METODE DE TESTARE A VITAMINEI D - serm.md · PDF file• Rahitism, osteomalacie •...
Transcript of METODE DE TESTARE A VITAMINEI D - serm.md · PDF file• Rahitism, osteomalacie •...
METODE DE TESTARE
A VITAMINEI D
Dr. Cristina Mambet
DETERMINĂRILE SERICE DE VITAMINA D
Motivele creşterii marcate în ultimii ani a testelor
de laborator care măsoară concentraţia serică
de 25-0H vitamina D:
→ preocuparea ↑ pentru dg. şi tratamentul osteoporozei
→ prevalenţa ↑ a deficitului de vitamina D în multe populaţii
→ descoperirea unor semnificaţii biologice noi dincolo de
rolul clasic în reglarea metabolismului mineral şi osos
Adaptare după Le Goff et al. Ann Biol Clin 2015
Schema simplificată a metabolismului vitaminei D
25 hidroxivitamină D3
Rinichi CYP24A1 Rinichi CYP27B1
24, 25 hidroxivitamină D3 1, 25 dihidroxivitamină D3
Şi alte ţesuturi în afară de rinichi au
posibilitatea să hidroxileze 25
hidrovitamina D3 în metaboliți dihidroxilați. Totuși factorii care
controlează aceasta sunt diferiți.
DBP: proteină carrier a vitaminei D; CM: chilomicroni; VLDL: lipoproteine de densitate foarte slabă; D3: colecalciferol; D2:
ergocalciferol; CYP: citocrom; Ca++: calciu ionizat; Pi: fosfat anorganic; FGF23: factor de creștere fibroblastică; PTH:
parathotmon.
D3
10%90%
D3 +D2
METABOLIŢII INACTIVI AI VITAMINEI D
1,25(OH)2D ↑ expresia CY24A1 care metabolizează 25(OH)D şi
1,25(OH)2D în metaboliţi inactivi hidrosolubili ce vor fi excretaţi urinar
şi biliar → se leagă de VDBP şi pot interfera cu unele teste de
determinare 25(OH)D
Zimmerman DR et al. Arch Biochem Biophys 2001
UTILITATEA DOZĂRII 25(OH)D
NIVELUL SERIC 25(OH)D – PARAMETRU DE ELECŢIE
PENTRU VERIFICAREA STATUSULUI VIT. D:
→ reflectă vit. D totală (D3 + D2) derivată atât din surse alimentare şi
expunerea la soare cât şi din conversia din depozitele adipoase
→ T ½ în circulaţie de 3-4 săptămâni (T ½ pentru 1,25 vit. D: 4 ore!)
→ concentraţie serică mai mare şi mai stabilă decât 1,25(OH)2D
→ studii epidemiologice: corelaţii între nivelul seric 25(OH)D şi
diverse boli
Aw TC et al. Proccedings of Singapore Healthcare, 2013.
NIVELUL OPTIM 25(OH)D
VALOAREA PRAG PENTRU UN STATUS NUTRIŢIONAL
ADECVAT = 30 ng/mL
Valorile > 30 ng/mL garantează o absorbţie intstinală optimă a calciului
Sub această valoare ↑ nivelul seric PTH
Se asigură un substrat suficient pentru conversia non-renală 25(OH)D în 1,25(OH)D
Se consideră că necesarul de 25(OH)D este similar la adult
şi copil
INSUFICIENŢA/DEFICIENŢA 25(OH)D
Valorile < 10 ng/mL indică deficienţa 25(OH)D
Valorile cuprinse între 10 şi 30 ng/mL sunt sugestive
pentru un nivel 25(OH) insuficient
Valorile > 150 ng/mL indică toxicitate
Holick MF. Vitamin D deficiency. N Engl J Med, 2007.
