Prepararea Vaccinurilor Inactivate

download Prepararea Vaccinurilor Inactivate

of 30

description

vaccinur inactivate

Transcript of Prepararea Vaccinurilor Inactivate

  • Prepararea vaccinurilor inactivate

  • Vaccinuri preparate din germeni inactivatiSunt constituite din germeni care in urma tratarii prin diferite procedee, chimice sau fizice isi pierd capacitatea de multiplicare sau de replicare (in cazul virusurilor) in organismul vaccinat avand conservata antigenitatea.Scopul principal al inactivarii consta, pe de o parte, in anihilarea in totalitate a patogenitatii tulpinii bacteriene utilizate la preparare vaccinului, iar pe de alta parte, in mentinerea intacta a structurilor antigenice (polizaharide, proteine, nucleoproteine, etc.), responsabile de inducerea raspunsului imun.

  • Vaccinuri preparate din germeni inactivatiObtinerea unui raspuns imun eficient cu astfel de vaccinuri se realizeaza prin utilizarea unor culturi vaccinale cu concentratii mari de masa antigenica asociata de obicei cu diferiti adjuvanti.Vacinurile obtinute din suspensii bacteriene inactivate poarta denumirea de (bacteriene).

  • Vaccinuri preparate din germeni inactivatiInactivare prin procedee chimice. Se bazeaza pe utilizarea in decursul timpului a diverse substante: antiseptice (formol, fenol, acetona, cloroform, merthiolat de sodiu, etc.); coloranti (albastru de metilen, albastru de toluidina, cristal violet); compusi organici (betapropiolactona) si derivatii etilendiaminici (etilendiamina,hidroxilamina), thiomersal, etc.

  • Vaccinuri preparate din germeni inactivatiProcedeele clasice de inactivare, cu formol, fenol, mertiolat, etc, desi foarte utile in practica, au fost aplicate fara o baza stiintifica riguroasa.In prezent (substantele inactivante) utilizate actioneaza direct asupra materialului genetic, ex.: betapropiolactona, hidroxilamina sau unele imine.Cu toate acestea formolul are inca o larga intrebuintare, fiind activ fata de bacterii, secretii bacteriene si virusuri. El conserva si pastreaza un timp indelungat structurile imunogene. Aceasta explica rarele accidente determinate de formaldehida, decurgand din cinetica neliniara de inactivare si din incapacitatea sa de a neutraliza patogenitatea unor virusuri.

  • Vaccinuri preparate din germeni inactivatiSubstantele inactivante pot forma cu constituentii din produsul inactivat complexe,care pot dobandi proprietati antigenice noi, fiind in masura sa determine unele efecte nocive sau sensibilizari ale organismelor vaccinate. In cazul revaccinarilor se pot declansa reactii alergice sau reactii de tip autoimun.Suspiciuni la vaccinurile de uz uman: antipoliomielita.

  • Vaccinuri preparate din germeni inactivatiInactivarea prin procedee fizice. Se realizeaza prin mai multe mijloace ca, caldura, ultrasunetele, radiatiile gama. Aceste procedee se pot combina uneori cu cele chimice.Caldura a fost si este si in prezent utilizata ca factor inactivant ajutator, la prepararea majoritatii vaccinurilor inactivate pe cale chimica.Temperaturile ridicate, mai mari de 37 C, care sunt active prin actiunea lor proprie, sunt ineficiente la prepararea vaccinurilor, din cauza distrugerii structurilor antigenice ale microorganismelor.In acest sens s-a demonstrat ca,incalzirea la 56 C timp de o ora a suspensiilor bacteriene sau virale, duce la scaderea evidenta sau chiar la distrugerea totala a proprietatilor lor imunizante.

  • Vaccinuri preparate din germeni inactivatiUltrasunetele, razele UV si radiatiile ionizate, a caror actiune se poate doza corespunzator, isi gasesc aplicabilitate cand metodele curente de inactivare nu conserva structurile antigenice imunogene. Produsele obtinute prin aceste metode de inactivare au o buna toleranta, imunogenitate si conservabilitate.

  • Vaccinuri preparate din germeni inactivatiVaccinurile obtinute din germeni inactivati prezinta o serie de avantaje si dezavantaje. Ca avantaje se pot mentiona:eliminarea riscului de reversie si a pericolului creerii purtatorilor de germeni;se pot obtine din agentii etiologici ai unor boli la care procedeele de atenuare nu sunt posibile(ex. :virusul febrei aftoase);pot fi utilizate cu atenti si la animale debile, cu boli intercurente sau foarte sensibile.

