale

REACTIVI:

1. Reactiv (R1)Tampon fosfat, pH=7,7 50 mmol/LDTNB 0,25 mmol/L

2. Reactiv (R2)Soluþie substrat8-butirilcolin-iodurã 6 mmol/L

PROBA:

Ser nehemolizat.Plasmã obþinutã din sânge recoltat pe EDTA sauheparinã.

EFECTUAREA ANALIZEI:Pregãtirea amestecului de reactivi:Soluþia 1 (S1): se va dizolva conþinutul flaconuluiR1 în cantitatea corespunzãtoare de apã distilatã.Soluþia 2 (S2): se va dizolva conþinutul flaconuluiR2 în cantitatea corespunzãtoare de apã distilatã.Stabilitatea soluþiei: (feritã de luminã)

2-8 °C 6 sãptãmâni

METODA DE LUCRU:37°C

Reactiv R1 1,5 mLProba 5 µLReactiv R2 50 µL

Observaþie: la determinãri în serie, reactivii R1 ºiR2 se pot amesteca în proporþie de 30:1. Reacþia vaporni în momentul adãugãrii probei.Stabilitatea amestecului:

15-25°C 1 orã

Dupã amestecare, se va citi valoarea absorbanþei(A) amestecului la 405 nm (400 -440 nm), în cuvede 1 cm, faþã de aer, în momentul amestecãrii, iardupã 30, 60, 90 secunde din nou. Se va calculavariaþia absorbanþei pe minut (∆A/min).Metoda de mãsurare: cinetic (cu factor).

CALCUL:

25°C: ∆A/min x 11730 =U/L37°C: ∆A/min x 23460 =U/L

LINEARITATE:

Dacã în 90 sec. variaþia absorbanþei pe minut la 405nm depãºeºte 0,400 proba se va dilua 1:5 cu soluþiefiziologicã de NaCl, se va repeta determinarea ºirezultatul se va înmulþi cu 5.




31

CREATININA ENZIMATICÃReactiv lichid în doi componenþi



Creatininã + H2O creatininazã creatinã

Creatinã + H2O creatinazã sarcozinã + carbamidã

Sarcozinã +O2 sarcozinoxidazã glicinã + HCHO + H

2O

2

H2O

2 + EHSPT + 4-aminoantipirinã H

2O

2 chinonã roºie

+ 4H2O

EHSPT= N-etil N-(2-hidroxi-3-sulfopropil)�n- toluidinã

LITERATUR Ã:

Artiss J.D., Zak B.,: Clin. Chem. 30; 1389, (1984)


Ser sau plasmã 53-115 µmol/LUrinã 7-16 mmol/24h

REACTIVI:

1. Reactiv (R1)

creatinazã >20 kU/Lsarcozinoxidazã >6 kU/Lascorbatoxidazã >2 kU/Lcatalazã >100 kU/LEHSPT >0,40 mmol/L

2. Reactiv (R2)4-aminoantipirinã >2,5 mmol/Lcreatininazã >250 kU/Lperoxidazã >50 kU/L

Standard:Standard de creatininã

PROBA:

Ser nehemolitic, plasmã obþinutã din sânge recoltatpe heparinã. Urinã diluatã cu apã distilatã înproporþie de 1:100.


Ferite de luminã ºi pãstrate la 2-8°C, reactiviisunt stabili pânã la data indicatã pe ambalaj.



METODA DE LUCRU:

Martor Standard ProbaReactiv R1 1 mL 1 mL 1 mLApã distil. 15 µL - -Standard - 15 µL -Proba - - 15 µL

Dupã amestecare ºi o incubare de 5 minute la 37°Cse va citi absorbanþa (A1) probei ºi a standarduluila 555 nm, în cuve de 1 cm, faþã de martor. Dupãaceasta se mai adaugã:

Reactiv R2 330 µL 330 µL 330 µL

Dupã amestecare ºi o incubare de 5 minute la 37°Cse citeºte absorbanþa (A2) probei ºi a standarduluila 555 nm, în cuve de 1 cm, faþã de martor.

CALCUL:

(A2– A1)proba

/(A2– A1)standard

x Cstandard

=Cproba

LINEARITATE:

Pânã la concentraþia de 1770 µmol/L, variaþiaabsorbanþei este direct proporþionalã cu concentraþiacreatininei. Peste aceastã valoare, proba se va diluacu soluþie fiziologicã de NaCl. Se va repetadeterminarea ºi la calcul se va lua în considerareraportul de diluþie.

A se întrebuinþa numai la diagnostizãri in vitro.




32

CREATININA ENZIMATICÃConþinut: 10x12 mL Nr. cod: 44111

Creatinina se elibereazã în urma metabolizãriifosfatului de creatinã din þesutul muscular.


Creatininã + H2O creatininazã creatinã

Creatinã + H2O creatinazã sarcozinã + carbamidã

Sarcozinã +O2 sarcozinoxidazã glicinã + HCHO + H

2O

2

H2O

2 + EHSPT + 4-aminoantipirinã H

2O

2 chinonã

roºie + 4H2O

EHSPT= N-etil N-(2-hidroxi-3-sulfopropil)�n-toluidinã

LITERATURÃ:

Artiss J.D., Zak B.,: Clin. Chem. 30; 1389, (1984)


Ser sau plasmã 53-115 µmol/LUrinã 7-16 mmol/24h

REACTIVI:

1. Reactiv (R1)creatinazã ≥12000 U/Lsarcozinoxidazã ≥ 6000 U/Lperoxidazã ≥12000 U/L

2. Reactiv (R2)4-aminoantipirinã 2 mmol/Lcreatininazã ≥180000 U/L

3. Reactiv (R3)tampon fosfat, pH=8,1 50 mmol/LEHSPT 0,78 mmol/L


PROBA:

Ser nehemolitic, plasmã heparinicã.Urinã diluatã cu apã distilatã în proporþie de 1:100.


Pregãtirea amestecului de reactivi:Soluþia 1 (S1): se va dizolva conþinutul unui flacon dereactiv (R1) în cantitatea corespunzãtoare de reactiv(R3).Soluþia 2 (S2): se va dizolva conþinutul unui flacon dereactiv (R2) în cantitatea corespunzãtoare de reactiv(R3).

Stabilitate:20-25°C 1 sãpt.2-8°C 4 sãpt.

METODA DE LUCRU:

Martor Standard ProbaSoluþia S1 1 mL 1 mL 1 mLProba - - 50 µLStandard - 50 µL -Apã distil. 50 µL - -Dupã amestecare ºi o incubare de 5 minute la 25°Csau 37°C se mai adaugã:Soluþia S2 200 µL 200µL 200µL

Citirea absorbanþei se va efectua la 555 nm, în cuvede 1 cm prin douã metode:a. Metoda cu punct final:Dupã prima amestecare ºi incubare se va citiabsorbanþa (A1) probei ºi a standardului faþã demartor. Se va adãuga soluþia (S2) ºi se va incuba 15minute la 25°C sau 10 minute la 37°C, dupã care seva citi absorbanþa (A2) probei ºi a standardului faþãde martor.

CALCUL:

(A2– A1)proba

/(A2– A1)standard

x Cstandard

=Cproba

b. Metoda cineticã:Dupã amestecare ºi incubare se va urmãri variaþiaabsorbanþei probei ºi a standardului în minutele 2ºi 4 (∆A).

CALCUL:∆A

probã /∆A

standard x C

standard = C

proba

Metoda este linearã pânã la 1770 µµµµµmol/L.




33

CREATIN CHINAZA(CK-NAC)

Conþinut: 20x3ml 12x10ml 15x20ml 60x20mlNr. cod: 40401 40411 40421 40422




D-glucozã-6-fosfat + NADP G-6-PDH D-glucozã-6-fosfat + NADPH + H+

LITERATURÃ:

Ann. Boil. Clin.: 40, 99, (1982)


25°C 30°C 37°CFemei 10-70 U/L 15-110U/L 24-170U/LBãrbaþi 10-80 U/L 15-130U/L 24-195U/L

REACTIVI:

1. Reactiv (R1)

Tampon imidazol, pH=6,7 100 mmol/LAcetat de magneziu 10 mmol/L

2. Reactiv (R2)

N-acetil cisteinã 20 mmol/LADP 2 mmol/LAMP 5 mmol/LNADP 2 mmol/LD-glucozã 20 mmol/LPentafosfat de diadenozinã 10 mmol/LEDTA 2 mmol/LHexochinazã ≥3500 U/L6-fosfat dehidrogenaz de glucozã ≥2000 U/Lfosfat de creatinã 30 U/L

PROBA:

Ser nehemolitic.


Pregãtirea amestecului de reactivi: se va dizolvaconþinutul unui flacon de reactiv R2 în cantitateacorespunzãtoare din reactivul R1.Stabilitatea soluþiei:

2-8°C 2 sãpt.20-25°C 2 zile

METODA DE LUCRU:


Se amestecã ºi se incubeazã timp de 2 minute la37°C. Variaþia absorbanþei se va citi la 340 nm, încuve de 1 cm, timp de 3 minute, faþã de apã distilatã.Se va determina variaþia absorbanþei pe minut(∆A/min).Mod de mãsurare: cinetic (cu factor).

CALCUL:

334 nm: U/L= ∆A/min. x 8252340 nm: U/L= ∆A/min. x 8095365 nm: U/L= ∆A/min. x 14571

LINEARITATE:

Dacã variaþia absorbanþei pe minut depãºeºte 0,250,proba se va dilua cu soluþia fiziologicã de NaCl înpropoþie de 1:10. Se va repeta determinarea ºi lacalcul se va lua în considerare diluþia.

OBSERVAÞIE:





34

CREATIN CHINAZAReactiv lichid în doi componenþi





D-glucozã-6-fosfat + NADP+ G-6-PDH glucozã-6-fosfat+ NADPH + H+

LITERATURA:

Mathieu M. Ann. Biol. Clin., 40,87, 1987


25°C 30°C 37°CFemei 10-70 U/L 15-110U/L 24-170U/LBãrbaþi 10-80 U/L 15-130U/L 24-195U/L

REACTIVI:

1. Reactiv (R1)

Tampon imidazol, pH=6,7 125 mmol/LAcetat de magneziu 11 mmol/LN-acetil cisteinã 25 mmol/LD-glucozã 25 mmol/LEDTA 2 mmol/LAMP 6,26 mmol/LNADP 2,5 mmol/LPentafosfat de diadenozinã 13 mmol/LHexochinazã 6800 U/L

2. Reactiv (R2)

fosfat de creatinã 166 mmol/LADP 15 mmol/L6-fosfat dehidrogenaz de glucozã 8800 U/L


PROBA:

Ser nehemolitic, plasmã obþinutã din sânge recoltatpe EDTA sau heparinã.


Ferite de luminã ºi pãstrate la 2-8°C, reactiviisunt stabili pânã la data indicatã pe ambalaj.

