UNIVERSITATEA DE ŞTIINŢE AGRICOLE ŞI MEDICINĂ VETERINARĂ CLUJ-NAPOCA

ŞCOALA DOCTORALĂ

FACULTATEA DE MEDICINĂ VETERINARĂ

DANA-DORELA IRINCA

REZUMAT AL TEZEI DE DOCTORAT

CERCETĂRI PRIVIND UNII PARAMETRI BIOCHIMICI ÎN HEPATOPATII PARAZITARE LA OVINE ŞI BOVINE

CONDUCĂTOR ŞTIINŢIFIC:

Prof. Dr. Dr. h.c. ERONIM ŞUTEU

CLUJ-NAPOCA 2008

Cercetări privind unii parametri biochimici în hepatopatii parazitare la ovine şi bovine

I

REZUMAT

Lucrarea alcǎtuitǎ din 2 pǎrţi: prezentare bibliograficǎ şi cercetǎri proprii, cuprinde

13 capitole: 6 la partea întâi şi 7 capitole la partea a doua. Prezentarea bibliograficǎ

conţine date din literaturǎ cu privire la aspectele morfofiziologice ale ficatului,

parazitozele hepatice la rumegǎtoare, patogeneza, efectul de apǎrare al gazdelor şi

distrugere a paraziţilor, modificǎrile histologice şi biochimice în hepatopatiile parazitare

la rumegǎtoare. Cercetǎriile proprii sunt structurate în urmǎtoarele capitole:

1. Scopul lucrării

La rumegǎtoare, helmintozele hepatice- fascioloza, hidatidoza etc., evolueazǎ

obişnuit foarte grav şi uneori sunt greu diagnosticabile clinic şi prin metode de laborator.

Cercetǎrile paraclinice de laborator prin metode coproscopice, nu au o eficacitate ridicatǎ

în fasciolozǎ şi dicroceliozǎ, iar în hidatidozǎ nu existǎ metode uzuale de diagnostic

imunologic la animale în viaţǎ. Pentru suplinirea acestor neajunsuri am experimentat

valoarea complementarǎ a altor metode de laborator- biochimice, enzimatice etc., care sǎ

releve mai precis stǎrile de disfuncţii şi modificǎri hepatice induse de infestaţii

helmintice. Astfel, se vor putea depista mai timpuriu infestaţiile pentru a institui metodele

de tratament şi profilaxie. Cercetǎrile s-au efectuat pe taurine şi ovine.

2. Studiul infestaţiilor şi modificǎrile histologice hepatice la taurine

Cercetările au fost efectuate pe un număr de 227 bovine, înainte şi după

sacrificarea în condiţii normale, în 3 abatoare: S.C. EVEREST S.R.L. Cluj-Napoca, S.C.

AGRO-ARDEAL S.R.L., localitatea Orheiul Bistriţei, comuna Cetate, judeţul Bistriţa-

Năsăud şi Abatorul RIANA din localitatea Iclod, judeţul Cluj, în perioada 2005-2008.

Animalele au fost în stare clinică sănătoase şi în condiţii de întreţinere bună.

In cazul taurinelor au fost sacrificate 194 femele şi 33 masculi, cu vârste cuprinse

între 10 luni şi 13 ani, provenite din mai multe judeţe precum: 41 animale din jud. Alba;

40 animale din jud. Bistriţa- Năsăud; 49 animale din jud. Cluj; 39 animale din jud.

Maramureş; 30 animale din jud. Sălaj; 28 animale din jud. Suceava.

Cercetări privind unii parametri biochimici în hepatopatii parazitare la ovine şi bovine

II

De la fiecare animal sacrificat s-au recoltat individualizat: probe de sânge colectat

pe heparină, pentru obţinerea plasmei şi probe cu fragmente de ficat pentru examene

biochimice şi enzimatice. S-a examinat ficatul pentru identificarea helminţilor: vezica şi

canalele biliare pentru infestaţia cu trematode- Fasciola hepatica, Dicrocoelium

lanceolatum; parenchimul hepatic pentru metacestode- Echinococcus granulosus şi

Cysticercus tenuicollis. Structura infestaţiilor hepatice- numerică şi procentuală - la

taurine sacrificate, pe judeţe este prezentatǎ în tabelul 2.

Rezultalele examenelor morfo şi histopatologice hepatice au fost diferite,

dependente de speciile identificate şi de intensivitatea infestaţionalǎ. Aspecte

microscopice, lezionale au fost mai grave la cazurile cu infestaţii masive. Aspectele

lezionale hepatice corelate de infestaţia cu cei trei helminţi au relevat cele mai grave

forme în cazul infestaţiilor cu Fasciola hepatica- în formele cronice: angiocolită şi

hepatită interstiţială. In infestaţiile cu Dicrocoelium lanceolatum predominanţa leziunilor

a fost: hepatita interstiţială, angiocolita. Modificările hepatice cele mai grave au fost în

infestaţii masive şi asociate ale Fasciola hepatica şi Echinoccocus granulosus.

3. Cercetǎri asupra unor parametri biochimici sanguini şi tisulari hepatici în

helmintoze hepato-biliare la taurine

Din plasmă au fost determinaţi următorii constituenţi biochimici şi enzimatici:

glicemia, albumina, colesterolul total şi esterificat, bilirubina totală şi directă, precum şi

γ- glutamiltransferaza (GGT; E.C. 2.3.2.2.) şi fosfataza alcalină (PAL; E.C. 3.1.3.2.).

Probele de ţesut hepatic, în cantitate mai mare de 500 g au fost mărunţite, ţinute

la rece în ser fiziologic, presate pe hârtie de filtru, tocate şi omogenizate, fiind apoi

determinate γ- glutamiltransferaza (GGT) şi fosfataza alcalină (PAL).

Sunt descrise metodele de prelucrare a probelor sanguine şi hepatice precum şi

metodele analitice folosite.

Cercetări privind unii parametri biochimici în hepatopatii parazitare la ovine şi bovine

III

Cercetări privind unii parametri biochimici în hepatopatii parazitare la ovine şi bovine

IV

Valorile medii ale constituenţilor biochimici plasmatici şi din ţesutul hepatic la

taurinele luate în studiu sunt trecute în tabelul11. A fost calculatǎ deasemenea şi

semnificaţia statistică a diferenţelor (testul t Student) între valorile constituenţilor

biochimici plasmatici şi din ţesutul hepatic la taurinele luate în studiu.

Din analizele biochimice ale constituenţilor plasmatici, rezultatele sunt variabile,

dependente de tipul infestaţiei cu Fasciola hepatica, Echinococcus granulosus,

Dicrocoelium lanceolatum, de asocierile dintre paraziţi şi de categoria constituenţilor.

Valorile medii ale constituenţilor biochimici sanguini ale taurinelor luate în studiu

sunt reprezentate în graficele 5-9.

Rezultatele cercetărilor biochimice sanguine şi hepatice la taurine (n=227), în

infestaţii singulare sau asociate cu helminţi hepatici au condus la următoarele concluzii:

1. Monoparazitismul cu Fasciola hepatica a indus o creştere semnificativă

(p<0,05) a glicemiei (120,23±40,15 mg/dl) comparativ cu lotul neinfestat (105,88±38,12

mg/dl). Nivelul maxim al glicemiei (160,90±27,79 mg/dl) s-a înregistrat în infestaţiile

asociate cu Fasciola hepatica şi Dicrocoelium lanceolatum diferenţa fiind foarte

semnificativă statistic (p<0,001). Infestaţia cu Echinococcus granulosus a avut un efect

hipoglicemiant, coborând nivelul la 81,71±28,16 mg/dl, diferenţa faţă de lotul martor

fiind asigurată statistic (p<0,01).

