Lucrare Licenta Roxana - Fitopatologie

CUPRINS

Capitolul I

Capitolul II

2

CAPITOLUL I

Datele din literatură cu privire la acţiunea unor produse biostimulatoare asupra

germinaţiei seminţelor sau asupra speciilor patogene şi saprofite care colonizează sămânţa

sunt foarte rare. Cele mai multe studii au evidenţiat acţiunea/interacţiunea patogeni –

îngrăşăminte foliare aplicate în diferite culturi legumicole.

Aplicarea îngrăşămintelor chimice (cu azot, fosfor şi potasiu) în doze moderate,

echilibrate, are o acţiune favorabilă asupra plantelor. În schimb, aplicarea unor doze mari de

azot contribuie la sensibilizarea accentuată a plantelor faţă de agenţii patogeni. De asemenea,

dozele ridicate de azot determină o creştere luxuriantă a plantelor, dezvoltarea unui foliaj

bogat, împiedicând o bună aerisire la nivelul frunzelor şi crescând umiditatea relativă la

nivelul plantei.

Insuficienţa îngrăşămintelor chimice influenţează, de asemenea, comportarea

plantelor faţă de boli. Astfel, incidenţa patogenilor Alternaria porri f. sp. solani, A. alternata

f. sp. lycopersici, A. tenuissima este explozivă când plantele sunt slab nutrite, lipsa unui singur

element nutritiv (de exemplu magneziul) determinând accentuarea gravităţii atacului pe

frunze şi fructe.

Interactiunea dintre bolile si ingrasaminte este de un mare interes practic si s-au

efectuat numeroase studii asupra interactiunii dintre ingrasamintele pe baza de azot si boala.

Aplicarea azotului peste doza recomanadata a dovedit ca determina cresterea semnificativa a

razei de actiune a bolii si a suprafetei lezate. Aceste studii s-au facut si la Magnaporthe grisea

si Blumeriaia graminis ssp. tritici si la făinarea tomatelor Oidium lycopersici.

O insuficienta a ingrasamintelor conduce la sensibilitatea plantei si avansarea bolilor.

Supraabundenta ingrasamintelor conduce la o hipersensibilitate fie aprovizioneaza excese de

ingrasamant care sunt disponibile direct pentru a sustine cresterea patogenilor. Mai puţine

studii sunt îndreptate către studierea efectului îngrăşămintelor din categoria fertlizanţi foliari

şi biostimulatori asupra creşterii şi dezvoltării agenţilor patogeni. Studiile au fost îndrepatate

către influenţa îngrăşămintelor foliare cu azot şi potasiu de tipul ureei şi sărurilor: azotat de

amoniu, sulfat de amoniu, azotat de potasiu, clorură de potasiu, sulfat de potasiu şi fosfat acid

de potasiu faţă de patogenii Alternaria solani la tomate şi Alternaria macrospora la bumbac

(Blachinski şi al., 1996).

Biostimulatorii utilizaţi în prezent în culturile ecologice au un efect stimulativ asupra

sistemului radicular, in particular. Produsul BioRootz este un biostimulator universal pentru:

3

cultivarea răsadului, legumicultură, sere, solarii, cultivarea cartofului, căpşuni, pepeni, plante

tehnice, grădinărit, gazon, cultivarea florilor etc. Acesta se aplică la nivelul solului pentru a

stimula creşterea numărului de microorganisme existente din sol, în beneficiul dezvoltării

rădăcinii.

Numărul crescut al microorganismelor provoacă o absorţie mult mai mare de nutrienţi

precum şi a îngrăşămintelor folosite în paralel. Acest lucru se poate demonstra prin diferenţa

de dezvoltare a structurii rădăcinii constatată la plantele tratate cu BioRootz, faţă de acele

plante care nu au fost tratate. Ca urmare, mediul rădăcinii este mai puţin expus la diverse boli

ale solului; mai mult, acest produs are efect inhibitor asupra mucegaiului patogen. Produsul

BioRootz elimină bolile determinate de virusuri; în cele mai multe cazuri virusul fiind

îndepărtat pentru întreg sezonul. În cazul în care virusul este depistat a fi prezent, efectele

acestuia sunt semnificativ diminuate comparativ cu situaţiile în care plantele nu sunt tratate cu

BioRootz (EcoIndustries)

Avantajele utilizării produsului BioRootz:

- Stabilizarea mediului biologic în mediu de creştere;

- Reducerea poluării organice din sistemul de scurgere;

- Creşterea capacităţii de absorţie a îngrăşămintelor şi a nutrienţilor de către plantă cu

cca 40%;

BioRootz are efecte pozitive asupra bolilor care apar în legumicultură, incluzând:

virusul X al cartofului, virusul Pepino Mosaic sau specii ale genurilor: Clavibacter, Fusarium,

Pythium, Phytophthora, Verticilium şi Botrytis. Proprietaţile acestui produs sunt enumerate în

tabelul 1.

BioRootz are rezultate semnificative în diminuarea numărului bolilor; prin efecte

pozitive, în procesul de recuperare a părţilor afectate ale plantelor şi în 99% dintre cazuri la

eliminarea răspândirii viitoare a acestor boli şi infestări. Se poate spune că acest produs

elimină în cele mai multe cazuri virusurile, îndepărtândul pentru tot sezonul. Atunci când

virusul este depistat a fi prezent, efectele acestuia sunt semnificativ diminuate comparativ cu

plantele care nu sunt tratate cu BioRootz.

În cazul ciupercilor (Fusarium spp.) acţiunea acestora este redusă (până la stopare)

întrtr-o perioadă foarte scurtă. Ciupercile atacă rădăcinile după care atacă planta în întregime.

4

BioRootz activează micorizele din sol, care pot stopa dezvoltarea speciilor de

Fusarium (distrugerea comlpetă a acestei ciuperci în numai o zi de la aplicarea tratamentului

cu BioRootz).