  • Vaccinuri preparate din germeni inactivatiDintre dezavantaje mentionam:lipsa capacitatii de multiplicare sau replicare in organism;necesita concentratii mai mari de substante antigenice si administrarea in doze mai mari pentru o imunizare corespunzatoare;au un continut mai ridicat de substante imunologic inactive (de balast) care pot genera fenomene secundare (durere, reactie locala, hipersensibilitate) si chiar inhibarea raspunsului imun;capacitate imunogena redusa ca urmare a efectului slab asupra imunitatii mediate celular;Imunitatea conferita este mai putin stabila si de durata mai scurta, in general cuprinsa intre 3-6 luni;

  • Vaccinuri preparate din germeni inactivatiabsenta stimularii proceselor imunitare locale, la nivelul mucoaselor, cu insuficienta sintezei de IgA, ceea ce creeaza riscul ca indivizii vaccinati sa inregistreze colonizarea mucoaselor, replicarea locala a virusurilor si transmiterea lor; Structura antigenica a tulpinii vaccinale poate fi modificata prin tratamentele aplicate in cursul prepararii, in sensul pierderii unor epitopi esentiali;instalarea imunitatii are loc mai tardiv (10 14 zile in medie), iar pentru consolidarea acesteia se impun vaccinari de rapel; structura antigenica a tulpinii vaccinale poate fi modificata prin tratamentele aplicate in cursul prepararii, in sensul pierderii unor epitopi esentiali; dificultati legate de producerea unei cantitati mari de microorganisme, mai ales in cazul agentilor microbieni care nu se cultiva sau se cultiva cu dificultate; dificultati in asigurarea constanta a unei valori biologice riguros egala a seriilor succesive de vaccin.

  • Vaccinuri preparate din germeni inactivatiVaccinuri inactivate serie aparte autovaccinurile.Preparate din tulpini izolate din focarele de boala se utilizeaza numai la animalele din fermele respective.La baza utilizarii lor sta premisa ca tulpinile de focar prin particularitatile lor antigenice si de patogenitate confera o imunitate mai ridicata decat cele de colectie.Autovaccinurile sunt constituite de obicei din culturi bacteriene sau virale inactivate (formol, sonicare), din triturate de organe provenite de la animale moarte sau sacrificate.Exemple: autovaccinul anticolibacilar, spirochetoza pasarilor, pasteureloza, etc.

  • NORME TEHNICEDE PREPARARE A VACCINULUI INACTIVAT SI CU ADJUVANT HIDROXID DE ALUMINIU CONTRA HOLEREI AVIAREHOLEPAL 1. CARACTERISTICILE PRODUSULUI1.1. Vaccinul inactivat contra holerei palmipedelor este un produs biologic obtinut prin cultivarea tulpinilor de Pasteurella multocida (Clemson University-CU si trei tulpini izolate din Romania Ar, Or, Mh) in sistem static sau pe fermentor. Vaccinul este reprezentat de amestecul culturilor celor patru tulpini de Pasteurella multocida, avand o concentratie de minimum 1 x 109 germeni/ml. Culturile sunt inactivate cu formaldehida si adsorbite pe hidroxid de aluminiu.

  • 1.2. Denumirea comerciala a vaccinului inactivat contra holerei la palmipede este HOLEPAL.1.3. Vaccinul se livreaza in flacoane care contin 50, 100 sau 250 ml, respectiv 25, 50, sau 125 de doze.1.4. Vaccinul se prezinta sub forma unui lichid galbui, usor tulbure cu sediment bogat alb-cenusiu care prin agitare moderata se uniformizeaza.

  • 2. COMPOZITIA PRODUSULUI2.1. Vaccinul HOLEPAL contine 80% culturi inactivate de P. multocida si 20% hidroxid de aluminiu.2.2. Inactivarea culturii adsorbite pe gel de hidroxid de aluminiu se realizeaza prin adaugarea de aldehida formica de 40% in proportie de 3 si mentinerea timp de 72 ore la temperatura de 370C

  • 3. MATERIALE3.1. Tulpini de Pasteurella multocida (CU, Ar, Or, Mh). 3.1.1.Caracteristicile morfologice, culturale, intretinerea si controlul tulpinilor sunt descrise in Normele tehnice pentru tulpini.3.2. Medii de cultura.3.2.1. Pentru obtinerea culturilor se folosesc mediile descrise in Tehnica 1 privind prepararea mediilor de cultura.3.2.2. Tulpina de lucru (TL) de virus Cl/90 de La Sota, se prepara, conserva si utilizeaza conform ,,Normelor tehnice de preparare si control ale acesteia.