2. Valorile medii ale albuminei plasmatice au înregistrat o scădere pronunţată faţă

de lotul martor (3,49±0,66 g/dl) în toate stările de parazitism hepatic. Astfel, în

infestaţiile unice cu Fasciola hepatica albuminemia a scăzut la 2,97±0,76 g/dl (p<0,001),

iar în cea cu Dicrocoelium lanceolatum la 2,94±0,44 g/dl (p<0,001). În stările de

parazitism asociate Echinococcus granulosus cu Dicrocoelium lanceolatum albumina

plasmatică a înregistrat valoarea de 2,95±0,49 g/dl, diferenţă asigurată statistic (p<0,001).

3. Colesterolul total a suferit creşteri asigurate statistic (p<0,05) în infestaţia unică

cu Fasciola hepatica (170,63±54,79 mg/dl) comparativ cu lotul martor (148,19±42,09

mg/dl). Scăderea valorii medii a colesterolului total s-a produs în infestaţiile unice cu

Echinococcus granulosus şi Dicrocoelium lanceolatum, ajungând la 72,61±15,17 mg/dl

(p<0,001), respectiv 82,47±19,03 mg/dl (p<0,001), dar şi în infestaţia asociată a celor doi

paraziţi 81,05±17,67 mg/dl (p<0,001).

Cercetări privind unii parametri biochimici în hepatopatii parazitare la ovine şi bovine

V

Cercetări privind unii parametri biochimici în hepatopatii parazitare la ovine şi bovine

VI

4. Valorile colesterolului esterificat au avut tendinţa de scădere de la 96,89±49,67

mg/dl la martori, la 67±13,81 mg/dl (p<0,001) în infestaţiile unice cu Fasciola hepatica,

41,29±12,39 mg/dl (p<0,001) în infestaţia cu Echinococcus granulosus şi 50,49±25,14

mg/dl (p<0,001) în infestaţia cu Dicrocoelium lanceolatum. Aceeaşi tendinţă a fost

remarcată şi în coparazitarea Fasciola hepatica cu Echinococcus granulosus în care

colesterolul esterificat a scăzut la 55,32±21,94 mg/dl (p<0,001), iar în infestaţia asociată

Echinococcus granulosus şi Dicrocoelium lanceolatum s-a înregistrat valoarea de

58,09±16,87 mg/dl (p<0,001).

5. Raportul între colesterolul esterificat şi colesterolul total a scăzut comparativ cu

al martorilor (0,66±0,28), valorile cele mai mici fiind în infestaţiile monoparazitare cu

Fasciola hepatica 0,42±0,10 (p<0,001) şi în infestaţia coparazitară Fasciola hepatica cu

Echinococcus granulosus 0,39±0,16 (p<0,001).

6. Bilirubina totală a crescut în infestaţiile cu Dicrocoelium lanceolatum şi în

infestaţia asociată Echinococcus granulosus cu Dicrocoelium lanceolatum de la

0,35±0,29 mg/dl la martori la 0,57±0,26 mg/dl (p<0,001), respectiv la 0,9±1,18 mg/dl

(p<0,001). În monoparazitismul produs de Echinococcus granulosus valoarea medie a

bilirubinei totale scade la 0,16±0,07 mg/dl (p<0,001), iar în infestarea asociată Fasciola

hepatica cu Echinococcus granulosus, valoarea medie a bilirubinei totale scade până la

valoarea de 0,17±0,07 mg/dl (p<0,001).

7. Bilirubina directă a scăzut în infestaţia cu Echinococcus granulosus de la

0,13±0,11 mg/dl la martori la 0,04±0,03 mg/dl (p<0,001) şi în coparazitarea Fasciola

hepatica cu Echinococcus granulosus la 0,05±0,03 mg/dl (p<0,001). In evoluţia asociată

a Echinococcus granulosus cu Dicrocoelium lanceolatum valoarea medie a bilirubinei

directe a crescut la 0,46±0,19 mg/dl (p<0,001).

8. Valorile medii ale γ- glutamiltransferazei au crescut comparativ cu ale martorilor

în cazul tuturor taurinelor infestate. Cele mai ridicate valori au fost în infestaţia

monoparazitară cu Fasciola hepatica (41,35±14,08 U/l) comparativ cu lotul martor

(20,62±6,46 U/l), diferenţă asigurată statistic (p<0,001). Aceeaşi tendinţă a fost remarcată

şi în evoluţia coparazitară Fasciola hepatica cu Echinococcus granulosus şi

Echinococcus granulosus cu Dicrocoelium lanceolatum, în care valoriile medii serice ale

GGT au fost de 36,03±22,53 U/l (p<0,001) şi respectiv de 29±7,80 U/l (p<0,001).

Cercetări privind unii parametri biochimici în hepatopatii parazitare la ovine şi bovine

VII

9. Fosfataza alcalină a înregistrat creşteri la toate taurinele infestate, valoarea cea

mai mare fiind semnalată la animalele infestate cu Echinococcus granulosus

364,42±77,04 U/l (p<0,001) comparativ cu a martorilor 196,55±106,89 U/l.

10. Activitatea enzimatică a parenchimului hepatic a fost caracterizată de creşteri ale

γ- glutamiltransferazei. Valori semnificativ mai ridicate (p<0,001) comparativ cu martorii

(2,86±1,18 U/g ţesut proaspăt) au fost înregistrate atât în infestaţiile unice cu

Echinococcus granulosus (3,91±1,05 U/g ţesut proaspăt) şi Dicrocoelium lanceolatum

(4,01±1,04 U/g ţesut proaspăt) cât şi în evoluţia lor asociată (3,99±1,10 U/g ţesut

proaspăt).

11. Activitatea enzimatică a fosfatazei alcaline în parenchimul hepatic a constat în

creşteri la toate taurinele infestate comparativ cu valoarea înregistrată la martori

(1,85±1,04 U/g ţesut proaspăt). Cea mai importantă creştere (p<0,001) a PAL s-a

semnalat în coparazitismul Fasciola hepatica, Dicrocoelium lanceolatum (3,79±1,03U/g

ţesut proaspăt).

4. Cercetări privind nivelul plasmatic şi tisular al unor microelemente în

helmintoze hepatice la taurine

Prelevarea sângelui s-a realizat în tuburi vidate cu heparină de la taurine înainte de

sacrificare. Din plasma obţinută au fost determinate următoarele microelemente : Zn,

Fe, Cu, Ca, Mg. După sacrificare, de la aceleaşi animale, au fost prelevate probele de

ţesut hepatic. Fiecare probă în cantitate de aproximativ 500 g a fost supusă unor etape

preliminarii de pregătire pentru determinarea microelementelor: Zn, Fe, Cu, Ca, Mg.

Sunt descrise metodele de prelucrare a probelor sanguine şi hepatice precum şi

metodele analitice folosite.

Valorile medii ale constituenţilor biochimici plasmatici şi din ţesutul hepatic la

taurinele luate în studiu sunt trecute în tabelul 21. Din calculul statistic al valorilor

elementelor minerale plasmatice analizate am constatat că rezultatele variază dependent

de tipul infestaţiei cu Fasciola hepatica, Echinococcus granulosus, Dicrocoelium

lanceolatum, de asocierile dintre paraziţi şi de tipul elementului mineral determinat.

Valorile medii pentru elementele minerale sanguine ale taurinelor luate în studiu

sunt reprezentate în graficele 14-18.

