Lab 2 Lab 2 BBiochimie iochimie clinicclinicăă

Explorarea metabolismului Explorarea metabolismului lipidiclipidic

Clase de lipide sericeClase de lipide serice

Colesterol Colesterol – EsterificatEsterificat– NeesterificatNeesterificat

TriglicerideTrigliceride FosfolipideFosfolipide Acizi graşi liberiAcizi graşi liberi

Lipidele sericeLipidele serice Grup heterogen de compuşi chimiciGrup heterogen de compuşi chimici Sunt insolubile in apă şi solubile în solvenţi Sunt insolubile in apă şi solubile în solvenţi

organiciorganici RolRol

– Energetic (TG, AGL)Energetic (TG, AGL)– Funcţional (acizi biliari, hormoni steroizi, PGL, Funcţional (acizi biliari, hormoni steroizi, PGL,

leucotriene)leucotriene)– Structural (fosfolipide)Structural (fosfolipide)

~~ 15-20% din greutatea unui adult normal 15-20% din greutatea unui adult normal conformatconformat

Combinaţii ale AG cu alcooli sau amineCombinaţii ale AG cu alcooli sau amine

Determinarea lipidelorDeterminarea lipidelor

Se poate faceSe poate face– Dozarea lipidelor totale sau a fracţiunilor Dozarea lipidelor totale sau a fracţiunilor

de LPde LP– Separarea LPSepararea LP

Lipide totaleLipide totale

Test cu valoarea orientativăTest cu valoarea orientativă VN: 400-800mg/dlVN: 400-800mg/dl VC: VC: dislipidemii primare,DZ,

mixedem, sdr. nefrotic, alcoolism cronic, pancreatită acută

VS:hipertireoză, stări carențiale, infecții acute, anemii grave

Metodă de determinare: fotometrică

Colesterol totalColesterol total

Parametru important in etiologia Parametru important in etiologia aterosclerozeiaterosclerozei

2/3 este esterificat2/3 este esterificat VN:VN:

– La adulti:La adulti: risc scăzut 140 – 200mg/dl (3,6 – 5,1mmol/l)risc scăzut 140 – 200mg/dl (3,6 – 5,1mmol/l) limită de risc: 200 – 240 mg/dl (5,18 – 6,20 mmol/l)limită de risc: 200 – 240 mg/dl (5,18 – 6,20 mmol/l) risc crescut: peste 240 mg/dl (peste 6,2 mmol/l)risc crescut: peste 240 mg/dl (peste 6,2 mmol/l)

– La copii:La copii: risc scăzut: < 170 mg/dl (< 4,40 mmol/l)risc scăzut: < 170 mg/dl (< 4,40 mmol/l) limita de risc: 170 – 200 mg/dl (4,40 – 5,16mmol/l)limita de risc: 170 – 200 mg/dl (4,40 – 5,16mmol/l) risc crescut: peste 200 mg/dl (5,18 mmol/l)risc crescut: peste 200 mg/dl (5,18 mmol/l)

Colesterol totalColesterol total

VC: VC: obstrucții biliare, ciroză portală, hepatite acute, sdr. nefrotic, pancreatită cronică, DZ, hipotireoză, hipercolesterolemie familială, dislipidemii

VS:hepatopatii grave, uremii, stări septice, hipertireoză, boala Tangier(deficienta familiala a alfalipoproteinelor-HDL), anemii, macroglobulinemie Waldenström, analfalipoproteinemie, stării carențiale

Metodă de determinare: fotometrică/enzimatică

Colesterol liber (neesterificat)

VN: VN: <<75mg/dl75mg/dl

VC: VC: obstrucții biliare, ciroză portală, colangite, pancreatită acută, hipercolesterolemie familială

VS: ca și colesterolul total

Metodă de determinare: fotometrică/enzimatică

Colesterol esterificat

VN: 60-100mg/dlVN: 60-100mg/dl

VC: VC: ca și colesterolul total

VS: ciroză hepatică, stări septice

Metodă de determinare: fotometrică cuplată cu calcul matematic

Dozarea colesterolului totalDozarea colesterolului total Metoda enzimatică colorimetrică

