Microbiologie Totalizare 2

8/10/2019 Microbiologie Totalizare 2

1/30

Lucrare de laborator nr.9

Tema:Procesul infectios factorii nespecifici de rezistenta

a organismului..1.Notiune de infectie

INFECIA totalitatea proceselor biologice care se produc n ma/o n urma penetrrii mi/o

patogene sau potenial patogene (PP).

PROCESUL INFECIOS interaciunea dintre mi/o i ma/o n diverse condiii ale mediului

ambiant. Manifestarea lui poate fi inaparent/ asimptomatic(stare de portaj sntos,

eliminarea rapid a mi/o) sau simptomatic.

MALADIA INFECIOAS manifestarea suprem a procesului infecios, se caracterizeaz prin diferite

simptome, determinate de efectele metaboliilor microbieni (toxine, enzime, etc) sau de reaciaimun a gazdei la prezena bacteriei

Particularitile bolii infecioase

1.

Sunt provocate de ageni patogeni

2.

Contagiozitate (capacitatea de a se transmite de la o surs la o persoan receptiv)

3.

Specificitate (un agent provoac o infecie, ex.: Clostridium tetanieste agentul tetanosului,

etc.)

4.

Evoluie clinic stadial

5.

Imunitate la reinfecie(durat variabil)

Apariia maladiei depinde de multipli factori, n special de capacitatea agentului cauzal de a provoca

maladiai de gradul de rezisten al gazdeila aceast invazie

2.Rolul microorganismelor in procesul infectios.

ROLUL MICROORGANISMULUI N PROCESUL INFECIOS. PATOGENITATEA I VIRULENA

Relaiile dintre mi/o i ma/o gazd:

1.

Comensalism(flora bucal, intestinal, etc)

2.

Parazitism (prezena mi/o este nociv pentru ma/o)

Orice mi/o parazit capabil s provoace o infecie (n condiii adecvate) este considerat p a t o g e

n.

Exist 2 tipuri de mi/o patogene:

1.

Obligat (cert) patogene, care infecteaz persoane imunocompetente cu doze mici


2/30

2.

Potenial patogene(oportuniste), care pot cauza infecie numai cu doze mari saula

persoane imunocompromise (deseori fac parte din flora normal a organismului)

Mi/o patogene pot fi gzduite uneori fr a provoca maladia, astfel de persoane sunt numite

purttori sntoi de germeni

Microorganismele patogene se caracterizeaz prin:

Patogenitatecapacitatea unei bacterii de a declana infecia. Este un caracter de specie

determinat genetic (cromozom, plasmide, bacteriofagi).

n cadrul unei specii patogene pot exista tulpini cu manifestare variat a patogenitii de la

absena total pn la foarte nalt.

Virulen gradul de patogenitate al unei tulpini(msur cantitativ a patogenitii). Se

apreciaz prin infectarea animalelor de laborator cu cantiti diferite de mi/o.

Unitile de virulen:

- DLMnumrul de bacterii necesar pentru a ucide 80% din animalele infectate

-

DL5050% letalitate

- DCL100% letalitate

- DI50/DIprovoac boala la 50%/ 80% animale

Modificarea virulenei:

-

Amplificareaprin transfer i recombinare genetic, condiii optime pentru cretere

- Reducerea(atenuarea) prin meninerea bacteriilor n condiii nefavorabile (t, factori chimici,

etc), mutaii

Bacteria patogen trebuie:

1.

S fie capabil de a se transmitentre gazde

2. Spenetrezen organismul-gazd

3.

S se rspndeascprin organism

4. S se multiplice i s persiste(evitnd sau distrugnd sistemul imun al gazdei)

5.

Sproduc leziuni

Aceste capaciti sunt asigurate de factorii de patogenitate.

3.factorii patogenitatii

Factorii de patogenitate ai bacteriilor


3/30

I.

Factori structurali (somatici)

1.

Adezine - fimbriile, glicocalixul, proteine de adeziune ale peretelui celular. Asigur aderarea

bacteriilor la receptorii de pe suprafaa celulelor-int sau la proteine matriciale

extracelulare (colagen, fibronectin, laminin, elastin, etc)

2.

Proteine ale sistemelor de secreie (tipuri I-IV)

3. Capsulaantifagocitar, anti-complement

4.

Antigenul O- antifagocitar

5. Peptidoglicanul(adeziune, agresie tisular)

6.

Acizii teichoici/lipoteichoici(adeziune, toxicitate)

7.

Proteina A la stafilococi(aciune antifagocitar prin fixarea Fc a IgG)

8.

Proteina M la streptococi(adeziune, a/fagocitar)

II. Enzime de patogenitate (responsabile de persisten, diseminare i producerea leziunilor)

- Plasmocoagulaza (formarea trombilor septici-efect antifagocitar, propagare n organism)

- Fibrinolizina (eliberarea bacteriilor din trombi)

- Hialuronidaza (diseminare, leziuni tisulare)

-

Colagenaza (identic)

- Neuraminidaza (lichefierea mucusului)

-

Proteaze (ex.: distrugerea Ig A secretorii)

-

Dezaminaze

- Decarboxilaze

Fosfataze, etcIII. Toxine bacteriene (responsabile de leziuni)

- Exotoxine(proteice, secretate n mediul extracelular)

- Endotoxine(LPZ, legate de celula bacterian)

4.Toxinele bacteriene.Carcateristica.Obtinerea.

Caracteristica exotoxinelor:

-

Proteine produse de bacterii G+/G-


4/30

- Pot fi secretate n mediul extern, eliberate n spaiul periplasmic sau fixate pe suprafaa

celulei

- Termolabile (excepie enterotoxina stafilococic i TS(toxina termostabil) a E. coli)

-

Hidrosolubile i acioneaz la distan

- Efectul se instaleaz dup o perioad de incubaie

-

Manifest tropism (specificitate de aciune)

- Toxicitate nalt (DLM de ordinul ng/kg)

-

Exotoxinele sunt imunogene (induc sinteza anticorpilor - antitoxine)

- Antitoxinele neutralizeazactivitatea exotoxinei (faza de fixare pe receptorii celulari)

-

Exotoxinele tratate cu formol 0,4% i meninute la 39-40C timp de 3-4 sptmni setransform n anatoxine. Ele sunt lipsite de toxicitate dar pstreaz imunogenitatea (utilizate

n calitate de vaccin).

Suportul genetic al exotoxinelor: cromozom(dizenteric, ), plasmide (toxina antraxului, toxina

tetanic), profagi (toxina difteric, botulinic).

Tipurile de exotoxine:

I.

Toxine citolitice

Deregleaz membranele celulare prin aciune enzimatic (fosfolipaza /lecitinaza, sfingomielinaza)

sau prin formarea porilor (streptolizina O, -toxina/hemolizina S.aureus, leucocidina

II.Toxine citotoxice, de tip A-B (acioneaz n interiorul celulei). Ex.: toxina difteric, botulinic,

tetanic, holeric, etc

Au structur bipartit: fracia polipeptidic B (cell binding) este responsabil de legarea de receptorii

specifici din membrana celulei-int, fracia polipeptidic A(active) ptrunde n celul (prin

endocitoz sau translocare) i determin activitatea toxic.

Fiecare citotoxin acioneaz strict specific:

toxina difteric inhib sinteza proteinelor,

- toxina botulinic i tetanic sunt neurotoxine, inhib eliberarea neurotransmitorilor,

-

toxina holeric i pertusic activeaz adenilat-ciclaza membranar, etc

Obinerea exotoxinelor bacteriene

-

Cultivarea tulpinii toxigene n mediu lichid

- Filtrarea culturii pentru separarea toxinei


5/30

- Purificarea toxinei

-

Concentrarea toxinei

- Determinarea activitii toxinei (se msoarin uniti de floculareLf )

5.Patrunderea si raspindirea microorganismilor in macroorgansim

P A T O G E N E Z A BOLII INFECIOASE

Ptrunderea i rspndirea mi/o n ma/o

Sursa de infecie: omul bolnav, reconvalescent, purttor sntos (infecii antroponoze) sau

animalele (infecii zooantroponoze)

Mecanismele de transmitere

1. Prin contact (direct, indirect)

2. Fecal-oral (alimentar, hidric, etc)

3. Aerogen (aer-praf, aer-picturi)

4. Transmisiv (prin intermediul vectorilor)

5. Vertical (transplacentar)

Microbii penetreaz prin tegument, mucoase sau direct n snge (pori de intrare). Un

microb poate avea una sau mai multe pori de intrare.

Doza critic ex.: dizenterie102 mi/o, febr tifoid 105, holer 109.

La poarta de intrare bacteria ader la celule (adeziunea) i se multiplic local (colonizarea),

formndfocarul primar de infecie. Infecia poate rmne localizat sau poate s se

rspndeasc (invazia) pe cale limfatic, sanguin,pe calea nervilorsau prin continuitate

(din aproape n aproape). n esutul afectat mi/o se multiplic i provoac leziuni direct prin

intermediul enzimelor sau toxinelor sau indirect, via mecanisme imune.

Mi/o se elimin cu diferitesecrete sau excrete ale ma/o, prin care are loc contaminareaaltor gazde sau obiecte

6.Dinamica evoluarii bolii infectioase

Dinamica evoluiei bolii infecioase

I. Perioada de incubaie (de la penetrarea mi/o pn la apariia primelor simptome). Durata

variabil (ore ani). Microbul se adapteaz, se multiplic, produce toxine, enzime, etc.

II. Perioada de invazie (prodromal, de debut). Apar primele semne clinice, nespecifice (febr, frison,

inapeten, astenie, etc). Durata 2-3 zile.