  • 3.3. Adjuvanti.3.3.1. Hidroxidul de aluminiu se prezinta sub forma de gel. Dupa omogenizare prin agitare are aspectul unui lichid alb-laptos.3.3.2. Hidroxidul de aluminiu se sterilizeaza prin autoclavare o ora la 1150C.3.4. Inactivant.3.4.1. Se utilizeaza formaldehida in concentratie finala de 3

  • 4. MODUL DE PREPARARE4.1. Prepararea inoculului. Tulpinile de lucru se paseaza in mediul lichid, descris in Tehnica , in proportie de 1 2 % din volumul mediului de cultura si se incubeaza la 370C, timp de 18 20 ore. Cultura astfel obtinuta constituie inoculul pentru prepararea vaccinului.4.1.1. Din cultura-inocul se recolteaza o proba de 5 10 ml pentru controlul bacteriologic si fungic conform cerintelor din Tehnica 3.4.1.2. Inoculul trebuie sa fie pur din punct de vedere bacterioscopic si bacteriologic si steril fungic.4.2. Prepararea culturilor se realizeaza in sistem static sau fermentor folosind cultura inocul si respectand parametrii de crestere, conform Tehnicii 2.4.3. Culturile ajunse la sfarsitul fazei de multiplicare logaritmica se recolteaza in recipienti pe care se noteaza simbolul tulpinii, data obtinerii culturii, cantitatea recoltata.

  • 4.4. Din fiecare cultura se recolteaza o proba de 5 - 10 ml care se controleaza din punct de vedere bacterioscopic, bacteriologic si fungic (conform Tehnicii 3) si al titrului (conform Tehnicii 4).4.4.1. Culturilecare corespund controalelor efectuate conform pct. 4.4. sunt adsorbite pe gel de hidroxid de aluminiu steril, cu pH-ul ajustat la valoarea 7,2 7,4. Proportia de cultura-gel de hidroxid de aluminiu este de 1/5.4.5. Inactivarea culturilor se realizeaza prin adaugarea de formol (cu concentratia de aldehida formica de 40%) in proportie de 3 si mentinerea timp de 48 ore la temperatura de 370C.4.6. In scopul adsorbtiei culturii bacteriene pe gelul de hidroxid de aluminiu, recipientii cu hidroxid de aluminiu peste care s-a recoltat cultura bacteriana inactivata se mentin 48 ore la temperatura de 370C. La interval de 2 3 ore continutul recipientilor este bine omogenizat prin agitare.

  • 5. MODUL DE FORMARE A SERIEI5.1. Cantitatea de cultura bacteriana rezultata prin insamantarea aceluiasi pasaj al tulpinii de lucru se comaseaza intr-un recipient de omogenizare (repartizare) respectandu-se raportul cantitativ intre tulpini. Amestecul obtinut formeaza seria de vaccin.5.2. Fiecare serie de vaccin se numeroteaza. Numerotarea seriilor se face in ordine crescanda pe o perioada de 5 ani.

  • 6. MODUL DE CONDITIONARE.6.1. Conditionarea se face in flacoane sterile de 100 si 250 ml continand 50 si respectiv 125 doze, inchise cu dop de cauciuc si capsula de aluminiu.6.2. Fiecare flacon se eticheteaza.6.2.1. Etichetele vor avea inscrise urmatoarele date: denumirea producatorului, denumirea produsului, seria, valabilitatea, numarul de doze si viteza laboratorului de control.6.3. Flacoanele se ambaleaza in cutii individuale sau colective pe care se aplica o eticheta cu specificatiile de la pct. 6.2.1.6.4. Pe cutii se aplica o banderola de garantie pe care este inscrisa denumirea producatorului.6.5. In fiecare ambalaj se introduce cate un exemplar din instructiunile de folosire a vaccinului.

  • 7. VALABILITATEA 7.1. Vaccinul inactivat contra holerei la palmipede HOLEPAL are valabilitatea de 18 luni de la data prepararii. 8. CONDITII DE PASTRARE SI TRANSPORT8.1. Vaccinul va fi conservat la producator, in timpul transportului cat si la beneficiar pana la folosire, la temperatura cuprinsa intre +4/+80C.8.2. Transportul vaccinului se va efectua in masini sau lazi izoterme la temperatura de conservare.