Cercetări privind unii parametri biochimici în hepatopatii parazitare la ovine şi bovine

VIII

Rezultatele cercetărilor cu privire conţinutul în microelemente a plasmei şi a

ţesutului hepatic la taurine (n=227), cu infestaţii singulare sau asociate cu helminţi

hepatici au condus la următoarele concluzii:

1. Valorile medii ale zincului plasmatic indică o scădere în toate infestaţiile cu

helminţi hepatici cu evoluţie singulară sau asociată, valorile minime caracterizând

infestaţiile cu Dicrocoelium lanceolatum 66,50±25,85 μg/dl (p<0,001), urmată de

coinfestaţia Fasciola hepatica şi Echinococcus granulosus 111,48±42,57 μg/dl şi

infestaţia monoparazitară cu Fasciola hepatica 129,12±58,41 μg/dl (p<0,001).

2. Valorile medii ale calciului plasmatic au scăzut faţă de martori (11,45± 1,04

mg/dl) în toate cazurile, diminuări semnificative observându-se în infestaţia cu

Dicrocoelium lanceolatum 7,80±1,03 mg/dl (p<0,001) şi în infestaţia asociată

Echinococcus granulosus cu Dicrocoelium lanceolatum 10,05±1,01 mg/dl (p<0,001).

3. Comparativ cu lotul martor (3.21± 0.61 mg/dl) magneziul plasmatic a prezentat

o tendinţă de scădere a valorilor medii la 2,80±0,51 mg/dl (p<0,001) în infestaţia

singulară cu Fasciola hepatica iar în infestaţia cu Dicrocoelium lanceolatum la 1,44±0,46

mg/dl (p<0,001). Infestaţiile coparazitare Fasciola hepatica şi Echinococcus granulosus,

au indus o scădere a magnezemiei la 2,59±0,42 mg/dl (p<0,001) şi la 2,07±0,46 mg/dl

(p<0,001) în infestaţia Echinococcus granulosus şi Dicrocoelium lanceolatum.

4. Sideremia a înregistrat scăderi în toate infestaţiile cu paraziţi hepatici. Faţă de

lotul martor (82.52± 21.40 μg/dl) în infestaţia cu Fasciola hepatica fierul plasmatic a

scăzut la 55,56±22,58 μg/dl (p<0,001) şi la 56,00±27,50 μg/dl, 54,00±13,56 μg/dl în

infestaţiile cu Dicrocoelium lanceolatum (p<0,001) şi Echinococcus granulosus

(p<0,001). In infestaţiile asociate valorile sideremiei au fost de 60,37±28,47 μg/dl

(p<0,001) în cazul Fasciola hepatica şi Echinococcus granulosus, de 59,08±15,24 μg/dl

(p<0,001) în cazul Echinococcus granulosus şi Dicrocoelium lanceolatum, iar în cazul

Fasciola hepatica şi Dicrocoelium lanceolatum, 44,01±14,72 μg/dl (p<0,001).

Cercetări privind unii parametri biochimici în hepatopatii parazitare la ovine şi bovine

IX

Cercetări privind unii parametri biochimici în hepatopatii parazitare la ovine şi bovine

X

5. Valorile medii ale cuprului plasmatic la taurinele infestate cu helminţi hepatici

au scăzut în toate cazurile comparativ cu martorii (127,78± 50,21 μg/dl), la 69,42±35,40

μg/dl (p<0,001) în infestaţia monoparazitară cu Dicrocoelium lanceolatum şi la

77,04±29,81 μg/dl (p<0,001) în evoluţia simultană a Fasciola hepatica şi Dicrocoelium

lanceolatum.

6. Valorile medii ale Zn din ţesutul hepatic comparativ cu lotul neinfestat

(30,0±6,26 μg/g ţesut proaspǎt), au scǎzut în infestaţia cu Echinococcus granulosus:

23,98±6,19 μg/g ţesut proaspǎt (p<0,001) şi în infestaţiile asociate Fasciola hepatica şi

Echinococcus granulosus: 22,86±8,46 μg/g ţesut proaspǎt (p<0,001) şi Echinococcus

granulosus şi Dicrocoelium lanceolatum: 20,05±4,02 μg/g ţesut proaspǎt (p<0,001).

7. Valorile medii ale Ca din ţesutul hepatic au scăzut faţă de martori (55,71±

16,35 μg/g ţesut proaspǎt), la 41,10±9.70 μg/g ţesut proaspǎt (p<0,001) în infestaţia cu

Echinococcus granulosus şi la 36,11±10,88 μg/g ţesut proaspǎt (p<0,001) în infestaţia

Echinococcus granulosus şi Dicrocoelium lanceolatum şi au crescut la 117,73±78,74

μg/g ţesut proaspǎt (p<0,001) în infestaţia cu Fasciola hepatica şi la 192,44±81,74 μg/g

ţesut proaspǎt (p<0,001) în infestaţia cu Dicrocoelium lanceolatum, la 99,45±49,98 μg/g

ţesut proaspǎt (p<0,001) în infestaţia cu Fasciola hepatica şi Echinococcus granulosus, şi

respectiv la 209,80±41,70 μg/g ţesut proaspǎt (p<0,001) în infestaţia Fasciola hepatica şi

Dicrocoelium lanceolatum.

8. S-au remarcat scăderi ale magneziului tisular în infestaţia cu Dicrocoelium

lanceolatum pânǎ la valoarea medie de 47,32±17,30 μg/g ţesut proaspǎt (p<0,001) şi de

63,01±15,61 μg/g ţesut proaspǎt (p<0,001) în infestaţia asociatǎ Fasciola hepatica şi

Dicrocoelium lanceolatum.

9. Valorile medii ale fierului hepatic au scǎzut în infestaţiile cu Dicrocoelium

lanceolatum la 4,38±1,67 μg/g ţesut proaspǎt (p<0,001) şi în infestaţia cu Echinococcus

granulosus şi Dicrocoelium lanceolatum la 4,07±1,53 μg/g ţesut proaspǎt (p<0,001),

comparativ cu lotul martor (24,56±4,91 μg/g ţesut proaspǎt).

10. Valorile medii determinate din ţesutul hepatic pentru cupru la taurinele

infestate cu helminţi hepatici indică o scădere în infestaţiile cu Dicrocoelium lanceolatum

pânǎ la 7,97±2,62 μg/g ţesut proaspǎt (p<0,001) şi Echinococcus granulosus 12,55±7,49

μg/g ţesut proaspǎt (p<0,001) şi în coparazitarea Fasciola hepatica şi Dicrocoelium

Cercetări privind unii parametri biochimici în hepatopatii parazitare la ovine şi bovine

XI

lanceolatum (5,58±1,51 μg/g ţesut proaspǎt) (p<0,001), comparativ cu lotul martor

(20,46±4,86 μg/g ţesut proaspǎt) şi o creştere în infestaţia Echinococcus granulosus şi

Dicrocoelium lanceolatum unde valoarea medie a fost de 22,36±8,94 μg/g ţesut proaspǎt

(p<0,001).

