Microbiologie - Genus Neisseria

10
A. Neisseria meningitidis 1. Minidefinitie II. Habitat III. Implicare in patologia umana IV. Microbiologie - principalele caractere si implicatii in patogeneza si diagnosticul microbiologie Factori de patogenitate, antigene Patogenie Raspunsul imun Notiuni de epidemiologie si profilaxie a infectii lor nosocomiale Diagnosticul de laborator Curs. XVII. Genul Neisseria Caractere genera le ale Genului Neisseria Din Genul Neisseria fac parte coci Gram negativi, dispuşi în perechi, cu aspect reniform, oxidază pozitivi. Speciile patogene sunt pretenţioase, cu cerinţe nutritive speciale, şi sensibilitate la temperaturi scăzute, preferând temperatura de 37° C. Din Genul Neisseria fac parte: Neisseria meningitidis Neisseria gonorrhoeae Neisserii nepatogene Încadrare taxonomică Ordin: Eubacteriales Familie: Neisseriaceae Neisserii: pretentioase nutritiv: N meningitidis si N gonorrheae - nepretentioase nutritiv: Neisserii nepatogene V. VI. VII. VIII. IX. Cuvinte cheie: Meningita; Coc Gram negativ, pretenţios, reniform (bob de fasole); capnofil; termofil; oxidază pozitiv; endotoxină; sindrom Waterhouse-Friedericksen; zaharolitic: Glucoză, Maltoză; Agar Thayer-Martin chocolat; capsulă - serogrupuri frecvente A, C; Vaccinare

Transcript of Microbiologie - Genus Neisseria

Page 1: Microbiologie - Genus Neisseria

A. Neisseria meningitidis1. MinidefinitieII. HabitatIII. Implicare in patologia umanaIV. Microbiologie - principalele caractere si implicatii in patogeneza si

diagnosticul microbiologieFactori de patogenitate, antigenePatogenieRaspunsul imunNotiuni de epidemiologie si profilaxie a infectii lor nosocomialeDiagnosticul de laborator

Curs. XVII. Genul Neisseria

Caractere genera le ale Genului Neisseria

Din Genul Neisseria fac parte coci Gram negativi, dispuşi în perechi, cu aspectreniform, oxidază pozitivi.

Speciile patogene sunt pretenţioase, cu cerinţe nutritive speciale, şi sensibilitate latemperaturi scăzute, preferând temperatura de 37° C.

Din Genul Neisseria fac parte:• Neisseria meningitidis• Neisseria gonorrhoeae• Neisserii nepatogene

Încadrare taxonomică

Ordin: EubacterialesFamilie: Neisseriaceae

• Neisserii:pretentioase nutritiv: N meningitidis si N gonorrheae

- nepretentioase nutritiv: Neisserii nepatogene

V.VI.VII.VIII.IX.

Cuvinte cheie: Meningita; Coc Gram negativ, pretenţios, reniform (bob de fasole);capnofil; termofil; oxidază pozitiv; endotoxină; sindrom Waterhouse-Friedericksen;zaharolitic: Glucoză, Maltoză; Agar Thayer-Martin chocolat; capsulă - serogrupurifrecvente A, C; Vaccinare

Page 2: Microbiologie - Genus Neisseria

III. Implicare în patologia umană

1. Minidefiniţie

Meningococii sunt bacterii care pot fi implicate în infecţii de gravitate severă,uneori medie, cu punct de plecare la nivelul mucoasei respiratorii:

meningita, care evoluează cu precădere la copilul mic (6 luni - 1 an) şi laadolescenţi, pacienţi cu deficite imunitare înnăscute sau dobândite etc.

• artrita• localizări la nivelul mucoaselor şi seroaselor,• pneumonie

Semnele clinice ale sindromului meningeal infecţios sunt: cefalee, fotofobie,greaţă, vărsături, febră, poziţie "în cocoş de puşcă".