EFECTUAREA ANALIZEI:Prepararea amestecului de reactivi ºi stabilitatea lor:• Pregãtirea reactivului de lucru cu un

singur component: se vor dizolva patru pãrþidin reactivul R1 într-o parte din reactivul R2.

Stabilitate:20 - 25 °C 2 zile2-8°C 1 sãpt.

• Reactivii cu doi componenþi sunt gatapentru folosinþã.

METODA DE LUCRU:Metoda de lucru cu un singur reactiv:Amestecul de reactivi 1mLProba 40 µL

Dupã amestecare ºi o incubare de 3 minute la30°C(37°C) se va citi valoarea absorbanþei pe minutla 340 nm timp de 3 minute, în cuve de 1 cm, faþãde apa distilatã.


Dupã amestecare ºi incubare de 3 minute se maiadaugã:

Reactiv R2 250 µL

Dupã amestecare ºi o incubare de 2 minute la 30°C (37°C), se va citi valoarea absorbanþei pe minutla 340 nm, timp de 3 minute, în cuve de 1 cm, faþãde apa distilatã.

CALCUL:30°C U/L= ∆A/min x 4127

LINEARITATE:Dacã variaþia absorbanþei pe minut depãºeºte 0,250la 340 nm, proba se va dilua cu soluþia fiziologicãde NaCl în propoþie de 1:10. Se va repetadeterminarea ºi la calcul se va lua în considerarediluþia.A se întrebuinþa numai la diagnostizãri invitro.




35

CREATININAConþinut: 2x125mL 20x250mL 2x250 mLNr. cod: 41741 41752 41751

Creatinina se elibereazã în urma metabolizãriifosfatului de creatinã din þesutul muscular.


Creatinina cu picratul alcalic formeazã un com-plex colorat. Viteza de formare a complecºilor estedirect proporþionalã cu conþinutul în creatininã aprobei. Metoda cineticã diminueazã interferenþaprodusã de alte substanþe.

LITERATURÃ:

Bartel S.H.: Clin. Chem. Acta 37, 193, (1972)


Ser 53-115 µmol/L 6-13 mg/LUrinã 7-16 mmol/24h 0,8-1,8 g/24h

REACTIVI:

1. Reactiv (R1)Acid picric 8,73 mmol/L

ATENÞIE! Reactivul are efect iritant!

2. Reactiv (R2)Hidroxid de sodiu 300 mmol/LFosfat disodic 25 mmol/L


PROBA:

Ser nehemolitic, plasmã.Urinã de 12 sau 24 ore, diluatã cu apã distilatã înproporþie de 1:100.


Pregãtirea amestecului de reactivi: se vaamesteca un volum de reactiv R1 cu un volum dereactiv R2.

Stabilitate:20-25°C 1 lunã

METODA DE LUCRU:

Standard ProbaAm. de reactiv 1 mL 1 mLStandard 100 µL -Proba - 100 µL

Dupã amestecare ºi o incubare de 30 secunde la25°C (30-37°C), se va citi absorbanþa (A1) probeiºi a standardului la 492 nm (480-520 nm), în cuvede 1 cm, faþã de apã distilatã. A doua citire se vaefectua dupã exact 2 minute (A2).Modul de mãsurare: cu punct final

CALCUL:

(A2– A1)proba

/(A2– A1)standard

x Cstandard

=Cproba


LINEARITATE:

Intensitatea culorii este direct proporþionalã cuconcentraþia creatininei pânã la 1326 µmol/L (150mg/L). Peste aceastã valoare, proba se va dilua, iarla calcul se va lua în considerare factorul de diluþie.

OBSERVAÞIE:

Metoda este recomandatã diagnosticãrii in vitro.În cazul concentraþiilor mari, prezenþa cetonilor,acidului ascorbic, glucozei, carbamidei, albumineiperturbã rezultatul. Vitezele de reacþie sunt diferite,de aceea se recomandã ca prima citire sã se efectuezeimediat dupã adãugarea probelor (sã nu depãºeascã10 secunde).




36

CRP � LATEXConþinut: 50 teste 100 testeNr. cod: 1200301 1200302

Kitul se utilizeazã la punerea în evidenþã pe lamã aproteinei C-reactive (PCR). Reactivul este osuspensie uniformã de particule latex sensibilizatecu anticorpi antiproteinã-C-reactivã umanã. În seruladulþilor sãnãtoºi concentraþia de PCR este sub 12mg/L. Aceastã concentraþie creºte în faza acutã amultor procese inflamatorii, în cele mai multeinfecþii bacteriene, unele virale, în febra acutãreumaticã, artrita reumatoidã, în general înmajoritatea bolilor de colagen. PCR-ul crescut sepoate pune în evidenþã în infarctul miocardic acutºi în numeroase boli maligne, mai ales în faza demetastazã. Dintre metodele imunologice careservesc la evidenþierea PCR, sensibilitatea testuluilatex depãºeºte pe cea a precipitãrii în gel sauprecipitãrii capilare, rezultatele pozitive fiind maifrecvente. Avantajul metodei latex constã înrapiditate: în decurs de 2 minute se poate interpreta.Se utilizeazã numai ser. Serurile puternic lipemicepot da rezultate fals pozitive.

PRINCIPIUL DETERMINÃRII:Dacã în produsul examinat cantitatea de proteinãC-reactivã atinge nivelul suficient de înalt, întreparticulele sensibilizate de latex se formeazã punþiantigen-anticorp, suspensia îºi pierde aspectulomogen, aglutinarea devenind observabilã ºi cuochiul liber.

LITERATURÃ:Tillet, W.S.,Francis T.: J. Exper. Med. 52; 561, (1930)Singer, J.M., Plotz,C.M.: Amer. J.Med. 21;888, (1956)

CONÞINUTUL KITULUI:- reactiv PCR-latex 2,5 ml- tampon glicinã-NaCl, pH8,6; concentrat 10 ml- control pozitiv 1 ml- control negativ 1 ml- placã împãrþitã în 6 câmpuri- pipete de singurã folosinþã, 50 bucãþiSerurile de control conþin stabilizator.

PÃSTRARE ªI STABILITATE:Reactivii se pãstreazã la o temperaturã de 2-8°Cpânã la data indicatã pe etichetã. Nu se vor congela.

PROBA:Ser obþinut dupã coagularea completã a sângeluivenos. Se poate pãstra 24 ore la temperatura de 2-8°C, sau timp mai îndelungat, congelat la –20°C .Sã nu se foloseascã ser hemolizat, lipemic sauinfectat.

Alte materiale necesare, neincluse în kit:Centrifugã, pipete serologice sau automate,cronometru, eprubete, ser fiziologic, sursã deluminã de intensitate mare.

METODOLOGIE:- reactivii se lasã la temperatura camerei sã se

încãlzeascã- reactivul PCR se omogenizeazã prin agitare- se efectueazã de fiecare datã ºi controlul pozitiv

� negativ- în cercul de pe lamã se pune o picãturã din serul

de cercetat nediluat. Pipeta se pãstreazã pentruamestecare

- se adaugã o picãturã de reactiv PCR- se amestecã cele douã picãturi cu partea platã a

pipetei, astfel ca sã acopere toatã suprafaþacercului

- se roteºte lama exact 2 minute- se observã apariþia � sau absenþa � aglutinãrii- Evaluarea de dupã uscarea picãturii dã rezultate

eronate, fals pozitive- se spalã lama pentru examinarea urmãtoare

INTERPRETARE:

Reacþia pozitivã este semnalatã de apariþiaaglutinãrii, care apare în general într-un minut.Absenþa aglutinãrii indicã valori sub prag alconcentraþiei de PCR, (rezultat negativ). Lainterpretarea reacþiei trebuie avut în vedereomogenitatea suspensiei cu controlul negativ.Serurile lipemice sau infectate pot da rezultatefals pozitive.




37

CUPRUContinut: 5x10mlNr. cod: 44311

Reactiv folosit pentru determinarea cantitativã a cuprului fãrãdeproteinizare în ser uman ºi plasmã.

PRINCIPIUL DETERMIN ÃRII:Cuprul legat în ceruloplasminã se elibereazã într-un sistemtampon cu pH=4,7. Ionii de Cu în prezenþa 3,5-dibrom-PAESAformeazã un complex colorat, iar intensitatea coloraþiei estedirect proporþionalã cu conþinutul de cupru din probã.

LITERATURA:Abe, Yamashit S., et.al.: Clin. Chem., 522;35 (1989)

VALORI DE REFERINÞÃ:Femei 12,6-24,4 µmmol/L

800-1550 µmg/LBãrbaþi 11,0-22,0 µmmol/L

700-1400 µmg/L

REACTIVI: 1. Reactiv (R1)

tampon, pH=4,7 2. Reactiv (R2)

3,5-dibrom-PAESA 3. Reactiv (R3)

Catalizator(Setul conþine o spatulã de dozare.)

Standard

PROBÃ:Ser nehemolitic sau plasmã heparinizatã.

ATENÞIE!Se vor folosi eprubete de unicã folosinþã sau eprubete din sticlãspãlate cu HCl 1N ºi apã distilatã.

EFECTUAREA ANALIZEI:Pregãtirea amestecului de reactivi:

WR1: Se va dizolva o lingurã mãsurãtoare dereactiv R3 în conþinutul unui flacon de reactiv R1.Stabilitatea soluþiei: 2-8°C 15 zile

WR2 (Soluþia cromogenã) : se vor amesteca 10 volume dinsoluþia WR1 cu 0,5 volume din reactivul R2. ( metoda cu unreactiv).

Stabilitatea soluþiei: la temp. camerei: 3-4 ore -20°C: 3 sãptãmâni

METODA DE LUCRU:Determinãrile se fac la urmãtoarele parametrii:Lungimea de undã: 570-590 nmTemperaturã: 37°CCuve: 1 cmMod de mãsurare: cu punct final

Determinare cu un reactiv

Martor Standard ProbaWR2 1 mL 1 mL 1 mLApã distilatã 50µL - -Standard - 50µL -Proba - - 50µL

Amestecaþi ºi citiþi absorbanþa (A) dupã 5 minute de incubarela 37°C. Culoarea este stabilã timp de 1 orã.

Determinare cu 2 reactivi:

Martor Standard ProbaApã distilatã 50µL - -Standard - 50µL -Proba - - 50µL

Amestecaþi ºi citiþi absorbanþa (A1)

Reactiv 2 50µL 50µL 50µL

Amestecaþi ºi citiþi absorbanþa (A2) dupã 5 minute de incubarela 37°C. Culoarea este stabilã timp de 1 orã.

CALCUL:Metoda cu un reactiv:

(Aproba

/Astandard

) x Cstandard

=Cproba

Metoda cu 2 reactivi[(A2-A1

proba )/( A2-A1

standard ) ] x C

standard=C

proba


LINEARITATE:Metoda este linearã pânã la 78.65 µmol/L (5 mg/L)

OBSERVATIE:Metoda este recomandata diagnosticarii in vitro.