5. Dozarea proteinelor şi a globulinelor plasmatice la taurine

Pentru dozarea proteinelor serice s-a recoltat sânge de la trei bovine sacrificate în

Abatorul Riana din localitatea Iclod, judeţul Cluj. Una din bovine a prezentat o infestare

slabă spre medie cu Fasciola hepatica şi va fi identificată în continuare ca proba 1. Altă

bovină a fost neinfestată din punct de vedere al paraziţilor hepatici, cu ficat sănătos fară

urme de infestare veche şi se identifică în continuare ca proba 3, iar ultima bovină a

prezentat o infestare masivă cu Fasciola hepatica, identificată ca proba 6. Serul s-a

analizat pentru dozarea proteinelor prin două metode de electroforeză: în gel de

poliacrilamidă dodecil sulfat sodică şi pe acetat de celuloză, descrise deasemenea în

lucrare. Datorită lipsei de integrare şi citire automată a procentelor de distribuţie ale

fracţiunilor proteice ale serului sanguin prin SDS-PAGE, am folosit electroforeza pe

acetat de celuloză, analiză care a fost cantitativă şi s-au obţinut următoarele rezultate

transpuse în tabelul nr. 24:

Tabelul 24

Rezultatele analizei cantitative a electroforezei proteinelor serice pe acetat de celuloză

Proteine totale Albumine α1-

globuline α2-

globuline β-

globuline γ-

globuline Numărul probei

g/dl g/dl % g/dl % g/dl % g/dl % g/dl %

Raport A / G

Proba 1 Infestare slabă cu

F.h.

8.17 2.74 33.5 0.0 0.0 0.77 9.4 3.17 38.8 1.49 18.3 0.50

Proba 3 martor

8.75 3.42 39.1 0.49 5.6 0.74 8.5 2.65 30.3 1.44 16.5 0.64

Proba 6 Infestare

masivă cu F.h.

7.46 2.59 34.7 0.16 2.2 0.57 7.7 2.48 33.3 1.65 22.1 0.53

Cercetări privind unii parametri biochimici în hepatopatii parazitare la ovine şi bovine

XII

Analiza rezultatelor obţinute la electroforeza pe acetat de celuloză a fracţiunilor

proteice în înfestaţia cu Fasciola hepatica a condus la următoarele concluzii:

1. Proteinele totale scad cu gradul de infestare, cele mai mari valori s-au obţinut

la martor, taurina neinfestată, respectiv 8,75 g/dl, iar valoarea minimă s-a observat în

infestaţia masivă cu Fasciola hepatica, respectiv 7,49 g/dl. Deasemenea, se constată

scăderea albuminelor de la 3.42 g/ml la martor la 2.59 g/ml la taurina care a prezentat

infestare masivă cu Fasciola hepatica.

2. In ceea ce priveşte globulinele: α1- globulinele scad de la 0,49 g/dl la

taurinele neinfestate la 0,16 g/dl în cazul infestaţiei masive cu Fasciola hepatica şi lipsesc

în infestaţia slabă cu acelaşi parazit hepatic, valoarea α2- globulinelelor creşte în cazul

infestaţiei slabe cu Fasciola hepatica de la 0,74 g/dl la taurinele neinfestate, la 0,77 g/dl şi

scade la 0,57 g/dl în infestaţia masivă, iar în cazul γ- globulinelor se constată creşterea

lor cu creşterea gradului de infestare, de la 1.44 g/ml la martor la 1.65 g/ml la cazul care a

prezentat infestare masivă cu Fasciola hepatica.

6. Studiul infestaţiilor hepatice la ovine şi modificările biochimice,

enzimatice, minerale

Analizele biochimice s-au efectuat din plasmă şi din ţesut hepatic, prelevate

individualizat, la un număr de 14 ovine sacrificate în abatorul S.C. EVEREST S.R.L.

Cluj- Napoca, precum şi din plasma a 25 ovine care au provenit de la C.S.V. Caţa, jud.

Braşov la care s-a pus diagnosticul de parazitare prin test imunologic al fasciolozei prin

metoda ELISA (Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay) şi prin examen copro-

parazitologic pentru Fasciola hepatica şi Dicrocoelium lanceolatum. Sângele a fost

recoltat pe heparină şi s-a obţinut plasma care a fost analizată.

Din plasmă şi ţesut hepatic au fost determinaţi aceeaşi parametri ca la taurine.

După sacrificarea ovinelor şi examinarea ficatului, s-a constatat că din cele 14

ovine, 5 au fost infestate cu Fasciola hepatica, 4 au fost infestate cu Echinococcus

granulosus, una a fost infestată cu Fasciola hepatica şi Echinococcus granulosus ca

formă coparazitară şi 4 au fost neinfestate.

Din cele 25 ovine care au provenit de la C.S.V. Caţa, jud. Braşov la care s-a pus

diagnosticul de parazitare prin test imunologic al fasciolozei prin metoda ELISA şi prin

Cercetări privind unii parametri biochimici în hepatopatii parazitare la ovine şi bovine

XIII

examen copro-parazitologic pentru Fasciola hepatica şi Dicrocoelium lanceolatum,

structura infestaţiilor cu helminţi hepatici este urmǎtoarea: în urma testului imunologic

pentru antigeni de Fasciola hepatica, 5 ovine au fost neinfestate şi 20 au fost infestate cu

Fasciola hepatica. In urma examenului copro-parazitar, structura infestaţiilor a fost

urmǎtoarea: 15 ovine neinfestate, 6 ovine infestate cu Fasciola hepatica, 3 ovine infestate

cu Dicrocoelium lanceolatum şi una infestatǎ atât cu Fasciola hepatica cât şi cu

Dicrocoelium lanceolatum.

Valorile medii ale parametrilor constituienţilor biochimici şi ale elementelor

minerale din plasmă la ovine sunt prezentate în tabelul 31, iar valorile medii ale

parametrilor constituienţilor enzimatici şi ale elementelor minerale din ţesut hepatic la

ovine sunt prezentate în tabelul 32.

Rezultatele cercetărilor biochimice sanguine şi hepatice, dar şi a elementelor minerale

la ovine, în infestaţii singulare sau asociate cu helminţi hepatici au condus la următoarele

concluzii în ceea ce priveşte doar rezultatele senmificative obţinute:

1. Monoparazitismul cu Fasciola hepatica, infestaţia asociată cu Fasciola hepatica

şi Dicrocoelium lanceolatum au indus o creştere a glicemiei comparativ cu lotul

neinfestat (53,22±15,55 mg/dl). Infestaţia cu Echinococcus granulosus a avut un efect

hipoglicemiant.

2. Valorile medii ale albuminei plasmatice au înregistrat o scădere faţă de lotul

martor (3,30±0,91 g/dl) în toate stările de parazitism hepatic.

3. Colesterolul total a suferit scăderei asigurate statistic (p<0,01) în infestaţia cu

Echinococcus granulosus (41,25±22,34 mg/dl) comparativ cu lotul martor (69,11±19,12

mg/dl). Valorile colesterolului esterificat au avut tendinţa de scădere de la 36,44±16,63

mg/dl la martori, la 19,75±15,11 mg/dl (p<0,01) în infestaţia cu Echinococcus

granulosus.

4. Bilirubina totală şi directǎ au scăzut în toate infestaţiile studiate la ovine

comparativ cu martorii (0,60±0,45 mg/dl şi respectiv 0,20±0,07 mg/dl).

5. Valorile medii plasmatice ale γ- glutamiltransferazei au crescut comparativ cu

ale martorilor în cazul tuturor ovinelor infestate. Valori semnificative au fost în infestaţia

monoparazitară cu Fasciola hepatica (184,91±72,90 U/l) comparativ cu lotul martor:

45,67±14,77 U/l (p<0,001) şi în infestaţia cu Echinococcus granulosus: 104,50±78,16 U/l

Cercetări privind unii parametri biochimici în hepatopatii parazitare la ovine şi bovine

XIV

(p<0,001) şi în infestaţia Fasciola hepatica cu Dicrocoelium lanceolatum: 105,75±10,97

U/l (p<0,001).

6. Fosfataza alcalină plasmatică a înregistrat creşteri la toate ovinele infestate,

valori semnificative fiind în infestaţia cu Fasciola hepatica 232,14±64,51 U/l (p<0,001)

şi în infestaţia cu Echinococcus granulosus 142,75±80,53 U/l (p<0,001), în infestaţia

asociată Fasciola hepatica cu Dicrocoelium lanceolatum: 149,00±16,27 U/l (p<0,001),

comparativ cu a martorilor 101,22±15,42 U/l.