Meingococii sunt coci gram negativi, cu tendinţa de a rezista la decolorarea cualcool acetonă, nesporulaţi, imobili, dispuşi de obicei în perechi, cu feţele aplatizate sauconcave adiacente, oxidaza şi catalază pozitivi; strict aerobi, carboxifili (capnofili), puţinrezistenţi în mediul înconjurător.

II. Habitat

Meningogocii colonizează exclusiv omul, la nivelul oro- şi nazofaringelui.Indivizii colonizaţi pot fi purtători sau bolnavi. În populaţia generală a fost descrisă o ratăde portaj de 5-30%, dar în colectivităţi închise ea se ridică până la 80%, determinândepisoade epidemice.

Dupa faringe, localizările cele mai frecvente sunt: conjunctiva, vaginul, uretra şirectulrect

Meningococii pot cauza îmbolnăviri acute şi cronice.

Dintre imbolnăvirile acute, cea mai frecventă este meningita meningococică, degravitate variabilă în funcţie de teren. Numai unul din 1000 de purtători fac boala, darrata fatalităţii este de 5-15% (Organizaţia Mondială a Sănătăţii). În 75% din cazuri apar şimanifestări cutanate, sub forma erupţiei peteşiale sau purpurice polimorfe. Formele deboală pot fi uşoare sau medii, mai rar aparând forma fulminantă, cunoscută subdenumirea de sindrom Waterhous Friedericksen, de origine endotoxinică.

2

Page 3: Microbiologie - Genus Neisseria

3

Fig. 1. Erupţie peteşială într-un caz de meningită

IV. Microbiologie - principalele caractere si implicatii in patogeneza sidiagnosticul microbiologie

Caracterele morfotinctoriale sunt cele descrise în general pentru Neisserii:• Forma: coci in formă de boabă de cafea sau reniformi• Dimensiuni: 0,6 - lum• Tinctorialitate: gram negativi, cu tendinţa de a rezista la decolorare• Dispoziţie caracteristica, in diplo, rar tetrade; axul lung este paralel şi feţele

aplatizate sau concave adiacente• În prelevate poate fi extracelular, dar şi intracelular, fiind catalază pozitiv

Caractere de cultivabilitate

Neisseria meningitidis este o bacterie pretenţioasă, cu metabolism de tipheterotrof, care cultivă pe medii cu adaosuri nutritive (sânge, ser sau suplimenteorganice şi anorganice simple: vitamine, baze nucleotidice, aminoacizi, zaharuri,săruri de tamponare etc.), substraturi chimic definite sau organice.

Agarul Thayer Martin chocolat este un mediu cu adaos de sânge de berbecdefibrinat în care hematiile sunt lizate prin căldură, pe care meningococul se dezvoltăsub formă de colonii S, cu tentă cenuşie. Se poate utiliza şi în varianta selectivă, cuadaos de antibiotice la care meningococul este rezistent, pentru izolarea acestuia dinamestecuri bacteriene.

Meningococul este oxidază şi catalază pozitiv, carboxifil. Este strict aerob, adicănu se poate cultiva în absenţa oxigenului, precum stafilococii şi streptococii, care suntfacultativanaerobi.

Spectrul zaharolitic este relativ redus: fermentează glucoza şi maltoza, spredeosebire de gonococ, care fermentează numai glucoza.

Rezistenţa la agenţi fizici este redusă. Meningococul este foarte sensibil la frig şila uscăciune. Moare În scurt timp la temperaturi sub 37 o C.

Consecinţe acestor caractere sunt:

Page 4: Microbiologie - Genus Neisseria

Contaminarea este doar directă, zona periculoasă pentru contaminare fiindde numai 2-3 m în jurul pacientului sau purtătorului. Se transmite prinpicături Pf1ugge, cu dimensiune prea mică pentru a se depune.Dacă prelevatele nu sunt transportate foarte rapid, preferabil în containerîncălzit la 37 o C , în timp de maximum 1 oră, sau dacă nu se faceînsămânţare directă, şansele de izolare sunt minime.Prelevatele nu se refrigerează până la insămânţare

V. Factori de patogenitate, antigene

Principalii factori de patogenitate ai meningococilor sunt: fimbriile, capsula,antigenele membranei exteme, lipopolizaharidul, proteazele etc.