III. Perioada de stare (a manifestrilor clinice specifice). Durata variabil.


6/30

IV. Perioada terminal (convalescen i vindecare, sau cronicizare, sau stare de portaj, sau deces)

7.Criteriile de apreciere a rolului etiologic al agentului causal

Criteriile de apreciere a rolului etiologic al agentului cauzal n survenirea infeciilor specifice

(postulatele lui Koch)

1.

Bacteria trebuie s fie prezent la toate persoanele bolnave

2. Bacteria trebuie s fie izolat de la bolnav i meninut n cultur pur

3.

Cultura pur inoculat la un voluntar sau la un animal experimental trebuie s reproduc

simptomele bolii

4.

Aceeai bacterie trebuie s fie reizolat de la voluntarul sau animalul infectat

Actualmente se insist pe genomul bacterian (prezena genelor de patogenitate)

8.formele infectiei..

9.Rolul mediului ambient si social in infectie

Rolul mediului ambiant i social n infecie (condiiile economice, condiiile de via,

catastrofe ecologice sau naturale, progresul n igiena public, etc).

Maladii sociale: tuberculoza, pediculoza (tifosul exantematic), sifilisul, etc.

10.Rezistenta nespecifica a microorganismelor.

Pentru meninerea coerenei celulelor i esuturilor i pstrarea integritii sale ma/o pune

n joc 2 categorii de procese aprute succesiv n cursul evoluiei:

Rezistena nespecific, nnscut dezvoltat filogenetic, asigurat de factori

constituionali. Rspuns maxim imediat, nespecific, antigen-independent

Imunitatea (rezistena specific) s-a dezvoltat ontogenetic, antigen-dependent i

antigen-specific, rspuns maxim peste cteva zile de la agresie, se caracterizeaz prinmemorie imunologic

Rezistena nespecific

Rezistena nespecific este asigurat de factori tisulari (de barier), factori celulari i umorali.

Factori tisulari (de barier)

- Tegumentul(barier mecanic - integritatea, descuamarea stratului cornos; barier

biologic -flora normal, chimic - pH acid al tegumentului)


7/30

Mucoasele(barier mecanic - integritatea, micarea cililor, scurgerea secretelor; chimic -

secreiile digestive, pH acid al urinei; biologic -flora normal; barier enzimaticenzimele

din secreiile mucoaselor, ex.: lizozimul, lactoferina

Dac barierele au fost depite, atunci organismul dispune de ali factori de rezisten

nespecific: factori celulari i umorali.

Factori celulari de rezisten nespecific

- Reacia inflamatoare. mpiedic multiplicarea i rspndirea microbilor i asigur distrugerea lor.

- Fagocitoza(component al reaciei inflamatoare). Asigur captarea i distrugerea

substanelor strine, inclusiv a mi/o, celulelor infectate, celulelor tumorale.

Celulele fagocitare (fagocitele)

1 - Leucocitele PMN

2Macrofagele (monociten snge, macrofage fixecel. Kupffer, macrofage alveolare,

osteoclaste, microglia, macrofage din splin i ganglioni limfatici).

Pentru a interveni, fagocitele trebuie s recunoasc bacteriile ca particule strine.

Exist molecule solubile i membranare care pot recunoate componente bacteriene:

1.

Solubile - lectinele care se pot lega de manoza din peretele celular bacterian; proteine

plasmatice ce leag LPS bacterian

2.

Membranarepe macrofage exist receptori de manoz, receptorul CD 14 pentru LPZ,

receptori Toll-like(TLR). TLR pot recunoate diferite molecule bacteriene: LPZ,

peptidoglicanul, lipoproteine, acizi lipoteichoici, flagelina.

Ali receptori: receptori pentru Fc al IgG, pentru complement (CR1, CR3, CR4), pentru interferon,

limfokine, lectine, fibronectin, .a.

11.Fagocitoza

FAZELE FAGOCITOZEI

I. Chemotaxisul (atractani proteine bacteriene, fragmente de perete celular, capsule,

endotoxina, chemokine, etc)

III. Adeziunea mi/o la fagocit (fagocitul recunoate molecule strine de pe suprafaa bacteriilor

monomeri de PG, acizi teichoici, LPZ, acid micolic, ADN bacterian, ARNd.c. viral, manoza, glicani din

fungi, etc )

Inhibitoricapsula, antigenul O, proteina M, proteina A, plasmo-coagulaza, etc. Bacteriile patogene

care nu pot fi fagocitate se numesc extracelulare.

Stimulatoricationi de Ca2+, proteina C - reactiv, opsonine(fracii de complement (C3b),

fibronectina, unii anticorpi). Datorit receptorilor opsoninele acoper suprafaa bacteriilor


8/30

(opsonizare). Fagocitele de asemenea posed receptori pentru opsonine i astfel faciliteaz

adeziunea i ingestia mi/o.

IV. Ingestia (nglobarea) i formarea fagosomei.

III. Distrugerea (digestia) intracitoplasmatic

Fagosoma fuzioneaz cu lizosoma, n interiorul fagolizosomei formate mi/o va fi omort sub

aciunea enzimelor, anionilor superoxizi, H2O2, pH acid, apoi digerat de enzimele hidrolitice.

Produsele degradate pot fieliminatedin celul (PMN, macrofagele) sau dup o selecie i pregtire

prealabil (processing)unele peptide vor fi expuse pe membrana macrofagelor n asociaie cu

molecule ale CMH.Ele vor contribui la stimularea imunitii prin interaciunea cu receptorul pentru

Ag de pe limfocitele T. Aceasta este fagocitoza complet.

Fagocitoza incompletagentul persist i se multiplic n fagocit (micobacterii, gonococi).

Cauze:inhibiia formrii fagolizosomei, eliminarea bacteriei din fagosom nainte de fuziunea cu

lizosoma, etc). Acetia sunt patogenifacultativ intracelulari.

Aprecierea strii funcionale a fagocitelor

1.

Procentul fagocitelor active (N - 30-60%)ponderea fagocitelor care au nglobat cel puin

un mi/o

2.

Numrul fagocitar (N - 4 - 24)nr de mi/o nglobate n mediu de un fagocit

Alte celule cu activitate nespecific: celulele K i NK

Factori umorali de rezisten nespecific

Reactivi de faz acutorganismul supus unei agresiuni reacioneaz prin sinteza i secreia

crescut a unor proteine plasmatice: inhibitori de proteaze, proteine ale sistemului complement i

ale coagulrii, proteina C reactiv, protrombina, fibrinogenul, etc. Acestea mresc rezistena gazdei,

limiteaz leziunile tisulare i favorizeaz vindecarea

Complementulreprezint un sistem complex de proteine termolabile solubile imembranare. Se ntlnesc n plasma sangvin, limf i exsudate. Nu se detecteaz n saliv,

lacrimi, urin, transsudate.

Exist peste 30 de fracii ale C. C1-C9 sunt solubile, celelalte au rol de receptori membranari.

Fraciile C1-C9 circul n ser sub form inactiv, care n procesul activrii capt proprieti

enzimatice.

Activitatea biologic a complementului:

- Opsonizarea bacteriilor

-

Aciune citolitic


9/30

- Activitate anafilactic stimuleaz chimiotaxisul i activeaz neutrofilele, degranularea

mastocitelor i bazofilelor

- Activarea limfocitelor B

-

2. Properdinaproteine serice care particip la activarea complementului pe cale

alternativ.

- 3. -lizineleproteine serice termostabile (63 grade) cu activitate antimicrobian asupra

bacteriilor G+ n special

- 4.X lizina, protein seric termostabil (70-100 grade), produce liza bacteriilor G -

-

5. Lizozimulprezent n lacrimi, saliv, ser sanguin, favorizeaz liza bacteriilor

- 6.Anticorpii normali

-

7. Interferonii (glicoproteine cu aciune antiviral, antiproliferativ i imunomodulatoare

Lucrare de laborator nr 10

Tema:Imunitatea .Raspunsul imun.Ag.Ac

1.Notiune de imunitate.Organele centrale si periferice ale sistemului imun.Celuleleimunocompetente.Complexul MHCIMUNITATEnereceptivitatea organismului la orice ageni strini din punct de

vedere genetic, inclusiv la mi/o i toxinele lor.-

IMUNITATEcapacitatea de aprare specific a organismului fa de agresoriexterni (virusuri, bacterii, fungi, protozoare, toxine) ct i fa de propriile molecule iunele celule degradate sau modificate.

- Sarcina fundamental a imunitii distincia dintre moleculele i celulele proprii(self) i cele strine (non-self)

-

Organele centrale (primare) ale SImduva osoas i timusul la vertebrate(ficatul n perioada embrionar), bursa Fabricius la psri. Apar primele n timpulvieii embrionare.

-

Rolulsursa celulelor-stem, instruirea,maturizarea iselectia celulelorimunocompetente (limfocitele T i B).-

n mduva osoas se afl celulele-stem, precursori ai T i B-limfocitelor. Pre-Tlimfocitele migreaz ulterior n timus, unde va avea loc instruirea i maturizarealor,devenind celule imunocompetente, capabile s recunoasc specific un singur Ag (prinachiziionarea unor receptori specifici).

-

Instruirea si maturizarea B-limfocitelor are loc n mduva osoas.- Aceste procese sunt independente de orice stimulare antigenic a organismului.

- Dup prsirea organelor centrale limfocitele nu mai revin aici, ele se stabilesc norganele limfoide secundare, recirculndprin snge, limfOrganele periferice (secundare) ale SI

- n ele se realizeaz contactul dintre antigen, celulele prezentatoare de antigen ( CPA)i celulele imuno-competente, cu inducerea unui raspuns imun.