38

DIA � QUICK PANOPTIC

Set de soluþii pentru colorarea panopticã a preparatelor hematologice (frotiu periferic, punctate de

MO, sedimente din punctat articular, pleural, LCR) ºi histologice.

Reactivi:

1. DIA FIX PANOPTIC � soluþie de fixare ºi precolorare

2. DIA RED PANOPTIC � soluþie eozinofilã

3. DIA BLUE PANOPTIC � soluþie bazofilã

Metoda de lucru:

1. Executarea frotiurilor în mod obiºnuit

2. Reactivii se repartizeazã separat, în vase de sticlã cu capac

3. Frotiul uscat este introdus în soluþia de fixare timp de 1 secundã, de 5-10 ori

4. Frotiul fixat este introdus în soluþia DIA RED timp de 1 secundã, de 3-13 ori

5. Frotiul este introdus în soluþia DIA BLUE timp de 1 secundã, de 3-15 ori

Intensitatea coloraþiei se controleazã prin numãrul introducerilor în soluþii.

6. Spãlare cu apã distilatã (nu este nevoie de spãlare între fazele coloraþiei)

7. Uscare

În momentul apariþiei precipitaþiilor în soluþii, sau a nuanþelor de coloraþie soluþiile respective trebuiesc

schimbate.

Termen de valabilitate: 12 luni.




39

FIER (FERROZIN)Conþinut: 9x50 mlNr. cod: 45631


Fierul trivalent de pe transferinã, este redus la fierbivalent la un pH=4,8 de cãtre ferozinã, dând uncomplex colorat în roºu. Absorbanþa mãsuratã la560 nm este direct proporþionalã cu concentraþia înfier a probei.

LITERATURA:

Williams et al.: Clin. Chem. 23; 237, (1977)Stoockey L.: Anal. Chem., 42, 779 (1970)Persijn et al.: Clin. Chem. Acta, 35, 91 (1971)


Fier total din ser:

Femei: 8,8-27 µmol/LBãrbaþi: 9,0-30 µmol/L

REACTIVI:

1. Reactiv (R1)Acetat tampon pH=4,8 100 mmol/LGuanidinã 6 mmol/LTiouree 52,5 mmol/L

2. Reactiv (R2)Acid ascorbic 150 mg/fiolã

3.Reactiv (R3)Ferrozin 40 mmol/L

Standard

PROBA:

Ser nehemolitic, plasmã obþinutã din sânge recoltatpe heparinã.


Prepararea reactivilor: se amestecã o fiolã de acidascorbic (R2) cu un flacon de reactiv R1 de 50 ml.

Stabilitate: 20-25°C 3 zile2-8°C 2 sãpt.

Reactivul R3 este gata preparat ºi este stabil pânãla data de pe etichetã.

METODA DE LUCRU:

Martor Standard ProbaReactiv R1 1 mL 1 mL 1 mLApã distil. 200 µL - -Standard - 200 µL -Proba - - 200 µL

Se amestecã ºi se mãsoarã absorbanþa pentru:A1

standard ºi A1

proba .

Dupã aceasta, se adaugã la fiecare eprubetã:

Reactiv R3 40 µL 40 µL 40 µL

Dupã amestecare ºi o incubare de 10 minute la 37°Cse citeºte absorbanþa (A2) probei ºi a standarduluila 560 nm (550-570 nm), în cuve de 1 cm, faþã demartor.

CALCUL:

(A2– A1)proba

/(A2– A1)standard

x Cstandard

=Cproba

LINEARITATE:

Pânã la concentraþia de 179 µmol/L, variaþiaabsorbanþei este direct proporþionalã cu concentraþiafierului. Peste aceastã valoare, proba se va dilua cusoluþie fiziologicã de NaCl. Se va repetadeterminarea ºi la calcul se va lua în consideraregradul de diluþie.

OBSERVAÞIE:

Hemoliza perturbã determinarea.Reactivii R1, R2, R3 se pot amesteca înainte de a fidozaþi. Se adaugã 1 fiolã de R2 la 50 ml de R1, apoi2 ml de R3. Se amestecã atent.

A se întrebuinþa numai la diagnosticãri in vitro.




40

FOSFATAZA ACIDÃConþinut: 20x3ml 12x10mlNr. cod: 42401 42411

Fosfatazele acide sunt izoenzime. Activitateacataliticã, specificitatea substratului ºi sensibilitateafaþã de inhibitori, diferã. În mediu alcalin majoritateaizoenzimelor este labilã. Importantã este izoenzimade origine prostaticã.


Fosfataza acidã din ser catalizeazã transformareaalfa-naftilfosfatului în 1-naftol ºi fosfat anorganic.1-naftolul rezultat din reacþie, cu Fast Red TRformeazã un compus azo. Fracþia de origineprostaticã se blochezã cu tartrat.

LITERATURÃ:

Hillmann,G.J.:Clin.Chem.Clin.Biochem.9, 273, (1971)


Fosfatazãacidã totalã 30°C 37°CBãrbaþi max 8,0 U/L max 10 U/LFemei max 5,7 U/L max 7,8U/LFosfatazãacidã prostaticã max 3,8 U/L max 4,3U/L

REACTIVI:

1. Reactiv (R1)

tampon citrat, pH=5,2 150 mmol/L

2. Reactiv (R2)

alfa naftil-fosfat 10 mmol/LFast Red TR 6 mmol/L

3. Reactiv (R3)

tartrat de sodiu 400 mmol/L

PROBA:

Ser nehemolizat. NU se va lucra cu plasmã.


Pregãtirea reactivului de lucru: se dizolvãconþinutul unui flacon de reactiv (R2) în cantitateacorespunzãtoare de tampon (R1).

Stabilitatea soluþiei: (ferit de luminã)20-25 °C 6 ore2-8 °C 2 zile

METODA DE LUCRU:

Total Rezis.la tartratSoluþia de lucru 1 mL 1 mLTartrat (R3) - 80 µLProba/ser contr. 100µL 100µL

Dupã amestecare ºi o incubare de 5 minute la 37°C se va citi valoarea absorbanþei faþã de aer la405nm, în cuve de 1cm, timp de 3 minute. Se vacalcula variaþia absorbanþei pe minut (∆A/min.).Metoda de mãsurare: cinetic.

CALCUL:

Fosfataza acidã totalã:∆A/min x 750 = U/L

Fosfataza acidã prostaticã:(∆A/min)

total -(∆A/min)

rez. la tartrat x 750=U/L

LINEARITATE:

Metoda este linearã pânã la o concentraþie de 150U/L. Dacã variaþia absorbanþei pe minut depãºeºte0,25, proba se va dilua cu soluþie fiziologicã de NaClîn proporþie de 1:10.

OBSERVAÞIE:

Substratul este toxic, pipetarea cu gura esteinterzisã! Determinarea se va efectua imediat dupãrecoltare. Substanþele formatoare de chelaþi (EDTA)deranjeazã determinarea.





41

FOSFATAZA ALCALINÃ(A.L.P)

Conþinut: 20x3ml 15x20ml 20x1000mlNr. cod: 40201 40221 40262


Enzima catalizeazã hidroliza monofosfaþilor inmediu alcalin. Prin metoda cineticã, fosfatazaalcalinã din sânge catalizeazã hidroliza substratuluifosfat de p-nitrofenil. În urma reacþiei rezultã p-nitrofenolat ºi fosfat anorganic. Ionii de Mg++

mãresc activitatea enzimei.

fosfat de p-nitrofenil + H2Ofosfataza alcalina

Mg++

p-nitrofenolat + ortofosfat

LITERATURÃ:

Haussment T.U. et al.: Clin.Chim. Act. 35, 271-273, (1977)


25 °C 30 °C 37 °CCopii 110-720 145-950 180-1200 U/LAdulþi 60-170 73-207 98-279 U/L

REACTIVI:

1. Reactiv (R1)

sol. tampon dietanolamina, pH= 9.8 1 mol/L

Clorurã de magneziu 0.6 mmol/L

2. Reactiv (R2)

fosfat de p-nitrofenil (soluþie) 10 mmol/L

PROBA:

Ser nehemolizat sau plasmã obþinutã din sângerecoltat pe heparinã.


Pregãtirea reactivului de lucru: se dizolvãconþinutul unui flacon de reactiv (R2) în cantitateacorespunzãtoare de tampon (R1).

Stabilitatea soluþiei: (ferit de luminã)20-25 °C 48 ore2-8 °C 14 zile

METODA DE LUCRU:

Amestec de reacivi 1 mLProba 20 µL

Dupã amestecare ºi o incubare de 1 minut la 25 °C(30,37 °C) se va mãsura valoarea absorbanþei faþãde aer sau apã distilatã la 405-410 nm, în cuve de1cm. Se va calcula variaþia absorbanþei pe minut(∆A/min.).Metoda de mãsurare: cinetic.

CALCUL:

405nm: ∆A/min x 3000 = U/L

LINEARITATE:

Dacã variaþia absorbanþei pe minut depãºeºte 0,25,proba se va dilua cu soluþie fiziologicã de NaCl înproporþie de 1:10.

OBSERVAÞIE:

Substratul ALP este toxic, pipetarea cu gura esteinterzisã!Determinarea se va efectua imediat dupã recoltare.Substanþele formatoare de chelaþi (EDTA)deranjeazã determinarea.Metoda este recomandatã diagnosticãrii in vitro.




42

FOSFORConþinut: 2x125mlNr. cod: 41341


În mediu alcalin, fosforul împreunã cu molibdatulde amoniu formeazã un complex anorganic defosfomolibdat. Determinarea pseudocineticã afosforului anorganic se efectueazã la 340 nm.

Fosfor anorganic + molibdat de amoniuacid sulfuric

complex anorganic de fosfomolibdat

LITERATURÃ:

Daly J., Erthingshausen G.: Clin. Chem. 18, 263 (1972)


Ser, plasmã 0.87-1.45 mmol/LUrinã 10.4-28.8 mmol/24h

REACTIVI:

1.Reactiv (R1)

acid sulfuric 210 mmol/Lmolibdat de amoniu 650 µmol/L

2.Reactiv (R2)

soluþie standard (fosfor) 1,62 mmol/L

PROBA:

Ser nehemolitic sau plasmã heparinizatã. Urinãdiluatã cu apã distilatã în proporþie de 1:10.


Reactivul este gata pentru folosire.Stabilitatea soluþiei: la 2-25°C pânã la data indicatãpe etichetã.

METODA DE LUCRU:

Martor Standard ProbaApa distil. 10µL - -Standard - 10µL -Proba - - 10µLReactiv R1 1 mL 1 mL 1 mL

Dupã amestecare ºi o incubare de 5 minute la 20-25°C, se va citi absorbanþa probei ºi a martoruluila 340 nm, în cuve de 1 cm, faþã de martor.Modul de mãsurare: cu punct final

CALCUL:

(Aproba

/Astandard

) x Cstandard

=Cproba


LINEARITATE:

Intensitatea culorii este direct proporþionalã cuconcentraþia, pânã la 6.46 mmol/L.

