S.aureus -lp-UTM

14
 Genul Staphylococcus  Etapele diagnosticului de laborator in infectia cu  Staphylococcu s spp. Stafilococi coagulazo-pozitivi:  S. aureus Sta fil oco ci coagu laz o-negati vi (SCN) cu ip ortan!" cli nic ":  S. lugdunensis, S. schleiferi, S. epidermidis, S.haemolyticus, S. saprophyticus. etc #roduse patologice  portaj: secreţie din cavitatea nazală anterioară, secreţie faringiană, probe de pe tegumente (zona axilară, perianală)  plăgi, otite, in fecţii tegumentare Þ puro iul ( S. aureus) infecţii urinare Þ urină ( S. saprophyticus, S. aureus ) infecţii gastro-intestinale, toxiinfecţii alimentare Þ materii fecale, vomismente, alimente. meningite !" septicemie, febră p uerperală, s#nge pt $emocultura (S. aureus, %!&)  pneumonie, spută. infecţii nosocomiale - S. aureus meticilino-rezis tent ('"%, %"' ), %!& meticilino-rezi stent-('"%)  S. aureus intermediar vancomicina (*%)  S. aureus rezistent la vancomicina ( "%) +

Transcript of S.aureus -lp-UTM

Page 1: S.aureus -lp-UTM

7/25/2019 S.aureus -lp-UTM

http://slidepdf.com/reader/full/saureus-lp-utm 1/14

  Genul Staphylococcus

  Etapele diagnosticului de laborator in infectia cu

 Staphylococcus spp.

Stafilococi coagulazo-pozitivi: S. aureus

Stafilococi coagulazo-negativi (SCN) cu iportan!" clinic":  S. lugdunensis, S.

schleiferi, S. epidermidis, S.haemolyticus, S. saprophyticus. etc

#roduse patologice

•  portaj: secreţie din cavitatea nazală anterioară, secreţie faringiană, probe de pe

tegumente (zona axilară, perianală)

 plăgi, otite, infecţii tegumentare Þ puroiul (S. aureus)• infecţii urinare Þ urină (S. saprophyticus, S. aureus)

• infecţii gastro-intestinale, toxiinfecţii alimentare Þ materii fecale, vomismente,

alimente.

• meningite !" 

• septicemie, febră puerperală, s#nge pt $emocultura (S. aureus, %!&)

•  pneumonie, spută.

• infecţii nosocomiale - S. aureus meticilino-rezistent ('"%, %"' ),

%!& meticilino-rezistent-('"%)

  S. aureus intermediar vancomicina (*%)

  S. aureus rezistent la vancomicina ( "%)

+

Page 2: S.aureus -lp-UTM

7/25/2019 S.aureus -lp-UTM

http://slidepdf.com/reader/full/saureus-lp-utm 2/14

$ecoltare produs patologic

#$%&'S $EC%*$Ea)C*N+*Eb)$*NS#%$

%,SE$*++ RESPECTA PRECAUTIUNIE 

UNI!ERSAE

*,CES

&ESC+S

+NC+S

&ezinfecteaza cualcool etilic /012betadina. &aca

este necesar irigaleziunea cu osolutie salina non-inhibitorie.

*spira cu o

seringa sterila( de preferat ) sau

cu tapon steril2

profund dinleziune.

*spira cu o

seringa sterila.ransfera iediataseptic tot

aterialul intr-unsiste anaerob.

 a) 3 4l2 sau 5 tapoane dinacelasi loc.

b) 6 5 h.

a) 3 4 l

 b) 6 5 h2 sisteanaerob detransport

Se recoanda recoltarea cu seringasterila prin aspiratie sau biopsie. &acase recolteaza cu taponul2 este

obligatorie recoltarea a doua tapoanedin profunziea leziunii ( 4 taponpentru insaantare si 4 tapon pentrufrotiul Gra ).

 7ediul de transport Stuart sau *ies.

 Evita containarea produsuluipatologic in oentul recoltarii cubacterii ce nu sunt iplicate in procesul

infectios.  Sisteul anaerob de transport este

obligatoriu pentru a asigurasupravietuirea bacteriilor anaerobeiplicate in procesul infectios. Sisteanaerob : #$*S transport ediu2

*ccu- CulShure -o8ygen free-s9ab2containere fara o8igen pentru biopsiilede tesut.. (vezi ane8a nr.)

*celeasi recoandari la recoltarepentru: vezicule2 pustule2plaga2 flictene2furuncule2 arsuri2 ulcer decubit2 fistule2plaga uscata2etc

 Gangrena : se recolteaza siheocultura in acelasi tip.

