S.aureus -lp-UTM
-
Upload
mihalcea-dana -
Category
Documents
-
view
219 -
download
0
Transcript of S.aureus -lp-UTM
7/25/2019 S.aureus -lp-UTM
http://slidepdf.com/reader/full/saureus-lp-utm 1/14
Genul Staphylococcus
Etapele diagnosticului de laborator in infectia cu
Staphylococcus spp.
Stafilococi coagulazo-pozitivi: S. aureus
Stafilococi coagulazo-negativi (SCN) cu iportan!" clinic": S. lugdunensis, S.
schleiferi, S. epidermidis, S.haemolyticus, S. saprophyticus. etc
#roduse patologice
• portaj: secreţie din cavitatea nazală anterioară, secreţie faringiană, probe de pe
tegumente (zona axilară, perianală)
•
plăgi, otite, infecţii tegumentare Þ puroiul (S. aureus)• infecţii urinare Þ urină (S. saprophyticus, S. aureus)
• infecţii gastro-intestinale, toxiinfecţii alimentare Þ materii fecale, vomismente,
alimente.
• meningite !"
• septicemie, febră puerperală, s#nge pt $emocultura (S. aureus, %!&)
• pneumonie, spută.
• infecţii nosocomiale - S. aureus meticilino-rezistent ('"%, %"' ),
%!& meticilino-rezistent-('"%)
S. aureus intermediar vancomicina (*%)
S. aureus rezistent la vancomicina ( "%)
+
7/25/2019 S.aureus -lp-UTM
http://slidepdf.com/reader/full/saureus-lp-utm 2/14
$ecoltare produs patologic
#$%&'S $EC%*$Ea)C*N+*Eb)$*NS#%$
%,SE$*++ RESPECTA PRECAUTIUNIE
UNI!ERSAE
*,CES
&ESC+S
+NC+S
&ezinfecteaza cualcool etilic /012betadina. &aca
este necesar irigaleziunea cu osolutie salina non-inhibitorie.
*spira cu o
seringa sterila( de preferat ) sau
cu tapon steril2
profund dinleziune.
*spira cu o
seringa sterila.ransfera iediataseptic tot
aterialul intr-unsiste anaerob.
a) 3 4l2 sau 5 tapoane dinacelasi loc.
b) 6 5 h.
a) 3 4 l
b) 6 5 h2 sisteanaerob detransport
Se recoanda recoltarea cu seringasterila prin aspiratie sau biopsie. &acase recolteaza cu taponul2 este
obligatorie recoltarea a doua tapoanedin profunziea leziunii ( 4 taponpentru insaantare si 4 tapon pentrufrotiul Gra ).
7ediul de transport Stuart sau *ies.
Evita containarea produsuluipatologic in oentul recoltarii cubacterii ce nu sunt iplicate in procesul
infectios. Sisteul anaerob de transport este
obligatoriu pentru a asigurasupravietuirea bacteriilor anaerobeiplicate in procesul infectios. Sisteanaerob : #$*S transport ediu2
*ccu- CulShure -o8ygen free-s9ab2containere fara o8igen pentru biopsiilede tesut.. (vezi ane8a nr.)
*celeasi recoandari la recoltarepentru: vezicule2 pustule2plaga2 flictene2furuncule2 arsuri2 ulcer decubit2 fistule2plaga uscata2etc
Gangrena : se recolteaza siheocultura in acelasi tip.
7/25/2019 S.aureus -lp-UTM
http://slidepdf.com/reader/full/saureus-lp-utm 3/14
E8aenul acroscopic: puroi cremos, filamentos, gălbui.