10/30

- Ganglionii limfatici (raspuns imun contra Ag transportate cu limfa)-

Splina (raspuns imun contra Ag transportate cu sangele)-

Formaiunile limfoide ale mucoaselor digestive i respiratorii (amigdale, plci Peyer,apendice), esutul limfoid asociat tegumentului(raspuns imun contra Ag cepenetreaza prin epitelii)

-

-

CELULELE SISTEMULUI IMUN- Limfocitele (celule imunocompetente, recunoasterea Ag)-

Celulele efectoare (eliminarea microbilor)-

Celulele prezentatoare de Ag (CPA) (captarea si prezentarea Ag microbiene )- LIMFOCITELE- Toate limfocitele provin din celule-stem ale maduvei osoase, cu o etapa ulterioara de

maturizare si selectie.- Limfocitele T si B sunt unicele celule ce poarta receptori specifici de Ag (celule

imuno-competente), fiind mediatorii principali ai imunitatii adaptative-

Maturizarea limfocitelor Bare loc n mduva osoas prin intermediul interaciunii

directe cu celulele stromei, iar n stadiile tardive sub aciunea citokinelor secretate decelulele stromale (n special IL-7). LB sunt supuse uneiselectii pozitivein favoareaexpresiei de receptori intacti si uneiselectii negativecontra recunoasterii puternice aantigenelor proprii.

-

In organelor limfoide secundare limfocitele B se localizeaza infoliculii cortexuluiexterndin ganglionii limfatici, foliculii din plcile Peyer i foliculii zonei perifericedin pulpa alb a splinei (arii timo-independente).

-

COMPLEXUL MAJOR DE HISTOCOMPATIBILITATE (MHC)- Moleculele CMH reprezint un ansamblu unic de glicoproteine exprimate pe

suprafaa celulelor organismului, care sunt veritabili markeri/ antigene de identitateai fiecrui individ.

-

Rolul moleculelor CMH:- Particip la prezentarea antigenelor peptidice limfocitelor T- Responsabilitate n respingerea grefelor-

CMH este transmis genetic. Genele CMH sunt situate pe cromozomul 6 la om, locusnumit HLA (Human Leukocyte Antigen).

- Moleculele CMH sunt formate din 2 catene polipeptidice, constituite din domeniiextracelulare, un fragment transmembranar i o regiune intracitoplasmatic. Structuratridimensional a moleculei duce la formarea unei caviti, la fundul creia se afl

receptorii care vor interaciona cu peptide antigenice proprii sau strine.Ali receptoriai CMH interacioneaz cu moleculele CD4 sau CD8 de pe TL.-

2.Tipurile de imunitate.Imunitatea dobindita ,umorala si celulara.TIPURILE DE IMUNITATE

- Ereditar(natural, de specie). Poate fi absolut (lipsa intei) sau relativ.-

Dobndit(achizitionata, adaptativa)- Activ - Natural (postinfecioas)

- Artificial (n urma vaccinrii)- Pasiv

-

- Natural (transplacentar, prin laptele matern)- - Artificial (administrarea Ac / seruri imune sau a- limfocitelor)


11/30

- Imunitatea dobnditse caracterizeaz prin:-

Dezvoltare lenta si manifestare tardiva (cteva zile, sptmnidupa contactul cu unantigen)

- Specificitate fa de antigen (capacitatea de a recunoaste si raspunde specific lanumeroase substante straine, inclusiv agenti infectiosi)

-

Memorie imunologic (capacitatea de a elabora raspuns mai rapid, mai intens si

eficace la intalniri repetate cu un antigen)- Imunitatea dobndit poate fi:-

I. Imunitate antibacterian, antiviral, antimicotic, antitoxic, antitumoral, etcII. n funcie de mecanismele reaciilor imune

- Imunitate umoral, exercitatprin intermediul unor proteine numite anticorpi (Ac,Ig), produse de limfocitele B. Fiind secretate in sange si lichide biologiceneutralizeaza si elimina microbii extracelulari si toxinele lor.

- Imunitate celular, eficienta in eliminarea parazitilor intracelulari sau a celulelortumorale. Este exercitatprin intermediul limfocitelor T (citotoxicitate directa,activarea macrofagelor, celulelor NK, secreia citokinelor)

-

III. n dependen de persistena mi/o- -Imunitate sterilse manifest dup eliminarea agenilor patogeni din organism

(ex.:rujeol)-

-Imunitate nesterilnereceptivitatea se pstreaz doar n perioada aflrii mi/o norganism (tuberculoz, sifilis).

- 3.Antigenele si characteristic lor.Antigene complete siincomplete.Izoantigene si autoantigeneANTIGENELEsubstane strine (non-self)de natur endo- sau exogen capabile

s declaneze un rspuns imun (umoral, celular, toleran imunologic, memorieimunologic, paralizie imunologic).-

Proprietile de baz ale Ag:- Imunogenitateacapacitatea Ag de a fi recunoscut ca strin i de a induce rspuns

imun specific-

Antigenitatea (specificitatea)capacitatea Ag de a interaciona specific cu Ac sau cureceptorul pentru Ag complementar al limfocitelor sensibilizate

- Antigenele care posed ambele caractere sunt Ag complete.- Cerinele fa de Ag complete:-

- S fie substane strine

-

- S fie formate din gruparea carrier (purttor) i epitopi (determinante antigenice)- S aib o greutate molecular de peste 10 kDa-

S aib structur chimic complex (proteine, polizaharide, LPZ, etc)-

S aib o conformaie spaial stabil- Antigenele incomplete (haptenele)posed antigenitate dar sunt lipsite de

imunogenitateAntigenele incomplete (haptenele):

-

Au mas molecular mic- Pot deveni imunogene combinndu-se cu macromolecule purttoare (proteine sau

polizaharide)

-

Exemple de haptene: sruri ale metalelor grele (Cr, Ni), substane de origine vegetal,medicamente, colorani, oligonucleotide.


12/30

- Superantigenemolecule proteice particulare (enterotoxinele stafilococice, toxinaocului toxicstafilococic, toxina exfoliativ a stafilococilor, nucleocapsida virusuluirabic), capabile s stimuleze un numr mare de limfocite T (10-40%). N0.01%.SuperAg provoac reacii imunopatologice.

-

-

Se disting arbitrar:

-

Ag solubile: proteine plasmatice, toxine, enzime, hormoni, etc- Ag figurate(celulare, corpusculare): celule, bacterii, parazii, etc.-

n funcie de provenien se deosebesc:-

- Ag heterofileAg comune mai multor specii animale. Ex.: Ag polizaharidiceForssman, prezente n hematiile de cal, cine, oaie, cobai; sistemul Rhaleritrocitelor se ntlnete la om i maimuele Macaccus rhesus, etc

-

4.Structura antigenic a celulei bacteriene si a virusurilor.Structura antigenic a celulei bacteriene

-

Ag structurale(Ag O/Rsomatice, LPZ, termostabile; Ag Hflagelar, proteic,termolabil; Ag Kcapsular, termovariabil; Ag Ffimbrial)

- II.Ag solubile(enzime de- patogenitate, exotoxine)-

Antigene virale:proteine/GP de invelis, nucleoproteine, enzime-

Determinantele antigenice (epitopii)- Imunogenitatea este o caracteristic a ntregii macromolecule Ag.- Antigenitatea (specificitatea) este determinat de anumite secvene ale Ag.-

Suprafee limitate din macromolecula Ag apte s se combine cu Ac specifici sau cureceptorii de pe limfocitele sensibilizate se numescdeterminante antigenicesau

epitopi.-

5.Anticorpii(imunoglobulinele)structural or .Clasele de

imunoglobuline.Functiile lor biologice.Anticorpii complete si

incompleteIgprezint glicoproteine din fracia -globulinelor. Se disting Ig membranare (BCR)i Ig solubile (secretate)Ac ca atare.

- Ac sunt molecule glicoproteice produse de plasmocitele derivate din limfocitele Bactivate de Ag. Ac circul n snge i ptrund n esuturi. Sunt eficieni contrabacteriilor, toxinelor microbiene i virusurilor n poziie extracelular.

-

Ac au proprietatea de a recunoate i a se combina cu Ag complementar, att invivo,ct i in vitroUNITATEA DE STRUCTUR a Ig (monomerul) este constituit din 2 lanuriglicoproteice (catene) identice uoare L(Light) i 2 catene grele H(Heavy), legatentre ele prin puni disulfidice.

-

Exist 2 tipuri de catene L i , identice ntr-o molecul de Ig.-

Se disting 5 clase de lanuri H: , , , , , ce corespund celor 5 clase (izotipuri) deIg: Ig G, Ig A, Ig M, Ig D, Ig E.

- n componena lanurilor se disting regiuni variabile (aminoterminale) i regiuni

constante (carboxilterminale).-

Regiunile variabile ale catenelor L i H formeaz o cavitate tridimensional - centrulactiv (paratopul) al moleculei de Ig, care va reaciona specific cu determinantaantigenic (epitopul) Ag corespunztor, constituit din 5-7 AA sau 3-4 reziduuri


13/30


14/30

- DacAg penetreazprin tractul respiratorn amigdale i esutul limfoid asociatbronhilor i mucoaselor

-

DacAg penetreazn tractul intestinalplcile Peyer, foliculii solitari- DacAg patrunde prin tegumentintlnirea are loc n esutul limfoid asociat

tegumentuluiII.Recunoaterea epitopilor unui Ag de ctre receptorul specific(BCR) de pe suprafaa B limfocitelor naive (selecia clonala)i activarea lor.

-

Limf B naverecunosc epitopii prin intermediul moleculelor de Ig M i Ig D (BCR)de pe suprafata lor, capabile slege epitopi omologi cu forma complementara.