Fimbriile sunt implicate în aderenţa la epitelii mucoase, seroase etc.Capsula conferă rezistenţa la fagocitoză, antibiotice, anticorpi etc. Există 12

grupuri capsulare, dintre care cele mai frecvent implicate în patologie sunt grupurileB,C,A,Y, care constituie 95% dintre meningococii circulanţi.

Antigenele proteice ale membranei exteme (OMP = Outer Membrane Proteins)stau la baza subâmpărţirii tulpini lor în tipuri, subtipuri etc.

Lipopolizaharidul are structura cunoscută: lipid A si miez polizaharidic identic cual enterobacteriilor. Membrana externă este hiperprodusă în timpul multiplicării.Distrugerea rapidă a meningococilor poate da naştere unui sindrom sever decoagulare intravasculară diseminată, denumit sindrom Waterhouse - Friedericksen.

Proteazele au acţiune asupra factorilor locali de apărare, respectiv distrugimunoglobulinele A de la nivelul mucoaselor.

VI. PatogeniePrincipalele faze ale infecţiei meningococice sunt:

colonizarea căilor respiratorii superioare prin fimbrii (Pili) de adeziunepătrunderea în circulaţia sanguină (septicemie, endotoxemie)localizare meningeală, cu producerea de leziuni tisulare şi vasculare

Vasculita periferică este cauza rash-ului cutanat.Prezenţa meningococului la nivel local şi general, cu localizari secundare explică

denumirea de "boală meningococică" care se foloseşte pentru a desemna tabloulclinic complex din meningita meningococică.

VII. Raspunsul imun

Raspunsul imun este specific de grup. În acest context, este posibilă repetareabolii, cu un alt serotip.

VIII. Noţiuni de epidemiologie şi profilaxie a infecţiilor meningococice

Există grupuri cu receptivitate înaltă la boala meningococică, ca de exemplu:copii 6 luni -1 an, imunodeprimaţi, colectivităţi semiînchise etc.

La nivel mondial există o zonă hiperendemică, centura de meningite din Africasubsahariană (Fig. 2).

4

Page 5: Microbiologie - Genus Neisseria

Fig.2. Centura de meningite din Africa Subsahariană - who.int

În Romania există cazuri sporadice sau epidemice. Epidemiile recunosc ociclicitate de 10-11 ani.

Serogrupurile epidemice sunt A şi C; grupul B cauzează mai ales infecţiisporadice.

în context epidemie se recomandă imuni zarea pentru întrega populaţie, pentrulimitarea epidemiilor cu meningococ de grup A şi C. În caz de călătorie în ţări endemiceşi la contacţii cazurilor de meningită meningococică se aplică vaccinare cu tipurileprevalente sau cele izolate de la cazurile clinice.

În prezent există vaccin bivalent A, C şi tetravalent A, C, Y, W135.

IX. Diagnosticul de laborator

Probele care se recoltează pot fi: LCR, sânge, exsudat nasofaringian, biopsie dinleziuni cutanate, lichid articular, secretie conjunctivală, spută etc.

Pentru păstrarea şanselor de izolare a meningococilor este strict necesarăadoptarea precauţiilor generale, ca şi asigurarea transportului rapid, preferabil la 37oC.

Pentru alte produse decât sângele, se poate adopta o variantă de însămânţaredirectă în mediu bifazic (Trans Isolate OMS - Fig. 3) sau plăci cu mediu suplimentattransportate în atmosferă îmbogăţită în bioxid de carbon, preferabil În containerizoterm la 37° C. Se poate utiliza şi mediul de transport Amies şi Stuart, dar în acest caznu mai este posibil examenul direct.

Este total contraindicată refrigerarea probelor şi/sau a mediilor de transportînsămân ţa te.

