Lucrarea de laborator N.18TEMA: MICROBIOLOGIA I DIAGNOSTICUL DE LABORATOR AL SPIROCHETOZELOR1. Caracteristica general a spirochetelor, clasificarea i rolul lor n patologia uman.Spirochetele bacterii helicoidale (form de tirbuon), flexibile i mobile (fibrile interne), rspndite n natur, comensale ale mucoaselor umane. Familii : Spirochaetaceae, Leptospiraceaen aceste 2 familii intr bacterii saprofite i patogene. Din saprofite - Spirochaeta i Cristispira.Spirochetele patogene triesc pe substraturi moarte, n bazine poluate, n intestinul animalelor pochiloterme. Dupa Romanovski-Giemsa se coloreaz n albastru.Spirochete patogene (genuri): Treponema, Borrelia, Leptospira.-Agentul patogen al sifilisului-Agentul framboesiei (seamana cu sifilisul, dar se transmite extragenital)-Agentul bajelului (seamana cu sifilisul, pe cale menajera)-Agentul pintei-Agenii patogeni ai tifosului recurent (epidemin, endemic-Agentul patogen al bolii Lyme2. Caracteristicele morfobiologice ale agentului cauzal al sifilisului.Familia SpirochaetaceaeGenul TreponemaSpecii : - T.pallidum (patogen) subspecii (variante): T.pallidum pallidum (agentul sifilisului)T.pallidum endemicum (agentul bejelului, sifilis endemic nevenerian leziuni cutanate)T.pallidum carateum (agentul pintei/carate, nevenerian, America Central i de Sud) T. pertenue (agentul pianului, maladie cutanat, nevenerian, zone tropicale i subtropicale)Treponeme comensale:Orale (T.denticola, T.orale, etc)Genitale (T.phagedenis, T.refringens, etc)CARACTERE MORFOLOGICE I TINCTORIALET.pallidum bacterie fin, helicoidal, cu 8-14 spire regulate i capetele ascuite, mobil cu micri de flexie, nurubare i translaie. Gram -.Evidenierea : - preparate native (microscopul cu fond negru, contrast de faz) - Nu se coloreaz dup Gram - Romanovsky-Giemsa roz-pal - Impregnare cu sruri de argint (filamente negre-brune pe fondul galben) - Frotiuri Burri necolorate pe fondul negru CARACTERE DE CULTUR

Cultivarea T.pallidum in vitro imposibil

Pasaje succesive n testicule de iepure (tulpina Nichols de T.pallidum). Suspensii de astfel de treponeme supravieuiesc 72 ore n mediul Mayer-Nelson (la 25 grade n anaerobioz).STRUCTURA ANTIGENIC

Haptene lipidice (antigen cardiolipinic / cardiolipin, Ag nespecific) fosfolipid prezent la treponeme patogene i esuturi ale mamiferelor (extras din cord bovin)Antigen proteic, de grup, comun treponemelor patogene i nepatogene (obinut din tulpina Reiter a T.phagedenis)Peptide i glicopeptide din membrana extern, specifice T.pallidum (obinute din tulpina Nichols a T.pallidum) FACTORI DE PATOGENITATEFactori de adeziuneFactori de invazie (hialuronidaza)Factori de sensibilizareEndotoxina Supresia rspunsului imun celular n stadiile iniiale ale bolii3. Sursa, mecanismul i cile de transmitere ale infeciei. Patogeneza, stadiile clinice ale sifilisului.PATOGENEZA SIFILISULUISursa de infecie omul bolnavCile de transmitere:SexualContact indirect (srut, obiecte, instrumente chirurgicale recent contaminate, transfuzii de snge, etc.)Transplacentar (vertical) Poarta de intrare tegumentul lezat, mucoasa genital, bucal, anal

Perioada de incubaie 2-6 sptmni (3)Evoluia sifilisuluiSifilisul primar (4-6 sptmni) la poarta de intrare apare ancrul sifilitic: ulceraie cu baza indurat, nedureros, bogat n treponeme (99% localizare genital i anal, 1% - bucal).Adenopatie satelit