-

La interactiunea BCR/Ag T-dependent (proteine), limf B naiv se comporta ca o CPA(inglobarea Ag, degradarea lui, selectarea peptidelor antigenice si prezentarea pesuprafata celulara a complexului peptid/CMH II pentru a fi recunoscute de limfTCD4)Primul semnal activator reprezinta interactiunea BCR cu epitopul Ag corespunzator.Semnale secundare intervin ulterior (ex.:fixarea pe limf B a fraciei C3d acomplementului). Astfel limf B naiv este activat, fiind capabil sa produccantitatimari de molecule CMH II, molecule co-stimulatoare i receptori pentru citokinele

produse de limf ThIII. Proliferarea limfocitelor B activate si diferentierea lor

- Dup activarea limf B de unAg T-independenturmeaza proliferarea lui intr-o clonade celule identice (expansiunea clonala)i diferenierea n plasmocite, care vorsintetiza si secreta Ac din clasa (izotipul) Ig M, memoria imunologica lipseste.

- IV. Efectul interaciunii dintre Ag i Ac in vivo- depinde de natura Ag i de tipul de Ac i se poate manifesta prin:-

- Opsonizarea bacteriilor i intensificarea fagocitozei- Activarea complementului pe cale clasic determinnd citoliz (inclusiv bacterioliz)- Neutralizarea toxinelor, enzimelor-

Inhibiia adeziunii bacteriilor, virusurilor (IgA)-

Neutralizarea virusurilor extracelulare- Imobilizarea bacteriilor si protozoarelor- Citotoxicitatea mediat celular anticorp-dependent (celulele acoperite de Ac sunt

distruse de celulele K)-

Rspunsul umoral primar la primul contact cu Ag- I faz de latendureaz 4-7 zile, pn la apariia primilor Ac. In acest timp are

loc recunoaterea, degradarea Ag, diferenierea T,B limfocitelor

-

II faz logaritmicTitrul Ac crete, atingnd max n a 10-15 zi. Iniial are locproducerea Ig M, peste 4-5 zile - IgG sau alte izotipuri de Ig (prin comutatie de clasa

sub influenta citokinelor produse de Th).-

III faz de producere maxim a AcDurata variaz n funcie de Ag- IV faz de diminuare a titr ului de Ac(declin)n cazul Ag proteice dureaza

sptmni, Ag polizaharidice luni, Ag viraleani)-

Rspunsul umoral secundar(la un contact repetat cu acelai Ag).-

Este asigurat de LB-memorie- Perioad de latenscurt (ore)- Ascensiune rapid a titrului Ac

-

Titru maxim de Ac meninut o durat mai mare- Afinitate crescut a Ac fa de Ag- Producerea anticorpilor Ig G.


15/30

-RASPUNSUL IMUN CELULAR (Imunitatea celular) - IC

-

Rolul IC este de a elimina microbii care pot supravieui n vacuole fagocitare sau ncitoplasma celulelor infectate. Acest tip de imunitate este asigurat delimfocitele T.

-

Principalii efectoriai IC sunt limfocitele Tcitotoxice (Tc) derivate din limf TCD8(T8),care au capacitatea de a distruge celulele infectate cu virus sau tumorale i de a

liza macrofagele infectate cu bacterii facultativ intracelulare. Ambele tipuri delimfocite (TCD8 naive si Tc) poseda TCR si molecule CD8.I etapaPrezentarea Ag LT nave. Procesul are loc n organele limfoide periferice(OLP).

- CPA profesioniste (macrofage, celule dendritice) capteaza Ag (ex.: celule infectatecu virus sau celule tumorale).

-

In cursul fagocitozei unele proteine virale pot fi transferate din fagosome incitoplasma, unde ele vor fi fragmentate de catre proteasome. Dupa asamblarea cumoleculele CMH I, complexul peptid /CMH I este scos la suprafata CPA (peste250.000 complexe per celula).

-

CPA cu limfa sunt transportate in ganglionii limfatici, unde ele vor fi capabile saprezinte Ag limfocitelor TCD8 nave.

- II etapaRecunoasterea epitopilor Ag de catre TCR unui LT CD8 naiv si activarealui.

-

Limf T8 navevor recunoaste peptide asociate cu CMH I de pe suprafata CPA careau captat celule infectate cu virus. Epitopul trebuie sa corespunda cu TCR de pelimfocitul T8, iar CMH I va recunoaste situsuri de pe CD8.

-

Aceaste interactiuni, precum si alte legaturi moleculare intre CPA si limf T8,participa la activarea limf T8 nave (costimulare). Citokinele eliberate de CPA seimplica de asemenea.

-

-

III etapaProliferarea limfocitelor T8 (expansiunea clonala) si diferentierea lor.- Dupa activare, sub influenta unor citokine eliberate de limf Th1 (in special IL-2), are

loc proliferarea limf T8 si diferentierea lor in celule efectoare Tc, capabile sa luptecu infectia intracelulara sau celulele tumorale.

-

Proliferarea ncepe la 2 zile de la activarea limfocitelor i se produce rapid (peste osptmn dup infectare pn la 10-20% din toate limf din OLP pot fi specificepentru un Ag. N1:106). Diferentierea in celule Tc are loc in paralel cu proliferarea.

-

IV. Realizarea efectuluiIC

-

Citotoxicitateaeste rezultatul contactului specific direct dintre clona de Tc i inta lor(celule infectate cu virus sau bacterii intracelulare, celule tumorale). Celulele infectateprezint pe suprafaa sa pepMemorie imunologicaCapacitatea sistemului imun de a elabora raspuns mai rapid,mai intens si mai eficace la intalniri repetate cu acelasi Ag.

- Tolerantaabsenta raspunsului imun la antigene proprii (self). Este determinata deinactivarea si eliminarea limfocitelor autoreactive in procesul de maturizare alimfocitelor T si B.

-

8.Particularitatile imunitatii in infectii

bacteriene,virale.Imunitatea antitoxica si de


16/30

transplantRaspunsul imun antibacterian si antiviral are att o componenta

- humorala ct si una celulara. Prevalenta unuia sau altuia dintre cele- doua compartimente este diferita n functie de natura agentului infectios.-

De cele mai multe ori, predomina raspunsul imun mediat humoral, iar n-

cazuri mai rare (de exemplu, infectia cu M. tuberculosis sau cu M.-

leprae) este preponderent raspunsul imun mediat celular.- Raspunsul imun fata de diferite antigene ale agentilor patogeni are-

grade variate de protectie antiinfectioasa, n functie de natura agentului,-

de gradul sau de virulenta si de natura raspunsului imun pe care-l- initiaza. Uneori, raspunsul imun antiinfectios este putin benefic pentru- gazda sau este chiar detrimental, din diferite cauze:-

- raspunsul imun este orientat fata de componente moleculare- neesentiale ale agentului infectios. Stimularea antigenica activeaza un- raspuns imun ineficient. Anticorpii nu au efect neutralizant al

-

infectiozitatii, pentru ca structurile de care se leaga specific nu constituie-

situsuri critice ale agentului patogen (de exemplu, anticorpii antiflagelari,- care in vitro determina aglutinarea, in vivo au o eficienta mai scazuta,- limitata la imobilizarea celulelor bacteriene);-

- raspunsul imun poate produce leziuni mai puternice si mai-

extinse dect nsusi agentul infectios. Infectia propriu-zisa produce- leziuni minime, dar activarea imunitatii mediate celular amplifica leziunile- tisulare si grabeste evolutia procesului infectios (de exemplu, leziunile-

consecutive infectiei cu virusul corio-meningitei limfocitare la soarece si- liza hepatocitelor infectate cu virusul hepatiei B umane).

-

Componentele structurale antigenice ale unui agent infectios, care-

stimuleaza un raspuns imun protector se numesc situsuri critice sau-

structuri imunodominante.- Un raspuns imun eficient (protector) trebuie sa aiba ca rezultat- final, lezarea structurii peretelui bacterian, fungic sau a nvelisului viral,-

prin actiunea combinata a anticorpilor si a proteinelor complementului.*Raspunsul imun n infectiile virale

- Infectiile virale constituie, nca, o cauza majora a morbiditatii si- mortalitatii, desi vaccinarea a redus incidenta infectiilor severe (polio,-

oreion, rujeola, rubeola) si a eradicat variola. Cunoasterea-

mecanismelor raspunsului imun antiviral este importanta pentru-

evaluarea problemelor clinice de fond (de exemplu, dinamica-

raspunsului imun) si pentru cautarea unor noi metode de obtinere a- vaccinurilor.- Interactiunea virusurilor cu organismele, este modulata de-

sistemele de aparare nascute si dobndite. Pentru a se perpetua ntr-o-

populatie, virusul trebuie sa fie virulent, dar suficient de flexibil n-

modularea virulentei, pentru a se pastra n populatia sensibila. In- perspectiva evolutiva, interactiunea virusului cu organismul sensibil

-

trebuie sa confere superioritate virusului. Daca este prea virulent si nu-

poate fi controlat de imunitatea gazdei, rezultatul poate fi moartea si n- final disparitia gazdei. Daca este lipsit de virulenta, virusul va fi eliminat- prea rapid de sistemul imunitar al gazdei si poate sa dispara prin


17/30

- incapacitatea de a se perpetua.-

Adeseori, virulenta virala este diminuata prin mutatie si n acelasi-

timp se selecteaza gazde mai bine adaptate imunitar, rezultnd un- echilibru fluctuant, n care coexista att gazda ct si virusul.-

Proteinele virale, componente ale capsidei si peplosului, sunt-

imunogene si induc un raspuns imun intens n organismul infectat.