7. Activitatea enzimatică a parenchimului hepatic a fost caracterizată de creşteri

ale γ- glutamiltransferazei, comparativ cu martorii (2,82±1,88 U/g ţesut proaspăt).

8. Activitatea enzimatică a fosfatazei alcaline în parenchimul hepatic a crescut la

toate ovinele infestate comparativ cu valoarea înregistrată la martori (2,61±1,03 U/g ţesut

proaspăt) la 3,99±0,90 U/g ţesut proaspăt (p<0,05) la ovinele infestate cu Fasciola

hepatica, iar în infestaţia cu Echinococcus granulosus la 3,91±0,50 U/g ţesut proaspăt

(p<0,05).

9. Valorile medii ale zincului plasmatic indică o scădere în toate infestaţiile cu

helminţi hepatici, faţă de lotul martor (110,56±45,09 µg/dl).

10. Sideremia a înregistrat scăderi în toate infestaţiile cu paraziţi hepatici, cu

evoluţie singulară sau asociată. Faţă de lotul martor (110,44± 21.41 μg/dl) în infestaţia

singulară cu Echinococcus granulosus fierul plasmatic a scăzut semnificativ la

66,00±32,48 μg/dl (p<0,001).

11. Valorile medii ale cuprului, calciului şi magneziului plasmatic la ovinele

infestate cu helminţi hepatici au scăzut în toate cazurile comparativ cu martorii.

12. Valorile medii ale fierului hepatic au crescut semnificativ în infestaţia cu

Echinococcus granulosus la 32,29±2,22 μg/g ţesut proaspǎt (p<0,01), comparativ cu

ovinele din lotul martor unde valoarea tisulară a fierului a fost de 18,83±7,26 μg/g ţesut

proaspǎt .

13. Valorile medii determinate din ţesutul hepatic pentru zinc, cupru, calciu şi

magneziu la ovinele infestate cu helminţi hepatici indică o scădere în ambele tipurie de

infestaţie raportat la ovinele martor.

Cercetări privind unii parametri biochimici în hepatopatii parazitare la ovine şi bovine

XV

UNIVERSITY OF AGRICULTURAL SCIENCE AND VETERINARY MEDICINE

CLUJ-NAPOCA DOCTORAL SCHOOL

FACULTY OF VETERINARY MEDICINE

DANA-DORELA IRINCA

SUMMARY OF Ph. D. THESIS

RESEARCHES CONCERNING SOME BIOCHEMICAL PARAMETERS IN PARASITICAL HEPATOPATHIES

AT THE OVINE AND BOVINE

SCIENTIFIC ADVISER:

Prof. Dr. Dr. h.c. ERONIM ŞUTEU

CLUJ-NAPOCA 2008

Researches concerning some biochemical parameters in parasitical hepatopathies at the ovine and bovine

I

SUMMARY This paper is made from 2 parts: the bibliographical presentation and personal

researches comprising 13 chapters: 6 for the first part and 7 chapters at the second part.

The bibliographical presentation contains data from literature concerning the

morphophysiological aspects of the liver, the hepatic parasitose at the ruminants, the

pathogenesis, the defending effect of the hostess and the destroying of the parasites, the

histological and biochemical changes in the liver sickness with parasites at the ruminants.

The personal researches are structured in the following chapters:

1. The Aim of the Paper

At the ruminants, the hepatic helminthose- liver fluke, hydatidose etc. usually they

evolve very severely and sometimes they are very difficult to be diagnosticated clinically

and by laboratory methods. Paraclinical laboratory researches by coproscopic methods

don’t have a high efficiency in liver fluke, dicroceliosis, but in hydatydose don’t exist

usual methods of immunological diagnosis at the living animals. To compensate these

drawbacks we experienced the complementary value of some other laboratory

biochemical and enzymatical methods, which to reveal more precisely the disfunctions

status and the hepatic changes induced by helmintic infestations. So, we can find out

earlier the infestations in order to impose the treatement methods and prophylaxis. The

researches have been done on beeves cattle and ovine.

2. The Study of the Infestations and the Histological Hepatic Changes at Beeves

Cattle

The researches have been done on a number of 227 beeves cattle, before and after

slaughtering in normal conditions in 3 slaughter-houses: S.C. EVEREST S.R.L. Cluj-

Napoca, S.C. AGRO-ARDEAL S.R.L., place Orheiul Bistriţei, village Cetate, district

Bistriţa-Năsăud and Slaughter-houses RIANA, Iclod, district Cluj, during 2005-2008.

The animals have been in a healthy clinical status and in good attendance.

In the case of the beeves cattle there have been slaughtered 194 females and 33

males, aging between 10 months and 13 years, coming from more districts as it follows:

41 animals from the Alba district, 40 animals from the Bistriţa-Năsăud district, 49

animals from the Cluj district, 39 animals from the Maramureş district, 30 animals from

the Sălaj district, 28 animals from the Suceava district.

Researches concerning some biochemical parameters in parasitical hepatopathies at the ovine and bovine

II

From each slaughtered animal have been taken individualized: blood samples

collected on heparine in order to obtain plasma and samples with liver fragments for

biochemical and enzymatical analysis. The liver has been examined in order to identify

the helmints: the biliary vesicle and the biliary duct for the infestation with trematodes:

Fasciola hepatica, Dicrocoelium lanceolatum; hepatic parenchyma for metacestodes:

Echinococcus granulosus and Cysticercus tenuicollis. The structure of the hepatic

infestations- numerical and percentage- at the slaughtered beeves cattle, on districts is

presented in table 2.

The results of the morpho and histopathological hepatic exams have been

differend depending of the identified species and of the intensivity of the infestation. The

microscopic aspects lesional have been more severe on the cases with massive

infestations. The hepatic lesional aspects related to the infestation with the three helmints

revealed the most severe forms in the case of infestation with Fasciola hepatica- in

chronical forms: angiocolitis and interstitial hepatitis. In Dicrocoelium lanceolatum

infestations the main lesions were: the interstitial hepatitis, angiocolitis. The most severe

hepatic changes have been in massive infestations and associated of the Fasciola

hepatica and Echinococcus granulosus.

3. Researches upon some Blood Biochemical Parameters and Hepatic Tissue in the

Hepato-biliary Helminthose at the Beeves Cattle

From plasma there have been determined the next biochemical and enzymatical

constituents: glycemia, albumin, total and esterified cholesterol, total and direct bilirubin,

gamma-glutamyl transferase, alkaline phosphatase, zinc, iron, copper, calcium,

magnesium.

The hepatic tissue samples in quantity more than 500 g have been cut in pieces,

have been kept in cold in physiological serum, pressed upon a filter paper, minced and

homogenized, being then determined gamma-glutamyl transferase (GGT; E.C.2.3.2.2.),

alkaline phosphatase (ALP; E.C.3.1.3.2.), zinc, iron, copper, calcium, magnesium.

There are described methods of processing blood and hepatic samples as well as

the used analytical methods.

Researches concerning some biochemical parameters in parasitical hepatopathies at the ovine and bovine

III

Researches concerning some biochemical parameters in parasitical hepatopathies at the ovine and bovine

IV

Researches concerning some biochemical parameters in parasitical hepatopathies at the ovine and bovine

V

The mean values of the plasmatic biochemicals constituents and from hepatic

tissue at the beeves cattle taken into study are to be found in the table 11. Also it has been

calculated the statistical significance of the differences (Student’s t-test) between the

values of the plasmatical biochemical constituents and of the hepatic tissue at the studied

beeves cattle. From the biochemical analysis of the plasmatical constituents the results

vary depending on the type of infestation with Fasciola hepatica, Echinococcus

granulosus, Dicrocoelium lanceolatum and on the association with the parasites and the

constituents cathegory.