Produsul poate fi folosit în scop profilactic, pentru a preveni apariţia bolilor la plante.

BioRootz poate fi folosit pe întreaga cultură, de la înfiinţare acesteia şi până la recoltare.

Produsul poate fi considerat ca o asigurare a culturii, care poate fi folosită de la bun început

pentru a acoperi riscurile împotriva bolilor şi plăgilor.

Tabelul 1.1

Proprietăţile caracteristice produsului BioRootz

lichid cu aspect maro închis, miros plăcut;

acţionează rapid

asigură dezvoltarea unui sistem radicular puternic şi sănătos

uşor aplicabil pe teren, putând fi injectat în bazinele de irigat sau

stropit;ideal pentru orice tip de sol;

conţinut bogat în elemente nutritive

obţinut din materii prime organice 100% naturale;

raport calitate/preţ foarte avantajos;experienţă îndelungată în aplicarea

cu succes a acestuia în Europa

randament crescut al recoltei cu până la 30-40%încă din primul an de

aplicare.

BioRootz este alcătuit din 100% extracte şi uleiuri vegetale (tabelul 1.2). Toate

materiile prime provin dintr-un ciclu ecologic închis, produs fără agenti chimici, sintetici sau

fertilizatori.

Un alt produs, ProBalance, este un regenerator al plantei şi al rădăcinii, cu efect

antibiotic, conţinând un complex de elemente de bază din plante şi comcentrat din fructe.

ProBalance se descompune 100% în natură, astfel încât sete prietenos cu mediul. Produsul

actionează în două etape: în prima etapa se manifestă ca un dizolvant nutritiv biochimic, iar în

cea de-a doua, stimulează micro-organismele la o activitate mărită, cu ajutorul

micronutrienţilor pe care îi conţine.

5

ProBalance sustine producţia sucului alcaloid (conexiunile toxice N produse de plante,

care vatămă insectele) şi prin urmare, sistemul natural de apărare al plantelor este semnificativ

îmbunătăţit

Tabelul 1.2.

Copompoziţia produsului BioRootz

Componentul Concentraţia

(mg/l)

Ca 480-960

Co 960-1200

Cu 0,24-0,50

Fe 28,0-40,0

Mg 80,0-120,0

K 4400-6000

S 800-1600

Ureea 40-50

Ulei plante 1400

Ulei acizi 0,8-1,2 %

Ph 9,4

Densitate 1,05 kg/l

.

ProBalance este alcătuit din extracte şi uleiuri 100% naturale din plante şi fructe.Toate

componentele folosite la obţinerea acestuia provin dintr-un ciclu ecologic închis, produs fără

agenti sau fertilizatori sintetici sau chimici.

ProBalance aduce plantei o semnificativă protecţie împotriva fungilor, acarienilor şi

insectelor.Produsul ajută la prelevarea manganului, magneziului, potasiului, bioxidului de

siliciu şi calciului.

ProBalance îmbunătăţeşte reacţia plantei la insecte şi boli şi accelerează circulaţia

zahărului şi a amidonului în plantă. Produsul creşte forţa rădăcinilor şi a frunzelor.

6

ProBalance şi-a dovedit eficacitatea asupra tuturor tipurilor de culturi acţionând ca o

barieră fizică împotriva infestărilor cu insecte şi boli.

Tabelul 1.3.

Copompoziţia produsului ProBalance

Componentul Concentraţia (%)

Extract de legume 50, 0

Glicerină 4,0

K2O 4,0

SI 0,3

N 0,02

Ca 0,03

H2O Depinde de concemtratia de H2O din cartof

Ulei esenţial de lămâie 0,05

Ulei esenţial de portocală 0,05

Ulei din sămânţă de rapiţă 2,05

Ulei de floarea soarelui 2,00

Ulei aromatizat din India 1,00 - 2,00

7

CAPITOLUL II

REZULTATE PRIVIND ACŢIUNEA BIOLOGICĂ A UNOR

BIOSTIMULATORI FAŢĂ DE PATOGENI TRANSMIŞI PRIN

SEMINŢELE DE LEGUME ŞI GERMINAŢIA ACESTORA

2.1. Justificarea temei

Odată cu începerea cultivării plantelor de către om a apărut şi interesul păstrării şi

îmbunătăţirii germinaţiei seminţelor cu scopul de a putea asigura înfiinţarea culturilor în anii

următori sau la distanţe mari de locul în care au fost produse.

Păstrarea îndelungată a seminţelor a declanşat o serie de căutări pentru a găsi condiţiile

cele mai bune de menţinere a germinaţiei. Datorită condiţiilor fiziologice cât şi a celor de

producere, de condiţionare şi de păstrare, valoarea germinaţiei scade în timp.

Bolile şi dăunătorii care acţionează în perioada de producere şi păstrare a seminţelor,

influenţează negativ germinaţia. Din aceste motive cât şi pentru a asigura o răsărire rapidă,

chiar explozivă şi uniformă a culturilor a fost şi este necesar să se efetueze permanent teste cu

ajutorul cărora să se stabilească metode de menţinere a germinaţiei la un nivel optim o

perioadă cât mai îndelungată.

Este cunoscut faptul că tratamentele chimice efectuate în perioada de condiţionare şi

ambalare a seminţelor afectează negativ menţinerea germinaţiei o perioadă îndelungată.

Datorită acestei situaţii, mulţi agricultori caută să păstreze seminţele netratate, iar înainte de

însămânţare aplică diferite tratamente. Îmbunătăţirea germinaţiei şi obţinerea de plante

sănătoase şi viguroase determină o serie de cercetări care să înlocuiască substanţele chimice

de sinteză cu produsele obţinute din diferite părţi ale unor plante.