-

Raspunsul imun antiviral este orientat att fata de antigenele exprimate- pe suprafata virionilor, ct si fata de antigenele prezentate pe suprafata-

celulei infectate.-

Antigenele expuse pe suprafata celulei infectate, difera n functie- de natura virusului (nud sau acoperit) si de mecanismul maturarii- virionilor. Celulele infectate cu virusuri nude (adeno-, reo-,-

enterovirusuri) expun pe suprafata lor proteine virale asociate cu moleculele CMH I,iar cele infectate cu virusuri nvelite, n special cu

- virusuri care se matureaza prin nmugurire la nivelul membranei, expun-

glicoproteinele peplosului, inserate n arii limitate ale membranei. In

-

ambele cazuri, celula infectata devine tinta mecanismelor de- recunoastere imunitara.- Antigenele expuse pe suprafata virionului sau a celulei infectate,-

stimulatoare ale raspunsului imun, se numesc antigene protectoare.-

Antigenele intrinseci ale virionului, au rol protector nesemnificativ,- deoarece nu vin n contact cu sistemul imunitar, dect n cazul n care- se sintetizeaza n exces si se elimina din celula infectata.-

Antigenele virale libere sau asociate virionului, stimuleaza- raspunsul imun humoral, iar cele prezentate pe suprafata celulelor- infectate, stimuleaza raspunsul imun celular.-

Activarea unuia sau altuia dintre compartimentele imunitatii,-

depinde de mai multi factori: de tipul de infectie (primara sau- secundara), de rezultatul interactiunii virus-celula (liza sau infectie- persistenta) etc.-

Virusurile care produc infectii acute, determina o competitie ntre-

replicarea virala si efectorii raspunsului imun. Rezultatul este- nsanatosirea sau moartea gazdei.- Pentru virusurile care produc infectii cronice, scara de timp este-

mai lunga. Virionii sau antigenele virale din snge sau din alte fluide,

-

determina formarea complexelor Ag-Ac, cu manifestari patologice- secundare. Alteori, anticorpii antivirali si celulele T activate, pot produce-

leziuni ale celulelor infectate. Majoritatea manifestarilor clinice care-

nsotesc infectiile virale cronice, sunt consecinta raspunsului imun al- gazdei, stimulat de antigenele virale.

Lucrare de laborator nr.11Tema:Metoda serologica de diagnostic.Reactiiantigen AnticorpL.L. Nr.11 Tema: metoda serologica de diagostic. Reactii le antigen-anticorp.


18/30

1. Metoda selorogica de diagnostic. Esenta. Seroindentificarea si serodiagnosticul. Mecanismele reactiilor

antigen-anticorp in vitro.

REACIILE ANTIGEN-ANTICORP in vitro (REACIILE SEROLOGICE)Reacia Ag-Ac este determinatde interaciunea specificdintre epitopii Antigenului i paratopii Anticorpilor.

n acest proces intervin patru tipuri de legturi: legturi de hidrogen, legturi electrostatice, forele Vander Waals i legturi hidrofobe.

Legtura Ag-Ac are trei caracteristici: este exotermic, specific

i reversibil.

Afinitateaunui Ac pentru un Ag specific caracterizeaz

intensitatea forelor de legtur

a complexului Ag-Ac.Ea depinde de complementaritatea steric

dintre paratop i epitop.

Aviditateaunui Ac pentru un Ag specific reprezintrapiditatea apariiei manifestrii reaciei Ag-Ac(precipitare, aglutinare, etc.). Ea depinde de constanta de asociere, de valena Ac, de numrul deepitopi, de temperatur, de pH, de fora ionic

a mediului.Un paratop se poate combina cu un singur epitop, numit specific. Astfel, daceste cunoscut unul din

elementele reaciei - Ag sau Ac, poate fi identificat cellalt

Reaciile Ac-Ac (reaciile serologice) au doudirecii de aplicare practic:I. Seroidentificare:Detectarea i dozarea Ag (element necunoscut - tulpini microbiene izolate din diferite

prelevate) cu ajutorul Ac specifici cunoscui.Pot fi utilizate dou

surse de Ac: Ac monoclonali, absolut omogeni, dar care recunosc doar un singur epitop iAc policlonali, ce se conin n seruri imune (antiseruri), care permit legturi de aviditate naltcu Ag.

Serurile imune se obin prin injectarea la un animal de laborator a antigenelor cunoscute. Dupo perioaddetimp, serul animalului va conine anticorpi contra acestor antigene. Dar natura exact

a Ac din acest sernu poate fi cunoscutcu exactitate (Ac policlonali). Specificitatea serului trebuie sfie permanentcontrolati Ac nedorii trebuie sfie eliminai prin adsorbie.

II. Serodiagnostic:Detectarea i titrarea Ac din serul bolnavilor (component necunoscut) fa

de un Agspecific cunoscut (coninut n diagnosticuri).

Unele reacii Ag-Ac se manifestdirect i pot fi observate de experimentator: de exemplu precipitarea sauaglutinarea complexelor Ag-Ac, liza unor celule purttoare de Ag pe membrana lor (hemoliz,bacterioliz, etc).

Alte reacii Ag-Ac nu se vizualizeaz

spontan

in vitro. n acest caz se va recurge la nite artificiiexperimentale, cum ar fi utilizarea Ac marcai:

Ac marcai cu un fluorocrom: imunofluorescena.Ac marcai cu un izotop radioactiv: analiza radio-imun.Ac marcai cu o enzim: analiza imunoenzimatic.

INTERACIUNEA ANTIGEN-ANTICORPFaza specific: are loc interaciunea dintre Ag i Ac specific corespunztor. Este un fenomen rapid, invizibil,

comun pentru toate reaciile Ag-Ac. Decurge la temperatura de 37 C, n prezena unui electrolit(sol. fiziologic).

Faza nespecific, vizibila uniunii Ag-Ac, se manifestprin precipitare, aglutinare, liz, etc - fenomenedeterminate de anumite condiii (valena Ac, dimensiunile Ag, etc).

2. Reactia de aglutinare (RA). Principiul, mecanismul i componentele reactiei. Modificrile reactiei de

aglutinare. Tehnica de efectuare. Analiza rezultatelor.

REACIA DE AGLUTINAREDin latinagglutinatio - ncleiereReacia Ag-Ac se poate manifesta prin aglutinareatunci cnd determinantele antigenice sunt purtate de

particule figurate(Ag insolubile, corpusculare), iar Acspecifici sunt complei(cel puin bivaleni).


19/30

Aglutinarea este determinatde formarea unei reele ntre Ag i Ac, ce permite apropierea unui numrsuficient de particule figurate pentru a constitui aglutinate vizibile cu ochiul liber. Ac IgM cu 10 epitopipoteniali aglutineazmai activ dect Ac IgG.

Clasificarea reaciilor de aglutinareAglutinare activ

sau direct, n care particula figurat

(Ag corpuscular) este el nsui purttor de

determinante antigenice specifice (hematii, leucocite, trombocite, spermatozoizi, bacterii)Aglutinare pasivsau indirect, n care particula servete doar de suport pentru un determinant antigenic

solubil fixat artificial pe suprafaa sa. Frecvent sunt utilizate ca suport hematii formolate, particulede latex sau microcristale de colesterol.

Reactii de aglutinare activa (directa)Aspect calitativ

Reactia poate fi efectuata pe lama de sticla sau in tuburi.ReactiapelamaSe amesteca o picatura de ser si o picatura de suspensie bacteriana (Ag). Lectura se face la microscop sau cu

ochiul liber. In caz de reactie pozitiva apar conglomerate, iar lichidul se clarifica;in caz de reactie negativa,lichidul ramane tulbure.

Reactia in tuburiIn eprubeta se amesteca serul si Ag figurate (hematii, bacterii).Reactia pozitiva se manifesta prin formarea unui sediment cu aspect de umbrela inversata la fundul tuburilor

(peste 20-24 ore) i clarificarea lichidului. Aprecierea intensitaii reaciei se efectueaza dupa sistema de4 plusuri (++++).

Celulele neaglutinate se sedimenteaza la fundul tuburilor sub forma de buton sau inel (reactie negativa).Lectura se face cu ochiul liber sau folosind oglinda concava a microscopului.

Aspect cantitativ

Metoda dilutiilor succesiveInitial se efectueaza dilutii succesive ale serului (1/50, 1/100, 1/200, etc) in care se introduc ulterior cantitati

egale de Ag. Termostat

2 ore, apoi la t camerei 18-20 ore.Aprecierea: cea mai mare dilutie a serului in care se manifesta aglutinare de cel putin 3 +(+++) se numeste

titrul anticorpilor aglutinanti (titrul serului aglutinant).Aglutinarea directa este utilizata pentru determinarea grupelor sangvine sau in diagnosticul unor maladii

infectioase (seroidentificarea Ag sau depistarea i titrarea Ac din serul bolnavilor) .

Reactile de aglutinare pasiva (indirecta)Aglutinarea pasiva consta in fixarea unui Ag solubil (sau al unui Ac) pe un suport corpuscular inert, care nu

intervine in reactia Ag-Ac. In calitate de suport inert pot servi hematiile, particule de latex, cristale decolesterol. Suspensia de particule sensibilizate cu Ag sau Ac este pusa in contact cu serul imun(respectiv cu Ag), ca si in cazul aglutinarii directe.Avantajele reactiilor indirecte: facilitatea lecturii si sensibilitatea inalta.

Reactia de hemaglutinare indirecta (pasiva)RHAI / RHAPUnele antigene de origine polizaharidica se fixeaza practic spontan, dupa o scurta incubatie, pe suprafata

hematiilor. Antigenele proteice se fixeaza doar dupa o pregatire prealabila a hematiilor (de ex.: tratarea

cu tanina, formol).RHAI se efectueazin godeurile unei placi din polistiren. Reactia pozitiva se manifesta prin aglutinarea

eritrocitelor sensibilizate (umbrela inversata de culoare bruna la fundul godeurilor).