Vindecare spontan a ancrului (imunitatea local)Sifilisul secundar (urmare a diseminrii sangvine) dup 6-8 spt. de evoluie- Manifestri cutanate (rozeole, sifilide erozive,etc)Manifestri mucoase (plci mucoase)Poliadenopatie Leziuni ale organelor interne (hepatite, nefrite, periostite, meningite, etc)Rspunsul imun poate duce la dispariia leziunilor n 1-3 luniSifilisul latent (treponemele persist n ganglioni limfatici i splin) Lipsa semnelor cliniceNecontagios Posibile recidiveSifilisul teriar (dup 4-30 ani de la contaminare)Afeciuni cardio-vasculare (aortite, anevrisme)Afeciuni neurologice (tabes, paralizie general)Afeciuni osoase i cutanate (gome)Deces posibilSifilisul congenitaln timpul graviditii moartea ftului prin afeciuni polivisceraleLa finele graviditii sau la natere leziuni tardive (dentare, osoase, oculare)Imunitatea (nesteril)Umoral

Celular (protectoare, deprimat n sifilisul primar i secundar) 4. Diagnosticul de laborator al sifilisului: produsele biologice, recoltarea lor, metodele de diagnostic.IAGNOSTICUL DE LABORATORPrelevate: serozitatea din leziunile primare sau secundare, puncii din ganglioni limfatici, serul sangvin, LCRMetode de diagnosticExamenul microscopicMicroscopia pe fond negru, contrast faz

RIFImpregnare argentic, coloraia GiemsaExamenul serologic (sifilis secundar, teriar)I Reacii nespecifice (cu Ag cardiolipinice)Reacia VDRL (Veneral Disease Research Laboratory) - reacie de precipitareIeftin, facil, specificitate redus

Reacii fals pozitive: viroze, colagenoze, paludism, ciroze, reumatism, graviditate, etc.RFC (Wassermann)Reacii specifice (cu Ag treponemice) RFC Wassermann sau KolmerRHAI (Ag lizat din tulpina Nichols fixat pe hematii)RIFI (Ag suspensie de T.pallidum fixat pe lam)RIT (testul Nelson) (Ag tulpina Nichols a T.pallidum)RIE (ELISA)PCR (detectarea ADN) n LCR, lichidul amniotic, esutEVOLUIA TITRURILOR DE ACRIFI se pozitiveaz la apariia ancrului (o lun dup infectare)VDRL dup 6 sptmniRHAIRIT n stadiul secundar, 2 luni dup infectareDup tratamentul sifilisului:VDRL se negativeaz prima Alte reacii rmn pozitive 5. Borreliile i caracterele morfobiologice.MICROBIOLOGIA I DIAGNOCTICUL DE LABORATOR AL BORRELIOZELORCLASIFICARE:Familia SpirochaetaceaeGenul BorreliaSpecii: - B.recurrentis (transmis prin pduchi)- B.duttoni, B.hispanica, B.persica, B.burgdorferi, etc (transmise prin cpue)CARACTERE MORFOBIOLOGICEMorfologia: filamente spiralate cu 5-8 spire neregulate, flexibile i mobile, cu micri de flexie i nurubare. Gram-, colorate n albastru-violet dup Giemsa.Caractere de cultur: bacterii anaerobe, cultiv in vitro pe medii complexe i in vivo (ou embrionat, artropode, animale de laborator) Structura antigenic: variabilitate pronunat

Habitat - Omul bolnav n snge i esuturi infectate - Roztoare- Vectori (pduchi, cpue) n lichidul celomic6. Sursa de infecie, mecanismul i cile de transmitere ale tifosului recurent epidemic i endemicFEBRA RECURENT

Febra recurent epidemic

Agentul cauzal - B.recurrentisSursa de infecie omul bolnav Vector - Pediculus humanusContaminare prin lichidul celomic eliberat la zdrobirea pduchilorPoarta de intrare tegumentul lezat, conjunctiva Febra recurent endemic