In acest context, obiectivele noastre au urmărit atât efectul unor tratamente naturale,

aplicate la sămânţă, asupra indicatorilor de calitate ai acesteia în ceea ce priveşte germinaţia

(procentul de germinare, apariţia de germeni cu cât mai puţine deficienţe structurale) cât şi

acţiunea biologică a acestora asupra potenţialilor agenţi patogeni seed borne.

8

2.2. Obiective

Studiul nostru a urmărit atât efectul unor tratamente naturale - biostimulatori, aplicate

la sămânţă, asupra indicatorilor de calitate ai acesteia în ceea ce priveşte germinaţia (procentul

de germinare, apariţia de germeni cu cât mai puţine deficienţe structurale) cât şi acţiunea

biologică a acestora asupra potenţialilor agenţi patogeni seed borne (transmisibili cu sămânţa).

2.3. Material şi metode

Experienţele necesare analizelor de germinaţie au fost montate în cadrul Laboratorului

Central pentru Controlul Calităţii Seminţelor şi Materialului Săditor Bucureşti. Experienţele

care au urmărit estimarea acţiunii biologice in vitro a biostimulatorilor utilizati asupra unor

agenţi patogeni au fost realizate în cadrul laboratorului de Fitopatologie al catedrei de

genetică, Ameliorare şi Protecţia plantelor, Facultatea de Agricultură, USAMV Bucureşti.

Laboratorul Central pentru Controlul Calităţii Seminţelor şi Materialului Săditor

Bucureşti este Autoritatea Oficiala pentru certificarea şi controlul calităţii semintelor din

judeţul Ilfov, parţial judeţul Călăraşi şi Bucureşti.Laboratorul central, coordonează din punct

de vedere tehnic, activitatea tuturor celor 30 Inspectoratelor Teritoriale şi a celor 7 filiale din

judeţele ţării. Laboratorul central împreună cu toate inspectoratele teritoriale şi filialele ţării,

sunt subordonate Inspecţiei Naţionale pentru Calitatea Seminţelor din cadrul Ministerului

Agriculturii Pădurilor şi Dezvoltării Rurale.

Laboratorului Central pentru Controlul Calităţii Seminţelor şi Materialului Săditor

Bucureşti este compus din 10 laboratoare servicii şi compartimente tehnice după cum

urmează: Laborator de Puritate. Laborator Fitosanitar; Laborator de Germinaţie; Laborator de

Umiditate şi Primiri Probe; Laborator de Electroforeză; Serviciul Analize Laborator şi

Asigurarea Calităţii; Serviciul Control, Certificare, Înregistrare; Compartiment Acreditare,

Implementare, Verificare Metode Analize; Compartiment Informatizare; Compartiment

Financiar – Contabilitate şi Resurse Umane

Laboratorul de Puritate execută toate analizele de puritate fizică (P), determinarea

corpurilor străine(CS), determinarea masei a o mie de boabe (MMB), pregăteşte probele

pentru post control (PC), pregăteşte probele oficiale (PO) pentru păstrare. Laboratorul

Fitosanitar execută toate analizele de stare sanitară (SS) care sunt ridicate oficial de la agenţii

economici autorizaţi.

9

Laboratorul de Umiditate şi Primiri Probe înregistrează toate probele oficiale ridicate

de la agenţii economici autorizaţi, execută determinările de umiditate(U) şi cează fişele de

analiză. Laboratorul de Germinaţie execută toate determinările de germinaţie (G) şi de could

test (CT) la probele ridicate oficial de la agenţii economici autorizaţi. Laboratorul de

Electroforeză execută analize de puritate biologică, la probele ridicate oficial de la agenţi

economici autorizaţi.

Serviciul Analize Laborator şi Asigurarea Calităţii verifică toate fişele de analiză

executate în toate celelalte laboratoare şi compartimente, a probelor ridicate oficial de la

agenţii economici autorizaţi şi stabileşte calitatea seminţelor în vederea eliberării buletinului

orange (BO) care însoţeşte seminţele în Comunitatea Europeană (CE). Se ocupă de instruirea

şi verificarea cunoştinţelor Împuterniciţilor ISTA din întreaga ţară care ridică probe oficiale

destinate exportului.

Serviciul Control, Certificare, Înregistrare, se ocupă de stabilirea calităţii seminţelor

destinate comercializării pe piaţa internă în vederea eliberării Certificatului de Origine şi

Calitate al Seminţelor (COCS). Coordonează activitatea celor 11 inspectori oficiali atestaţi pe

care îi are laboratorul, care certifică loturile de seminţe şi material săditor, produse de agentii

economici autorizaţi. Se ocupă de înregistrarea, evidenţa şi controlul agenţilor economici

autorizaţi să producă şi să comercializeze seminţe în teritoriul de care răspunde.

Compartimentul Acreditare, Implementare, Verificare Metode Analize se ocupă de

acreditarea laboratoarelor din cadrul inspectoratelor teritoriale şi filialelor din ţară, de

elaborarea manualului calităţii, de pregătirea tehnică şi verificarea cunoştinţelor tehnice ale

tuturor laborantilor şi eşantionorilor oficiali, verifică implementarea şi respectarea metodelor

de analiză oficială la toate inspectoratele din ţară.

Compartimentul Informatizare se ocupă de confecţionarea tuturor etichetelor oficiale

destinate loturilor de seminţe analizate şi care corespund calitativ standardelor în vigoare.

Completează toate certificatele de calitate ale seminţelor analizate.

Compartimentul Financiar – Contabilitate şi Resurse Umane se ocupă de taxarea

tuturor analizelor efectuate şi a tuturor serviciilor prestate de personalul din cadrul

laboratorului către agenţii economici. În cadrul laboratorului au intrat în acest an 4850 probe,

pe care s-au efectuat 16530 analize diferite.