The mean values of the biochemical constituents of the blood of the studied

beeves cattle are represented in graphics 5-9.

The results of the blood biochemical researches and hepatic at the beeves cattle

(n=227) in singular infestations or associated with hepatic helmintes draw to the

following conclusions:

1. The monoparasitism with Fasciola hepatica induced a significant increase

(p<0,05) of the glycemia (120,23±40,15 mg/dl) comparing with the uninfested batch

(105,88±38,12 mg/dl). The maximum level of glycemia (160,90±27,79 mg/dl) has been

registered in associated infestations with Fasciola hepatica and Dicrocoelium

lanceolatum, the difference being very significant statistically (p<0,001). The infestation

with Echinococcus granulosus had a hypoglycemia effect lowering the level to the

81,71±28,16 mg/dl, the difference from the control sample being statistically assured

(p<0,01).

2. The mean values of the plasmatic albumin had registered a severe lowering

comparing to the control sample (3,49±0,66 g/dl) in all cases of hepatic parasitism. Thus,

in unique infestation with Fasciola hepatica the albumin values lowered to 2,97±0,76

g/dl (p<0,001), but with Dicrocoelium lanceolatum at 2,94±0,44 g/dl (p<0,001). In the

parasitism states associated Echinococcus granulosus with Dicrocoelium lanceolatum the

plasmatic albumin registered a value of 2,95±0,49 g/dl (p<0,001).

3. The total cholesterol has increased (p<0,05) in the unique infestation with

Fasciola hepatica (170,63±54,79 mg/dl) being compared with control sample

(148,19±42,09 mg/dl). The lowering of the mean value of the total cholesterol has been

produced in unique infestations with Echinococcus granulosus and Dicrocoelium

Researches concerning some biochemical parameters in parasitical hepatopathies at the ovine and bovine

VI

lanceolatum, reaching at 72,61±15,17 mg/dl (p<0,001), respectively 82,47±19,03 mg/dl

(p<0,001), but also in associated infestation of the two parasites 81,05±17,67 mg/dl

(p<0,001).

4. The values of the esterified cholesterol tended to decrease from 96,89±49,67

mg/dl at the control samples to the 67±13,81 mg/dl (p<0,001) at the unique infestations

with Fasciola hepatica, 41,29±12,39 mg/dl (p<0,001) in Echinococcus granulosus

infestation and 50,49±25,14 mg/dl (p<0,001) in Dicrocoelium lanceolatum infestation.

The same trend has been remarked in Fasciola hepatica and Echinococcus granulosus

coparasitism in which the esterified cholesterol has decreased at the 55,32±21,94 mg/dl

(p<0,001), but in the Echinococcus granulosus and Dicrocoelium lanceolatum associated

infestation has been registered the value of 58,09±16,87 mg/dl (p<0,001).

5. The ratio between the esterified and total cholesterol has been comparatively

decreased with the control samples (0,66±0,28), the least values being in monoparasitism

infestation with Fasciola hepatica 0,42±0,10 (p<0,001) and in coparasitism infestation

Fasciola hepatica with Echinococcus granulosus 0,39±0,16 (p<0,001).

6. The total bilirubin increased in Dicrocoelium lanceolatum infestation and in the

Echinococcus granulosus with Dicrocoelium lanceolatum from 0,35±0,29 mg/dl at the

control sample at the 0,57±0,26 mg/dl (p<0,001), respectively at the 0,9±1,18 mg/dl

(p<0,001). In the monoparasitism produced by Echinococcus granulosus the mean value

of the total bilirubin decreases at 0,16±0,07 mg/dl (p<0,001), but in the associated

infestation Fasciola hepatica with Echinococcus granulosus, the mean value of the total

bilirubin decreases to the value of 0,17±0,07 mg/dl (p<0,001).

7. The direct bilirubin decreased in the infestation with Echinococcus granulosus

from 0,13±0,11 mg/dl at the control samples at 0,04±0,03 mg/dl (p<0,001) and in

coparasitism Fasciola hepatica with Echinococcus granulosus at the 0,05±0,03 mg/dl

(p<0,001). In the associated evolution of Echinococcus granulosus with Dicrocoelium

lanceolatum the mean value of direct bilirubin increased at 0,46±0,19 mg/dl (p<0,001).

8. The mean values of γ- Glutamyl Transferase (GGT) have been comparatively

increased with those of the control samples in the case of all infestated beeves cattle. The

highest values have been in the monoparasites infestation with Fasciola hepatica

(41,35±14,08 U/l) comparing with the control sample (20,62±6,46 U/l), difference which

Researches concerning some biochemical parameters in parasitical hepatopathies at the ovine and bovine

VII

is statistically assured (p<0,001). The same trend has been remarked in the coparasites

evolution Fasciola hepatica with Echinococcus granulosus and Echinococcus granulosus

with Dicrocoelium lanceolatum in which the mean serum values of the GGT have been

of 36,03±22,53 U/l (p<0,001) and respectively of 29±7,80 U/l (p<0,001).

9. Alkaline phosphatase has been registered increases at all the infestated beeves

cattle, the biggest value being signaled at the animals infestated with Echinococcus

granulosus 364,42±77,04 U/l (p<0,001) comparatively with the control samples

196,55±106,89 U/l.

10. The enzymatic activity of the hepatic parenchyma has been characterized by

increases of the γ- Glutamyl Transferase. Significant higher values (p<0,001)

comparatively with control samples (2,86±1,18 U/g wet weight) has been registered both

in unique infestations with Echinococcus granulosus (3,91±1,05 U/g wet weight) and

Dicrocoelium lanceolatum (4,01±1,04 U/g wet weight) and also in their associated

evolution (3,99±1,10 U/g wet weight).

11. The enzymatic activity of the alkaline phosphatase in the hepatic parenchyma

has increast at all the infested beeves cattle comparatively with the registered value at the

control sample (1,85±1,04 U/g wet weight). The most important raising (p<0,001) of

ALP has been signaled in the Fasciola hepatica and Dicrocoelium lanceolatum

coparasitism (3,79±1,03U/g wet weight).

4. Researches Concerning the Plasmatic and Tissue Level of Some Microelements in

Hepatic Helminthose at Beeves Cattle

The collecting of the blood has been realised in vacuum tubes with heparin from

the beeves cattle before slaughtering. From the obtained plasma have been determined

the following microelements: Zn, Fe, Cu, Ca, Mg. After slaughtering, from the same

animals have been prevailed the samples of the hepatic tissue. Every sample in aprox.

500g in quantity has undergone some preliminary stages of preparations in order to

determine the microelements: Zn, Fe, Cu, Ca, Mg.

There have been described the metods of preparations of the blood samples and

hepatic ones as well as the used analitical methods.

The mean values of the plasmatical biochemical constituents and of the hepatic

tissue at the studied beeves cattle are to be seen in the table 21. From the statistical

Researches concerning some biochemical parameters in parasitical hepatopathies at the ovine and bovine

VIII

estimation of the plasmatical mineral values of the analised elements we have stated that

the results vary depending on the type of infestation with Fasciola hepatica,

Echinococcus granulosus, Dicrocoelium lanceolatum, by the association between the

parasites and by the type of the determined mineral element. The mean values for the

blood mineral elements of the studied beeves cattle are represented in the 14-18 graphics.