Agenii cauzali - B.hispanica, B.persica, B.duttoni, etcSursa de infecie roztoarele slbatice sau peridomesticeVectori cpue din genul OrnithodorosContaminare prin nep

tur, prin intermediul lichidului coxal, prin dejecii analePATOGENEZA FEBREI RECURENTEPerioada de incubaie 3-14 zile (borreliile se multiplic n viscere ficat, splin, creier, etc.)Perioada febril debut brutal, cu febr 40-41 grade i frison (endotoxina eliberat n snge la distrugerea borreliilor). Algii difuze, stare de tifos, semne meningeale, hepato-splenomegalie, icter. Criza febril dureaz 7 zile.Urmeaz o perioad afebril de o sptmn, succedat de alt criz termic cu durat mai scurt

Accesele se repet (2-4-10 recurene)Sub aciunea anticorpilor bactericizi formai la sfritul acceselor febrile se selecteaz varianta antigenic responsabil de urmtorul acces.Febra recurent endemic are o evoluie mai benign

7. Diagnosticul de laborator al tifosului recurent: materialele de examinat, regulile de recoltare, metodele de diagnostic.DIAGNOSTICUL DE LABORATORAL FEBREI RECURENTEPrelevate: snge, LCRMetode de diagnostic:1. Examenul microscopic (n perioada febril): - preparate native (fond negru, contrast de faz)Frotiuri colorate Giemsa RIF2. Examenul biologic (infectarea cobailor, obolanilor)8. Agentul cauzal al borrelioei Lyme. Caracterele morfobiologice. Rspndirea n natur. Sursa de infecie, cile de transmitere. Principiile diagnosticului de laborator.BOALA LYMEAgentul cauzal Borrelia burgdorferi (B.burgdorferi sensu stricto, B.afzelii, B.garinii)Caractere morfoculturale bacterie helicoidal, mobil prin micri de flexie i rotaie. Nu se coloreaz prin metoda Gram. Se cultiv lent (cteva sptmni) numai pe medii specialeHABITAT I CONTAMINARERezervor de infecie: roztoare, animale domestice (cini, cai, etc), psri.Vectori: cpue din genurile Ixodes i Amblyomma, nari, tuniContaminare: prin nep

tura vectorului infectatEVOLUIA BOLII LYMEIncubaie 2-4 sptmniI Faza primar (leziune cutanat eritemul cronic migrator). Durata 3-4 sptmni Faza secundar durata 2-6 sptmni manifestri neurologice, cardiace, cutanate, artralgiiFaza teriar dureaz luni, ani afeciuni cronice cutanate (acrodermatit cronic atrofiant), articulare (artrite cronice), neurologice (encefalomielite)DIAGNOSTICUL DE LABORATOR AL BOLII LYMEPrelevate: biopsii cutanate, snge, LCR, lichid sinovialMetode de diagnostic:Examenul microscopic (preparate native, coloraia special a biopsiilor, impregnare argentic)Examenul bacteriologicDiagnosticul serologic (RIFI, ELISA, Western-blot)PCRTratament peniciline, tetraciclineProfilaxie informarea populaiei, extragerea cpuelor9. Leptospirele i caracterele lor morfobiologice. Sursa, mecanismele i cile de transmitere ale leptospirozei. Patogeneza.MICROBIOLOGIA I DIAGNOSTICUL DE LABORATOR AL LEPTOSPIROZELORLeptospirele sunt bacterii care pot infecta numeroase specii de animale (n special vertebrate) i accidental omul. ClasificareFamilia LeptospiraceaeGenul LeptospiraSpp. L.interrogans (patogen pentru om i animale) L.biflexa (saprofit, ape de suprafa) L.parva (saprofit, apa de conduct)

CARACTERE MORFOBIOLOGICECaractere morfologice bacterii fine i spiralate, cu 10-30 spire strnse i regulate, cu capetele ndoite n crlig (aspect de S, C, ?). Realizeaz micri de nurubare, flexie i translaie. Pot fi examinate la microscopul cu fond negru sau cu contrast de faz.Coloraia Giemsa roz-palCARACTERE MORFOBIOLOGICECaractere de cultur