10

2.3.1. Material biologic vegetal

Determinările de germinaţie s-au efectuat pe 31 de probe de seminţe (aparţinând

plantelor din diferite familii botanice), sondate de la agenţi economici de pe teritoriul

judeţului Ilfov şi din Bucureşti, zone arondate pentru analize şi certificare la LCCS Bucureşti.

Aceste seminţe nu au fost tratate cu nici o substanţă chimică cu excepţia tratamentelor din

experienţă. Elementele de identificare ale loturilor analizate sunt prezentate în tabelele 2.1 –

2.5.

Tabelul 2.1

Elemente de identificare a loturilor de seminţe din familia Umbeliferae

Nr. fişă Specia/Soiul Unitatea Producătoare

2304 Păstârnac Alb Lung Unisem

3211 Morcov Milenium 3 Unisem

3039 Ţelină Edward Amia Internaţional

2643 Ţelină de Rădăcină Mentor Universal Impex

3002 Pătrunjel Gigante Amia Internaţional

3003 Pătrunjel Lenka Amia Internaţional

2600 Pătrunjel Ory Amia Internaţional

2303 Pătrunjel de Rădăcină Zaharat Unisem

Tabelul 2.2.

Elemente de identificare a loturilor de seminţe din familia Cruciferae


2392 Muştar Alb Alex ITC

2393 Rapiţă Wilma Alfa Semence

3031 Conopidă Rober Amia Internaţional

3038 Gulie Wiedenska Biala Amia Internaţional

3034 Varză Albă Ditmarska Amia Internaţional

3033 Varză Albă Camienna Glowa Amia Internaţional

3036 Varză Roşie Haco Amia Internaţional

3037 Varză Albă Brusel Groninger Amia Internaţional

11

Tabelul 2.3.

Elemente de identificare a loturilor de seminţe din familia Cucurbitaceae


2302 Castraveţi Lord Unisem

Tabelul 2.4.

Elemente de identificare a loturilor de seminţe din familia Solanaceae


2301 Ardei Opal Unisem

2300 Ardei Galben Superior Unisem

2432 Ardei Orest Unisem

2433 Ardei Siret Unisem

3214 Ardei Iute Delicios Unisem

2305 Tomate Kristinica Unisem

2174 Vinete Luiza ICDLF Vidra

Tabelul 2.5.

Elemente de identificare a loturilor de seminţe din familia Liliaceae


2311 Ceapă Wolska Amia Internaţional

3004 Ceapă Wolska Amia Internaţional

3005 Praz Gros Long D`ete Amia Internaţional

3006 Praz De Carentan2 Amia Internaţional

12

La Laboratorul Central Pentru Calitatea Seminţelor şi Materialului Săditor au fost

efectuate determinări de germinaţie pe cele 31 de probe de seminţe, în trei variante. Produsele

utilizate au fost BioRootz şi Probalance. Variantele test sunt prezentate în tabelul 2.6.

Tabelul 2.6

Variante test – analiza de germinaţie

Var. Specificaţie

Martor probele martor, netratate, puse la germinat pentru determinările

oficiale, conform Standardului Român SR 1634 din iunie 1999

pentru eliberarea certificatelor de calitate

V1 probele puse la germinat folosind pentru umectarea stratului de

germinatie soluţia ProBalance in concentraţie de 3%.

V2 probele puse la germinat folosind pentru umectarea stratului de

germinatie soluţia BioRootz in concentraţie de 1%.

2.3.2. Metode de cercetare

2.3.2.2 Metode pentru analiza germinaţiei seminţelor.

Metodele utilizate în analizele de germinaţie sunt prezentate în tabelul 2.7. Ele sunt

difeite, în funcţie de lotul de seminţe supus analizei.

Au fost urmărite umătoarele elemente: porcentul d egerminare, numărul de germeni

anormal, caracterizarea acestora şi procentul de germeni anormali în raport cu proba martor.

Materiale folosite: strat de germinaţie: hârtie de sugativă şi filtru.

Compoziţia hârtiei: din lemn albit chimic, bumbac sau altă celuloză vegetală

purificată. Trebuie sa fie liberă de ciuperci, bacterii şi substanţe toxice care pot

influenţa dezvoltarea germenilor în timpul germinaţiei.

Textura: poroasă astfel încât rădăcinile germenilor să crească pe suprafaţa hârtiei nu în

interiorul ei.

Rezistenta: suficient de rezistentă pentru a putea rezista la rupere în timpul testului.

13

Tabelul 2.7

Metode utilizate în analizele de germinaţie

Nr

Crt.Specia

Soiul Metoda

(strat/temperatură)

2304 Pastinaca sativa

(Păstarnac)Alb lung

BP/20-30OC

Lumină -28 zile

3211 Daucus carota

(Morcov)

Milenium 3 BP/20 OC

Lumină -14 zile

3039 Apium graveolens

(Ţelină)Edward

TP/20-30 OC

Lumină -21 zile

2643 Apium graveolens

(Ţelină)Mentor

TP/20-30 OC

Lumină -21 zile

3002 Petroselinum crispum

(Pătrunjel)Gigante

TP/20-30 OC

Lumină -21 zile


(Pătrunjel)

Lenka TP/20-30 OC

Lumină -21 zile


(Pătrunjel)Ory

TP/20-30 OC

Lumină -21 zile


(Pătrunjel)Zaharat

TP/20-30 OC

Lumină -21 zile

2392 Sinapis alba

(Muştar)

Alex TP/20 OC

Lumină -7zile

2393 Brassica napus

(Rapiţă)

Wilma TP/20 OC

Lumină -7zile

3031 Brassica oleracea var. botrytis

(Conopidă)Rober

TP/20 OC

Lumină -10zile

3038 Brassica oleracea

var.gongylodes

(Gulie)