5

Page 6: Microbiologie - Genus Neisseria

Fig. 3. Mediu Trans Isolate pentru însămînţare din LCR şi transport

Lichidul cefalorahidian va fi examinat din punct de vedere macroscopic, citologie,biochimie şi bacteriologie, pentru evaluarea aspectului eventual purulent, a prezenţeicelulelor inf1amatorii, a proteinelor, nivelului de glucoză, microorganismelor patogene.

Examenul bacterioscopic este foarte valoros şi se efectuează pentru observareaelementelor celulare şi a bacteriilor (Fig.4). Se pot utiliza coloraţia Gram, albastru demetilen, May-Grunwald-Giemsa. Citologia se efectuează cantitativ şi calitativ.

Testele rapide utilizate pentru evidenţierea meningococilor sunt: latex saucoaglutinare, imunoelectroforeză pentru identificarea grupului capsular etc. Acestea seefectuează din supernatantul LCR, după centrifugare. Dacă proba a ajuns la laboratordupă mai mult de 1 oră, examenul citologie nu mai este relevant.

Fig. 4. Frotiu din prelevat. Leucocit cu meningococi intracelulari. Coloraţie M-G-G

Izolarea meningococilor este posibilă, cu condiţia respectării cu stricteţe acondiţiilor de recoltare şi transport, precum şi a utilizării mediilor adecvate.

6

Page 7: Microbiologie - Genus Neisseria

G Mal

Mediul Thayer Martin, însămânţat cât mai rapid după izolare, se incubează timpde 24-48 h, la 37 aC, în atmosferă îmbogăţită cu 5-10% C02. Mediul selectiv cu adaosde antibiotice este folosit pentru produse contaminate. Pentru prelevatele normal sterile(sange, lichid articular etc.) se utilizează mediul neselectiv.

IdentificareaÎn scop clinic şi pentru confirmarea suspiciunii de meningită se iau în considerare:

- aspectul microscopic,- caracterele de cultură,- testul oxidazei pozitiv,- identificare biochimică (inclusiv teste rapide si medii cromogene); glucoză şi

maltoză pozitiv (Fig. 5).

Fig. 5. Zaharoliza + glucoza şi maltoza pozitiv - meningococ

În scop epidemiologic se poate efectua tipizarea, stabilindu-se grupul, tipuri,subtipuri serologice şi/sau electroforetice de OMP, tipizare moleculară.

Deşi rezistenţa la Penicilină e rară, poate fi necesară testarea sensibilităţii laantibiotice, pentru confirmarea sensibilităţii clinice şi pentru fundamentarea politicii deutilizare a antibioticelor.

7

Page 8: Microbiologie - Genus Neisseria

III. Implicare În patologia umană

B. Neisseria gonorrhoeae

1. MinidefinitieII. HabitatIII. Implicare in patologia umanaIV. Microbiologie - principalele caractere si implicatii in patogeneza si

diagnosticul microbiologieV. Factori de patogenitateVI. PatogenieVII. Raspunsul imunVIII. Notiuni de epidemiologie si profilaxie a infecţii lor gonocociceIX. Diagnosticul de laborator

Cuvinte cheie: Infecţii genitale, Coc Gram negativ foarte pretentios, reniform (bobde fasole), Capnofilie, Termofilie, Oxidaza pozitiv, Geloza Tayer-Martin chocolat,Urmărire complexă pentru coexistenţa altor infecţii cu transmitere sexuală,Antibiograma, Diagnostic serologie cazuri cronice

I. Minidefiniţie

Gonococii sunt bacterii implicate în infecţii ale tractului urogenital. Mai rar pot fiimplicaţi în oftalmia gonococică şi foarte rar în infecţii meningeale.

Netratate, infecţiile evoluează spre cronicizare cu fibroză

II. Habitat

Gonococii colonizeaza exclusiv omul. Au o afinitate specială pentru tractulurogenital, prin fimbrii, adezine de natură proteică. Pot fi prezenţi şi pe alte mucoase siseroase: conjunctivă, vagin, uretră, rect.