OBSERVAÞIE:

Metoda este recomandatã diagnosticãrii in vitro.Dacã serul este lipemic, se va prepara o soluþieblanc: 10 µL ser se vor dilua cu soluþie fiziologicãde NaCl ºi se va citi absorbanþa la 340 nm.




43

FR � LATEXConþinut: 50 teste 100 testeNr. cod: 1200201 1200202

Kitul serveºte la evidenþierea factorului reumatoid(FR) din ser. Reactivul FR-Latex este o suspensiede particule uniforme de latex, sensibilizate cuimunoglobulinã umanã. Factorii reumatoizi suntautoanticorpi anti-fragment ai imunoglobulinelor G.Majoritatea lor aparþin clasei IgM, restul sunt detip IgG, respectiv IgA. În 70-80% a bolnavilorsuferinzi de artritã reumatoidã FR este prezent întitrii înalte. În osteoartrite ºi febra reumaticã, numai2-3% a cazurilor sunt pozitive.

PRINCIPIUL DETERMINÃRII:Dacã sunt prezente factorii reumatoizi, anticorpiiantiimunoglobulinici realizeazã punþi între particulelelatex, suspensia îºi pierde caracterul omogen, aglutinareaparticulelor devine observabilã ºi cu ochiul liber.

LITERATURÃ:Waaler, E.:Acta Path Microb. Scand.17,182 (1940)Hannestad, K.: Clin. Exp. Immunol. 3,671, (1968)Lane, J.J.Jr.,Decker,J.L.: JAMA 173, 982, (1960)Singer, J.M.Am.J. Med., 31, 706-779 (1961)

CONÞINUTUL KITULUI:• Suspensie de latex sensibilizat cu IgG uman, în tam-

pon glicinã-NaCl, cu pH=8,6• Control pozitiv• Control negativ• Plãci de unicã folosinþã, împãrþite în 6 câmpuri• Pipete de o singurã folosinþã

Serurile de control conþin stabilizator. Reactivii conþinazotit de sodiu în concentraþie de 1 mg/mL .

MOD DE PÃSTRARE, STABILITATE:Nu se congeleazã. Þinut la temperatura de 2-8°C , kituleste stabil pânã la data indicatã pe etichetã.Utilizabilitatea reactivului este confirmatã de reacþiaadecvatã a controalelor.

Alte materiale necesare neincluse în kit:Centrifugã, pipete serologice sau automate,cronometru, baghete de sticlã, eprubete, ser fiziologic,sursã de luminã de intensitate mare.

PROBA:Ser obþinut dupã coagularea completã a sângelui recoltatdin venã. Serul poate fi menþinut 24 ore la 2-8°C sautimp mai îndelungat congelat la –20°C. Nu se vor folosiseruri hemolizate, lipemice sau infectate.

METODOLOGIE:- substanþele se lasã sã se încãlzeascã la temperatura

camerei- reactivul se omogenizeazã prin agitare- se efectueazã de fiecare datã ºi controlul pozitiv �

negativ- în cercul trasat pe lamã se pune o picãturã din serul

de cercetat nediluat. Pipeta se pãstreazã pentruamestecare.

- se adaugã o picãturã de reactiv- se amestecã cele douã picãturi cu partea platã a

pipetei, astfel ca sã acopere toatã suprafaþa cercului- se roteºte lama exact 2 minute- se observã apariþia � sau absenþa � aglutinãrii- Evaluarea de dupã uscarea picãturii dã rezultate

eronate- se spalã lama pentru examinarea urmãtoare.

INTERPRETARE:Reacþia POZITIVÃ este semnalatã de apariþiaaglutinãrii. Absenþa aglutinãrii indicã o concentraþie subprag al FR (reacþie NEGATIVÃ.) La interpretarearezultatelor se ia în considerare omogenitatea suspensieicu controlul negativ. Dacã controlul pozitiv ºi negativnu dau rezultatul adecvat, kit-ul trebuie schimbat.Determinarea FR ajutã la diferenþierea artriteireumatoide de febra reumaticã: în primul caz obþinemrezultat pozitiv în 80%, în cazul din urmã de obicei nuse poate evidenþia FR. FR mai poate fi pus în evidenþãîn aprox. 6% din cazurile de poliartritã nodoasã, lupuseritematos, unele inflamaþii cronice ca lepra, TBC, sifilis,endocardita bacterianã.




44

GAMMA � GTConþinut: 20x3ml 9x50ml 20x100mlNr. cod: 40501 40531 40562


γ-GT catalizeazã transferul γ - glutamilului de pesubstratul L - γ - glutamil - 3carboxi - 4-nitroanilidape glicilglicina. Creºterea valorii absorbanþeimãsuratã la 405 nm este în corelaþie cu formarea 4-nitroanilidei ºi este direct proporþionalã cuactivitatea gamma-GT.

L-γ-glutamil-3- L-γ-glutamil-

carboxi-4- + glicilglicina γ - GT - glicilglicina +nitroanilida + 3-carboxi-4 - nitroanilina

LITERATURÃ:

Szasz G.: Clin. Chem. 15,124.(1969)Lum G. et all. Clin. Chem. 18,358. (1972)


25°C 30°C 37°CBãrbaþi 6-28 U/L 8-38 U/L 11-50 U/LFemei 6-18 U/L 5-25 U/L 7-32 U/L

REACTIVI:

1. Reactiv (R1)

Tampon TRIS, pH =8,1 100 mmol/LGlicilglicinã 100 mmol/L

2. Reactiv (R2)

L - γ - glutamil – 4 mmol/L3-carboxi -4-nitroanilidã

PROBA:

Ser nehemolizat.


Pregãtirea reactivului de lucru: se va dizolvaprin agitare conþinutul unui flacon de reactiv (R2)în cantitatea corespunzãtoare de reactiv (R1).

Stabilitatea soluþiei:20 – 25 °C 7 zile2 – 8 °C 10 zile

Dacã extincþia reactivului de lucru la 405 nm faþãde apa distilatã este mai mare de 0,8 acesta NU seva folosi.

METODA DE LUCRU:


Dupã amestecare ºi o incubare de 1 minut la 25°C(30°C,37°C) se va citi valoarea absorbanþei (A) la405 nm (410 nm), în cuve de 1 cm, faþã de apãdistilatã sau aer. Se va urmãri variaþia absorbanþeipe minut (∆A/min) timp de 3 minute.Metoda de mãsurare: cinetic

CALCUL:

405 nm: ∆A/min x 1190 =U/L410 nm: ∆A/min x 1339 =U/L

LINEARITATE:

Dacã variaþia absorbanþei pe minut la 405 nmdepãºeºte 232 U/L, se va repeta determinarea cuserul diluat cu soluþie fiziologicã de NaCl înproporþie de 1:10, ºi rezultatul se va înmulþi cu 10.

OBSERVAÞIE:

Este interzisã pipetarea cu gura!Anticoagulanþii, ca citratul, oxalatul, EDTA perturbãdeterminarea (nu este indicatã utilizarea plasmei).Metoda este recomandatã diagnosticãrii in vitro.




45

γ- GTReactiv lichid cu doi componenþi



Determinarea cineticã a activitãþii γ- glutamil-transferazei:

GLUPA-C + glicilglicinã γ-GT L-γ- glutamil-glicilgl icinã + 5- amino-2- acidnitrobenzoic

GLUPA-C= L-γ- glutamil-3-carboxi-p- nitroanilida

LITERATURÃ:

Szasz G., Clin. Chem., 22, 2051. 1976;

VALORI NORMALE:

30°C 37°CFemei 4-25 U/L 5-32 U/LBãrbaþi 7-34 U/L 10-45 U/L

REACTIVI:

1. Reactiv (R1)

Tampon TRIS, pH=8,25 125 mmol/LGlicilglicinã 140 mmol/L

2. Reactivi (R2)

GLUPA-C 22 mmol/L


PROBA:Ser nehemolizat.


Ferite de luminã ºi pãstrate la 2- 8 °C, reactivii suntstabili pânã la data indicatã pe ambalaj.


Prepararea amestecului de reactivi ºi stabilitatea lor:• Pregãtirea reactivului cu un singur compo-

nent: se vor dizolva patru pãrþi din reactivulR1 într-o parte din reactivul R2.

Stabilitate:20 - 25 °C 5 zile4°C 3 sãpt.


Metoda de lucru cu un singur reactiv:

Amestecul de reactivi 1mLProba 100 µL

Dupã amestecare ºi o incubare de 1 minut la30°C(37°C) se va citi valoarea absorbanþei pe minutla 405 nm timp de 3 minute, în cuve de 1 cm, faþãde apa distilatã.


Dupã amestecare ºi incubare de 1 minut se maiadaugã:

Reactiv R2 250 µL

Dupã amestecare ºi o incubare de 1 minut la 30 °C,se va citi valoarea absorbanþei pe minut la 405 nm,timp de 3 minute, în cuve de 1 cm, faþã de apadistilatã.

CALCUL:Cu un singur component:

U/L= ∆A/min x 1158Cu doi componenþi:

U/L= ∆A/min x 1421

LINEARITATE:Dacã valoarea absorbanþei pe minut la 405 nm depãºeºte0.20, proba se va dilua cu ser fiziologic de NaCl înproporþie de 1:10, dupã care se va repeta determinarea.




46

GLUCOZA GOD/PAPReactiv lichid cu un component



Determinarea enzimaticã-colorimetricã aglucozei.

Glucoza+O2

glucoz-oxidazã acid gluconic + H2O

2

2H2O

2 +4 amino-antipirinã + fenol peroxidazã

chinonimina + 4H2O

LITERATURA:

Trinder P.,: Ann. Clin. Biochem., 6,(1969), 24.

VALORILE DE RE FERINÞÃ:

Ser 3.89-5.84 mmol/l 0.70-1.05 g/lLiquor 2.78-3.89 mmol/l 0.50-0.70 g/l

REACTIVI:

Tampon TRIS, pH=7,40 100 mmol/LFenol 10 mmol/L4-amino antipirin 0,3 mmol/LPeroxidazã 700 U/LGlucoz-oxidazã 10000 U/L

StandardGlucozã standard


PROBA:

Ser nehemolitic, plasmã heparinizatã.Liquor (LCR).


Ferite de luminã ºi pãstrate la 2-8°C, reactivii suntstabili pânã la data indicatã pe ambalaj.

METODA DE LUCRU:

Martor Standard ProbaReactiv 1 mL 1 mL 1 mLApã distil. 10 µL - -Standard - 10 µL -Proba - - 10 µL

Se amestecã ºi se incubeazã timp de 5 minute la37°C. Variaþia absorbanþei se va citi la 500 nm(492-520 nm), în cuve de 1 cm, faþã de martor.

