Medii de culturaMedii de cultura

Medii de cultură:Medii de cultură: complexe de substanţe care complexe de substanţe care permit crepermit creşşterea terea şşi multiplicarea i multiplicarea bacteriilorbacteriilor

Scopuri :Scopuri :

- izolarea in cultura pur- izolarea in cultura purăă- identificare- identificare- diagnostic, tratament- diagnostic, tratament- producerea industrial- producerea industrialăă a unor a unor substansubstanţţee(prepararea vaccinurilor) (prepararea vaccinurilor)

- controlul sterilit- controlul sterilităţăţii sau incii sau incăărcrcăăturii turii

microbiene a unor elemente de mediu microbiene a unor elemente de mediu (ap(apăă, ,

alimente)alimente)

Conditii Conditii

1.1. S Surse de C, N, apurse de C, N, apăă, substan, substanţţe e minerale, energie, substanminerale, energie, substanţţe e nutritive, factori de crestere nutritive, factori de crestere

2.2. pH optim, temperatura optima pH optim, temperatura optima

3.3. atmosferă corespunzătoare atmosferă corespunzătoare ((aero/anaerobioza) aero/anaerobioza)

4.4. sterile sterile

Ingrediente:Ingrediente:

PeptonPeptonăăExtracte sau infuzii de carneExtracte sau infuzii de carneAgenti de solidificare: agarAgenti de solidificare: agarIndicatori de pH: turnesol, roIndicatori de pH: turnesol, roşşu fenolu fenolAgenti selectiviAgenti selectiviZaharuriZaharuri

Clasificarea mediilor de culturClasificarea mediilor de culturăă

DupDupăă consisten consistenţăţă: lichide : lichide

solide solide

semisolide semisolide

DupDupăă provenien provenienţăţă: naturale : naturale

sintetice sintetice

DupDupăă compozi compoziţţie ie şşi scopi scop: simple: simple complexe complexe speciale speciale

Clasificarea mediilor de culturClasificarea mediilor de culturăă

Medii complexe:Medii complexe:

1.1. D De utilitate generale utilitate generalăă:uzuale :uzuale

2.2. M Medii speciale :edii speciale :

selectiveselective de imbog de imbogăţăţireire anaerobi anaerobi teste biochimice teste biochimice

După conţinutul de substanţe După conţinutul de substanţe nutritivenutritive::

1.1.Medii naturaleMedii naturale: conţin substanţe : conţin substanţe nutritive în forma lor naturală, fără a nutritive în forma lor naturală, fără a fi prelucrate în prealabil: mediul cu fi prelucrate în prealabil: mediul cu bilă, mediul cu lapte, mediul cu ouă, bilă, mediul cu lapte, mediul cu ouă, ser de bou coagulatser de bou coagulat

2. Medii artificiale2. Medii artificiale::

A) A) Medii de bazăMedii de bază – pentru germeni – pentru germeni nepretenţiosinepretenţiosi

1) 1) bulion simplubulion simplu

2) 2) geloza simplăgeloza simplă – bulion + agar-agar – bulion + agar-agar (un extract de alge care asigură (un extract de alge care asigură consistenţa solidă, nu are proprietăţi consistenţa solidă, nu are proprietăţi nutritive)nutritive)

B) Medii compuseB) Medii compuse

1.1. Medii complexeMedii complexe: mediu de bază : mediu de bază + substanţe organice (sânge, ser, + substanţe organice (sânge, ser, glucoză), sunt folosite pentru glucoză), sunt folosite pentru cultivarea germenilor pretenţiosi cultivarea germenilor pretenţiosi (geloza sânge)(geloza sânge)

2.2. Medii de îmbogăţireMedii de îmbogăţire: conţin : conţin agenţi selectivi, care inhibă agenţi selectivi, care inhibă dezvoltarea unor bacterii si permit dezvoltarea unor bacterii si permit crecreşşterea altoraterea altora

3) Medii speciale3) Medii speciale

- mediul Löwenstein-Jensen – pt. - mediul Löwenstein-Jensen – pt. cultivarea micobacteriilorcultivarea micobacteriilor

- mediul Sabouraud – pt. cultivarea - mediul Sabouraud – pt. cultivarea levurilor (Candida)levurilor (Candida)

- mediul chocolat – neisserii, hemofili- mediul chocolat – neisserii, hemofili

4) Medii diferenţiale si selectiv-4) Medii diferenţiale si selectiv-diferenţialediferenţiale: :

- - indicator de culoare, +/- substanţe indicator de culoare, +/- substanţe selective (inhibă cresterea unor selective (inhibă cresterea unor bacterii) + zaharuri/polialcooli ; bacterii) + zaharuri/polialcooli ;

- - sunt folosite pentru izolare si sunt folosite pentru izolare si identificare (geloza lactozată, TSI, identificare (geloza lactozată, TSI, Leifson, Chapman)Leifson, Chapman)