The results of the researches concerning the content in microelements of the

plasma and of the hepatic tissue at the beeves cattle (n=227) having singular or associated

with hepatic helmints infestations have drawn to the following conclusions:

1. The mean values of the plasmatic zinc indicates a decreasing in all infestations

with hepatic helmints with an associated or singular evolution , the lower value

characterising the infestations with Dicrocoelium lanceolatum 66,50±25,85 μg/dl

(p<0,001), followed by the coinfestation Fasciola hepatica and Echinococcus granulosus

111,48±42,57 μg/dl and the monoparasites infestation with Fasciola hepatica

129,12±58,41 μg/dl (p<0,001).

2. The mean values of the plasmatic calcium decreased against the control

samples (11,45± 1,04 mg/dl) in all cases, significant diminishes being observed in the

infestation with Dicrocoelium lanceolatum 7,80±1,03 mg/dl (p<0,001) and in the

associated infestation Echinococcus granulosus with Dicrocoelium lanceolatum

10,05±1,01 mg/dl (p<0,001).

3. Comparing with the control sample (3,21± 0.61 mg/dl) the plasmatic

magnesium has presented a trend of diminishing the mean values to the 2,80±0,51 mg/dl

(p<0,001) in the singular infestation with Fasciola hepatica but in the infestation with

Dicrocoelium lanceolatum at 1,44±0,46 mg/dl (p<0,001). The coparasites infestations

Fasciola hepatica and Echinococcus granulosus induced a decreasing of the magnesium

at the 2,59±0,42 mg/dl (p<0,001) and at 2,07±0,46 mg/dl (p<0,001) in the infestation

with Echinococcus granulosus and Dicrocoelium lanceolatum.

Researches concerning some biochemical parameters in parasitical hepatopathies at the ovine and bovine

IX

Researches concerning some biochemical parameters in parasitical hepatopathies at the ovine and bovine

X

4. The iron values has registered decreases in all infestations with hepatic

parasites. Against the control sample (82.52± 21.40 μg/dl) in the infestation with

Fasciola hepatica the plasmatic iron has decreased at 55,56±22,58 μg/dl (p<0,001) and at

56,00±27,50 μg/dl, 54,00±13,56 μg/dl in the infestations with Dicrocoelium lanceolatum

(p<0,001) and Echinococcus granulosus (p<0,001). In the associated infestations the iron

values have been of 60,37±28,47 μg/dl (p<0,001) in the case of Fasciola hepatica and

Echinococcus granulosus, of 59,08±15,24 μg/dl (p<0,001) in the case of the

Echinococcus granulosus and Dicrocoelium lanceolatum, and in the case of Fasciola

hepatica and Dicrocoelium lanceolatum 44,01±14,72 μg/dl (p<0,001).

5. The mean values of the plasmatic copper at the infested beeves cattle with

hepatic helmints have decreased in all cases comparativelly with the control samples

(127,78± 50,21 μg/dl), at 69,42±35,40 μg/dl (p<0,001) in the monoparasites infestation

with Dicrocoelium lanceolatum and at 77,04±29,81 μg/dl (p<0,001) in the simultaneous

evolution of Fasciola hepatica and Dicrocoelium lanceolatum.

6. The mean values of the zinc from the hepatic tissue comparativelly with the

uninfested sample (30,0±6,26 μg/g wet weight) have decreased in the infestation with

Echinococcus granulosus: 23,98±6,19 μg/g wet weight (p<0,001) and in the associated

infestations Fasciola hepatica and Echinococcus granulosus: 22,86±8,46 μg/g wet

weight (p<0,001) and Echinococcus granulosus and Dicrocoelium lanceolatum:

20,05±4,02 μg/g wet weight (p<0,001).

7. The mean values of the calcium from the hepatic tissue decreased against the

control samples (55,71± 16,35 μg/g wet weight) to the 41,10±9.70 μg/g wet weight

(p<0,001) in the infestation with Echinococcus granulosus at the 36,11±10,88 μg/g wet

weight (p<0,001) in the infestation with Echinococcus granulosus and Dicrocoelium

lanceolatum and increased at 117,73±78,74 μg/g wet weight (p<0,001) in the infestation

with Fasciola hepatica and at 192,44±81,74 μg/g wet weight (p<0,001) in the infestation

with Dicrocoelium lanceolatum, at 99,45±49,98 μg/g wet weight (p<0,001) in the

infestation with Fasciola hepatica and Echinococcus granulosus and respectively

209,80±41,70 μg/g wet weight (p<0,001) in the infestation Fasciola hepatica and

Dicrocoelium lanceolatum.

Researches concerning some biochemical parameters in parasitical hepatopathies at the ovine and bovine

XI

8. There have been remarked decreasings of the tissular magnesium in the

infestation with Dicrocoelium lanceolatum up to the mean value of 47,32±17,30 μg/g wet

weight (p<0,001) and of 63,01±15,61 μg/g wet weight (p<0,001) in the associated

infestation Fasciola hepatica and Dicrocoelium lanceolatum.

9. The mean values of the hepatic iron decreased in the infestation with

Dicrocoelium lanceolatum at 4,38±1,67 μg/g wet weight (p<0,001) and in the infestation

with Echinococcus granulosus and Dicrocoelium lanceolatum at 4,07±1,53 μg/g wet

weight (p<0,001) comparing with the control sample (24,56±4,91 μg/g wet weight).

10. The mean values determined from the hepatic tissue for copper at the infested

beeves cattle with hepatic helmints indicate a decreasing in the infestation with

Dicrocoelium lanceolatum to the 7,97±2,62 μg/g wet weight (p<0,001) and Echinococcus

granulosus 12,55±7,49 μg/g wet weight (p<0,001) and in the coparasitism of Fasciola

hepatica and Dicrocoelium lanceolatum (5,58±1,51 μg/g wet weight) (p<0,001)

comparing with the control sample (20,46±4,86 μg/g wet weight) and an increasing in the

infestation Echinococcus granulosus and Dicrocoelium lanceolatum where the mean

value was of 22,36±8,94 μg/g wet weight (p<0,001).

5. Determination of the Proteins and the Plasmatic Globulins at the Beeves Cattle

For the quantitative determination of the blood proteins, blood has been collected

from three bovine slaughtered in the Riana slaughter-house, from Iclod, Cluj district. One

of the bovine presented a slight to medium infestation with Fasciola hepatica and will be

identified as it follows as sample 1. An other bovine was uninfested from the point of

view of the hepatic parasites, with a healthy liver without any traces of old infestation

and it is identified as it follows as sample 3 and the last bovine presented a massive

infestation with Fasciola hepatica identified as sample 6. The serum has been analised

for quantitative determination through two methods of electrophoresis: sodium dodecyl

sulfate polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE) and electrophoresis on cellulose

acetate, described also in the paper. Because of the lack of the integration and

automatical reading of the percentage of distribution of the proteic fragments of the blood

serum by SDS-PAGE, we used electrophoresis on cellulose acetate, analise which was

quantitative and we obtained the following resultes which were writen in the table 24:

Researches concerning some biochemical parameters in parasitical hepatopathies at the ovine and bovine

XII

Table 24 The results of the quantitative analysis of the serum proteins electrophoresis on

cellulose acetate

Total protein Albumin α1-

globulin α2-

globulin β-

globulin γ-

globulin No. of sample g/dl g/dl % g/dl % g/dl % g/dl % g/dl %

A / G Ratio

Sample 1 Weak

infestation with F.h.

8.17 2.74 33.5 0.0 0.0 0.77 9.4 3.17 38.8 1.49 18.3 0.50

Sample 3 Control sample

8.75 3.42 39.1 0.49 5.6 0.74 8.5 2.65 30.3 1.44 16.5 0.64

Sample 6 Massive

infestation with F.h.