  • 9. CONTROALE PE FLUX TEHNOLOGIC9.1. Ccontrolul puritatii microbiologice se executa la cultura inocul si la fiecare cultura obtinuta pe fermentor sau balon. In acest scop se recolteaza o proba de 5 10 ml din cultura.9.1.1. Pentru stabilirea puritatii culturii se efectueaza examenul bacteriologic. Cultura examinata trebuie sa contina numai germeni morfologic identici celor din tulpina de lucru Norme tehnice pentru tulpini bacteriene.9.1.2. Controlul puritatii bacteriologice se executa si trebuie sa corespunda prevederilor din Tehnica 3, pe mediile de cultura dezvoltandu-se numai culturi caracteristice de P. multocida.9.1.3. Controlul concentratiei de germeni vii pe ml de cultura se executa (si trebuie sa corespunda) conform normelor din Tehnica 4. Cultura trebuie sa contina cel putin 1 x 109 germeni pe ml.

  • 10. EVIDENTE DE PRODUCTIE SI CONTROL PE FLUX10.1. Se tin in registrele oficiale ale Laboratorului de productie.10.1.1. Registru de evidenta tulpini si Registru de productie vaccin.10.1.2. Registrul de control pe faza de productie.10.1.3. Dosar cu fisele de control si certificatele de calitate.

  • 11. NORME SANITARE VETERINARE DE LUCRU11.1. Masuri de prevenirea difuzarii tulpinilor de P. multocida11.1.1. Aria de productie pentru HOLEPAL va fi complet separata de zonele in care se lucreaza cu alte tulpini vaccinale.11.1.2. Spatiile tehnologice de lucru se vor dezinfecta periodic (saptamanal) cu formaldehida, calculandu-se cate 5-10 ml la m3 sau Javel 70% s.a.11.1.3. Toate materialele folosite la prepararea tulpinii matca, tulpinii de lucru, vaccinului antiholeric inactivat se vor decontamina prin autoclavare.

  • 11.2. Masuri de prevenire a contaminarii vaccinului cu bacterii sau fungi11.2.1. Incaperile de lucru se vor curata mecanic, spala cu detergenti si dezinfecta cu una din urmatoarele solutii:soda caustica ..5%formol.1% (sub forma de vapori)Javel70% s.a.11.3. Termostatele vor fi periodic curatate mecanic, peretii vor fi spalati cu solutie de detergenti si dezinfectante cu vapori de formol sau decontaminol.

  • 12. NORME DE PROTECTIA MUNCII12.1. Orice acident de munca, indiferent de gravitatea lui, va fi anuntat imediat sefului de munca, iar in lipsa acestuia, persoanei care ii tine locul.12.2. Persoanele care vin la serviciu in stare de ebrietate sau consuma alcool in timpul serviciului nu vor fi admise la lucru. Acestea vor fi sanctionate conform regulamentului de ordine interioara.12.3. Pentru lucrarile de laborator este obligatorie purtarea echipamentului de protectie muncii.12.4. In boxele sterile se va folosi echipament tehnologic special (halate, bonete, baticuri, sorturi) destinat strict operatiunilor din boxa

  • 12.5. Este interzisa folosirea boxelor sterile in alte scopuri decat cele prevazute de fluxul tehnologic.12.6. Dupa terminarea activitatii, personalul care a executatz operatii legate de producerea vaccinului este obligat sa se spele pe maini cu solutii dezinfectante.12.7. Este interzisa pastrarea hranei in frigiderele unde se gasesc tulpini bacteriene sau virale.12.8. Este obligatorie spalarea pe maini cu apa, sapun si detergenti inainte de consumarea alimentelor.

  • 12.9. Pentru evitarea accidentelor se va folosi numai sticlarie intacta, fara zgarieturi sau bule de aer.12.10. Recipientii utilizati la obtinerea vaccinului, controlul acestuia si tot instrumentarul folosit se vor steriliza prin autoclavare.12.11. Este interzisa functionarea lampilor de ultraviolete in prezenta oamenilor.12.12. Este interzisa functionarea fara supraveghere a aparatelor electrice, a instalatiilor de incalzire, a becurilor de gaz aprinse si folosirea furtunelor defecte sau cu un grad avansat de uzura, fara coliere, cu ramificatii metalice sau de sticla.

  • 12.13. Lichidele combustibile si volatile (alcool, toluen) vor fi manipulate cu atentie deosebita.pe masa de lucru se vor tine cantitati mici, iar in laborator se vor depozita in fisete cantitatile necesare lucrului pentru cel mult o luna de zile;se vor pastra in vase ermetic inchise si se va evita varsarea lor;nu se vor depozita si nu se vor transvza in apropierea focului.