Preparatul microscopic permanent

Preparatul microscopic permanent

Reprezinta modalitatea de examinare a Reprezinta modalitatea de examinare a unor celule , fragmente de tesut sau unor celule , fragmente de tesut sau organ , carora li s-au suprimat organ , carora li s-au suprimat procesele vitale prin fixare procesele vitale prin fixare

- permite examinarea la microscopul - permite examinarea la microscopul optic a principalelor caracteristici ale optic a principalelor caracteristici ale celulelor si a modului lor de celulelor si a modului lor de organizare.organizare.

Preparatul microscopic permanent

Un preparat microscopic este alcatuit Un preparat microscopic este alcatuit din:din:

1. obiect de examinat subtire si 1. obiect de examinat subtire si transparenttransparent

2. mediu de fixare transparent2. mediu de fixare transparent

3. lama si lamela3. lama si lamela

Preparatul microscopic permanent

Scopul Scopul relizarii unui relizarii unui preparat microscopic preparat microscopic permanent este de a permanent este de a conserva structurile conserva structurile celulare si raporturile celulare si raporturile dintre ele pe un timp dintre ele pe un timp nelimitat.nelimitat.

Este folosit in :Este folosit in :

- clinica - clinica

- laborator de - laborator de anatomie patologicaanatomie patologica

- medicina legala- medicina legala

- cercetare- cercetare

- in scop didactic- in scop didactic

Etapele obtinerii preparatului microscopic permanent

1. 1. Recoltare Recoltare2. Fixare2. Fixare3. Spalare3. Spalare4. Includere4. Includere5. Sectionare5. Sectionare6. Colorare sau impregnare6. Colorare sau impregnare7. Montare7. Montare8. Etichetare8. Etichetare

1.RECOLTAREA

Este operatia prin care obiectul de Este operatia prin care obiectul de examinat este prelevat de la omul sau examinat este prelevat de la omul sau animalul viu sau dupa sacrificarea animalul viu sau dupa sacrificarea animalului sau de la cadavru.animalului sau de la cadavru.

Poate fi bioptica sau necroptica Poate fi bioptica sau necroptica

Recoltarea bioptica

- - se recolteaza de la om sau animalul viu se recolteaza de la om sau animalul viu si se practica in scop diagnostic. si se practica in scop diagnostic. Se realizeaza prin :Se realizeaza prin :

1. raclare 1. raclare 2. punctie bioptica2. punctie bioptica3. aspiratie3. aspiratie4. interventie chirurgicala4. interventie chirurgicala

Recoltarea necroptica

- - dupa sacrificarea animalului si se dupa sacrificarea animalului si se practica in laboratoare in scop de practica in laboratoare in scop de cercetare sau didactic. cercetare sau didactic.

- recoltarea de la cadavrele umane se - recoltarea de la cadavrele umane se practica in laboratoarele de amatomie practica in laboratoarele de amatomie patologica si medicina legala in scopul patologica si medicina legala in scopul de a confrunta datele de anatomie de a confrunta datele de anatomie clinica si tanatogeneticeclinica si tanatogenetice..

Recoltarea

Conditiile unei bune recoltari:Conditiile unei bune recoltari:1. cat mai aproape de momentul decesului 1. cat mai aproape de momentul decesului

pentru a evita procesele de autoliza.pentru a evita procesele de autoliza.2. dimensiunea piselor sa nu depaseasca 5 mm2. dimensiunea piselor sa nu depaseasca 5 mm3. calitatea instrumentelor – bine ascutite 3. calitatea instrumentelor – bine ascutite

pentru a evita zdrentuirea si pierderea pentru a evita zdrentuirea si pierderea paralelismului dintre planuriparalelismului dintre planuri

4. adecvat in functie de tipul organului ; se vor 4. adecvat in functie de tipul organului ; se vor evita modificarile de volum, forma si relief.evita modificarile de volum, forma si relief.

2. FIXAREA

- - etapa decisiva in obtinerea unui etapa decisiva in obtinerea unui preparat microscopic permanent.preparat microscopic permanent.