Wiedenska Biala

TP/20 OC

Lumină -10zile

3033 Brassica oleracea var capitata

(Varză) Camienna Glowa

TP/20 OC

Lumină -10zile

3034 Brassica oleracea var capitata

(Varză)Ditmarska

TP/20 OC

Lumină -10zile

3036 Brassica oleracea Haco TP/20 OC

14

var.capitata rubra

(Varză roşie)

Lumină -10zile

3037 Brassica oleracea var.capitata

(Varză)Groninger

TP/20 OC

Lumină -10zile

2301 Capsicum annum

(Ardei)Ardei Opal

BP/20-30OC

Lumină-14zile

2300 Capsicum annum

(Ardei)Ardei Galben Superior

BP/20-30OC

Lumină-14zile

2432 Capsicum annum

(Ardei)Ardei Orest

BP/20-30OC

Lumină-14zile

2433 Capsicum annum

(Ardei)Siret

BP/20-30OC

Lumină-14zile

3214 Capsicum annum

(Ardei)

Delicios

Iute

BP/20-30OC

Lumină-14zile

2305 Lycopersicon esculentum

(Tomate)Kristinica

BP/20-30OC

Lumină-14zile

2174 Solanum melongena

(Vinete)Luiza

BP/20-30OC

Lumină-14zile

2311 Allium cepa

(Ceapă)

Wolska BP(PP)/20 OC

Lumină-12zile

3004 Allium cepa

(Ceapă)

Wolska BP(PP)/20 OC

Lumină-12zile

3005 Allium porum

(Praz)Gros LungD`ete

BP(PP)/20 OC

Lumină-16zile

3006 Allium porum

(Praz)

De Carentan 2 BP(PP)/20 OC

Lumină-16zile

2302 Cucumis sativusLord

BP/25OC

Lumină-8zile

Capacitatea de umectare: capacitate mare de reţinere a apei încât să ajungă pentru

întreaga perioadă a testului astfel încât să asigure continuu aprovizionarea cu apă a

seminţei.

PH: valori cuprinse între 6,0 - 7,5.

Păstrarea hârtiei: intr-o cameră rece cu o umiditate relativă cât mai scăzută; va fi

ambalată corespunzator pentru a fi protejată de murdărire şi deteriorare în timpul

păstrării.

Sterilizarea hârtiei: necesară în cazul în care s-au dezvoltat mucegaiuri în timpul

păstrării.

15

Testul biologic al calităţii hârtiei: pentru a compara hârtia de calitate necunoscută cu

hârtie din stoc de calitate acceptabilă cunoscută, trebuie efectuat un test biologic

pentru depistarea straturilor vătămătoare. Pentru acest test se folosesc seminţe din

anumite specii cunoscute ca fiind sensibile la substanţele toxice din compoziţia hârtiei.

Acest test se poate face cu următoarele specii: Phleum pretense, Agrostis gigantea,

Eragrostis curvula, Festuca rubra var. commutate si Lepidium sativum.

Aprecierea hârtiei se face prin compararea dezvoltării rădăcinii germemilor crescuti pe

cele două tipuri de hârtie. Aprecierea se face în ziua sau cu o zi înainte, specificată pentru

prima numărare la specia folosită în testare. Este obligatorie aprecierea germenilor în

această perioadă deoarece simptomele de inhibare a creşterii rădăcinii datorate toxicitătii

sunt mult mai pronunţate într-un stadiu mai timpuriu al creşterii rădăcinii. Asemenea

simptome sunt: scurtarea rădăcinilor şi uneori decolorarea varfurilor rădăcinilor, ridicarea

rădăcinilor deasupra hârtiei si inmănuncherea perilor radiculari.

Apa folosită pentru prepararea soluţiilor folosite în umectarea straturilor de

germinaţie:

Apa folosită trebuie să fie liberă de impurităţi organice si anorganice.

Calitatea apei: dacă apa curentă nu este destul de bună pentru a fi folosită la prepararea

soluţiilor de umectare a stratului,se poate folosi apă deionizată sau apă distilată.

pH 6,0-7,5.

Controlul calitaţii apei: periodic analize pentru determinarea pH-ului şi efectuarea

analizei microbiologice şi a compoziţiei chimice (la o instituţie specializată).

Verificarea calităţii apei se face pe probe comparative folosind pentru umectarea

stratului unei probe apa curentă iar la cealaltă probă apa distilată. Rezultatele obţinute

trebuie să fie asemănătoare.

Modul de lucru. Pentru determinari BP (rulou) s-a folosit hârtie sugativă şi de filtru

cu dimensiunile de 60x15 cm. Se umectează stratul de germinaţie la începutul lucrului într-un

vas cu soluţia preparată, până la capacitatea de reţinere a hârtiei. Cantitatea de soluţi absorbită

de stratul de hârtie trebuie să fie suficientă pentru intreaga peroadă de germinaţie.

Seminţele se aşează distanţat pe hârtia de sugativă şi se acoperă cu o faşie de hârtie de

filtru. Stratul astfel pregătit se rulează şi se introduce într-o pungă din polietilenă în poziţie

verticală, se inchide cu o agrafă la partea superioară iar apoi se aşeaza in aparatul de

germinaţie.

16

Pentru determinările TP s-a folosit rondele de sugativa 170 mm: seminţele se asează

pe suprafaţa hârtiei (stratul de germinaţie) in vase Petri sau cutii transparente.

Se umectează stratul de germinaţie la inceputul lucrului intr-un vas cu soluţia

preparată, până la capacitatea de reţinere a hârtiei, iar vasele se acoperă după înfinţarea

fiecărei repetiţii cu capac pentru a reduce evaporaţia. Cantitatea de soluţie absorbită de stratul

de hârtie trebuie să fie suficientă pentru întreaga peroadă de germinaţie.

Pentru determinările BP (PP pliseu mijlociu din sugativă): s-a folosit hârtia cu

dimensiunile 60x32 cm plus strat pentru învelirea pliseului cu dimensiunea de 32/12 cm.