20/30

n reacia de latex-aglutinareAc sau Ag sunt fixai pe particule de latex. Reacia se efectueaz

pe lama desticl.

Reacia de latex-aglutinare este utilizata in identificarea factorului reumatoid la bolnavi suspecti de poliartritareumatoida, in bacteriologie pentru identificarea rapid

a mi/o sau Ag lor n prelevate, sau identificarea

tulpinilor izolate, de asemenea pentru serodiagnosticul unor infecii.

Reacia de Co-aglutinare.La baza acestei reacii se aflproprietatea unei bacteriiStaphylococcus aureus(tulpina Cowan) - ce are n

componena peretelui celular proteina A - sfixeze Ig G prin intermediul fragmentului Fc. Astfel seformeazdiagnosticuri cu Ac, cu ajutorul carora pot fi identificare Ag respective necunoscute. Reaciase efectueaz

pe lam.

REACIA COOMBS

Unii Ac (monovaleni) nu sunt aglutinani n condiii normale, fiind monovalenti (ex.: anticorpii anti-Rh,responsabili de incompatibilitatea materno-fetaln sistemul Rh). Ei pot fi depistai graie testelorCoombs.

Sunt posibile 2 tehnici, n funcie de prelevat: snge de la nou-nscut sau de la femeia gravid.

Tehnica Coombs direct.La un nou-nscut se cautprezena Ac materni anti-Rh fixai pe hematii, dacmamaeste Rh-. La aceste hematii suspecte se adaug

un ser anti-Ig uman. Acest ser nu aglutineaz

hematiilenormale, din contra, el provoacaglutinarea hematiilor pe care sunt fixai Ac anti-Rh.

Tehnica Coombs indirect. La o femeie gravid

Rh- Ac anti-Rh sunt prezeni n ser. Iniial la acest ser se agaug

hematii Rh+ (pentru formarea complexului Ag-Ac), apoi se aplic

serul anti-Ig.

3. Reactia de precipitare (RP). Principiul, mecanismul si componentele reaciei . Tehnica de efectuare.

Analiza i interpretarea rezultatelor.

REACTIILE DE PRECIPITAREImunoprecipitarea se manifesta doar atunci candAg solubileste amestecat cu Ac corespunzator. Ea poate fi

observata sau in mediu lichid, sau solid, fiind sau calitativa, sau cantitativa. Acestea sunt reactiispecifice dar putin sensibile, ce necesita cantitati importante de anticorpi.

Precipitarea complexelor moleculare rezultate din uniunea Ag-Ac este determinata de formarea unei retele

tridimensionale de Ag reunite prin Ac.

Condiiile de formare a reelei de precipitare:Ac sa fie cel putin bivalent (Ac completi)Ag sa fie multivalent (haptenele nu pot fi precipitate)Precipitarea maxima corespunde cu zona de echivalen, unde Ac si Ag sunt in raport optimal de concentraie,

ce permite precipitarea tuturor moleculelor de Ac cu Ag corespunzator. n exces de Ag sau de Acprecipitatul nu se formeaz.

Utilizare:n medicina legala (determinarea apartenenei de specie a diferitor proteine: snge, sperm, etc), nigiena alimentar(depistarea falsificrii alimentelor), n diagnosticul maladiilor infectioase, etc

PRECIPITAREA IN MEDIU LICHIDReactia de precipitare inelara


21/30

Intr-un tub cu diametrul de cinci millimetri se introduce serul imun; pipeta se inclina si pe peretii ei se lasa sase prelinga incet solutia de Ag, ca sa nu se amestece cu serul. Daca Ac din ser corespund cu Ag, in zonade separare a celor doua lichide

se formeaza un inel alb, ceea cesemnifica precipitareacomplexului Ag-Ac.

Avantajul metodei

rapiditatea

si simplicitatea.Utilizarea practica: identificareapetelor de sange, depistarea falsificarilorproduselor alimentare, depistarea

antigenului polizaharidic al agentuluiantraxului in omogenat de organe (reactia Ascoli).

Reacia de floculare (tehnica Ramon)

Se efectueazdiluia succesiva serului imun (Ac) la care se adauga cantiti egale de Ag. Se ntroduc probelen termostat i periodic se examineazpentru depistarea tubului n care apareprecipitatul iniial (zonade echivalen).

Utilizare:pentru determinarea cantitii de toxin, antitoxin

sau anatoxin.

PRECIPITAREA N MEDIU SOLID (N GEL)n aceste reacii Ag i Ac difuzeaz

unul spre altul prin geloz

i n zona de concentraie optim

a acestor dou

reactive se produce precipitarea sub formde linii albe-cenuii. Dacexistmai multe sisteme Ag-Ac,se vor forma linii de precipitare distincte. Poate fi utilizatn analiza calitativa unui amestec de Ag

ntr-o soluie.

Imunodifuzia simplradial(tehnica Mancini)Se efectueazpe o placacoperitcu geloz, n care sunt ncorporai Ac specifici. Ag este depus n godeurile

din stratul de geloz. Ag difuzeaz

radial n geloz

pe parcursul a 48 ore. Dac

Ag corespunde Ac, atunciare loc formarea de discuri de precipitare, cu suprafaa proporional

concentraiei Ag din godeu. Seutilizez

pentru depistarea i cuantificarea Ig, hormonilor, enzimelor, etc.

Imunodifuzie dubl(tehnicile Ouchterlony i Elek)Se acopercu gelozo placde sticlsau se toarngeloza n cutia Petri.

n tehnica Ouchterlony Ag i Ac difuzeazdin godeurile situate la o distande 15 mm unul de altul.n tehnica Elek cele 2 reactive difuzeaz

din benzile de hrtie plasate pe suprafaa gelozei.Moleculele difuzeaz

n gel n funcie de greutatea lor i formeaz

linii de precipitarepentru fiecare sistem Ag-

Ac ce corespund n zona lor de echivalen. Dac

dou

Ag sunt identice, liniile lor se unesc, dac

suntdiferitese intersecteaz. Utilizareadeterminarea toxinelor (toxigeneza), antitoxinelor, Ag proteice

Contraimunoelectroforeza (CIEF)Este utilla examinarea amestecurilor antigenice complexe. Lectura este posibila peste 90 minute.Geloza este turnatpe o placde sticl, Ag i Ac sunt dispui n rezervoare circulare de 2 mm diametru, la o

distande 10 mm. n timpul electroforezei Ag, ncrcat negativ, migreazspre polul pozitiv, ntlnind

Ac care migreaz

spre catod. La interaciunea Ag i Ac omologi are loc formarea liniei de precipitare.CIEF servete la examinarea componentelor Ag din lichide biologice: LCR, urin, lichid pleural, ascit,etc.


22/30

4. Reaciile de liz. Reactia de fixare a complementului (RFC). Principiul, mecanismul i componentle reaciei.

Tehnica de efectuare. Analiza i interpretarea rezultatelor.

REACII DE CITOLIZIMUN(cu participarea complementului)Activarea fraciilor complementului (C) duce la liza particulei purttoare de Ag (hematii, bacterii, diverse

celule...)

Activarea complementuluiCalea clasic

Calea alternativ

Calea lectinic

Activarea C pe cale clasic

Activatorull constituie complexe Ag-Ac(IgG, IgM)Consecutivitatea activrii C: Ag-Acfixeazfracia C1qrs, care captulterior activitate esterazic(n prezena

obligatorie a Ca++

)

C1 activeaz

C4, cu formarea complexului AgAcC1C4b. Este apoi activat C2 (AgAcC1C4bC2a), complexulC4bC2adevenind convertazce acioneazasupra C3

Urmeazclivarea C3 n C3a (anafilotoxin) i C3b, care se unete de complex (AgAcC1C4bC2aC3b), formndC5-convertaza, care cliveaz

C5 n C5a i C5b

C5b se leagde membrana celulei-int. Urmeazfixarea simultana C,6,7. La final se fixeazC8, apoi C9,formnd complexul de atac membranar. Fixarea lor produce leziuni ireversibile

liza celulei.

Calea alternativde activare a C

Activatori:endotoxine, celule infectate cu virus, levuri, parazii, venin de cobr, agregate de IgA sau IgE. C1,4 i2 nu intervin i reacia ncepe cu C3. Properdina, factorul B i ionii de Mg

++sunt obligatorii n procesul de

activare pe cale alternativ.

Calea lectinicde activare a C este determinatde legarea unor lectine pe unele grupri de manoz,carbohidrat prezent n componena multor mi/o i absentla ma/o. Lectina este echivalentfracieiC1q. Alte 2 molecule se asociaz, formnd o enzim

similar

C1, ceea ce duce la formarea complexuluiC4bC2a (C3-convertaza)

Componentele reaciilor de liz:Ag (celule bacteriene, hematii, etc)Ac (lizine - IgG i IgM)Complementser proaspt de cobai sau ser de cobai liofilizatReacia de bacterioliz(RBL)- Ag

suspensie de bacterii vii (vibrioni, leptospire...)- Ac

serul imun sau serul bolnavului- Complement

RBL in vitro

Se efectueaz

diluia succesiv

a seruluiSe adaogsuspensie microbianvieSe adaogcomplement(martor: Ag+ser fiziologic+C)


23/30

Incubare 2 h la 37CRensmnare pe cutii cu geloz

cte 0,1 ml din fiecare diluie (24h

37

C)Lectura

se comparnr coloniilor crescute din martor i probele studiate

Titrulcea mai mare diluie a serului n care au fost lizate cel puin 50% din celule

RBL in vivo

Amestecul dintre Ag i Ac se inoculeaz

intra-peritoneal la animale de laborator (ex.: oareci albi)Peste fiecare 10 min, timp de o or, se extrage lichidul peritoneal, se pregtete un preparat nativ i se

examineaz

pe fond negru sau cu contrast de faz.Rezultat pozitiv

numrul bacteriilor scade treptat pn

la dispariie.Utilizarea RBLdiagnosticul holerei (RVL), leptospirozelor (RALL)

Reacia de hemoliz(RHL)Ag

hematii de berbec, suspensie de 3%Acser imun de iepure anti-hematii de berbec (serul hemolitic)ComplementPrincipiul reaciei: complexele Ag-Ac formate fixeaz

C i-l activeaz

pe cale clasic, provocnd hemoliza.