- un proces fizic sau chimic prin care - un proces fizic sau chimic prin care sunt oprite cat mai rapid procesele sunt oprite cat mai rapid procesele vitale celulare pastrandu-se cu alterari vitale celulare pastrandu-se cu alterari minime volumul , forma , relieful si minime volumul , forma , relieful si raporturile spatiale si moleculare .raporturile spatiale si moleculare .

FIXAREAPrin fixare Prin fixare urmarim :urmarim :1. Conservarea tesuturilor 1. Conservarea tesuturilor 2. Prevenirea pierderii de constituenti 2. Prevenirea pierderii de constituenti

celularicelulari3. Cresterea diferentierii optice a 3. Cresterea diferentierii optice a

structurilor celulare structurilor celulare 4. Marirea consistentei tesuturilor in scopul 4. Marirea consistentei tesuturilor in scopul

de a facilita trecerea lor prin celelalte etape de a facilita trecerea lor prin celelalte etape ale tehnicii si mai ales pentru sectionareale tehnicii si mai ales pentru sectionare

FIXATORII

ClasificareClasificarea. Dupa natura lor:a. Dupa natura lor:

1. fizici1. fizici2. chimici2. chimici

b. Dupa reactia pe care o au cu b. Dupa reactia pe care o au cu proteinele solubileproteinele solubile1. coagulanti1. coagulanti2. necogulanti2. necogulanti

FIXATORII

Fixatorii chimici:Fixatorii chimici:

1. simpli1. simpli

2. amestecuri fixatoare2. amestecuri fixatoare

FIXATORII CHIMICI

Fixatori simpliFixatori simpli mai des utilizati : mai des utilizati : acetona , acid tricloracetic , formol , acetona , acid tricloracetic , formol , acidosmic , alcool metilicacidosmic , alcool metilic

Amestecuri fixatoareAmestecuri fixatoare::- introduse in practica datorita - introduse in practica datorita afinitatii inegale pentru diversele afinitatii inegale pentru diversele elemente structuraleelemente structurale

Amestecuri fixatoare:

1. dupa compozitia chimica1. dupa compozitia chimica

a. apoasea. apoase

b. alcooliceb. alcoolice

2. Dupa scopul urmarit2. Dupa scopul urmarit

a. Universale (topografice)a. Universale (topografice)

b. Citologiceb. Citologice

Mecanismul fixarii

1. 1. insolubilizarea prin precipitare a insolubilizarea prin precipitare a unor constituenti celulari proteine , unor constituenti celulari proteine , glucide , saruri minerale, lipideglucide , saruri minerale, lipide

2. formarea de compusi de aditie intre 2. formarea de compusi de aditie intre fixator si unii constituenti celularifixator si unii constituenti celulari

3. coagularea proteinelor3. coagularea proteinelor

CALITATILE UNUI BUN FIXATOR

1. 1. patrunde bine in tesuturi patrunde bine in tesuturi 2. stabilizeaza tesuturile pastrand 2. stabilizeaza tesuturile pastrand

nealterate caracterul si distributia nealterate caracterul si distributia constituentilor celulariconstituentilor celulari

3. nu provoaca artefacte 3. nu provoaca artefacte 4. nu deformeaza tesutul4. nu deformeaza tesutul5. nu dizolva constituenti5. nu dizolva constituenti

CALITATILE UNUI BUN FIXATOR

6. 6. distruge microorganismele distruge microorganismele

7. extrage enzimele autolitice inactivate7. extrage enzimele autolitice inactivate

8. confera consistenta8. confera consistenta

9. produce diferentiere optica9. produce diferentiere optica

10. nu-si modifica compozitia 10. nu-si modifica compozitia

11. ieftin , netoxic , neinflamabil , neiritant11. ieftin , netoxic , neinflamabil , neiritant

TRATAMENTE POSTFIXARE

1. 1. decalcifierea decalcifierea

2. disocierea pieselor 2. disocierea pieselor

3.3. mordansarea mordansarea

4.INCLUDEREA

Este procedeul prin care se realizeaza Este procedeul prin care se realizeaza conditii optime care sa permita conditii optime care sa permita sectionarea piselor in sectiuni subtiri de sectionarea piselor in sectiuni subtiri de ordinul ordinul µµm , transparente si cu fete m , transparente si cu fete plane astfel incat sa poata fii examinate plane astfel incat sa poata fii examinate la microscop.la microscop.