CALCUL:

(Aproba

/Astandard

) x Cstandard

=Cproba


LINEARITATE:

Metoda este linearã pânã la 40 mmol/L( 7,2 g/L).

OBSERVAÞIE:





47

GLUCOZAGOD/PAP

Conþinut: 2x125ml 4x250ml 40x500mLNr. cod: 40841 40851 40882


Glucoz-oxidaza transformã glucoza în acid glu-conic. Peroxidaza descompune H

2O

2 rezultat din

prima reacþie. În final rezultã un complex colorat.

Glucoza+O2

glucoz-oxidazã acid gluconic + H2O

2

2H2O

2 +4 amino-antipirinã + fenol peroxidazã

chinonimina + 4H2O

LITERATURA:

Trinder P.,: Ann. Clin. Biochem., 6, 24(1969)Dingeon B. Ann. Biol. Clin. 33, 3 (1975)Lott J. A. Clin. Chem. 21, 1754 (1975)

VALORI NORMALE:

Ser sau plasmã 3,9-5,8 mmol/L 0,7-1,05 g/LLiquor (LCR) 2,8-3,9 mmol/L 0,5-0,7 g/L

REACTIVI:

1.Reactiv (R1)

Tampon TRIS, pH=7.5 90 mmol/LFenol 0.5 mmol/L

2.Reactiv (R2)

Glucoz-oxidazã 10000 U/LPeroxidazã 1000 U/L4-amino-antipirinã 2.6 mmol/L

StandardGlucozã standard

PROBA:

Ser nehemolitic, plasmã heparinizatã, sângedeproteinizat.Liquor.


Pregãtirea amestecului de reactivi: se va dizolvaconþinutul unui flacon de R2 în cantitateacorespunzãtoare de R1.

Stabilitatea soluþiei (în sticlã brunã):20-25°C 14 zile2-8°C 90 zile

METODA DE LUCRU:


Dupã amestecare ºi o incubare de 10 minute la 37°Csau 30 minute la 20-25°C, se va citi absorbanþaprobei ºi a standardului faþã de martor la 505nm(490-550 nm), în cuve de 1 cm. Culoarea probeirãmâne stabilã timp de 30 minute.Mod de mãsurare: cu punct final.

CALCUL:

(Aproba

/Astandard

) x Cstandard

=Cproba


LINEARITATE:

Pânã la 40 mmol/L( 7,2 g/L) valoarea absorbanþeieste direct proporþionalã cu concentraþia glucozei.Peste aceastã valoare proba se va dilua.

OBSERVAÞIE:

Metoda nu este recomandatã pentru determinareaglucozei din urinã. La probele deproteinizate,glutationul de origine eritrocitarã poate influenþarezultatul.A se întrebuinþa numai la diagnosticãri in vitro.




48

GLUCOZA - HK Reactiv lichid în doi componenþi



Glucoza+ATP HK G-6-P + ADP

G-6-P + NAD G-6-PDH gluconat-6-fosfat + NADH +H+

HK= hexochinazaG-6-P= glucoz-6-fosfatG-6-PDH= glucoz-6-fosfat-dehidrogenaza

LITERATURA:

Peterson,J.L.,Young,D.S.,Anal Biochem.,23,301(1968)Bondar, R.J.L.,Mead,D.C., Clin. Chem. 20, 586 (1974)

VALORI NORMALE:

Ser 3,61-6,11 mmol/L 0,65-1,10 g/LLiquor 2,78-3,89 mmol/L 0,50-0,70 g/L

REACTIVI:

1.Reactiv (R1)

Tampon Pipes, pH=7.6 80 mmol/LNAD 3 mmol/LATP 1.7 mmol/L

2.Reactiv (R2)

Sare de magneziu 4 mmol/LHK 1700 U/LG-6-PDH 1700 U/L

StandardGlucoza 5.56 mmol/L


PROBA:

Ser nehemolitic, plasmã obþinutã din sânge recoltatpe heparinã. LCR.




• Pregãtirea reactivului cu un singur compo-nent: se vor dizolva patru pãrþi din reactivulR1 într-o parte din reactivul R2.

Stabilitatea soluþiei:20-25°C 14 zile 2-8°C 2 luni



Martor Standard ProbaReactiv 1 mL 1 mL 1 mLApã distil. 10 µL - -Standard - 10 µL -Proba - - 10 µLDupã amestecare ºi o incubare de 5 minute la 37°C,se va citi valoarea absorbanþei faþã de martor la 340nm(334-365 nm), în cuve de 1 cm.• Metoda de lucru cu doi componenþi:

Martor Standard ProbaReactiv R1 1 mL 1 mL 1 mLApã distil. 10 µL - -Standard - 10 µL -Proba - - 10 µLDupã amestecare ºi o incubare de 1 minut se maiadaugã:Reactiv R2 250µL 250µL 250µL

Dupã amestecare ºi o incubare de 5 minute la37°C se va citi valoarea absorbanþei faþã de martorla 340 nm(334-365 nm), în cuve de 1 cm.

CALCUL:



A se întrebuinþa numai la diagnosticãri invitro.




49

HCG � LATEXConþinut: 50 testeNr. cod: 1200601

Testul HCG Latex pune în evidenþã prin aglutinaredirectã, HCG din urinã

PRINCIPIUL DETERMINÃRII:Hormonul gonadotrop uman de origine placentarã �HCG � apare dupã fecundaþie în urinã. Punerea înevidenþã a HCG din urinã pledeazã în general pentrugraviditate. La baza reacþiei stã un fenomen de aglutinarerapidã tip latex între cele douã componente: produsulde cercetat care conþine HCG ºi anti-HCG adsorbite peparticulele de latex. Dupã amestecarea celor douãcomponente �când anticorpii anti-HCG adsorbite peparticulele de latex sunt puse în contact cu produsul decercetat care conþine o cantitate suficientã de HCG - ,apare o aglutinare evidentã. În cazul conþinutului subprag suspensia de latex rãmâne omogenã.

SENSIBILITATEA TESTULUI:Sensibilitatea reacþiei este calibratã pentru evidenþiereaunei valori minime de 300 UI/ml HCG � nivel care apareîn general la 2 sãptãmâni dupã fecundaþie.

LITERATURÃ:Batzer, F.R.: Fertility and Sterility, 34, 1, (1980)

CONÞINUTUL KITULUI:- suspensie latex sensibilizat cu anticorpi anti-HCG- control pozitiv HCG- picurãtor, amestecãtor- lamã specialã cu 3 lãcaºuri

PÃSTRARE ªI STABILITATE:Reactivii se pãstreazã la o temperaturã de 2-8°C pânã ladata indicatã pe etichetã. Nu se vor congela.

PROBA:Se foloseºte urinã recoltatã într-un vas curat. NivelulHCG este cel mai ridicat în prima urinã de dimineaþã,deci acesta este cel mai indicat pentru analizã.Centrifugarea urinii este necesarã numai în caz deturbiditate excesivã. Se recomandã efectuarea reacþieicu urina proaspãt recoltatã, dar urina se poate pãstra la2-8°C timp de 72 ore. Înainte de efectuarea analizei urinase lasã la temperatura camerei.

METODOLOGIE:- Reactivii se lasã la temperatura camerei prealabil

efectuãrii analizei- Se folosesc plãci curate, spãlate în apã fierbinte ºi

pipete de unicã folosinþã- Dispozitivul de distribuþie se introduce în produsul

patologic, apãsând cu degetele. Încetând presiunea,produsul umplã dispozitivul. Þinând dispozitivulperpendicular pe lamã, se elibereazã o picãturã încerc.

- Se adaugã o picãturã de reactiv latex-anti-HCG, seîntinde pe toatã suprafaþa cercului.

- Se roteºte lama timp de 2 minute, imediat se citeºtereacþia, de preferabil la lumina intensivã sau lampãfluorescentã

- La fiecare serie sã se foloseascã controlul pozitiv.

ATENÞIE:1. Urina �control pozitiv� este iniþial sterilã. Pentru

evitarea contaminãrii, dupã folosire se închideimediat ºi se pune la 2-8°C.

2. Reactivul latex-HCG se usucã rapid la aer � la guraflaconului apare latexul. Dupã folosinþã se închideimediat flaconul.

EVALUARE:Reacþia este POZITIVÃ dacã dupã 2 minute apareaglutinarea amestecului. Pe baza conþinutului de HCGa urinei sarcina este probabilã.Reacþia este NEGATIVÃ dacã dupã 2 minutesuspensia rãmâne omogenã. În acest caz nivelul HCGeste sub prag. Dacã existã suspiciul sarcinii, se repetãreacþia cu urina recoltatã dupã câteva zile.

Substanþe care interfereazã cu reacþia:Anumite medicamente pot cauza reacþii fals pozitive saunegative. Se recomandã o pauzã în administrareaacestora înaintea recoltãrii urinii. Conþinutul foarte înaltde proteine poate inhiba în mod nespecific reacþia, decipoate da rezultat fals pozitiv. De asemenea un fals pozitivpoate cauza ºi conþinutul înalt de hormon luteinizant aurinei în menopauzã.




50

DEHIDROGENAZA ACIDULUI LACTIC (LDH)Conþinut: 20x3ml 15x20ml 60x20mlNr. cod: 42101 42111 42112

Dehidrogenaza acidului lactic este o enzimãprezentã în aproape toate celulele. Este o enzimãtetramer. Se cunosc 5 tipuri de izoenzime: LDH-1;LDH-2; LDH-3; LDH-4; LDH-5, în proporþie de20:34:23:12:11. Activitatea LDH din ser estedefinitã în mare parte de LDH-1 ºi LDH-2 suntspecifice miocardului ºi globulelor roºii; LDH-5este specificã ficatului. Activitatea izoenzimelordiferã în funcþie de substraturi. În cazurile de inf-arct miocardic activitatea enzimei dupã 8-12 orecreºte considerabil, iar dupã 4-5 zile scade.


Enzima LDH împreunã cu coenzima NADHcatalizeazã transformarea piruvatului în lactat.

Piruvat + NADH + H+ LDH lactat + NAD+

LITERATURA:

Bergmeyer, H.U.J.. Clin. Biochem 13,507, (1975)Howell B.F. et all. Clin. Chem. 25, 269 (1979)


25°C 30°C 37°C120-240 U/L 160-320 U/L 230-460 U/L

REACTIVI:

1. Reactiv (R1)

Tampon TRIS, pH=7,5 50 mmol/LPiruvat 0,6 mmol/L

2. Reactiv (R2)

NADH 0,18 mmol/L

PROBA:

Ser nehemolitic sau plasmã obþinutã din sângerecoltat pe heparinã.