– determinarea cantitativă specifică a colesterolului total

Esteri colesterol + H2O –colesterolesteraza → colesterol liber+ acizi grași

Colesterol liber total+ O2 –colesteroloxidaza → 3-colestenona + H2O2

2 H2O2+ fenol + 4-aminoantipirina (AAP)-peroxidaza → chinonimina(roșu)

Incubare 5 minute la 37°C (stabil 1 h) Se citește la λ=546 nm Es și Ep

Dozarea colesterolului totalDozarea colesterolului total

EpEp Colesterol total = x CsColesterol total = x Cs

EsEs

UM= mmol/l sau mg/dlUM= mmol/l sau mg/dl

Transformarea mg/dl in mmol/lTransformarea mg/dl in mmol/l

Mmol/l = mg/dl x 10/M colesteroluluiMmol/l = mg/dl x 10/M colesterolului

M colesterol = 386M colesterol = 386

Fosfolipide Fosfolipide

VN: 160-280mg/dlVN: 160-280mg/dl

VC:VC:ciroză biliară, obstrucții biliare, sdr.nefrotic, DZ, hipercolesterolemie familială

Metodă de determinare: fotometrică/enzimatică

Trigliceridele Trigliceridele Valori normale:Valori normale:

– risc scăzut – sub 150 mg/dl (1,70 mmol/l)risc scăzut – sub 150 mg/dl (1,70 mmol/l)– risc mediu – 150 – 200 mg/dl (1,70 – 2,25 risc mediu – 150 – 200 mg/dl (1,70 – 2,25

mmol/l)mmol/l)– risc crescut – 200 – 500mg/dl (2,25 – 5,6mmol/l)risc crescut – 200 – 500mg/dl (2,25 – 5,6mmol/l)– risc foarte crescut – peste 500 mg/dl (peste 5,6 risc foarte crescut – peste 500 mg/dl (peste 5,6

mmol/l)mmol/l) VC: HLP tip I,V; VC: HLP tip I,V; dislipidemii, pancreatită,

sdr. nefrotic, microvasculite, DZ decompensat, hipotireoză/mixedem

VS: stări carențiale, hipertireoză, lipodistrofii, anemii grave

Metodă de determinare: enzimatică /fotometrică

Acizi graşi liberi (AGL,FFA)Acizi graşi liberi (AGL,FFA) substrat energetic eliberat din țesuturile de

depozit excesul transportat în plasmă de albumină VN: <20mg/dl VC: vasculite, IMA, infarct pulmonar acut,

pancreatită acută, pneumonii, colangite, colecistită, peritonită peritonită

VS:VS:stări carențiale Metodă de determinare: enzimatică

/fotometrică/ electroforetică

Lipoproteinele Lipoproteinele

agregate macromoleculare complexe, solubile în apă autosamblarea necovalentă a diverselor

categorii de lipide cu proteine specifice(apoproteine-ApoP)

Rol: – 1.transportă moleculele de lipide de la locul de

absorbție (intestinul subțire) sau sinteză (ficatul) la locurile de utilizare și stocare (țesuturile periferice)

– 2. reglatori ai metabolismului lipidic

Separarea lipoporteinelorSepararea lipoporteinelor

Metoda de referință – Ultracentrifugarea

probe centrifugate până la 18 ore la 10°C, 40 000 rpm chilomicronii, VLDL, LDL plutesc la suprafața tubului HDL, proteinele plasmatice sedimentează la baza

tubului permite separarea componentelor și estimarea

consecutivă a fiecărei frațiuni de colesterol

!!! Nu se utilizează de rutină în laboratoare – Timpul îndelungat de prelucrare – Costuri ridicate

Separarea LP prin ELFOSepararea LP prin ELFO În funcție de sarcina lor

electrică, în câmp electric lipoproteinele vor migra, producându-se o separare clară (în ordinea scăderii mobilității) acestora în 4 fracțiuni: – α-LP: HDL– pre-beta-LP: VLDL– beta-lipoproteine: LDL– chilomicroni: START

Valori normale– Alfa: 20-30%– pre-Beta: 5-17%– Beta: 50-70%– Chilomicroni: 0-1%

α1-lipoproteinele (LP cu densitate mare, HDL)

transportorul "colesterolului bun", antiaterogen Metodă:

– procentaj relativ din lipidogramă în gel de agaroză– determinare indirectă enzimaticăa colesterolului din HDL