Page 3: S.aureus -lp-UTM

7/25/2019 S.aureus -lp-UTM

http://slidepdf.com/reader/full/saureus-lp-utm 3/14

 

E8aenul acroscopic: puroi cremos, filamentos, gălbui.

E8aenul icroscopic direct  frotiu din produsului patologic (pp)

• coloraţia ram: coci ram pozitivi, dispu/i 0n grămezi asemănătoare ciorc$inilor 

de strugure

• coci ram pozitivi localizati intra si perileucocitar1 prezenta celulelor inflamatorii

este dovada ca s-a recoltat un produs patologic real, de la nivelul procesului

infectios

Gra stain of Staphylococcus aureus in pustular e8udate 

2

Page 4: S.aureus -lp-UTM

7/25/2019 S.aureus -lp-UTM

http://slidepdf.com/reader/full/saureus-lp-utm 4/14

+nsaantarea pp

• se insamanteaza in poligon desc$is ( fara o latura) 3 pe medii solide, in scopul

obtinerii coloniilor microbiene izolate: geloza-sange sau !olumbia 3sange,mediul !$apman

4

Page 5: S.aureus -lp-UTM

7/25/2019 S.aureus -lp-UTM

http://slidepdf.com/reader/full/saureus-lp-utm 5/14

• se insamanteaza si in mediu lic$id de imbogatire 3 56*

 

+ncubare aerob" la 278!, +9 3 4 ore.

+dentificarea bacteriei:• Caractere orfotinctoriale: frotiu din cultur" pur"  : coci ram pozitivi, 0n

grămezi.

• Caractere de cultur": colonii %; pigmentate sau nepigmentate ( medii solide)

  'edii lic$ide- tulbura uniform bulionul  cu depozit moderat la fundul tubului

<

Page 6: S.aureus -lp-UTM

7/25/2019 S.aureus -lp-UTM

http://slidepdf.com/reader/full/saureus-lp-utm 6/14

#roducerea de heolizine 3 pe geloză-s#nge

• $emoliza beta (S. aureus,) datorată $emolizinei alfa• nu prezintă $emoliză (majoritatea tulpinilor %!&)

&escopunerea anitolului  pe mediul !$apman (manito-pozitiv, colonii galbene, S.

aureus)

=

Page 7: S.aureus -lp-UTM

7/25/2019 S.aureus -lp-UTM

http://slidepdf.com/reader/full/saureus-lp-utm 7/14

) Staphylococcus aureus, (5) Staphylococcus epidermidis, and (!) Escherichiacoli strea>ed on a mannitol salt agar plate. ?$e mannitol fermenting colon@(@elloA) is S. aureus, A$ile t$e mannitol nonfermenting colon@ (pin>) is S.epidermidis. ?$e groAt$ of E. coli Aas in$ibited b@ t$e $ig$ salt concentration.

7

Page 8: S.aureus -lp-UTM

7/25/2019 S.aureus -lp-UTM

http://slidepdf.com/reader/full/saureus-lp-utm 8/14

• Caractere biochiice:

estul catalazei

&iferentiaza coloniile de staphylococ de cele de streptococ.

Beoarece ambele bacterii cresc pe mediu cu sange se recomanda folosirea doar a

varfurilor coloniilor de stafilococ sau streptococ pentru a evita reactii fals pozitive

datorita catalazei eritrocitare(din mediu cu geloza 3sange).

Ce o lama de microscop depune +- picaturi de 6D , peste picatura de reactiv se adauga

coloniile testate.

Citire si interpretare:

• ?est pozitiv-aparitia bulelor de gaz pana la efervescenta, %?E*D!D!

• ?est negativ-absenta bulelor, %?"FC?D!D!

+dentificarea Staphylococcus aureus

%e face prin testul coagulazei pe laa , stafilococul auriu fiind producător de coagulază.Ce o lamă de microscop se pune o picătură de plasmă . Gn picătură se omogenizează cu

grijă o ansă din cultura pură a bacteriei de identificat. Dmogenizarea se continuă

imprim#nd lamei mi/cări de rotaţie.

Citire si interpretare

9

Page 9: S.aureus -lp-UTM

7/25/2019 S.aureus -lp-UTM

http://slidepdf.com/reader/full/saureus-lp-utm 9/14

• ?est pozitiv-apariţia de grunji, care lasă picătura limpede 0nseamnă reacţie

 pozitivă.