Seminţele sunt aşezate pe fâşii de hârtie de filtru plisată, asemenea acordeonului, după care se

umectează cu soluţia pregatită pentru testare. Pliseul se înfăşoara într-o fâşie de sugativă, se

aşează în pungi de plastic şi se duc în camera de germinaţie.

Seminţele rămân în camera de germinaţie pentru perioada stabilită în condiţiile

prevăzute în SR 1634/1999, pentru „Determinarea germinaţiei”.

Evaluarea germenilor. Evaluarea germenilor se face atunci când aceştia au atins faza

în care structurile lor esenţiale pot fi apreciate corect. Germenii normali vor fi îndepărtaţi de

pe strat la fiecare evaluare. În timpul perioadei de testare se înlătură de pe stratul de

germinaţie şi germenii afectaţi de boli pentru a înlătura riscul infectării seminţelor în curs de

germinare.

2.3.2.2. Metode pentru estimarea acţiunii biologice a biostimulatorilor (in vitro).

Testele pentru determinarea acţiunii biologice a biostimulatorilor asupra creştreii

miceliene a unor izolate patogene au fost derulate în cadrul laboratorului de Fitopatologie,

Facultatea de Agricultură, DepartamentulStiinţele plantelor, USAMV Bucureşti.

Laboratorul de Protecţia plantelor (A III 125) este dotat cu aparatură de bază necesară

derulării cercetărilor clasice de micologie, bacteriologie, microbiologie. Astfel, în dotarea

laboratorului există aparatură necesară izolarii, identificării, cultivării şi studiului diferiţilor

agenţi fitopatogeni (ciuperci, bacterii).

Laboratorul respectă normele de securitate şi igiena specifice domeniului

microbiologiei: deşeurile biologice (culturi de ciuperci, bacterii) sunt supuse decontaminării

prin autoclavare; celelalte tipuri de deşeuri sunt clasate în pubele etichetate specific.

Evidentierea actiunii biologice a celor trei produse test s-a realizat prin metoda

includerii acestora în mediul artificial de cultură PDA (Potato Dextrose Agar, Sigma

Agrohmicals, 39 g/l).

17

Concentraţiile test au fost 0,1 – 0,5 – 1 – 3%. Materialul biologic fungic a gost

reprezentat de un izolat al speciei Alternaria longipes (izolat de pe seminţe de ardei) şi un

izolat de Fusarium cucurbitacearum (izolat de pe seminţe de castraveţi).

După omogenizare, mediul a fost repartizat în vase Petri. Mediul astfel preparat a fost

însămânţat cu inoculul patogen, reprezentat de discuri miceliene cu diametrul de 8mm

prelevate de la periferia culturilor pure, în vârstă de o săptămână. Vasele Petri astfel

însămânţate au fost incubate în termostat la 24ºC, la întuneric. Efectul biologic a fost estimat

în comparaţie cu un martor cultivat pe mediul PDA, cu etanol in concentratia la care se

gaseste in extractul alcoolic. S-au realizat câte 3 repetiţii pentru fiecare produs testat şi fiecare

concentraţie.

Observaţiile s-au realizat după 5 şi 7 zile de incubare iar acţiunea biologică a fost

evaluată prin măsurarea creşterii miceliene (diametrului coloniilor).

Diametrele medii ale celor trei repetiţii au fost comparate cu cele ale martorului,

calculându-se astfel procentul de inhibare a creşterii miceliene (sau eficacitatea extractelor

vegetale) formula: % inhibare a creşterii (eficacitate) = (Dmt – Dvar)/Dmt x 100, unde

Dmt = diametrul coloniei miceliene a martorului netratat; Dvar = diametrul coloniei miceliene

a variantei test.

2.4. Rezultate obţinute

2.4.1.Rezultate privind influenţa biostimulatorilor asupra germinaţiei seminţelor

Influenţa biostimulatorilor asupra germinaţiei seminţelor plantelor din familia

Umbeliferae este prezentată în figura 2.1.

Astfel, remarcăm, în cazul seminţelor de păstârnac, lipsa germinării, la toate variantele

test. Pentru seminţele de morcov (soiul Milenium), tratamentele cu BioRootz şi ProBalance

au menţinut sau chiar au stimulat germinaţia.

In schimb, aplicarea acestor tratamente la sămânţă de ţelină, indiferent de soi, nu a

avut efect de stimulare, valorile germinaţiei seminţelor tratate fiind mult scăzute comparativ

cu martorul (fig. 2.1).

La seminţele de pătrunjel, a fost înregistrată o variaţie a valorilor germinaţiei

seminţelor. Astfe, la soiul Gigante, doar varianta BioRootz a stimulat germinaţia seminţelor.

18

La soiul Lenka, aplicarea produselor a menţinut valorile germinaţiei în apropierea

celei înregistrată la martor.

Un comportament asemănător a fost înregistrat la soiul Zaharat, cu specificarea că aici

germinaţia a avut valori scăzute, inclusiv la martor.

Fig. 2.1. Influenţa biostimulatorilor asupra germinaţiei seminţelor - Umbeliferae


Brassicaceae este prezentată în figura 2.2.

Semnalăm efectul de stimulare a germinaţiei seminţelor de muştar alb (soiul Alex), în

cazul celor trei variante de tratament. In cazul seminţelor de rapiţă, aplicarea tratamentului cu

BioRootz a ridicat valoarea germinaţiei la 86% (comparativ cu martorul – 81%). Celelalte

doua tratamente nu au modificat valoarea germinaţiei calculată pentru martor.

19

0

20

40

60

80

100

germ

inat

ia (%

)

M V1 V2

M 0 76 62 85 59 65 13 30

V1 0 76 24 26 63 57 9 32

V2 0 83 39 84 41 60 18 32

pastarnac Alb lung

morcov Milenium

3

telina Edward

telina Mentor

patrunjel Gigante

patrunjel Lenka

patrunjel Ory

patrunjel Zaharat

.