Medii lichide- bulion simplu Medii lichide- bulion simplu

Categoria: Mediu de bază Categoria: Mediu de bază

Componente:macerat Componente:macerat

de carne + peptonă + de carne + peptonă +

NaCl 0,5% NaCl 0,5%

Utilizare: pentru Utilizare: pentru

germeni nepretenţioşi germeni nepretenţioşi

Geloza simplaGeloza simpla

Categoria: mediu de bază Categoria: mediu de bază

Componente: bulion simplu + agar-Componente: bulion simplu + agar-agar agar

Geloza lactozataGeloza lactozata

Categoria: mediu Categoria: mediu diferenţial diferenţial

Componente: geloză Componente: geloză simplă simplă

+ lactoză + albastru + lactoză + albastru bromtimol bromtimol

Utilizare: studierea Utilizare: studierea

fermentării lactozei fermentării lactozei

Fermentarea lactozei pe geloză Fermentarea lactozei pe geloză lactozatălactozată

Bacteriile care Bacteriile care degradeaza lactoza degradeaza lactoza din mediu = din mediu = lactozo pozitive lactozo pozitive

Bacteriile care nu Bacteriile care nu degradeaza lactoza degradeaza lactoza din mediu = din mediu = lactozo negativelactozo negative

Geloza sangeGeloza sange

Categoria: mediu compus Categoria: mediu compus

Componente: Componente:

geloză simplă geloză simplă

răcită la 45°C + răcită la 45°C +

sânge defibrinat sânge defibrinat

10-20% 10-20%

Geloza socolatieGeloza socolatie

Categoria:mediu special Categoria:mediu special

Componente: geloză simplă Componente: geloză simplă

răcită la 60-80°C + sânge răcită la 60-80°C + sânge

Utilizare: cultivarea Utilizare: cultivarea

neisseriilor, hemofililor neisseriilor, hemofililor

Mediul Chapman Mediul Chapman

Categoria:mediu Categoria:mediu selectiv şi diferenţial selectiv şi diferenţial (evidentiaza o proprietate (evidentiaza o proprietate biochimica a tulpinii) biochimica a tulpinii) Componente:geloză Componente:geloză simplă + NaCl 7,5% + simplă + NaCl 7,5% + manitol + roşu fenol manitol + roşu fenol Utilizare:selectiv Utilizare:selectiv pentru stafilococpentru stafilococ

Mediu Chapman:descompunerea Mediu Chapman:descompunerea manitolului manitolului

Stafilococ manito-negativ Stafilococ manito-negativ (sus)(sus)

Staphylococcus aureusStaphylococcus aureus (jos) (jos)

Medii folosite pentru Medii folosite pentru enterobacteriienterobacterii

(agar, lactoza, indicatori de pH) (agar, lactoza, indicatori de pH)

Drigalski Drigalski

Istrate Istrate

McConkey McConkey

Levine Levine

Mediul LevineMediul Levine

Categoria: Mediu selectiv Categoria: Mediu selectiv

şi diferenţial şi diferenţial

Componente:geloză Componente:geloză

simplă + eozină + lactoză simplă + eozină + lactoză

+ albastru de metilen + albastru de metilen

Utilizare: cultivarea Utilizare: cultivarea

enterobacteriilor (E.coli)enterobacteriilor (E.coli)

ADCL (Leifson)ADCL (Leifson)

Categoria: mediu Categoria: mediu

selectiv şi diferenţial selectiv şi diferenţial

Componente: geloză Componente: geloză

simplă + săruri biliare + simplă + săruri biliare +

lactoză + roşu neutru lactoză + roşu neutru

Utilizare: cultivarea Utilizare: cultivarea

shigelelor şi salmonelelorshigelelor şi salmonelelor

Mediul Muller - HintonMediul Muller - Hinton

Categoria: mediu special Categoria: mediu special

Utilizare: efectuarea antibiogramelor Utilizare: efectuarea antibiogramelor

Mediul OCSTMediul OCST

Categoria: mediu de Categoria: mediu de

îmbogăţire (favorizeaza îmbogăţire (favorizeaza

X bacteriilor, mai ales X bacteriilor, mai ales

cand acestea sunt in cand acestea sunt in

concentratie mica) concentratie mica)

Componente: ou + Componente: ou +

cisteină + ser + telurit cisteină + ser + telurit

de potasiu de potasiu

Utilizare: cultivarea Utilizare: cultivarea

bacililor difterici bacililor difterici

Mediul SabouraudMediul Sabouraud

Categoria: mediu special Categoria: mediu special

Componente: geloză simplă+ Componente: geloză simplă+

maltoză/glucoză + antibiotice maltoză/glucoză + antibiotice

Utilizare: cultivarea levurilorUtilizare: cultivarea levurilor

Mediul Lowenstein-JensenMediul Lowenstein-Jensen

Medii pentru anaerobi: Medii pentru anaerobi:

- Bulion cu acid thioglicolic (mediu lichid; la - Bulion cu acid thioglicolic (mediu lichid; la

suprafata se adauga ulei de parafina suprafata se adauga ulei de parafina

- Tarozzi (mediu lichid, cu albus de ou; - Tarozzi (mediu lichid, cu albus de ou; lasuprafata se adauga ulei de parafina) lasuprafata se adauga ulei de parafina)

- Geloza Veillon (se obtin culturi in - Geloza Veillon (se obtin culturi in profunzimea profunzimea

mediului, realizate prin incorporare) mediului, realizate prin incorporare)

- Tehnica Ott (se insamanteaza pe mediu solid, - Tehnica Ott (se insamanteaza pe mediu solid,

agenti reducatori si se sigileaza cu parafina) agenti reducatori si se sigileaza cu parafina)

Caractere de culturăCaractere de cultură

Se studiază aspectul Se studiază aspectul macroscopic al coloniilor bacteriene macroscopic al coloniilor bacteriene izolateizolate

In mediu lichid se descrie: In mediu lichid se descrie:

- turbiditatea - turbiditatea

- formarea de depozite - formarea de depozite

- culoarea - culoarea

- suprafata - suprafata

Medii lichide Medii lichide

- tulburare uniforma a mediului: E. coli- tulburare uniforma a mediului: E. coli- tulburare + pelicula la suprafata: b. - tulburare + pelicula la suprafata: b. piocianicpiocianic- mediu limpede + pelicula: b. carbunos- mediu limpede + pelicula: b. carbunos- grunji: streptococul- grunji: streptococul

ColoniaColonia= ansamblu localizat, alc= ansamblu localizat, alcăătuit din tuit din populatie purpopulatie purăă de bacterii provenite dintr- de bacterii provenite dintr-unun singur parental. singur parental. Pe mediu solid se descrie: Pe mediu solid se descrie:

- forma coloniei - forma coloniei - culoarea - culoarea - marimea - marimea - consistenta - consistenta - suprafata - suprafata - emulsificabilitatea - emulsificabilitatea - margini- margini- mirosul culturii - mirosul culturii

1. Coloniile de tip S (smooth)1. Coloniile de tip S (smooth)

- - colonii rotundecolonii rotunde

- margini regulate, bombate- margini regulate, bombate

- suprafaţa netedă, translucidă- suprafaţa netedă, translucidă

- - usor detasabile de pe mediuusor detasabile de pe mediu

- - suspensionate în sol. saline produc suspensionate în sol. saline produc suspensii omogene (ser fiziol.)suspensii omogene (ser fiziol.)

- - reprezintă forma normală pentru reprezintă forma normală pentru majoritatea bacteriilor patogene, fiind majoritatea bacteriilor patogene, fiind dotată cu calităţi optime de structură dotată cu calităţi optime de structură antigenică si de patogenitate.antigenică si de patogenitate.

Staphylococcus aureusStaphylococcus aureusCultură pură Cultură pură

geloză simplă geloză simplă

Colonii SColonii S

pigment galben-auriu pigment galben-auriu

2. Coloniile de tip R (rough)2. Coloniile de tip R (rough)

- - colonii neregulatecolonii neregulate

- - plate, uscateplate, uscate

- - suprafaţa zbârcităsuprafaţa zbârcită

- - aderente la mediuaderente la mediu

- - în soluţii saline produc suspensii neomogene în soluţii saline produc suspensii neomogene (fenomenul de aglutinare spontană)(fenomenul de aglutinare spontană)

- - este caracteristică, în general, bacteriilor este caracteristică, în general, bacteriilor nepatogene, cu 3 excepţii: nepatogene, cu 3 excepţii: Bacillus Bacillus anthracis,anthracis,

Mycobacterium tuberculosis, Corynebacterium Mycobacterium tuberculosis, Corynebacterium diphtheriaediphtheriae

3.3. Forme intermediare: S-R , R-SForme intermediare: S-R , R-S

4. Coloniile de tip M4. Coloniile de tip M

- - aspect mucosaspect mucos

- foarte mari- foarte mari

- foarte bombate- foarte bombate

- - foarte lucioasefoarte lucioase

- - cu tendinţă de curgere si de cu tendinţă de curgere si de confluareconfluare

caracteristice bacteriilor care posedă caracteristice bacteriilor care posedă capsulă (de ex. Klebsiella)capsulă (de ex. Klebsiella)

KLEBSIELLAKLEBSIELLAGELOZA-SANGEGELOZA-SANGECOLONII MUCOASECOLONII MUCOASE

KLEBSIELLAKLEBSIELLAADCLADCLCOLONIICOLONIIMUCOASEMUCOASE

5. Coloniile pufoase5. Coloniile pufoase

- - mucegaiurimucegaiuri

Aspergilus niger Candida Aspergilus niger Candida albicansalbicans

6. Fenomen de căţărare6. Fenomen de căţărare

Proteus: pe medii simple creste sub Proteus: pe medii simple creste sub forma unui văl care acoperă toată forma unui văl care acoperă toată suprafaţasuprafaţa

mediului (nu apar colonii)mediului (nu apar colonii)