Ca şi meningococii, gonococii pot cauza îmbolnăviri acute şi cronice.Blenoragia este cea mai frecventă infecţie gonococică acută. Se manifestă prin

uretrită la bărbat, cu posibilă extindere la epididim şi prostată. Vaginita gonococică estemai frecvent asimptomatică, cu extindere spre uter, trompe uterine. Alte infecţii acutegonococice pot fi: conjunctivita nou-născutului, rar faringite, sinuzite, pneumonii, foarterar infecţie generalizată, asemănătoare celei meningococice.

Manifestările cronice cauzează fibrozare locală, artrite, perihepatita etc.

W. Microbiologie - principalele caractere si implicaţii În patogeneza şidiagnosticul microbiologie

Caractere morfotinctoriale si de cultivabilitate sunt asemănătoare N. meningitidis

8

Page 9: Microbiologie - Genus Neisseria

Fazele instalării infecţiei sunt:• Colonizarea tractului urogenital cu ajutorul pililor de adeziune, adezinei proteice• Invazie prin contiguitate (din aproape în aproape), rar septicemie cu endotoxemie

si manifestări cutanate

Rezistenţa la agenţi fizici/chimici/biologici - asemănătoare N meningitidis. Estemai frecvent rezistent la penicilină decat meningococul.

V. Factori de patogenitate

Principalii factori de patogenitate ai gonococilor sunt: fimbriile, capsula, şilipopolizaharidul. Posedă, de asemenea un cheltor de fier, care facilitează creşterea şimultiplicare în condiţii de sideropenie locală.

Fimbriile sunt implicate în aderenţa la epitelii mucoase, seroase, cu tropism cătreepiteliul urogenital, mucoase, seroase.

Capsula conferă rezistenţa la fagocitoză, antibiotice, anticorpi etc.Lipopolizaharidul poate fi şi în cazul gonococilor responsabil de producerea

sindromului Waterhouse-Friedericksen, dar mult mai rar decât în cazul meningococului.

VI. Patogenie

VII. Raspunsul imun

Răspunsul imun este, de regulă local, nu intotdeauna eficient. Este posibilăcronicizare, care poate fi urmată de cicatrici, fibroze etc.

VIII. Notiuni de epidemiologie si profilaxie a infectiilor gonococice

Receptivitatea la infecţia cu gonococ este generală. Este posibilă existenţacazurilor asimptomatice, în special la femeie, care poate transmite boala.

Infecţia gonococică se poate transmite împreună cu alte boli genitale, cum sunt:sifilisul, infecţia cu Chlamydia trachomatis, HIV. Din această cauză este necesarăurmărirea complexă a cazului depistat cu una dintre aceste infecţii, precum şi acontacţilor. Profilaxia trebuie să ţintească influenţarea comportamentului. Oftalmia nou-născutului se previne şi/sau combate cu antibiotice eficiente, sub supraveghereamedicului specialsit.

IX. Diagnosticul de laborator

Probele în infecţia gonococică pot fi: tampon endocervical, secretie uretrală,tampoane anale, faringiene, conjunctivale, sânge, lichid articular, biopsie din leziunicutanate

Se poate creşte şansa de izolare prin stimularea secreţiei uretrale, mecanică,biologică/vaccin, termică. La femeie se recoltează la sfărşitul perioadei menstruale

9

Page 10: Microbiologie - Genus Neisseria

Precauţiile privind transportul şi prelucrarea probelor (temperatură, însămânţarerapidă, medii speciale, atmosferă îmbogăţită în bioxid de carbon, contraindicaţiarefrigerării) sunt aceleaşi ca în cazul meningococului.

Identificarea urmează aceleaşi etape.Este necesară antibiograma, deoarece există tulpini de gonococ rezistente la

Penicilină.În infecţiile cronice este posibilă testarea prin Reacţia de Fixare a

Complementului pentru stabilirea etiologiei gonococice.

10