Pregãtirea amestecului de reactivi: se va dizolvaconþinutul unui flacon de reactiv R2 în cantitateacorespunzãtoare de reactiv R1.Stabilitatea soluþiei:

2-8°C 6 zile20-25°C 48 ore

METODA DE LUCRU:


Se amestecã ºi se incubeazã timp de 1 minut la25°C( 30-37°C). Variaþia absorbanþei se va citi la340 nm (334-365 nm), în cuve de 1 cm, timp de 3minute, faþã de apã distilatã. Se va determina variaþiaabsorbanþei pe minut(∆A/min).Mod de mãsurare: cinetic (cu factor).

CALCUL:

334 nm: ∆A/min. x 8095 = U/L340 nm: ∆A/min. x 8252 = U/L365 nm: ∆A/min. x 15000 = U/L

LINEARITATE:

Dacã variaþia absorbanþei pe minut depãºeºte 0,22la 334, 340 nm sau 0,12 la 365 nm, proba se vadilua cu soluþia fiziologicã de NaCl în propoþie de1:10. Se va repeta determinarea ºi la calcul se valua în considerare diluþia.

OBSERVAÞIE:





51

LDHReactiv lichid în doi componenþi



Determinarea cineticã a activitãþii LDH:

Piruvat + NADH + H+ LDH lactat + NAD+

LITERATUR Ã:

Ann. Biol. Clin. 1982, 40:123


30°C 37°C161-322 U/L 240-480 U/L

REACTIVI:

1. Reactiv (R1)

Tampon fosfat, pH=7,5 56 mmol/LPiruvat 1,6 mmol/L

2. Reactiv (R2)

NADH 240 µmol/L


PROBA:

Ser nehemolizat.




Pregãtirea reactivului cu un singur compo-nent: se va dizolva conþinutul reactivului R1 înconþinutul corespunzãtor de reactiv R2.

Stabilitatea soluþiei:20-25 °C 1 sãpt.2-8 °C 4 sãpt


METODA DE LUCRU:

Metoda de lucru cu un singur reactiv:Amestec de reactivi 1 mLProba 25 µL

Dupã amestecare ºi o incubare de 1 minut la 25°C(30,37 °C) se va citi valoarea absorbanþei (A) la340 nm (334 -365 nm), în cuve de 1 cm, faþã de apãdistilatã. Se va urmãri variaþia absorbanþei pe minut(∆A/min) timp de 3 minute.

Metoda de lucru cu doi componenþi:Reactiv R1 1 mLProba 50 µL


Reactiv R2 1 mLSe amestecã ºi dupã o incubare de 1 minut la 25°C(30,37 °C) se va citi valoarea absorbanþei (A) la340 nm (334 -365 nm), în cuve de 1 cm, faþã de apãdistilatã. Se va urmãri variaþia absorbanþei pe minut(∆A/min) timp de 3 minute.

CALCUL:


LINEARITATE:

Dacã variaþia absorbanþei pe minut la 340 nmdepãºeºte 0.15, proba se va dilua cu soluþiefiziologicã de NaCl în proporþie de 1:10, dupãcare se va repeta determinarea ºi rezultatul se vaînmulþi cu 10.




52

ALFA-HBDHReactiv lichid în doi componenþi



Determinarea cineticã a activitãþii α-hidroxibutirat-dehidrogenazei:

α-cetobutirat + NADH + H+ α-HBDH α - hidroxibutirat+ NAD

LITERATUR Ã:

Deutsche Gesellschaft fur Klinische Chemie, Z. Klin. Chem.U. Klin. Biochem. 1972,10:182


25°C 30°C 37°C55-145U/L 70-190U/L 80-220U/L

REACTIVI:

1. Reactiv (R1)

Tampon fosfat, pH=7,5 62 mmol/LL- cetobutirat 6,2 mmol/L

2. Reactiv (R2)

NADH 240 µmol/L


PROBA:

Ser nehemolizat.




Pregãtirea reactivului cu un singur component:se va dizolva conþinutul reactivului R1 în conþinutulcorespunzãtor de reactiv R2.

Stabilitatea soluþiei:20-25 °C 1 sãpt.2-8 °C 4 sãpt


METODA DE LUCRU:

Metoda de lucru cu un singur reactiv:Amestec de reactivi 1 mLProba 25 µL

Dupã amestecare ºi o incubare de 1 minut la 25°C(30,37 °C) se va citi valoarea absorbanþei (A) la340 nm (334 -365 nm), în cuve de 1 cm, faþã de apãdistilatã. Se va urmãri variaþia absorbanþei pe minut(∆A/min) timp de 3 minute.

Metoda de lucru cu doi componenþi:Reactiv R1 1 mLProba 50 µL


Reactiv R2 1 mLSe amestecã ºi dupã o incubare de 1 minut la 25°C(30,37 °C) se va citi valoarea absorbanþei (A) la340 nm (334 -365 nm), în cuve de 1 cm, faþã de apãdistilatã. Se va urmãri variaþia absorbanþei pe minut(∆A/min) timp de 3 minute.

CALCUL:


LINEARITATE:

Dacã variaþia absorbanþei pe minut la 340 nmdepãºeºte 0.15, proba se va dilua cu soluþiefiziologicã de NaCl în proporþie de 1:10, dupã carese va repeta determinarea ºi rezultatul se va înmulþicu 10.




53

MAGNEZIUConþinut: 1x250mlNr. cod: 45751

Magneziul este un cofactor necesar al activitãþii maimultor enzime participante la metabolismulhidraþilor de carbon, sinteza proteinelor, contracþiaþesutului muscular. Joacã rol important întransmiterea excitaþiei neuromusculare ºi înmehanismul funcþionãrii pompei de calciu.


Ionii de magneziu cu albastrul de xilidinã, în mediualcalin formeazã un complex colorat. Intensitateacoloraþiei este proporþionalã cu concentraþia ionilorde magneziu.

Mg++ + albastru de xilidinã OH- complex albastru dexilidinã - Mg

LITERATURÃ:

Bohuon C.:Clin. Chim. Acta, 7, 811 (1962)Mann C.K., Zoe J.H.: Anal. Chim. Acta, 16 (1957)Mann C.K., Zoe J.H.: Anal. Chim. 28 (1956)Rice E.W., Lapra C.Z.:Clin.Chim.Acta,10, 360 (1964)


Ser, plasmã 0,65-1,03 mmol/L16-25 mg/L

REACTIVI:

1.Reactiv (R1)

tampon TRIS, pH=11,3 250 mmol/Lalbastru de xilidinã 1 mmol/Ldetergenþi

2.Reactiv (R2)

Standard de magneziu

PROBA:

Ser nehemolitic sau plasmã heparinizatã.Urinã diluatã cu apã distilatã 1:10 cu pH-ul corectatla 3,0-4,0 cu HCl 0,1N.


Reactivii sunt gata pentru utilizare ºi au o stabilitatepânã la data menþionatã pe ambalaj.

METODA DE LUCRU:

Martor Standard ProbaStandard - 10µL -Proba - - 10µLReactiv 1 mL 1 mL 1 mL

Dupã amestecare ºi o incubare de 5 minute la 25-37°C, se va citi absorbanþa probei ºi a standarduluila 520 nm, în cuve de 1 cm, faþã de martor.Modul de mãsurare: cu punct final

CALCUL:

(Aproba

/Astandard

) x Cstandard

=Cproba


În cazul urinei, rezultatele se înmulþesc cu factorulde diluþie.

LINEARITATE:

Intensitatea culorii este direct proporþionalã cuconcentraþia, pânã la 2,06 mmol/L (50 mg/L).

OBSERVAÞIE:

Se vor utiliza numai instrumente din materialplastic.Metoda este recomandatã diagnosticãrii in vitro.




54

PROTEINA TOTALÃMetoda ultrasenzitivã

Conþinut: 250mlNr. cod: 42051


Proteinele din urinã ºi lichid cefalo-rahidian înprezenþa molibdatului de pirogalol formeazã uncomplex de culoare roºie. Absorbanþa maximã aculorii complexului se va deplasa de la lungimeade undã de 467 nm la 598 nm.

LITERATURÃ:

Watanabe N., Kamei S., Okubo A., Yamanak M., Osawa S.,Makino K.: The Japanese Journal of Clinical Pathology 32suppl; 227 (1984)


Urinã < 200 mg/24hLiquor (LCR) 150-450 mg/L

REACTIVI:

Reactivi de culoare:

Roºu de pirogalol 0,015 g/LMolibdat de sodiu 0,06 g/L

Standard:Standard de albuminã/globulinã

PROBA:

Urinã sau lichid cefalo-rahidian (LCR).Urina sau LCR se foloseºte ca atare, nu necesitãprelucrare anterioarã. Dacã proba conþine hematiisau alte celule se va centrifuga, iar determinarea seefectueazã din supernatant. În cazul în careconþinutul de proteinã a probei depãºeºte domeniulde linearitate, proba se dilueazã cu ser fiziologic înproporþie adecvatã. Rezultatul obþinut se înmulþeºtecu diluþia.

EFECTUAREA ANALIZEI:Reactivii sunt gata pentru folosire.

Stabilitatea soluþiei:ferit de luminã, la 2-8°C, pânã la data indicatã peetichetã.

METODA DE LUCRU:

Martor Standard ProbaReactiv 2,5 mL 2,5 mL 2,5 mLApã distil. 50 µL - -Standard - 50 µL -Proba - - 50 µL

Dupã amestecare ºi o incubare de 10 minute la 25°C,se va citi valoarea absorbanþei la 600 nm, în cuvede 1 cm, faþã de martor. Citirea se va efectua într-un interval maxim de 60 minute. În cazul în carevaloarea obþinutã depãºeºte valoarea 0,500,determinarea se va efectua cu 20 µL de probã, saucu probã diluatã.Modul de mãsurare: cu punct final.

CALCUL:



Dacã se utilizeazã un volum de 20 µL de probã,rezultatul obþinut se înmulþeºte cu 2,5. Dacã dincauza conþinutului ridicat de proteinã, proba trebuiediluatã, rezultatul se înmulþeºte cu diluþia.

LINEARITATE:

Valoarea absorbanþei este direct proporþionalã cuconcentraþia în proteinã - în cazul unui volum de50 µL de probã - pânã la 1500 mg/L iar în cazulunui volum de 20 µL de probã, pânã la 4000 mg/L.

OBSERVAÞIE:

Faþã de alte metode, existã o legãturã întreconcentraþie ºi valoarea absorbanþei. Dupãdeterminare, cuvele se curãþã bine prin clãtire.Rezultatul determinãrii poate fi influenþat deprezenþa hemoglobinei sau a ionilor de fier saucupru.




55

PROTEINE (BIURET)Conþinut: 1x250mL 1x1000mLNr. cod: 41951 41991

Proteinele sunt polimeri genetic codificaþi aiaminoacizilor. Ele pot fi grupate în funcþie destructura lor molecularã ºi proprietãþile fizico-chimice. Rolul lor în organism este multiplu:proteine de structurã, enzime, hormoni, toxine,proteine de transport. Unele fracþii de proteine potfi separate ºi identificate prin electroforezã ºi reacþiichimice respectiv imunologice specifice.