RECOMANDĂRI DE TESTARE 25(OH)D
• Rahitism, osteomalacie
• Osteoporoză
• Boală cronică de rinichi şi hiperparatiroidism
• Sindroame de malabsorbţie
• Medicamente (antipileptice, antifungice)
• Boli granulomatoase, unele limfoame
• Adulţi vârstnici cu istoric de fracturi
• Obezitate
• Sarcină, lactaţie
Holick MF. Evaluation, treatment, and prevention of Vitamin D deficiency: an Endocrine Society Clinical Practice
Guideline.J Clin Endocrinol Metab 2011
EVOLUŢIA METODELOR DE LABORATOR
PENTRU TESTAREA 25-OH VITAMINA D
TESTE COMPETITIVE
PENTRU VDBP/ TESTE
IMUNOCHIMICE
METODE
CROMATOGRAFICE
METODE RADIOIMUNOLOGICE
MANUALE CU VIT. D TRITIATĂ
METODE COMPLET AUTOMATIZATE CU
DETECŢIE BAZATĂ PE CHEMILUMINISCENŢĂ
HPLC CU DETECŢIE UV
HPLC CUPLATĂ CU
SPECTROMETRIE DE MASĂ
(LC/MS)
PROBLEME ŞI SOLUŢII
Variabilitate ↑ a rezultatelor obţinute prin metode diferite
Armonizarea şi standardizarea metodelor cu scopul:
dezvoltării unor intervale de referinţe robuste pentru
diagnosticul insuficienţei vitaminei D
definirea mai precisă a rolului vitaminei D ca factor de
risc pentru boală
PROBLEME ŞI SOLUŢII
Necesitatea acurateţei mai mari a testelor imunochimice
Stabilirea unor materiale de referinţă
Propunerea unor 2 metode candidat LC/MS ca proceduri
de referinţă
DE CE REZULTATE DISCREPANTE?
• extracţie incompletă 25-OH vitamina D din VDBP → rezultate fals-
scăzute
• diferenţe în recunoaşterea cele 2 forme 25-(OH)D2 şi 25-(OH)D3
• interferenţă variabilă cu metaboliţi cu activitate ↓/inactivi: epimer C3-
25(OH)D şi 24,25(OH)2D → supraestimarea rezultatelor
EPIMER C3 25(OH)D
• Epimerul diferă doar prin aranjarea
asimetrică a unei grupări hidroxil în poziţia C3
• Epimerii pot contribui semnificativ la nivelul
seric 25(OH)D la copiii <1 an
• Epimerizarea este posibil consecinţa unui metabolism imatur
• Efectul biologic al epimerilor 1,25: legare ↓ de VDR; sunt alterate
efectele induse de Ca asupra metabolismului osos
Sing Rj et al. C3-epimers can account for a significant proportion of total circulating 25-
hydroxyvitamin D in infants, complicating accurate measurement and interpretation of vitamin D
status. 2006, J Clin Endocrinol Metab.
DETERMINARE 25(OH)D PRIN TEHNOLOGIA LC/MS
• metode automate de extracţie în fază solidă
• cromatografie de lichide cu detecţie prin spectrometrie de masă
• detecţia şi cuantificarea separată D3, D2
• tehnică laborioasă
25-OH VIT. D3 25-OH VIT. D2
STANDARDIZAREA TESTELOR
• Program iniţiat recent de consorţiul Office of Dietalry Supplements, CDC (Center for disease control and prevention), NIST (National institute of standards and technology) şi laboratorul de referinţă pentru determinarea vitaminei D (Ghent, Belgia)
• Etapa 1: calibrarea şi validarea concentraţiilor 25(OH)D2 şi 25(OH)D3 în 40 seruri prin LC/MS; producătorii de reactivi îşi pot recalibra metodele prin raportarea la aceste rezultate
• Etapa 2: verificarea recalibrării obţinute prin testări oarbe a 10 seruri timp de 3 luni
Sempos CT et al. Scand J Clin Lab Invest Suppl. 2012
DETERMINARE 25(OH)D PRIN TEST COMPETITIV ECLIA
• pretratarea probei: VDBP din probă este denaturată pt a elibera 25-OH
vitamina D
• se adaugă apoi VDBP marcată cu ruteniu şi apoi vit. D biotinilată
• semnalul generat este invers proporţional cu 25(OH)D din probă
• corelaţie foarte bună cu LC/MS
JCLA 2014 Wielders JPM
ÎN LOC DE CONCLUZII...
• 25-OH - testul recomandat atât pentru evaluarea deficitului de
vitamină D cât şi pentru monitorizarea tratamentului
• 25-OH are roluri biologice multiple → evaluarea concentraţiei
serice
• utilizarea unor teste de detecţie performante standardizate este
esenţială pentru obţinerea unor rezultate clinic relevante
VA MULŢUMESC PENTRU ATENŢIE!