Intensitatea hemolizei se apreciaz

vizual (++++) sau prin msurarea densitii optice a hemoglobineieliberate.

Utilizarea practica RHL: pentru dozarea C, precum i n montarea reaciei de fixare a complementului.

5. Reactiile de neutralizare (RN) a toxinelor si virusurilor (in vivo, in vitro). Principiul, mecanismul i

componentele reactiei. Tehnica de efectuare. Analiza i interpretarea rezultatelor.

Antitoxinele sint niste anticorpi apti s

interactioneze cu toxinele respective si sa le neutralizeze. 60 de speciide m/o produc exotoxine.

Contiii pentru reactia de neutralizare: coraport cantitativ, timp necesar pentru interatiune si temperatura

optima. La baza neutralizarii - reactie f-ch, monosistemica, directa, bicomponenta.Manifestarea externa (in vitro) - fenomenul de floculatie - opalescenta aparuta in epurubeta ce contine toxina

si antitoxina.RIHA (reactia de inhibare a hemaglutinrii) - pentru indentificare virusurilor hemaglutinante. In conditii

necesare (temp. pH) in dilutii de ser se adaugo dozdeterminata de hematoglutinini suspensia dehematii.Reactia pozitiv

- daca sunt prezenti anticorpii inhibitri omologi hematoglutininei, hematiilesedimenteaza in butoane.Reactie negativa - in absenta acestor anticorpi hematiile aglutineaza in pelicula pe fundul godeuli sau altubului. se noteaza cu 4,3,2,1 despectiv inhibarii.

(in vivo) - se incouleaza ser imun + toxina la un animal receptiv si se urmareste manifestarea,

6. Reactii cu elemnte marcate: teste imunoenzimatice, radioimunodozarea, imunofluorescenta,

electrochemluminiscenta. Componentele. Tehnica de efectuare. Analiza i interpretarea rezultatelor.

Tehnici serologice cu utilizarea Ac marcain unele cazuri este imposibil de a detecta o reacie Ag-Ac: unii Ac nu precipiteaz, alii nici nu precipiteaz,

nici nu aglutineaz, exist

complexe Ag-Ac care nu fixeaz

C. n aceste cazuri pot fi utilizai Ac marcaipentru a vizualiza Ag respectiv. Conjugarea Ac cu marcani nu afecteaz

proprietile lor imunologice.Aceste reacii se monteazpe suport solid (lam, plci din plastic)

Marcanii utilizai uzual:

Fluorocromi(rodamina, fluoresceina), care emit respectiv o lumin

rou-oranj sau verde-galben

la tratarealor cu raze UV (Reacia de Imuno-Fluorescen)

Enzime(fosfataza alcalin, peroxidaza), capabile smodifice culoarea unui substrat (Reacia Imuno-enzimatic)


24/30

Radio-izotopi (125

J sau3H), care emit respectiv raze gamma i beta (Analiza Radio-Imun)

Reacia de imunofluorescen(RIF, reacia COONS)Metoda direct(numai n scop de seroidentificare). Din materialul ce conine Ag(material nativ, culturpur,

biopsie tisular) se preparun frotiu, peste care se aplicserul imun specific cu Ac marcai cufluorocrom.Peste 20 min de incubare ntr-o camer

umed

preparatul este studiat la microscopulluminiscent. n caz de reacie pozitiv

se observ

luminiscen

local. Inconvenient

necesitatea de a

avea seruri imune marcate specifice pentru fiecare Ag.

Metoda indirect. Poate fi utilizat

pentru sero-identificare i sero-diagnostic.Pe frotiul ce conine Agse aplic

Accorespunztori nemarcai. Peste 20 min se spal

minuios preparatul, apoise adaoganti-Ig fluorescent, care se va combina cu Ac din complex. Acest reactiv poate fi utilizat nnumeroase reacii.

Anti-Ig se obine prin imunizarea iepurilor (sau altor animale) cu Ig.

Tehnica fondatpe fixarea C:Markerul fluorescent este un ser anti-complement care se va lega decomplementul fixat pe complexul Ag-Ac.

RIF se utilizeaz

pentru identificarea rapid

a Ag din biosubstrate sau pentru serodiagnostic.

Reacia Imuno-Enzimatic(RIE, ELISA-Enzyme Linked Immunosorbent Assays).- RIE direct(metoda sandwich).Utilizatdoar n sero-identificarea Ag.n godeurile din placa de polistiren n

care sunt fixai Ac cunoscuise toarnsoluia de Ag necunoscut. Se incubeaz1h. Dupo splareminuioas

a godeurilor se adaug

Ac marcai cu enzime, care se fixeaz

pe epitopii liberi ai Agpolivalent. Dup

incubare de 30 min-1h se spal

iari godeurile. Prezena complexului Ac-Ag-Ac-marcat se depisteazcu ajutorul substratului cromogen(substaniniial incolor, dar care se coloreazsub aciunea enzimei, ex. apa oxigenata si orthofenilendiamina).

RIE indirect.Utilizatn serodiagnostic. Ag cunoscuteste fixat la fundul godeurilor. Ac (serul testat)se

ntroduce n godeu, dup

1h se spal

totul i se adaog

ligandul marcat cu enzim(anti-Ig sau proteinaA cuplate cu enzim). Acest ligand se fixeaz

pe Ac testai. Se adaog

apoi substratul cromogen.Cantitatea de Ac se msoar

dup

densitatea optic

a lichidului din godeuri.

Tehnica imunoblot (western blot)permite identificarea Ag dintr-un amestec.I etapelectroforeza n gel a probei de AgII etaptransferul electric al Ag pe membrana de nitrocelulozIII etap

pe membran

sunt aplicai succesiv Ac dirijai contra Ag, apoi conjugatul marcat cu enzim, carepermite depistarea Ac fixai. Dupo splare se adaogsubstratul cromogen. Fiecare complex Ag-Acformeazzone colorate distincte. Utilizare: depistarea Ac anti-HIV, caracterizarea Ac monoclonali...

Proteinele sunt separate electroforetic n gel poliacrilamid. Sub aciunea cmpului electric are loc difuziaproteinelor conform greutii moleculare, aranjndu-se n zone liniare subiri diferite: mai aproape destart se aranjeazproteinele cu masmolecularmare (120-150 kDa), la final se aranjeazproteinelecu masmolecularmic(5-10kDa).

Apoi lamela de gel este transferat

pe o foaie de nitroceluloz

amplasat

ntre electrozii unei surse de curentcontinuu. Sub aciunea cmpului electric are loc trecerea proteinelor din gel pe nitroceluloz, unde sefixeazfoarte bine pe hrtie.

Proteinele fixate sunt marcate cu o enzim(e.g. alkaline phosphatase sau peroxidase) incolor.Procedura ulterioar

de montare a reaciei este similar

tehnicii ELISA.

Analiza radioimun(ARI)Principiul este identic cu cel al RIE


25/30

Agse fixeazla fundul godeurilor din placa de plastic. Se adaogAc testaicare se vor combina cu Ag omolog.Dup

splarea godeurilor, se adaug

un ligand radiomarcat(anti-Ig). Dup

eliminarea excesului deizotopi prin splare, se msoarradio-activitatea: ea este proporionalcu concentraia Ac dozai.

7. Metode de tipizare moleculara. Reactia de polimerizare in lant (PCR - polimerase chain reaction),

MUltiplex PCR, REal TIme PCR, masspectrometria. Principille, mecanismele. Analiza i interpretarea

rezultatelor.

Lucrare nr 12..

9.Hipersensibilitatea de tip imediat si

tardiv.Factoriii si mecanismele implicate


26/30

2/15/20101

REACIILE DE HIPERSENSIBILITATE.Hipersensibilitateraspunsuri imune excesive sau anormale,capabile sa provoace leziuni tisulare si maladii. Aceste reacii sepot dezvolta n cadrul mecanismelor de aprare fa de un microbpatogen. n acelai timp, reacii similare pot fi dirijate contra

substanelor de origine ne-infectioasa.

Particularitile RHS:

1.RHS sunt specifice de Ag /alergen

2.RHS sunt induse de un contact primar cu Ag/alergenul careprovoac rspunsul imun specific (umoral, celular)

3.RHS sunt declanate la contacte ulterioare repetate cu acelaiAg/alergen

Clasificarea RHS dup mecanismele imunologice efectuate (Gell,Coombs)

I.Hipersensibilitatea de tipul I (reacii imediate, anafilactice)

II.Hipersensibilitatea de tipul II (citolitic-citotoxic)

III.Hipersensibilitatea de tipul III (prin complexe imune)IV.Hipersensibilitatea de tipul IV (tardiv)

V.Hipersensibilitatea de tipul V (prin autoAc)

RHS de tipul I (anafilactice, imediate)

RHS imediate mai sunt numite alergie sau atopie. Persoanele predispuse la astfelde reactii sunt numite atopice

Antigenele care declanseaza o hipersensibilitate imediata sunt calificate caalergeni.

