Proiect Microbiologie Final

download Proiect Microbiologie Final

of 24

  • date post

    08-Jul-2015
  • Category

    Documents

  • view

    650
  • download

    10

Embed Size (px)

Transcript of Proiect Microbiologie Final

USAMV FAC. DE BIOTEHNOLOGII MASTER BIOTEHNOLOGIE I SIGURAN ALIMENTAR

PROIECT MICROBIOLOGIE ANUL I, SEMESTRUL I

Cadru didactic Prof. dr. Florentina Radoi Masterande Dorina Farafin Brad Raluca Dudescu

BUCURETI 2010

PROIECT MICROBIOLOGIE

TEHNICI SI METODE DE EVALUARE A INCARCATURII MICROBIENE DIN ALIMENTE

Cadru didactic Prof. dr. Florentina Radoi Email: flore_radoi@hotmail.com Masterande Dorina Farafin Brad Email: dorina_farafin@yahoo.com Raluca Dudescu Email: raluca.dudescu@yahoo.comANUL I, SEMESTRUL I

2

CUPRINS

1. Introducere 2. Criterii de calitate microbiologica a alimentelor 3. Tehnici si metode clasice de evaluare a incarcaturii microbiene din alimente 4. Tehnici si metode moderne de evaluare a incarcaturii microbiene din alimente 4.1. Tehnica membranelor filtrante 4.2. Metoda bioluminiscentei 4.3 Tehnica petrifilmelor 5. Concluzii 6. Bibliografie

1. IntroducereProiectul Tehnici si metode de evaluare a incarcaturii microbiene din alimente doreste sa dezvolte subiectul tehnicilor si metodelor studiate la curs si experimentate in laborator, cu accent pe noile tehnici din domeniu. Lucrarea este structurata in 3 capitole principale ce incep cu analiza cerintelor europene privind calitatea microbiologica. Capitolul urmator se concentreaza asupra prezentarii unor metode si tehnici microbiologice clasice. Ultima parte este o prezentare detaliata a trei tehnici si metode moderne tehnica membranelor filtrante, metoda bioluminiscentei si tehnica petrifilmelor de la utilizarea lor, tehnica propriu-zisa, pana la avantaje si costuri. Proiectul se incheie cu o concluzie finala privind tendintele din domeniu si strategia firmelor producatoare de aparatura si consumabile de laborator, oferind de asemenea informatii despre sursele bibliografice intr-o forma inovatoare, ce usureaza cititorului cautarea. Speram ca proiectul nostru sa fie util colegilor, reprezentand o lectura practica ce si interesanta, directionand studentii interesati spre lecturarea unor studii relevante in domeniul tehnicilor de evaluare a incarcaturii microbiene, realizate de cercetatori romani si straini.

3

2. Criterii de calitate microbiologica a alimentelorCalitatea microbiologica este un criteriu extrem de important in aprecierea calitatii globale a alimentelor, incepand de la productia primara pana la comercializarea produsului catre consumator. Regulamentul CE nr. 2073/2005 amendat cu Regulamentul CE nr 1441/2007 al Comisiei Europene din 2007 a fost introdus ca norma ce stabileste criteriile microbiologice pentru produsele alimentare in toate statele membre. Acesta ofera o orientare privind caracterul acceptabil al produselor alimentare si al proceselor de fabricatie, manipulare si distributie a acestora, considerand ca utilizarea criteriilor microbiologice ar trebui s fac parte integrant din punerea n aplicare a procedurilor bazate pe principiile HACCP si a altor msuri de control al igienei.C1 Regulamentul CE 2073/2005 modificat prin 1441/2007 prezinta in anexa 1 3 capitole, structurate dupa cum urmeaza: Capitolul 1. Criterii de sigurant a produselor alimentare Capitolul 2. Criterii de igien a procesului o 2.1. Carne si produse din carne o 2.2. Lapte si produse lactate o 2.3. Produse din ou o 2.4. Produse pescresti o 2.5. Legume, fructe si produse din legume si fructe Capitolul 3. Norme pentru prelevarea de probe si pregtirea probelor pentru teste o 3.1. Norme generale pentru prelevarea de probe si pregtirea probelor pentru teste o 3.2. Prelevarea de probe bacteorologice n abatoarele si unittile de productie a crnii tocate si a preparatelor din carneC1 In anexa capitolului I este prezentat un tabel, in care sunt definite clar limitele microbiologice, pe categorii de alimente. Firmele alimentare din toate statele membre ale UE sunt obligate sa monitorizeze produsele realizate si sa se incadreze in aceste limite. De asemenea in tabel sunt prezentate standardele europene ce reprezinta, in domeniul reglementat, metodele analitice de referinta prin care laboratoarele fac determinari ale indicatorilor de calitate microbiologici:

4

In capitolul 2 Regulamentul european reglementeaza criteriile de igien ale proceselor, incepand de la produsele din carne si terminand cu legumele si fructele, concentrandu-se asupra etapelor din procesul tehnologic in care se aplica criteriul de igiena si actiunile corective in cazul in care rezultatele nu sunt satisfacatoare.

In capitolul 3 sunt stipulate normele pentru prelevarea de probe si pregtirea probelor pentru teste, in special pentru pentru carcasele de porcine, ovine, caprine si cabaline, descrise de asemenea in standardul ISO 17604.