• ?est negativ- amestecul răm#ne omogen1Drice reactie negativa se continua cu

testarea coagulazei in tub.

 estul coagulazei in tub  -H,< ml plasma se incubeaza cu H.< ml cultura de 4 ore a

tulpinii de testat in bulion glucozat,.la 27 ! pentru patru ore.

Citire si interpretare

• "ezultat pozitiv presupune aparitia unui coagul, se poate prelungi incubarea

 probei pana la +=-+9 ore, daca coagulul nu a aparut in primele patru ore, cu

verificarea periodica a probei

• "ezultat negativ-lipsa coagulului

• coagulaza liberă pozitiv: S. aureus;

• coagulaza liberă negativ: stafilococi coagulazo-negativi (%!&)

I

Page 10: S.aureus -lp-UTM

7/25/2019 S.aureus -lp-UTM

http://slidepdf.com/reader/full/saureus-lp-utm 10/14

+dentificarea S.aureus -test rapid:

Slide8 Staph #lus este un test rapid de latex aglutinare

 pentru identificarea Staphylococcus aureus izolat pe mediile de cultura

  rezultat negativ, absent S.aureus

 

+

Page 11: S.aureus -lp-UTM

7/25/2019 S.aureus -lp-UTM

http://slidepdf.com/reader/full/saureus-lp-utm 11/14

;erenteaz" glucoza, manitolul, lactoza, za$aroza etc. cu producere de acid

?ruse C* de identificare bioc$imica

 

ipizarea bacteriilor: pentru identificarea sursei de infecţie, compararea tulpinilor

izolate

•  prin lizotipie (determinarea sensibilităţii stafilococului faţă de bacteriofagi1)

•  prin metode de biologie moleculară

*ntibiograa 3 testeaza sensibilitatea tulpinilor izolate

'ediul 'uller 6inton, inocul H.< 'cEarland, temp 2< !, incubare +9 pana la 4 ore

+

Page 12: S.aureus -lp-UTM

7/25/2019 S.aureus -lp-UTM

http://slidepdf.com/reader/full/saureus-lp-utm 12/14

legerea discurilor pentru testarea sensibilitatii prin metoda difuzimetrica, interpretarea

rezultatelor conform Performance standards for antimicrobial susceptibility

testing;

!%* JHHI( anterior numit &!!%)

antibiograma F-?F%?

 pentru tulpinile cu inalta rezistenta la antibiotice

Modul de desfasurare a lucrarii practice

+

Page 13: S.aureus -lp-UTM

7/25/2019 S.aureus -lp-UTM

http://slidepdf.com/reader/full/saureus-lp-utm 13/14

  studentii primesc manuscrisul cu „etapele diagnosticului de laborator in

infectia cu Staphylococcus spp.

1. Lp se desfasoara interactiv- se discuta pe marginea manuscrisului primit

anterior LP-ului

2. Fiecare student efectueaza reactia catalazei

3. material demonstrativ- lucreaza doar asistentul -testul slidex Staph Plus

4. material demonstrativ-medii de cultura-Columbia-sange -colonii de

S. aureus, studentii recunosc coloniile de tip S, recunosc coloniile beta

hemolitice si non-hemolitice

5. material demonstrativ-trusa API pentru identificarea biochimica

=. antibiograma S.aureus, studentii masoara diametrele si noteaza in caiet,

interpretare conform CLSI/2009, Staphylococcus spp.

7. Fiecare student prinde imaginea la microscop si examineaza frotiuri :coci

Gram pozitivi in gramezi

Bibliografie

Bacteriologie Medicala, Olga Dorobat, editura UTM, 2006

• Clinical Microbiology Procedures Handbook, Henry D. Isenberg, editata

American Society for Microbiology, 2004

• Koneman's Color Atlas and Textbook of Diagnostic Microbiology , Washington

C Winn, Stephen D. Allen, Gail L. Woods, William M. Janda, Paul C.

Schreckenberger , editura Lippincott Williams & Wilkins, 2005

• Manual of Clinical Microbiology , Patrick R. Murray ,

Visit Amazon's Patrick R. Murray Page

search results

Learn about Author Central

 Ellen Jo Baron  , Michael A. Pfaller  , Fred C. Tenover  , Robert H. Yolken, editura

ASM, 2007

● Performance Standards for Antimicrobial Susceptibility Testing”.M 100, S19 

+

Page 14: S.aureus -lp-UTM

7/25/2019 S.aureus -lp-UTM

http://slidepdf.com/reader/full/saureus-lp-utm 14/14

  CLSI /2009

+