Manifestrile patologice survin timp de 15-30 min dup rentroducerea alergenului norganismul sensibilizat.

n reaciile anafilactice particip Ig E. la persoanele predispuse la alergii intalnirea cuunele Ag determina activarea limf Th2 si producerea Ac Ig E. Fiind sintetizate ntimpul primului contact cu alergenul, IgE se fixeaz pe receptori ai mastocitelor (nspecial din esutul conjunctiv sau din mucoase), persistnd mai multe luni.

La ptrunderea repetat (percutan, prin mucoase, intravenos) antigenulomolog leag ncruciat fragmentele Fab ale Ig E vecinede pe mastocite.Aceasta duce la eliberarea din celule a unor mediatori, substane biologicactive (histamin, serotonin, Factorul de Necroz al Tumorilor,prostaglandine, leucotriene). Ele se fixeaz pe receptorii terminaiilornervoase inducnd contracia musculaturii netede (bronice, intestinale,uterine), vasodilataie, creterea permeabilitii vasculare cu edem, reacieurticarian n tegument i hipersecreie de mucus la nivelul bronic. Acestereactii survin la cateva minute de la reintroducerea Ag.


27/30

2/15/20102Alti mediatori ai mastocitelorcitokinelerecruteaza, pe parcursul al catorva ore, neutrofile si eozinofile la nivelul localizariireactiei. Acest proces inflamator al RHS imediate reprezinta faza tardiva a reactiei. Este responsabila de leziunile tisulareprovocate de catre atacurile repetate de hipersensibilitate imediata.

Anafilaxia general (ocul anafilactic)

Este cea mai brutal i grav reacie declanat de un Ag/alergen. Se manifest n cteva secunde dup administrarea parenteral a dozelor

mari de Ag/alergen cu semne clinice sistemice: urticarie, asfixie, colaps circulator i oc. Poate duce la deces subit.Ag responsabile de ocul anafilactic:medicamente (analgezice, anestetice, AB, seruri sangvine de animale, enzime), venin de viespi, de albine,alimente.Anafilaxia local(alergenul administrat n doz foarte mic sau depus pe o mucoas)

-La nivelul mucoaselor:conjunctivita alergic, rinita, astmul i traheita spasmodic (alergeni: polenuri, dejecte de acarieni din praful de cas)

-Forme cutanate: dermatita atopic i urticaria

-Alergia alimentar: manifestri extradigestive (urticarie, edem Quincke, astm, anafilaxie) i digestive (diaree, vome)

Depistarea RHS tipul I:

-Teste cutanateprin aplicarea cutanat sau administrarea intradermic a alergenilor. Reacie pozitiv peste 15 min local apare o reacieeritemo-papuloas.

-Teste de provocarese efectueaz la astmatici, prin administrarea alergenului n aerozol (pe cale nazal, ocular, oral) i msurndmodificrile imediate i tardive a volumului expirat maxim.

-Dozarea imunoenzimatic sau radioimun a Ig E


28/30

2/15/20103Principii de tratament

-Evitarea alergenului

-Desensibilizarea prin administrarea repetata a dozelor mici de Ag, care induce sinteza Ac Ig G

-Tratament simptomatic (inhibitori ai degranulrii mastocitelor, anti-histaminice, etc)

RHS de tipul II (citolitic-citotoxice)

Implic Ac (Ig G sau Ig M) dirijai contra unui Ag natural sau exogen fixat pe suprafaa unei celule sau a unui esut. Se dezvolt ncteva minute sau ore.Afecteaz n special celulele sngelui, provocnd citoliza prin activarea complementului sau prin opsonizare i fagocitoz dectre macrofage. Celulele K de asemenea pot distruge celulele opsonizate.Aceste mecanisme cauzeaz citopenie.1.Reacii transfuzionale(prezena Ac anti-hematii n timpul unei transfuzii sanguine poate induce hemoliz intravascular prin activarea C pecale clasic).

2.Maladia hemolitic perinatal prin incompatibilitate Rhesus. Mama Rh-se imunizeaz n cursul primei graviditi contra ftului Rh+ la trecereahematiilor fetale n sngele matern (la natere, n timpul unui avort). La o graviditate ulterioar, mama pre-imunizat contra factorului Rh+poate sintetiza Ig G anti-Rh+, dac ftul este iari Rh+.

Aceti Ac pot traversa bariera placentar i liza hematiile ftului la finele graviditii, provocnd o hemoliz grav.Prevenirea: administrarea Ac anti-Rh+ tuturor femeilor Rh-n primele 48 ore de la naterea unui copil Rh+ sau a unui avort.

Aceti Ac opsonizeaz hematiile fetale din sngele matern i provoac eliminarea lor rapid.3. Hemoliza imun de origine medicamentoas(medicamentul se depune pe membrana eritrocitar i Ac anti-medicamentdistrug eritrocitele acoperite de acest medicament).4. Trombocitopenii i granulocitopenii.Diagnostic:-Depistarea Ac contra celulelor (esuturilor) implicare

-Prezena Ac i C n leziuni, depistai prin RIF


29/30

2/15/20104RHS de tipul III (mediate de complexe imune Ag-Ac solubile)

n mod normal CI sunt eliminate repede din organism. n unele circumstane CI persist perioade ndelungate. Cauze:a)Infecii cronice: angine streptococice, endocardite bacteriene, hepatite virale, parazitoze, etc

b)esuturiproprii devenite auto-reactive n urma unor procese distructive (ex.: colagenoze)

c)Introducerea albuminei serice n cantiti mari (tratament cu seruri imune)

Mecanismul:Complexele Ag-Ac solubile activeaz C i determin leziuni n locul formrii sau depunerii lor n esuturi sau pe endoteliul vascular.

-Fenomene patologice locale: reacia Arthus, glomerulonefrita, artrit, poliatrerite. Se produc n exces de Ac dup 3-10 ore de la contactul cuAg.-Fenomene patologicegenerale: boala serului (n exces de Ag).Depistarea RHS de tipul III:

-Evidenierea CI n biopsii tisulare. Se efectueaz utiliznd RIF, RIE sau ARI-Titrarea Complementului seric (diminuarea titrului)

RHS de tipul IV (mediate celular, tardive, ntrziate)

Sunt determinate de limfocite T CD8 (Tc) sau TCD4 (Th1) activate la contactul secundar cu Ag sensibilizant.Sunt cunoscute 3 modele de hipersensibilitate tardiv:1.Hipersensibilitatea tuberculinic

2.Reaciagranulomatoas

3.Dermatitele de contact

Hipersensibilitatea tuberculiniceste indus de infecii bacteriene, virale, fungice sau parazitare, prin vaccinare cu vaccinuri vii atenuate sau cuproteine fixate pe un adjuvant complet.Ptrunderea repetat a Ag activeaz limdocitele Th1 specifice de acest Ag, ducnd la activarea Tc i eliberarea unor citokine, responsabile deacumularea local a celulelor mononucleate cu apariia eritemului i formarea unui infiltrat, n unele cazuri chiar i necroz. Leziuneaaparepeste 48 ore i dispare n 3-5 zile.


30/30

2/15/20105Hipersensibilitatea granulomatoasapare n cursul sensibilizrii cu substane insolubile sau greu digerabile (constituienii unor parazii,compui lipoidici ai micobacteriilor, brucelelor, etc). n aceste cazuri RHS se prelungete i se manifest prin formarea, n cteva sptmni sauluni, a unui granulom.

n componena granulomului se disting 3 zone: central, din celule epitelioide, intermediar din limfocite i fibroblaste i periferic dinleucocite PMN, limfocite B i plasmocite. Granulomul poate fi supus fibrozei i calcifierii, persistnd mai muli ani.Hipersensibilitatea de contacteste determinat de haptene (metale grele -Ni, Cr, substane chimice cauciuc, clei, pesticide, vopsele, produsecosmetice, medicamente).Aplicate percutanse combin cu proteinele membranare, n special ale celulelor Langerhans din epiderm. Aceasta duce la expansiunea clonala limfocitelor TCD8+. La contacte repetate cu aceeai hapten, citokinele eliberate de limfocitele activate determin infiltrarea celular aglandelor sudoripare, sebacee, a foliculilor piloi, a epidermei. Peste 48-72 ore local se observ eritem, edem i formarea veziculelor.Explorarea hipersensibilitii tardive

T e s t e c u t a n a t e (in vivo)-Dermatitele de contactse depisteaz prin aplicarea cutanat a haptenelor i examinarea eritemului, infiltratului cutanat i a veziculelor aprutepeste 48 ore.

-Hipersensibilitatea tuberculinicse exploreaz prin introducerea intradermic a alergenilor microbieni: tuberculina (derivat proteic al uneiculturi de Mycobacterium tuberculosis), brucelina, tularina, antraxina, dizenterina, etc.

Peste 48 ore se msoar diametrul eritemului i induraiei.Reacia pozitiv denot c organismul a fost n contact cu alergenul (infecie anterioar sau actual, vaccinare) i c acestapersist n macrofagele organismului. Pentru confirmarea maladiei sunt necesare investigaii suplimentare.

T e s t e i n v i t r o-Testul de transformare limfoblastic(limfocitele unei persoane cu hipersensibilitate tardiv cultivate in vitro n prezena Ag/alergenului suport o transformare blastic cu proliferare ulterioar).

-Testul de inhibiie a migrriileucocitelor(activarea limfocitelor T de ctre Ag specifice duce la secreia citokinelor care inhibmigrarea leucocitelor)

-

Microbiologie Totalizare 2

Documents

Transcript of Microbiologie Totalizare 2