INCLUDEREA

Mase de incluziune :Mase de incluziune :

1. Dupa modul de realizare al includerii :1. Dupa modul de realizare al includerii :

a. Penetreaza celula a. Penetreaza celula

b. Ramane in spatiul intercelularb. Ramane in spatiul intercelular

2.Dupa solubilitatea in apa 2.Dupa solubilitatea in apa

a. anhidre , ex. parafina , celoidina , a. anhidre , ex. parafina , celoidina , paraplastulparaplastul

b. apoase ,ex . gelatina , polietilenglicolb. apoase ,ex . gelatina , polietilenglicol

Incluziunea la parafina etape premergatoare

a. deshidratare – alcool in a. deshidratare – alcool in concentratii crescande incepand cu 50concentratii crescande incepand cu 50°° fiecare in 3 bai succesive.fiecare in 3 bai succesive.

Incluziunea la parafina etape premergatoare

b. clarificare – indepartarea b. clarificare – indepartarea alcoolului din piesa cu ajutorul unor alcoolului din piesa cu ajutorul unor reactivi numiti clarificatori , miscibili reactivi numiti clarificatori , miscibili cu parafina , care fac ca piesa sa devina cu parafina , care fac ca piesa sa devina translucida. Se efectueaza cu alcool translucida. Se efectueaza cu alcool anilic sau cu hidrocarburi benzenice. anilic sau cu hidrocarburi benzenice.

Incluziunea la parafina etape premergatoare

c. impregnarea –patrundere a piesei cu c. impregnarea –patrundere a piesei cu parafina topita si solidificarea in bloc parafina topita si solidificarea in bloc prin racire pentru a oferi o consistenta prin racire pentru a oferi o consistenta omogena. omogena.

d. turnarea blocurilor – blocul inglobat d. turnarea blocurilor – blocul inglobat se monteaza pe un port-obiectse monteaza pe un port-obiect

5. SECTIONAREA

Piesa inclusa sau inghetata se taie in felii Piesa inclusa sau inghetata se taie in felii subtiri de ordinul micronilor cu ajutorul subtiri de ordinul micronilor cu ajutorul unui aparat numit microtom.unui aparat numit microtom.

5. SECTIONAREA

Sectionarea la microtomul ptr. parafina presupune urmatorii timpi pregatitori:

1. modelarea blocului pentru sectionare

2. lipirea blocului pe portobiect

3. sectionarea propriu-zisa

4. etalarea si lipirea sectiunilor

6. COLORAREA

- se urmareste cresterea contrastului intre - se urmareste cresterea contrastului intre elementele tisulare sau celulare prin elementele tisulare sau celulare prin modificarea indicilor de refractie ai modificarea indicilor de refractie ai substratului morfologic cu ajutorul substratului morfologic cu ajutorul colorantilor.colorantilor.

Tehnica de colorare depinde de natura Tehnica de colorare depinde de natura fixatorului si de tesutul pe care se aplica.fixatorului si de tesutul pe care se aplica.

7.MONTAREA

- - protejarea sectiunilor fragile de protejarea sectiunilor fragile de eventualele deteriorari, conservarea eventualele deteriorari, conservarea coloratiei si asigurarea unui mediu optic coloratiei si asigurarea unui mediu optic omogen si transparent necesar examinarii omogen si transparent necesar examinarii microscopice.microscopice.

Se face intre lama si lamela in diferite medii Se face intre lama si lamela in diferite medii de montare initial fluide.de montare initial fluide.

MONTAREA

Mediile de montareMediile de montare pot fii : pot fii :

1. Apoase: glicerina, sirop Apathy1. Apoase: glicerina, sirop Apathy

2. Anhidre: balsam de Canada, colofoniu2. Anhidre: balsam de Canada, colofoniu

8. ETICHETAREA Pe fiecare lama se noteaza Pe fiecare lama se noteaza

- tipul celular- tipul celular

- sursa de recoltare - sursa de recoltare

- fixatorul- fixatorul

- metoda de colorare- metoda de colorare

- data efectuarii- data efectuarii