Fig. 2.2. Influenţa biostimulatorilor asupra germinaţiei seminţelor - Brassicaceae


Solanaceae este prezentată în figura 2.3. In cazul seminţelor de solanacee, remarcăm creşterea

procentului de germinare la majoritatea acestora (excepţia soiul de ardei Galben Superior), în

cazul aplicării produsului BioRootz. In cazul tomatelor, valorile germinaţiei au rămas

apropiate de martor şi în cazul celorlalte doua variante.


Alliaceae este prezentată în figura 2.4. Cele două loturi de ceapă, soiul Wolska, s-au

comportat diferit. In cazul lotului 2311 au fost înregistraţi numai germeni morţi iar la

seminţele lotului 3004, germinaţia a fost foarte scăzută.

Varianta ProBalance a reuşit creşterea procentului de seminţe germinate de la 13%

(martor) la 23%. Nu a fost semnalat un efect stimulator al germinaţiei nici la seminţele de

praz tratate.

20

0

10

20

30

40

50

60

70

80

90

100

germ

inat

ia (%

)

M V1 V2

M 87 81 75 77 80 78 15 80

V1 90 86 57 66 60 72 6 79

V2 94 81 60 72 60 74 14 75

Muştar Alb Alex

Rapiţă Wilma

Conopidă Rober

Gulie Wiedenska Biala

Varză Albă

Ditmars

Varză Albă

Camien

Varză Roşie Haco

Varză Albă

Brusel

Fig. 2.3. Influenţa biostimulatorilor asupra germinaţiei seminţelor - Solanaceae

Fig. 2.4. Influenţa biostimulatorilor asupra germinaţiei seminţelor - Alliaceae

21

0

20

40

60

80

100

germ

inat

ia (%

)

M V1 V2

M 24 57 29 55 70 92 87

V1 29 47 43 60 73 94 87

V2 21 50 27 64 63 94 79

Ardei Opal

Ardei Galben

Superior

Ardei Orest

Ardei Siret

Ardei Iute

Delicios

Tomate Kristinic

a

Vinete Luiza

0

20

40

60

80

100

germ

inat

ie (%

)

M V1 V2

M 0 13 84 88

V1 0 4 53 61

V2 0 23 84 88

Ceapă Wolska Ceapă WolskaPraz Gros Long

D`etePraz De

Carentan2

In timpul analizelor de germinaţie a seminţelor se înregistrează se caracterizează

aspectul germenilor şi se descriu/centralizează germenii anormali. Aceste date, însoţite de

descrierea germenilor anormali, sunt prezentate în figurile 2.5 – 2.8.

In general, pentru seminţele de umbelifere, aplicarea tratamentelor cu biostimulatori a

redus apariţia de germeni anormali (fig 2.5). Insă, în cazul seminţelor de ţelină (ambele

soiuri), în cazul variantelor tratate a fost înregistrat un număr mai mare de germeni anormali

comparativ cu martorul. Remarcăm o creştere semnificativă a germenilor anormali în cazul

aplicării produsului MBS, la 79 de germeni la soiul Mentor (doar unul la varianta martor).

Fig. 2.5. Germeni anormali – Umbeliferae

Tratarea seminţelor de brasicacee cu biostimulatorii test a determinat scăderea

numărului de germeni anormali, în majoritatea cazurilor, ceea ce se corelează cu datele

referitoare la procentul de germinare (figura 2.6).

Influenţa tratamentelor cu biostimulatori asupra germenilor a fost variată, în cazul

seminţelor de solanacee (figura 2.7). Astfe, la soiul de ardei Opal, numărul de germeni

anormali a fost redus, comparativ cu martorul, în urma aplicării tratamentelor. In schimb, la

soiul Galben superior, la varianta ProBalance a fost înregistrat un număr mai mare de germeni

anormali, comparativ cu martorul şi cu celelalte doua variante. Acelaşi fenomen a fost

înregistrat şi la soiurile Orest şi Delicios.

22

0 1 4 1 5 4 5 30 1

27

54

05 2 20 1

26

5 2 3 1 3

0

20

40

60

80

past

arna

c A

lb lu

ng

mor

cov

Mile

nium

3

telin

a E

dwar

d

telin

a M

ento

r

patr

unje

l Gig

ante

patr

unje

l Len

ka

patr

unje

l Ory

patr

unje

l Zah

arat

M V1 V2

Fig. 2.6. Germeni anormali – Brassicaceae

Fig. 2.7. Germeni anormali – Solanaceae

23

1214

5

15

8

4

10

4

97

8

18

45

78

5

14

10

18

4

7

15

6

02468

101214161820

Muş

tar

Alb

Ale

x

Rap

iţă

Wil

ma

Con

opid

ăR

ober

Gul

ieW

iede

nska

Bia

la

Var

ză A

lbă

Dit

mar

ska

Var

ză A

lbă

Cam

ienn

aG

low

a

Var

zăR

oşie

Hac

o

Var

ză A

lbă

Bru

sel

Gro

ning

er

M V1 V2

8

5

8

14

6

3 34

3

5

14

21

56

8

16

13

7

1

6

02468

1012141618

Ard

eiO

pal

Ard

eiG

albe

nSu

peri

or

Ard

eiO

rest

Ard

eiSi

ret

Ard

ei I

ute

Del

icio

s

Tom

ate

Kri

stin

ica

Vin

ete

Lui

za

M V1 V2

La tomate, aplicarea produselor BioRootz şi proBalance a determinat înregistrarea

unui număr mai mic de germeni anormali. In schimb, acest efect nu s-a înregistrat şi la vinete.

In cazul seminţelor de alliacee, numai la ceapa Wolska, lotul 3004 au fost semnalaţi

mai puţini germeni anormali comparativ cu martorul, şi aceasta la toate variantele test (figura

2.8).