Medii lichide cu sruri anorganice tamponate cu fosfai i mbogite cu ser de iepure (mediile Korthof, Stuart), medii semisinteticeAerobioz

28-30 grade CLeptospirele se multiplic n 3-10 zile (pn la o lun) fr a tulbura mediulCARACTERE MORFOBIOLOGICEStructura antigenic a L.interrogans1. Antigene cu specificitate de gen, LPZ2. Antigene majore de grup (peste 20 serogrupuri)Ex.: L.icterohaemorrhagia, grippotyphosa, hebdomadis, canicola, pomona, autumnalis, etc.3. Antigene minore de tip (peste 200 serotipuri/variante) - proteicePATOGENEZA LEPTOSPIROZELORSursa de infecie: roztoarele slbatice, accidental-roztoarele peridomestice sau animalele domestice (porci, cini, cai, bovine) tubii contori proximali renaliPoarta de intrare: tegument i mucoaseCile de transmitere:Alimentar (alimente i apa contaminat)Contact direct cu animalele infectate Contact indirect (cu apa contaminat)Leptospirele sunt antrenate n circulaia sangvin fr leziuni la poarta de intrareIncubaia 1-2 sptmni (10 zile)Evoluia leptospirozelor:1. Faza septicemic (generalizat) 7 zile - febr, frison, sindrom meningeal2. Faza afebril (1-3 zile)3. Faza organic (febr, sindrom meningeal, sindrom hepato-renal, sindrom cardio-vascular-hemoragic, icter) Imunitatea: umoral, specific de tip, durabil

10. Diagnosticul de laborator al leptospirolezelor: materialul examinat i regulele de recoltare, metodele de diagnostic.DIAGNOSTICUL DE LABORATORPrelevate: snge, LCR (prima sptmn), urin (din sptmna II de boal), probe necroptice (seciuni histologice renale, hepatice)Metode de diagnostic- Examenul microscopic (fond negru, contrast de faz, coloraia Giemsa sau impregnaia argentic a seciunilor histologice), RIFExamenul bacteriologicProbele sunt nsmnate n cte 3-5 tuburi cu mediu de cultur, incubate n aerobioz la 28 grade pn la 1-3 luni.Identificarea n baza caracterelor:MicroscopiceDe cultur

De patogenitateSerologice (RFC, RAL) Examenul biologic (inocularea intraperitoneal la cobai). Peste 1-3 zile leptospirele pot fi depistate n exsudatul din cavitatea abdominal.Tehnici PCR (detectarea ADN)Diagnocticul serologic (din spt. II)Reacii cu specificitate de gen (RFC, RHAI, RIFI, ELISA) Reacii cu specificitate de tip (de referin)-RAL (Reacia de aglutinare-liz) Titrul diagnostic - 1/400 sau cretrea n dinamic de 4 ori11. Imunitatea, profilaxia i tratamentul specific ale spirochetozelor.TERAPIA I PROFILAXIA SIFILISULUIANTIBIOTERAPIA beta-lactamine, tetracicline, macrolide (rezisten la aminoside)Reacia Herxheimer este posibil (efectul endotoxinei)PROFILAXIA depistarea sistematic activ i tratarea bolnavilor TRATAMENT I PROFILAXIE LEPTOSPIROZELORTratament: penicilin, tetraciclin, gama-globulina antileptospiroas

Profilaxie: deratizarea, igiena i protecia muncii, supravegherea bazinelor de ap, vaccinarea selectiv (vaccin inactivat, durata imunitii-1 an) TRATAMENTUL I PROFILAXIAFEBREI RECURENTETratament: peniciline, tetracicline, cloramfenicolProfilaxie: lupta contra vectorilor i protecia individual

TRATAMENTUL I PROFILAXIA BOLII LYMETratament peniciline, tetraciclineProfilaxie informarea populaiei, extragerea cpuelor