E8aenul icroscopic direct frotiu din produsului patologic (pp)
• coloraţia ram: coci ram pozitivi, dispu/i 0n grămezi asemănătoare ciorc$inilor
de strugure
• coci ram pozitivi localizati intra si perileucocitar1 prezenta celulelor inflamatorii
este dovada ca s-a recoltat un produs patologic real, de la nivelul procesului
infectios
Gra stain of Staphylococcus aureus in pustular e8udate
2
7/25/2019 S.aureus -lp-UTM
http://slidepdf.com/reader/full/saureus-lp-utm 4/14
+nsaantarea pp
• se insamanteaza in poligon desc$is ( fara o latura) 3 pe medii solide, in scopul
obtinerii coloniilor microbiene izolate: geloza-sange sau !olumbia 3sange,mediul !$apman
4
7/25/2019 S.aureus -lp-UTM
http://slidepdf.com/reader/full/saureus-lp-utm 5/14
• se insamanteaza si in mediu lic$id de imbogatire 3 56*
+ncubare aerob" la 278!, +9 3 4 ore.
+dentificarea bacteriei:• Caractere orfotinctoriale: frotiu din cultur" pur" : coci ram pozitivi, 0n
grămezi.
• Caractere de cultur": colonii %; pigmentate sau nepigmentate ( medii solide)
'edii lic$ide- tulbura uniform bulionul cu depozit moderat la fundul tubului
<
7/25/2019 S.aureus -lp-UTM
http://slidepdf.com/reader/full/saureus-lp-utm 6/14
#roducerea de heolizine 3 pe geloză-s#nge
• $emoliza beta (S. aureus,) datorată $emolizinei alfa• nu prezintă $emoliză (majoritatea tulpinilor %!&)
&escopunerea anitolului pe mediul !$apman (manito-pozitiv, colonii galbene, S.
aureus)
=
7/25/2019 S.aureus -lp-UTM
http://slidepdf.com/reader/full/saureus-lp-utm 7/14
) Staphylococcus aureus, (5) Staphylococcus epidermidis, and (!) Escherichiacoli strea>ed on a mannitol salt agar plate. ?$e mannitol fermenting colon@(@elloA) is S. aureus, A$ile t$e mannitol nonfermenting colon@ (pin>) is S.epidermidis. ?$e groAt$ of E. coli Aas in$ibited b@ t$e $ig$ salt concentration.
7
7/25/2019 S.aureus -lp-UTM
http://slidepdf.com/reader/full/saureus-lp-utm 8/14
• Caractere biochiice:
estul catalazei
&iferentiaza coloniile de staphylococ de cele de streptococ.
Beoarece ambele bacterii cresc pe mediu cu sange se recomanda folosirea doar a
varfurilor coloniilor de stafilococ sau streptococ pentru a evita reactii fals pozitive
datorita catalazei eritrocitare(din mediu cu geloza 3sange).
Ce o lama de microscop depune +- picaturi de 6D , peste picatura de reactiv se adauga
coloniile testate.
Citire si interpretare:
• ?est pozitiv-aparitia bulelor de gaz pana la efervescenta, %?E*D!D!
• ?est negativ-absenta bulelor, %?"FC?D!D!
+dentificarea Staphylococcus aureus
%e face prin testul coagulazei pe laa , stafilococul auriu fiind producător de coagulază.Ce o lamă de microscop se pune o picătură de plasmă . Gn picătură se omogenizează cu
grijă o ansă din cultura pură a bacteriei de identificat. Dmogenizarea se continuă
imprim#nd lamei mi/cări de rotaţie.
Citire si interpretare
9
7/25/2019 S.aureus -lp-UTM
http://slidepdf.com/reader/full/saureus-lp-utm 9/14
• ?est pozitiv-apariţia de grunji, care lasă picătura limpede 0nseamnă reacţie
pozitivă.
• ?est negativ- amestecul răm#ne omogen1Drice reactie negativa se continua cu
testarea coagulazei in tub.
estul coagulazei in tub -H,< ml plasma se incubeaza cu H.< ml cultura de 4 ore a
tulpinii de testat in bulion glucozat,.la 27 ! pentru patru ore.
