Data ______ Lucrarea de laborator nr. 1

Subiect: MORFOLOGIA MICROORGANISMELOR. METODA MICROSCOPICĂ

DE DIAGNOSTIC.

Abilități:

Caracterizarea structurii laboratorului de microbiologie.

Respectarea regulilor de lucru şi comportare în laborator.

Descrierea morfologiei microorganismelor.

Enumerarea structurii şi a principiului de lucru a microscopului optic cu sistemul de imersie.

Prepararea frotiurilor din produse biologice şi culturi microbiene.

Colorarea frotiurilor prin metoda simplă şi compusă.

Microscopierea frotiurilor-test.

Materiale şi utilaje: microscop, sursa de lumină, aparataj, utilaj de laborator, veselă, platoul

laborantului cu: lame, anse, spirtieră, cuvă reniformă, suport pentru lame, hârtie de filtru, cutie

Petri; set de coloranți după Gram, soluție de albastru de metilen, Aujeszky, Ziehl- Nielsen;

Sarcina I. Reține pentru a fixa regulile de comportare și securitate în laboratorul de

microbiologie.

Aflați despre riscurile potențiale de securitate, pe care le presupune lucrul în laborator și

vizați registrul!

Sarcina II. Descrie compartimentele laboratorului de microbiologie:

Din variantele propuse selectează echipamentului potrivit al laboratorului de microbiologie

conform compartimentul. Autoclave verticale, dulap pentru uscat sticlăria spălată, etuve,

cutii pentru ambalarea materialelor de sterilizat.

Autoclave, baie de apă și de nisip, Balanțe tehnice, farmaceutice,

analitică, Agitator electromagnetic, Filtre sterilizante pentru

lichide, Recipiente pentru medii.

Anse, pense, tampoane, baghete de lemn, spirtieră, lame și lamele

la microscop, stativ pentru coloranți, microscop, lupă, centrifugă,

incubator, frigider, pipete cu vârfuri corespunzătoare, plăci din

material plastic cu godeuri pentru reacții serologice, eprubete,

plăci Petri, stative pentru eprubete, containere pentru materialul

contaminat, boxă de siguranță antiepidemică.

Sarcina III. a) Identifică și numerotează componentele structurale ale microscopului:

Ştiu Vreau să ştiu Am învățat

b) Enumeră regulile de lucru cu microscopul optic:

1.

2.

3.

4.

5.

Sarcina IV. a) Analizează imaginea şi identifică componentele celulei procariote.

_______________________________

_______________________________

_______________________________

_______________________________

_______________________________

_______________________________

_______________________________

b) Completează tabelul de mai jos,

menționând una din funcțiile acestor

structuri:

Sarcina IV. Pregătește frotiul/preparatul microscopic din material microbian cultural

conform metodei descrise.

a) Ansa este încălzită la roșu până și după ce este încărcată cu

produs microbian.

b) Etalarea. O ansă de produs microbian fluid este întinsă în strat

subțire, uniform pe o suprafață de 1-2 cm2 în centrul lamei.

Similar, o secțiune dint-o colonie bacteriană pe mediu solid,

prelevată cu acul, poate fi suspensionată într-o picătură de apă

în centrul lamei. La etalare ansa şi acul se manipulează cu

mișcări lente pentru a nu crea aerosoli contaminați la ruperi bruște ale peliculei de

lichid.

Elemente obligatorii a

procariotelor:

Funcțiile lor

Elemente facultative Funcțiile lor

c) Uscarea frotiului se face la temperatura camerei, poate fi grăbită în aer cald sau e platina

încălzită la 750C.

d) Fixarea face frotiul mai aderent de lamă, ameliorează colorabilitatea structurilor

celulare şi omoară microorganismele. Pentru studiul bacteriilor şi multor fungi este

uzuală - fixarea prin căldură. Lama, cu frotiul uscat

în sus, se înfierbântă trecând-o de 2-3 ori, cca 5

secunde, prin flacăra unui bec de gaz. Pentru studiul

protozoarelor este indicată fixarea cu alcool metilic.

e) Colorarea. (activitatea ce urmează)

Prezentarea rezultatelor:

Completează legenda figurii indicând etapele:

Sarcina V. Evidențiază morfologia microorganismelor

prin intermediul colorării, examenul microscopic cu imersie conform metodelor descrise.

a) Metoda prin colorație simplă, un singur colorant:

1. Se pune lama cu frotiul în sus pe stativul de colorare.

2. Se acoperă lama cu soluția albastru de metilen şi se lasă 1-3 minute.

3. Se spală lama cu apă de la robinet. Se absoarbe excesul de apă între două sugative ( hârtie

de filtru). Se usucă lama în poziție verticală şi se examinează la microscop.

b) Metodă din colorații diferențiale, după Gram

1. Se colorează cu soluție 0,5 % violet de gențiană sau cristal violet cca 60 secunde.

2. Se varsă colorantul şi, ținând lama înclinată, se picură soluție Lugol pentru spălarea

colorantului. Se acoperă lama cu soluție Lugol proaspătă şi se lasă să acționeze cca 30

secunde.

3. Se scurge soluția Lugol şi se spală frotiul cu alcool etilic de 960, se acoperă imediat frotiul

cu alcool etilic proaspăt şi se dă lamei mișcări alternative de înclinare până când preparatul

nu mai eliberează colorant. Se spală cu apă de robinet.

4. Se recolorează 1-2 minute cu soluție 0,1% de roșu neutru sau 30 de

secunde cu soluție 0,1% fucsină bazică.

5. Se spală, se absoarbe excesul de apă, se usucă şi se examinează cu

imersia.

Sarcina VI. a) Examinează microscopic microorganismele.

1. Se așeză preparatul pe masa port obiect a microscopului.

2. Se reflectă lumina în condensor (oglinjoara, sursa electrică).

3. Se focalizează preparatul cu obiectivul 10X, manipulând butonul mișcării

grosiere, se reglează lumina prin intermediul diafragmei. Se alege obiectivul 40X pentru

preparate uscate, 90X cu imersie.

4. Pe preparat se aplică o picătură de ulei de imersie, evitând atingerea frotiurilor cu bagheta

pentru ulei.

5. Se rotește revolverul şi se aduce în axul microscopului obiectivul cu imersie. Se coboară

tubul microscopului manipulând până la contactul lentilei frontale a obiectivului cu

picătura de ulei de pe lamă.

1.

2.

3.

4.

6. Privind prin ocular(e), se prinde imaginea, manipulând lent, progresiv, numai de jos în sus,

tubul microscopului prin butonul mișcării grosiere. Se focalizează imaginea prin butonul

mișcării fine.

b)Schițează grafic principalele forme de microorganisme.

_______ _______ ________ _______ _______ _______ ______

________ ________ _______ _______ _______ _______ ________

c) Definitivează rolul colorației în domeniul medical. În schema propusă, este indicată compoziția

chimică a peretelui celular la bacterii, conform

căreia, după metoda Gram, bacteriile se subîmpart

în cele Gram "+” și Gram”-”.

Rolul colorației Gram în domeniul medical

Diferențierea bacteriilor conform microscopiei

Sarcina VII. Realizează testul final

Concluzii