Fig. 2.8. Germeni anormali – Alliaceae

Germinaţia seminţelor unor loturi analizate şi exemple de germeni anormali sunt

prezentate în figurile 2.9 şi 2.10.

24

0

1210

8

0

4

29

33

0

97 6

0

5

10

15

20

25

30

35

Ceapă Wolska Ceapă Wolska Praz Gros LongD`ete

Praz DeCarentan2

germ

eni a

norm

ali

M

V1

V2

Fig. 2.9 Aspecte din timpul testărilor – variantele test cu seminţe de crucifere

Fig. 2.10. Tipuri de germeni anormali

26

2.4.2. Rezultate privind influenţa biostimulatorilor asupra creşterii miceliene a

unor izolate patogene

Testarea eficacităţii biostimulatorilor în inhibarea creşterii miceliene a patogenilor a

fost realizată prin metoda includerii acestora în mediul artificial de cultură PDA.

Concentraţiile test au fost 0,1 – 0,5 – 1 – 3%.

Materialul biologic fungic a gost reprezentat de un izolat al speciei Alternaria longipes

(izolat de pe seminţe de ardei) şi un izolat de Fusarium cucurbitacearum (izolat de pe seminţe

de castraveţi). Observaţiile au urmărit creşterea miceliană a patogenilor.

Rezultatele noastre semnalează lipsa unei acţiuni fungicide directe a celor trei produse

supuse studiului, creşterea miceliană înregistrată fiind normală (figura 2.11).

Ne putem explica eventual, acţiunea fungicidă a produselor BioRootz şi Probalance

descrisă în fişa tehnică prin stimularea unor mecanisme de apărare ale plantei, fapt care este

semnalat în literatura de specialitate pentru extracte vegetale sau alţi compuşi.

27

Fig. 2.11. Creşterea miceliană a izolatelor test în prezenţa compusului BioRootz

Mt0.1%

3%0.5%

1%

Fc

Al%

biorootz

28

2.5. Concluzii

Datele din literatură cu privire la acţiunea unor produse biostimulatoare asupra

germinaţiei seminţelor sau asupra speciilor patogene şi saprofite care colonizează sămânţa

sunt foarte rare. Cele mai multe studii au evidenţiat acţiunea/interacţiunea patogeni –

îngrăşăminte foliare aplicate în diferite culturi legumicole.

Este cunoscut faptul că tratamentele chimice efectuate în perioada de condiţionare şi

ambalare a seminţelor afectează negativ menţinerea germinaţiei o perioadă îndelungată.

Datorită acestei situaţii, mulţi agricultori caută să păstreze seminţele netratate, iar înainte de

însămânţare aplică diferite tratamente. Îmbunătăţirea germinaţiei şi obţinerea de plante

sănătoase şi viguroase determină o serie de cercetări care să înlocuiască substanţele chimice

de sinteză cu produsele obţinute din diferite părţi ale unor plante.

In acest context, obiectivele noastre au urmărit atât efectul unor tratamente naturale,

aplicate la sămânţă, asupra indicatorilor de calitate ai acesteia în ceea ce priveşte germinaţia

(procentul de germinare, apariţia de germeni cu cât mai puţine deficienţe structurale) cât şi

acţiunea biologică a acestora asupra potenţialilor agenţi patogeni seed borne.

Rezultatele noastre semnalează efectul aplicării unor biostimulatori la sămânţă, asupra

indicatorilor de calitate ai acesteia în ceea ce priveşte germinaţia (procentul de germinare,

apariţia de germeni cu cât mai puţine deficienţe structurale).

Tratamentele aplicate au avut la bază biostimulatori cunoscuţi pentru efectul lor în

stimularea germinaţiei seminţelor: BioRootz şi ProBalance.

Determinările de germinaţie s-au efectuat pe 31 de probe de seminţe, sondate de la

agenţi economici de pe teritoriul judeţului Ilfov şi din Bucureşti, zone arondate pentru analize

şi certificare la Laboratorul Central Pentru Calitatea Seminţelor şi Materialului Săditor din

Bucureşti.

Efectul asupra germinaţiei seminţelor a fost extrem de variat, în funcţie de planta

gazdă, de soi si, în cadrul aceluiaşi soi, şi de lotul analizat. In majoritatea cazurilor, a fost

semnalat un efect de îmbunătăţire a germinaţiei seminţelor şi reducerea numărului de germeni

anormali.

Au fost însă, şi cazuri, în care în urma aplicării tratamentelor, germinaţia a fost

afectată iar numărul de germeni anormali înregistraţi a fost mai mare comparativ cu martorul.

Pentru a analiza influenţa tratamentelor cu biostimulatori asupra unor patogeni

transmisibili cu sămânţa, au fost iniţiate teste in vitro.

29

Rezultatele noastre semnalează lipsa acţiunii directe, fungicide sau fungitoxice, a

biostimulatorilor testaţi. Acţiunea fungicidă descrisă în fişele tehnice se poate datora, mai

curând, unei activări a unor mecanisme de apărare în planră, fenomen descris pentru unele

extracte naturale (în compoziţia acestor biostimulatori regăsim astfel de principii, din plante).

30

Bibliografie

1. Agrios, G. 2005. Plant pathology, 5th Edition, Academic Press, New York.

2. Dordas, C. 2009. Role of nutrients in controlling plant diseases in sustainable

agriculture: a review. Lichtfouse et al. (eds.) Sustainable agriculture, EDPSciences

3. Solomon, P., Kar-Chun T., Oliver R. 2003. The nutrient supply of pathogenic fungi; a

fertile field for study. Molecular Plant pathology, $ (3), 203-210

31

Lucrare Licenta Roxana - Fitopatologie

Documents

Transcript of Lucrare Licenta Roxana - Fitopatologie