Proteinele, în mediu bazic, în prezenþa sãrurilorde cupru, formeazã complexe colorate (reacþiaBiuret). Intensitatea culorii este proporþionalã cuconcentraþia proteinei din probã.

Cu++ + Protein OH- complex Cu-Protein

LITERATURÃ:

Gornall, A. et al.: J. Biol. Chem., 117, 751 (1949)Weichselbaum P.E.: Am. J. Path. 16, 40 (1946)


Ser : 62-80 g/L

REACTIVI:

Reactiv colorant:

Iodurã de potasiu 30 mmol/LTartrat de sodiu-potasiu 100 mmol/LSulfat de cupru 30 mmol/LHidroxid de sodiu 3.8 mol/L

Standard:Standard de albuminã bovinã

PROBA:

Ser nehemolitic.

EFECTUAREA ANALIZEI:Reactivul este gata preparat ºi se poate folosi pânãla data indicatã pe flacon.

METODA DE LUCRU:


Dupã amestecare ºi o incubare de 10 minute la 25°C(30-37°C), se va citi absorbanþa probei ºi astandardului la 546 nm (530-580 nm), în cuve de 1cm, faþã de martor.Modul de mãsurare: cu punct final

CALCUL:

(Aproba

/Astandard

) x Cstandard

=Cproba


LINEARITATE:

Intensitatea culorii este direct proporþionalã cuconcentraþia proteinei pânã la 100 g/L. Peste aceastãvaloare, proba se va dilua cu soluþie fiziologicã deNaCl , iar la calcul se va lua în considerare factorulde diluþie.

OBSERVAÞIE:

În cazul serurilor lipemice se va utiliza corecþia cublanc.Metoda este recomandatã diagnosticãrii in vitro.




56

RETI � COUNT

Colorant pentru determinarea reticulocitelor din sânge

În urma colorãrii supravitale, moleculele colorantului se leagã de resturile de reticulendoplasmatic

reticulocitar.

Prin determinarea numãrului de reticulocite, se pot trage concluzii asupra activitãþii eritropoetice

regenerative.

Metoda de lucru:

1. Se vor amesteca 50 µL sânge total cu 50 µL soluþie colorantã, dupã care amestecul se va incuba

la temperatura camerei.

2. Dupã aproximativ 20 de minute se va efectue frotiul.

3. Uscarea cel puþin 20 minute a lamei la aer.

4. Se vor numãra reticulocitele pe 1000 de eritrocite, proporþia lor se va obþine în �.

Valori normale:

8 - 20 ‰ reticulocite

Stabilitate: 12 luni




57

SLE � LATEX

Este un test latex rapid pentru punerea în evidenþã,respectiv determinarea cantitativã a anticorpilorantinucleoproteinici serici caracteristici lupusuluieritematos sistemic (LES). Aceºti anticorpi suntconsideraþi a fi responsabili pentru fenomenul LEobservat in vitro la 75-80% dintre bolnavii cu SLE.


În prezenþa anticorpilor anti - DNP, se realizeazãpunþi între particulele latex sensibilizate, suspensiaîºi pierde aspectul omogen, aglutinarea devenindobservabilã ºi cu ochiul liber.

LITERATURÃ:

Holman, H.R.,Kunkel, H.G.:Science, 126; 163 (1957)Miescher,P.A., Strassel,R.: Vax Sang, 2;283 (1957)Chapman,J.C.: Am. J. Med. Tech., 42; 154, (1976)Tuffanelli, D. L.: Arch. Derm., 106; 553, (1972)

CONÞINUTUL KITULUI:

• Suspensie de particule latex sensibilizate cuDNP obþinut din timus de viþel

• Control pozitiv• Control negativ• Plãci• Pipete de o singurã folosinþã

MOD DE PÃSTRARE, STABILITATE:

Nu se congeleazã. La temperatura de 2-8°C kituleste stabil pânã la data indicatã pe etichetã.Utilizabilitatea reactivului este confirmatã dereacþia adecvatã a celor douã seruri de control.

Alte materiale necesare, neincluse în kit:Ser fiziologic izotonic, eprubete, cronometru, pipetediluante

PROBA:Ser neinactivat. Serul poate fi menþinut 48 ore la 2-8°C sau timp mai îndelungat congelat la –20°C. Nuse vor folosi seruri hemolizate, lipemice sauinfectate.

METODOLOGIE:- reactivii se lasã sã se încãlzeascã la temperatura

camerei- reactivul SLE se omogenizeazã prin agitare- se efectueazã de fiecare datã ºi controlul pozitiv

� negativ- în cercul trasat pe lamã se pune o picãturã din

serul de cercetat nediluat. Pipeta se pãstreazãpentru amestecare

- se adaugã o picãturã de reactiv SLE- se amestecã cele douã picãturi cu partea platã a

pipetei, astfel ca sã acopere toatã suprafaþacercului

- se roteºte lama exact 2 minute- se observã apariþia � sau absenþa � aglutinãrii- Evaluarea de dupã uscarea picãturii dã rezultate

eronate- se spalã lama pentru examinarea urmãtoare.

INTERPRETARE:

Aglutinarea indicã prezenþa anticorpilor anti DNPlupus � specifice.Rezultat pozitiv poate sã aparã ºi în caz desclerodermie, artritã reumatoidã, dermatomiozitãprecum ºi în alte boli ale þesutului conjunctiv.




58

Syphilis RPR Newmarket

Set utilizat pentru determinarea calitativã rapidã asifilisului din ser sau plasmã.

PRINCIPIUL DETERMINÃRII:RPR utilizeazã particule de carbon învelite cu antigencardiolipinic pentru detectarea anticorpilor prezenþi înser sau plasmã, provenite de la persoanele infectate cuspirocheta Trepanoma pallidum.Probele ce conþin aceºti anticorpi dau o reacþie deaglutinare a particulelor de carbon, care apar ca niºteaglomerãri negricioase pe un fond alb. Rezultatul sepoate interpreta ºi cu ochiul liber.Probele care nu conþin anticorpi, prezintã o suprafaþãde reacþie uniformã, eventual cu un depozit punctiformîn mijlocul suprafeþei de reacþie.

ATENÞIE!Numai pentru diagnostizãri in vitro!Toate serurile de control au fost gãsite negative latestarea AgHBs, HIV. Totuºi, se va lucra cu ele ca ºicum ar prezenta pericol de transmitere al acestor agenþipatogeni.

CONÞINUTUL KITULUI:• Antigen RPR 5x2 mL• Control pozitiv• Control negativ• Flacon de dozare• Ac pentru flaconul de dozare• Plãci de reacþie (10 sau 50 buc.)

DEPOZITARE:Toþi reactivii se vor pãstra la temperatura de 4°C.Termenul de valabilitate este cel de pe etichetã.

METODA DE LUCRU:Înaintea începerii examinãrii, reactivii se vor lãsa latemperatura camerei. A nu se utiliza probe lipemice,hemolizate sau cu turbiditate crescutã.

DETERMINAREA CALITATIVÃ:

1. Plasaþi 50 µL de ser pe una din cercurile plãcii dereacþie.

2. Întindeþi proba cu vârful pipetei ca sã acopere uni-form toatã suprafaþa cercului.

3. Omogenizaþi prin scuturare conþinutul flaconului cuantigen RPR.

4. Ataºaþi acul la capãtul dozatorului ºi aspiraþiconþinutul flaconului cu antigen în dozator.

5. Întoarceþi dozatorul în jos ºi eliminaþi aerul din in-terior prin strângerea uºoarã a pereþilor flaconului.

6. Þinând dozatorul în poziþie verticalã, picuraþi pesteproba din cercul de reacþie o singurã picãturã dereactiv.

7. Se va þine placa de reacþie cu primele douã degetede la ambele mâini ºi se va balansa-înclina uºor timpde 8 minute pentru a omogeniza reactanþii.

8. Interpretaþi vizual reacþia.9. Se recomandã efectuarea de probe cu serurile

pozitive respectiv negative din kit, pentru a controlareacþia serului bolnav.

10. Antigenul neconsumat se va reintroduce în flaconulcu antigen RPR.

11. Dozatorul ºi acul se vor spãla ºi usca dupã fiecareutilizare.

Interpretarea rezultatelor:

Intens pozitiv: se observã aglomerãri mari de particule.

Pozitiv: se observã aglomerãri de particule mai puþindispersate ca în primul caz.

Slab pozitiv: se observã aglomerãri mai mici de particulepe un fond cenuºiu deschis.

Urmã de reactivitate: se observã urme de aglomerãride particule, care apar sub formã de cerc în mijloculzonei de reacþie sau dispuse la marginea cercului dereacþie.

Negativ: se formeazã o suprafaþã netedã, uniformã, deculoare gri, sau un cerc de particule ne-agregate îninteriorul zonei de testare.




59

TRIGLICERIDE ADPSReactiv lichid în doi componenþi


PRINCIPIUL DETERMINÃRII:Lipoprotein-lipaza descompune trigliceridele în glicerinãºi acizi graºi. Glicerina este fosforilatã de glicerinchinazãîn prezenþa ATP ºi a ionilor de magneziu. 3-fosfatul deglicerinã rezultat este oxidat de 3-fosfat-glicerin-oxidazaîn prezenþa oxigenului molecular. H

2O

2 împreunã cu

peroxidaza, fenolul ºi 4-aminoantipirina formeazã underivat roºu de chinonã, care poate fi mãsurat la 505nm.

Trigliceride + H2O lipoprotein-lipazã glicerinã + acizi graºi

Glicerinã + ATP glicerinchinazã 3-fosfat de glicerinã + ADP

3-fosfat de glicerinã+O2 3-fosfat - glicerin-oxidazã H

2O

2 + fosfat

de hidroxi-acetonã

2 H2O

2 + 4-aminoantipirinã + p-clorfenol peroxidazã

derivat roºu de chinonã + 4 H2O

LITERATUR Ã:

Buccolo G.,David M., Clin. Chem. 19, 476 (1973)Annoni G., Bottasso B.M., Ciaci D.,: lab J.J.Res. Lab.Med., 9, 115,(1982).


Bãrbaþi 0,68-1,88 mmol/L 0,6-1,6 g/lFemei 0,45-1,60 mmol/L 0,40-1,4g/l

REACTIVI:

1. Reactiv (R1)Tampon PIPES, pH=7,0 50 mmol/LMagneziu 15 mmol/LADPS 1 mmol/LATP 1,5 mmol/LLipoproteinlipazã 1800 U/LGlicerinchinazã 450 U/L3-fosfat-glicerin-oxidazã 1500 U/L

2. Reactiv (R2)4-amino-antipirinã 0,9 mmol/Lperoxidazã 500 U/LStandard de trigliceridã

PROBA:Ser nehemolizat sau plasmã heparinizatã.



Ferite de luminã ºi pãstrate la 2-8°°°°°C, reactivii suntstabili pânã la data indicatã pe ambalaj.