5

Firmele alimentare din statele membre, obligate sa respecte norme microbiologice stricte dar si constranse de volumul si viteza de procesare ale propriilor procese, au avut nevoie sa se orienteze spre metode de analiza din ce in ce mai precise dar si mai rapide. Astfel, in ultimele decenii, companiile producatoare de aparatura si consumabile de laborator au fost la randul lor nevoite sa se orienteze spre noile cerinte si nevoi ale clientilor lor, dezvoltand metode mai simple, mai precise si mai rapide pentru evaluarea incarcaturii microbiene. Totusi, metodele clasice nu au fost uitate in totalitate, ele fiind folosite in continuare in laboratoarele firmelor alimentare si autoritatilor de control.

3. Tehnici si metode clasice de evaluare a incarcaturii microbiene din alimente

Printre metodele clasice, studiate si prezentate in cadrul laboratoarelor, se numara: metoda celulelor de masurat - se pot folosi mai multe tipuri de celule cum ar fi camera Thoma, camera Trck, Brker, RosenthalC1 pentru drojdii si spori de mucegaiuri

Fig 3.1 Celula de numarat Thoma reteaC1

Fig. 3.2 Celula de numarat Brker reteaC1

metoda Breed pentru bacterii lactice metoda standard SPC, de numarare a celulelor vii sau a unitatilor formatoare de colonii (ufc) tehnicile de reducere a colorantilor pentru microorganismele reducatoareD1

6

Toate aceste metode clasice prezinta avantaje de exemplu camera Thoma este o metoda rapida, prin SPC exista posibilitatea studiului la microscop, sau tehnic de reducere a colorantilor este o metoda foarte simpla dar au si dezavantaje, cum ar fi pentru camera Thoma precizia, timpul necesar incubarii pentru SPC sau erorile in cazul tehnicilor de reducere. Companiile producatoare de aparatura de laborator au incercat sa inlature aceste neajunsuri propunand metode moderne de determinare a incarcaturii microbiene.

4. Tehnici si metode moderne de evaluare a incarcaturii microbiene din alimenteVom incerca in acest capitol sa ne concentram asupra prezentarii a trei tehnici moderne tehnica membranelor filtrante, metoda bioluminiscentei si tehnica petrifilmelor din perspectiva tehnologiei, metodelor, avantajelor, dezvantajelor dar si al costurilor utilizarii lor.

4.1. Tehnica membranelor filtranteTehnica membranelor filtrante pe care o prezentam este oferita de Sartorius. Principiul acesteia se bazeaza pe concentrarea microorganismelor din probe urmata de o incubare a acestora pe medii de cultura sub forma de cartonase sau agar. Practic, un filtru membrana cu o porozitate adecvata este montata pe un suport iar proba in general lichida este turnata peste acesta. Astfel microorganismele din proba de control, in integralitatea ei, sunt retinute pe suprafata filtrului prin efectul de separare al membranei acestuia. Inhibitorii de crestere sunt apoi indepartati prin clatire cu solutie NaCl sterila. La filtrare Sartorius ofera posibilitatea tratarii probei prin metoda standard sau prin metoda monitor, dupa cum se arata in figura de pe pagina urmatoare. Filtru membrana este apoi plasat pe un mediu de cultura si incubat. Schimbul de produse nutritive si metabolice are loc prin sistemul poros al filtrului membrana. Coloniile care s-au dezvoltat pe suprafata filtrului in timpul incubarii sunt apoi numarate si raportate la volumul probei. Un alt element ce usureaza munca personalului de laborator este folosirea in cadrul acestei metode a cartonaselor impregnate cu mediu nutritiv (CMN): medii de cultura sterile in forma uscata, preambalate in cutii Petri sterile. Dupa umezire cu 3,03,5 ml apa sterila si distilata sau demineralizata, ele sint gata de utilizare. Spre deosebire de mediile clasice in solutie, cartonasele sunt stabile si pot fi depozitate timp indelungat. Utilizarea CMN scuteste de asemenea personalul de operatiunile de pregatire a mediilor nutritive si turnarea lor in cutiile Petri, economisind timpul si energia specialistilor microbiologi. Utilizarea acestora este prezentata la pagina 9.

7

Un exemplu de crestere a coloniilor ca rezultat al aplicarii metodei membranelor impreuna cu CMN este aratat mai jos. Exemplificarea s-a facut pentru probe din industria bauturilor, utilizand mediu Wrze pentru detectarea drojdiilor si a mucegaiurilor.

Fig. 4.1. Culturi obtinute prin metoda membranelor filtrante impreuna cu CMN

Avantajele si beneficiile metodei mebranelor filtrante sunt: 1. Precizie de detectare sporita 2. Faptul ca in comparatie cu metoda directa, pot fi testate volume de proba considerabil mai mari. Acest efect de concentrare ridica acuratetea detectarii microbiene. 3. Din punct de vedere al rezultatelor cantitative coloniile vizibile pot fi raportate direct la volumul de proba. 4. Filtrele membrana cu coloniile crescute pe ele pot fi arhivate pentru documentarea testului efectuat.

8

Fig. 4.2 Detrminarea numarului de germeni prin membranele filtrante

9

Fig. 4.3. Utilizarea cartonaselor impreganate cu mediu nutritiv

10

4.2. Metoda bioluminiscenteiMetoda determinarii concentratiei de ATP prin bioluminiscenta este utilizata in intreprinderile alimentare deoarece este facila, rapida, simpla,