7.46 2.59 34.7 0.16 2.2 0.57 7.7 2.48 33.3 1.65 22.1 0.53

The analyses of the results obtained at the electrophoresis on cellulose acetate of

the proteic fractions in the infestation with Fasciola hepatica led to the following

conclusions:

1. The total proteins decrease with the state of infestations, the highest values

have been obtained at the control sample, the uninfested beef cattle, respectively 8,75

g/dl, and the minimum value has been observed in the massive infestation with Fasciola

hepatica, respectively 7,49 g/dl. Also it has been observed the decreasing of the albumin

from 3.42 g/ml at the control sample to the 2.59 g/ml at the beef cattle which presented a

massive infestation with Fasciola hepatica.

2. Concerning the globulins: α1- globuline decrease from 0,49 g/dl at the

uninfested beeves cattle to the 0,16 g/dl in the case of massive infestation with Fasciola

hepatica and they lack in the weak infestation with same hepatic parasite, the value of the

α2- globuline increases in the case of the weak infestation with Fasciola hepatica from

0,74 g/dl at the uninfested beeves cattle to the 0,77 g/dl and decreases at 0,57 g/dl in the

massive infestation, but in the case of the γ- globulines it is observed their increasing

with the increasing of the level of infestation from 1.44 g/ml at the control sample to the

1.65 g/ml in the case which presented massive infestation with Fasciola hepatica.

Researches concerning some biochemical parameters in parasitical hepatopathies at the ovine and bovine

XIII

6. The Study of the Hepatic Infestations at the Ovine and the Biochemical,

Enzymatical and Mineral Changes

The biochemical analyses have been done from plasma and from hepatic tissue

individually colected from a number of 14 slaughtered ovine in the slaughter-house S.C.

EVEREST S.R.L. Cluj- Napoca as well as from plasma of 25 ovine which came from

C.S.V. Caţa, Braşov district, which were diagnosticated by having parasites through

ELISA method (Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay) and through the

coproparasitological exam for Fasciola hepatica and Dicrocoelium lanceolatum. The

blood has been collected on heparine and the obtained plasma was analysed.

From plasma and hepatic tissue were determined the same parameters as at the

beeves cattle.

After slaughtering of the ovine and the examination of the liver there has been

observed that from the 14 ovine, 5 have been infested with Fasciola hepatica, 4 have

been infested with Echinococcus granulosus, one has been infested with Fasciola

hepatica and Echinococcus granulosus as a coparasitary form and 4 uninfested.

From the 25 ovine which came from C.S.V. Caţa, Braşov district which were

diagnosed for fasciolosis through ELISA method and through coproparasitological exam

for Fasciola hepatica and Dicrocoelium lanceolatum, the structure of the infestations

with hepatic helmints is as it follows: after the ELISA test for Fasciola hepatica

antigens, 5 ovine were uninfested and 20 were infested with Fasciola hepatica. After

coproparasitological exam the structure of the infestation was the following: 15

uninfested ovine, 6 infested with Fasciola hepatica ovine, 3 infested with Dicrocoelium

lanceolatum ovine and one both with Fasciola hepatica and with Dicrocoelium

lanceolatum.

The mean values of the parameters of the biochemical constituents and of the

mineral elements from plasma at the ovine are presented in table 31, and the mean values

of the parameters of the enzymatical constituents and of the mineral elements from the

hepatic tissue at the ovine are presented in table 32.

The resultes of the biochemical researches from blood and hepatic tissue but also

of the mineral elements at the ovine in the singulare infestations or associated with

Researches concerning some biochemical parameters in parasitical hepatopathies at the ovine and bovine

XIV

hepatic helmints led to the following conclusions concerning only the segnificant results

obtained:

1. The monoparasitism with Fasciola hepatica, the associated infestation with

Fasciola hepatica and Dicrocoelium lanceolatum induced a increase of the glycemia

comparing with the uninfested lot (53,22±15,55 mg/dl). The infestation with

Echinococcus granulosus had an hipoglycemia effect.

2. The mean values of the plasmatic albumin registred a decrease comparing to

the control sample (3,30±0,91 g/dl) in all types of hepatic parasitism.

3. The total cholesterol suffered decreasing statistically assured (p<0,01) in the

infestation with Echinococcus granulosus (41,25±22,34 mg/dl) comparing with the

control sample (69,11±19,12 mg/dl). The values of the esterified cholesterol tended to

decrease from 36,44±16,63 mg/dl at the control samples to the 19,75±15,11 mg/dl

(p<0,01) in the infestation with Echinococcus granulosus.

4. The total and direct bilirubine decreased at all the studied infestations at the

ovine comparing with the control samples (0,60±0,45 mg/dl and respectively 0,20±0,07

mg/dl).

5. The mean plasmatic values of γ- Glutamyl Transferase increased

comparatively with the control samples in the case of all infested ovine. Significant

values were in the monoparasitary infestation with Fasciola hepatica (184,91±72,90 U/l)

comparatively with the control sample: 45,67±14,77 U/l (p<0,001) and in the infestation

with Echinococcus granulosus: 104,50±78,16 U/l (p<0,001) and in infestation Fasciola

hepatica and Dicrocoelium lanceolatum: 105,75±10,97 U/l (p<0,001).

6. The plasmatic alkaline phosphatase registered increasings at all the infested

ovine, significant values being in the infestation with Fasciola hepatica 232,14±64,51

U/l (p<0,001) and in the infestation with Echinococcus granulosus 142,75±80,53 U/l

(p<0,001), in the associated infestation Fasciola hepatica and Dicrocoelium lanceolatum:

149,00±16,27 U/l (p<0,001), comparatively with the control samples 101,22±15,42 U/l.

7. The enzymatic activity of the hepatic parenchima was characterized by

increasings of the γ- Glutamyl Transferase comparatively with the control samples

(2,82±1,88 U/g wet weight).

Researches concerning some biochemical parameters in parasitical hepatopathies at the ovine and bovine

XV

8. The enzymatic activity of the alkaline phosphatase in the hepatic parenchima

increased at all infested ovine comparatively with the registered value at the control

samples (2,61±1,03 U/g wet weight) at the 3,99±0,90 U/g wet weight (p<0,05) at the

infested ovine with Fasciola hepatica, and in the infestation with Echinococcus

granulosus at 3,91±0,50 U/g wet weight (p<0,05).

9. The mean values of the plasmatic zinc indicate a decreasing in all infestations

with hepatic helmints comparing with control sample (110,56±45,09 µg/dl).

10. The plasmatic iron registered decreasings in all infestations with hepatic

parasites with a singular or associated evolution. Comparing with control sample

(110,44± 21.41 μg/dl), in the singular infestation with Echinococcus granulosus the

plasmatic iron decreased significantelly at 66,00±32,48 μg/dl (p<0,001).

11. The mean values of the copper, calcium and plasmatic magnesium at the

infested ovines with hepatic helmints decreased in all cases comparatively with the

control samples.

12. The mean values of the hepatic iron increased significantelly in the infestation

with Echinococcus granulosus at 32,29±2,22 μg/g wet weight (p<0,01) comparatively

with the control sample ovine where the tissular value of iron was of 18,83±7,26 μg/g

wet weight.

13. The mean values determined from the hepatic tissue for zinc, copper,

calcium and magnesium at the ovine infested with hepatic helmints indicate a decreasing

in both types of infestations reported at the control sample ovine.

Researches concerning some biochemical parameters in parasitical hepatopathies at the ovine and bovine

XVI