Citire si interpretare
• "ezultat pozitiv presupune aparitia unui coagul, se poate prelungi incubarea
probei pana la +=-+9 ore, daca coagulul nu a aparut in primele patru ore, cu
verificarea periodica a probei
• "ezultat negativ-lipsa coagulului
• coagulaza liberă pozitiv: S. aureus;
• coagulaza liberă negativ: stafilococi coagulazo-negativi (%!&)
I
7/25/2019 S.aureus -lp-UTM
http://slidepdf.com/reader/full/saureus-lp-utm 10/14
+dentificarea S.aureus -test rapid:
Slide8 Staph #lus este un test rapid de latex aglutinare
pentru identificarea Staphylococcus aureus izolat pe mediile de cultura
rezultat negativ, absent S.aureus
+
7/25/2019 S.aureus -lp-UTM
http://slidepdf.com/reader/full/saureus-lp-utm 11/14
;erenteaz" glucoza, manitolul, lactoza, za$aroza etc. cu producere de acid
?ruse C* de identificare bioc$imica
ipizarea bacteriilor: pentru identificarea sursei de infecţie, compararea tulpinilor
izolate
• prin lizotipie (determinarea sensibilităţii stafilococului faţă de bacteriofagi1)
• prin metode de biologie moleculară
*ntibiograa 3 testeaza sensibilitatea tulpinilor izolate
'ediul 'uller 6inton, inocul H.< 'cEarland, temp 2< !, incubare +9 pana la 4 ore
+
7/25/2019 S.aureus -lp-UTM
http://slidepdf.com/reader/full/saureus-lp-utm 12/14
legerea discurilor pentru testarea sensibilitatii prin metoda difuzimetrica, interpretarea
rezultatelor conform Performance standards for antimicrobial susceptibility
testing;
!%* JHHI( anterior numit &!!%)
antibiograma F-?F%?
pentru tulpinile cu inalta rezistenta la antibiotice
Modul de desfasurare a lucrarii practice
+
7/25/2019 S.aureus -lp-UTM
http://slidepdf.com/reader/full/saureus-lp-utm 13/14
studentii primesc manuscrisul cu „etapele diagnosticului de laborator in
infectia cu Staphylococcus spp.
1. Lp se desfasoara interactiv- se discuta pe marginea manuscrisului primit
anterior LP-ului
2. Fiecare student efectueaza reactia catalazei
3. material demonstrativ- lucreaza doar asistentul -testul slidex Staph Plus
4. material demonstrativ-medii de cultura-Columbia-sange -colonii de
S. aureus, studentii recunosc coloniile de tip S, recunosc coloniile beta
hemolitice si non-hemolitice
5. material demonstrativ-trusa API pentru identificarea biochimica
=. antibiograma S.aureus, studentii masoara diametrele si noteaza in caiet,
interpretare conform CLSI/2009, Staphylococcus spp.
7. Fiecare student prinde imaginea la microscop si examineaza frotiuri :coci
Gram pozitivi in gramezi
Bibliografie
•
Bacteriologie Medicala, Olga Dorobat, editura UTM, 2006
• Clinical Microbiology Procedures Handbook, Henry D. Isenberg, editata
American Society for Microbiology, 2004
• Koneman's Color Atlas and Textbook of Diagnostic Microbiology , Washington
C Winn, Stephen D. Allen, Gail L. Woods, William M. Janda, Paul C.
Schreckenberger , editura Lippincott Williams & Wilkins, 2005
• Manual of Clinical Microbiology , Patrick R. Murray ,
Visit Amazon's Patrick R. Murray Page
search results
Learn about Author Central
Ellen Jo Baron , Michael A. Pfaller , Fred C. Tenover , Robert H. Yolken, editura
ASM, 2007
● Performance Standards for Antimicrobial Susceptibility Testing”.M 100, S19
+
7/25/2019 S.aureus -lp-UTM
http://slidepdf.com/reader/full/saureus-lp-utm 14/14
CLSI /2009
+