Prepararea amestecului de reactivi ºi stabilitatea lor:• Pregãtirea reactivului cu un singur component:

se vor dizolva douã pãrþi din reactivul R1 într-o partedin reactivul R2.

Stabilitate:20 - 25 °C 2 sãpt.2 - 8°C 2 luni




Dupã amestecare ºi o incubare de 5 minute la37°C se va citi absorbanþa probei la 546 nm (520-570 nm), în cuve de 1 cm, faþã de martor.

• Metoda de lucru cu doi componenþi:Martor Standard Proba

Apã distil. 15µL - -Standard - 15µL -Proba - - 15µLReactiv R1 1 mL 1 mL 1 mLDupã amestecare ºi incubare de 1 minut se maiadaugã:Reactiv R2 500µL 500µL 500µL

Dupã amestecare ºi o incubare de 5 minute la 37°Cse va citi absorbanþa probei la 546 nm (520 -570nm), în cuve de 1 cm, faþã de martor.

CALCUL:


LINEARITATE:

Metoda este linearã pânã la 11,4 mmol/L (10 g/l).




60

TRIGLICERIDE PAPReactiv lichid cu un component



Lipoprotein-lipaza descompune trigliceridele înglicerinã ºi acizi graºi. Glicerina este fosforilatã deglicerinchinazã în prezenþa ATP ºi a ionilor demagneziu. 3-fosfatul de glicerinã rezultat este oxidatde 3-fosfat - glicerin-oxidaza în prezenþa oxigenuluimolecular. H

2O

2 împreunã cu peroxidaza, fenolul

ºi 4-aminoantipirina formeazã un derivat roºu dechinonã, care poate fi mãsurat la 505 nm.




2O

2 + fosfat

de hidroxi-acetonã

2 H2O



LITERATUR Ã:

Buccolo G.,David M., Clin. Chem. 19, 476 (1973)Annoni G., Bottasso B.M., Ciaci D.,: lab J.J.Res. Lab.Med., 9, 115,(1982).


0.7 - 1.70 mmol/L (0.60-1.50 g/L)

REACTIVI:

1. Reactiv (R1)

Tampon PIPES, pH=7,20 50 mmol/LMagneziu 15 mmol/Lp- clorfenol 4 mmol/LATP 2,0 mmol/LLipoproteinlipazã 2000 U/LGlicerinchinazã 400 U/L3-fosfat-glicerin-oxidazã 1500 U/Lperoxidazã 2000 U/L4-amino-antipirinã 0,4 mmol/L

Standard de trigliceridã

PROBA:






METODA DE LUCRU:


Dupã amestecare ºi o incubare de 10 minute la 37°Cse va citi absorbanþa probei la 500 nm sau în cazulunei lãmpi de vaporizare de Hg la 546 nm, în cuvede 1 cm, faþã de martor.Coloraþia probei este stabilã timp de o orã.

CALCULARE:



LINEARITATE:

Absorbanþa este direct proporþionalã cu concentraþiatrigliceridelor pânã la 11.4 mmol/L (10 g/L). Pesteaceastã valoare, proba se va dilua cu soluþiefiziologicã de NaCl, iar rezultatul se va înmulþi cuvaloarea diluþiei.

OBSERVAÞIE:





61

TRIGLICERIDEConþinut: 12x10ml 15x20ml 20x100ml 9x50mlNr. cod: 40711 40721 40762 40731


Pregãtirea amestecului de reactivi: se va dizolvaconþinutul unui flacon de reactiv R2 în cantitateacorespunzãtoare de reactiv R1.


METODA DE LUCRU:

Martor Standard ProbaApã distil. 10µL - -Standard - 10µL -Proba - - 10µLAm. reactiv 1 mL 1 mL 1 mL

Dupã amestecare ºi o incubare de 6 minute la 37°Csau 20 minute la temperatura camerei se va citiabsorbanþa probei ºi a standardului la 505 nm (490nm - 550 nm), în cuve de 1 cm, faþã de martor.Coloraþia probei este stabilã timp de 30 minute.Metoda de mãsurare: cinetic (cu punct final).

CALCUL:

(Aproba

/Astandard

) x Cstandard

=Cproba


LINEARITATE:

Absorbanþa este direct proporþionalã cu concentraþiatrigliceridelor pânã la 20 mmol/L (7,8 g/L). Pesteaceastã valoare, proba se va dilua cu soluþiefiziologicã de NaCl, se repetã determinarea, iarrezultatul se va înmulþi cu valoarea diluþiei.

OBSERVAÞIE:



Lipoprotein-lipaza descompune trigliceridele înglicerinã ºi acizi graºi. Glicerina este fosforilatã deglicerinchinaza în prezenþa ATP ºi a ionilor demagneziu. 3-fosfatul de glicerinã rezultat este oxidatde 3-fosfat - glicerin-oxidaza în prezenþa oxigenuluimolecular. H

2O

2 împreunã cu peroxidaza, fenolul

ºi 4-aminoantipirina formeazã un derivat roºu dechinonã, care poate fi mãsurat la 505 nm.




2O

2 + fosfat

de hidroxi-acetonã

2 H2O



LITERATUR Ã:

Young D. et all. Clin. Chem. 21,5 (1975)Fossati P. et all. Clin. Chem. 28, 2077 (1982)


Bãrbaþi 0,65-1,85 mmol/L 0,5-1,6 g/lFemei 0,55-1,6 mmol/L 0,45-1,4g/l

REACTIVI:

1. Reactiv (R1)

Tampon PIPES, pH=6,9 50 mmol/Lp- clorofenol 2 mmol/L

2. Reactiv (R2)

Lipoproteinlipazã 150000 U/LGlicerinchinazã 800 U/L3-fosfat-glicerin-oxidazã 3000 U/Lperoxidazã 350 U/L4-aminoantipirinã 0,7 mmol/LATP 30 mmol/L

Standard de trigliceridã

PROBA: Ser sau plasmã heparinizatã, nehemolizat.




62

UREE (CARBAMIDA) U.V.Reactiv lichid în doi componenþi



Carbamida +H2O ureaza CO

2 + 2NH

4 +

2NH4

+ + 2α-cetoglutarat + 2NADH GLDH

2 L-glutamat + 2NAD+ + 2H2O

GLDH=glutamat dehidrogenaza

LITERATUR Ã:

Talke H., Schubert G.E. Klin. 1965, 43:174


Ser 2,50-7,49 mmol/L 0,15-0,4 g/LUrinã 20-35 g/24h

REACTIVI:

1. Reactiv (R1)

Tampon TRIS, pH=7,60 100 mmol/Lα-cetoglutarat 9 mmol/Lureazã 6500 U/LGLDH 1100 U/L

2. Reactiv (R2)

NADH 320 µmol/L

3. Reactiv (R3)

Standard de uree 8,32 mmol/L

OBSERVAÞIE:


PROBA:

Ser nehemolizat sau plasmã heparinizatã. Nu se vautiliza anticoagulant cu conþinut de fluoruri sau deioni de amoniu.




Prepararea amestecului de reactivi:• Pregãtirea reactivului cu un component: sevor dizolva trei pãrþi din reactivul R1 într-o partedin reactivul R2.Stabilitatea soluþiei:

20-25 °C 1 sãpt.2-8 °C 4 sãpt.


METODA DE LUCRU:• Metoda de lucru cu un singur reactiv:Amestec de reactivi 1 mLProba 10 µL

Dupã amestecare ºi o incubare de 60 secunde la37°C se va citi valoarea absorbanþei (A) la 340 nm(334 -365 nm), în cuve de 1 cm, faþã de apã distilatã,timp de 3 minute.• Metoda de lucru cu doi componenþi:Reactiv R1 1.5 mLProba 20 µL

Dupã amestecare ºi o incubare de 1 minut se maiadaugã:Reactiv R2 500 µL

Dupã amestecare ºi o incubare de 60 secunde la37°C se va citi valoarea absorbanþei (A) la 340 nm(334 -365 nm), în cuve de 1 cm, faþã de apã distilatã,timp de 3 minute.

CALCUL:



LINEARITATE:

Metoda este linearã pânã la 66,7 mmol/L (4g/L).Metoda este recomandatã diagnosticãrii in vitro.




63

CARBAMIDA (UREE)TEST UV

Conþinut: 15x20ml 9x50ml 20x100mlNr. cod: 40671 40631 40662

PRINCIPIUL DETERMI NÃRII:

Ureaza catalizeazã transformarea carbamidei înamoniu ºi CO

2. Enzima glutamat-dehirogenaza

(GLDH) transformã amoniul în prezenþa coenzimeiNADH ºi a 2-oxoglutarat �lui în glutamat, în timpce NADH se transformã în NAD.

Carbamida +H2O ureaza CO

2 + 2NH

4 +

2NH4

+ + 2oxoglutarat + 2NADH GLDH

2 L-glutamat + 2NAD+ + 2H2O

LITERATUR Ã:

Fawcett, J.K.J.Clin.Path. 13, 15 (1960)Chaney A.L. Clin. Chem. 8, 130 (1962).


Ser 2,47-7,47 mmol/L 0,15-0,4 g/LUrinã 20-35 g/24h

REACTIVI:

1. Reactiv (R1)

Tampon TRIS, pH=8,0 80 mmol/L

2. Reactiv (R2)

Ureazã 10000 U/LGLDH 16000 U/LNADH 0.3 mmol/L2-oxoglutarat 6,0 mmol/L

3. Reactiv (R3)

Standard de uree 8,32 mmol/L

PROBA:

Ser nehemolizat sau plasmã heparinizatã. Nu se vautiliza anticoagulant cu conþinut de fluoruri sau deioni de amoniu.Urinã diluatã cu apã distilatã în proporþie de 1:100.


Pregãtirea amestecului de reactivi: se va dizolvaconþinutul unui flacon de reactivi R2 în cantitateacorespunzãtoare de reactiv R1.


METODA DE LUCRU:

Standard ProbaAmestec de reactivi 1 mL 1 mLStandard 10µL -Proba - 10µL

Dupã amestecare ºi o preincubare de 30 secunde la37°C se va citi valoarea absorbanþei (A) la 340 nm(334 -365 nm), în cuve de 1 cm, faþã de aer sau apãdistilatã, iar peste 60 secunde din nou. Se va calculavariaþia absorbanþei pe minut (∆A/min).Metoda de mãsurare: cinetic (descrescãtor).

CALCUL:



LINEARITATE:

Metoda este linearã pânã la 65 mmol/L (3,9 g/L).Peste aceastã valoare, proba se va dilua cu o soluþiefiziologicã de NaCl, iar rezultatul se va înmulþi cufactorul de diluþie.

OBSERVAÞIE:

Ionii de fluor ºi amoniu perturbã determinarea.Metoda este recomandatã diagnosticãrii in vitro.




analizor instructiuni

Documents

Transcript of analizor instructiuni