(după blocarea selectivă a LP cu ApoB100) Valori normale

– bărbați: 20-25% sau >35 mg/dL– femei: 25-30%sau >45 mg/dL

Valori patologice/scăzute: – primar: boala Tangier (epurare accelerată a LP cu

ApoAII)– secundar: fumători, sedentari/obezi, femei

postmenopauză, alcoolici

β-lipoproteinele (cu densitate mică, LDL)

Principalul transportor de colesterol esterificat din organism, cea mai aterogenă dintre LP

Metodă: – procentaj relativ din lipidogramă – determinare directă (specifică/imunologică)– determinare din calcul (formula Friedewald) cu ApoB100

Valori normale: – bărbați: 60-70%sau <155mg/dL– femei: 50-70% sau <155 mg/dL

Valori patologice/crescute (dislipidemiile cu hipercolesterolemie): hipercolesterolemia familială sau cea poligenică, hipotiroidie, afecțiuni hepato-biliare, tratamente hormonale (anticonceptive, corticosteroizi

Dozarea LDLDozarea LDL

Ecuația FriedewaldLDL=CT-HDL-(TG/5)

Ecuația corectă doar atunci când:– nivelul TG <400mg/dl (4,5 mmol/l)– nu sunt prezenți chilomicroni– proba nu conține beta-VLDL– necesită probe recoltate după o perioadă de

post !!! Estimarea LDL în afara acestori

limitări duce la subestimări semificative ale acestuia.

Apoproteina AI (ApoAI)

componentă proteică majoritară a HDL factor de prognostic pozitiv în

ateroscleroză, mai important decât HDL

Metoda: nefelometrică Valori normale:

– bărbați: 100-200 mg/dL– femei: 110-225 mg/dL

Apoproteina B (ApoB)

componentă proteică unică a LDL factor de prognostic negativ în

ateroscleroză, chiar mai important decât LDL

Metoda: nefelometrică Valori normale:

– bărbați: 65-135 mg/dL– femei: 60-115 mg/dL

Lipoproteina X (LP-X)

lipoproteină patologică, discoidală, conținând lipide biliare, bogată în fosfolipide, colesterol liber și diferite apoproteine

Metodă:– electroforetică (migrează catodic în gel de agaroză)– imunologică

Valori:– normal absentă în serul persoanelor sănătoase– prezentă exclusiv în serul bolnavilor cu colestază

Lipoproteina(a)[LP(a)]

factor de risc independent pentru boala ateroclerotică

structură identică cu LDL+Apo(a) similitudine structuralăcu

plasminogenul factor de risc lipidic și trombotic Metodă: electroforetică/nefelometrică Valori normale: <30 mg/dL

Tulburările metabolismului Tulburările metabolismului lipidiclipidic

Dislipidemiille - stări însoțite de modificări cantitative/calitative ale lipoproteinelor

Hiperlipidemiile– stări patologice caracterizate prin creștere

concentrației TG și/sau colesterolului peste limitele acceptate ca normale pentru vârsta, sexul și starea de sănătate a persoanei

Hipercolesterolemia izolată:↑LDL Hipertrigliceridemia: ↑VLDL, mai rar

↑Chilomicroni Hiperlipidemia combinată: ↑LDL,↑VLDL,

mult mai rar ↑IDL

Clasificarea fenotipică a Clasificarea fenotipică a hiperlipoproteinemiilorhiperlipoproteinemiilor

Tipul Chilomicroni VLDL IDL LDL

I+++ N - N

IIa - N - ++

IIb - ++ - ++

III + +/- ++ N

IV - ++ - N

V ++ ++ - ↓

Clasificarea HLP prin pastrarea Clasificarea HLP prin pastrarea serului la 4serului la 4°°C/12hC/12h

Diagnosticul DLPDiagnosticul DLP

I-a etapă: Colesterol total + TG II-a etapă:

– analiza Colesteroluluidinlipoproteineleserice: LDL şi HDL

III-a etapă: – Lipidograma (determinarea proporţiei fracţiunilor

lipoproteice)– Diagnosticul diferenţial al dislipidemiilor mixte

(tipurile IIb, III şi V)– Identificarea prezenţei în cantitate

crescutăLp(a)