Lp Virusologie

7/30/2019 Lp Virusologie

1/333

VIRUSOLOGIE

CursProf. Dr. Simona Ruta

Lucrari Practice:

Asist. Univ. dr. Camelia SultanaAsist. Univ. dr. Loredana ManolescuAsist. Univ. Dr. Cornel PopescuPreparator Dr. Aura Temereanca


2/333

VARIOLA (smallpox)


3/333

Variolizare1% vs. 25% mortalitate

Imunitate pe viata

Marea Britanie: sfarsit ani 1700

China 1950

Pakistan/Afghanistan/Ethiopia-1970


4/333

Cowpox-Vaccinia

Jenner, 1796

1800- Vaccinare obligatorie copiiMarea Britanie 1930-ultimul caz indigen in Marea

Britanie 1940-ultimul caz indigen in StateleUnite

1958- programul OMS de eradicareOctombrie 1977: Ultimul caz din lume(Somalia)1980- eradicarea variolei


5/333

Dimensiunea virusurilor Exceptie- Virus gigant 650nm (780nm cufibrilele de pe suprafata) denumit Mimivirus

(de la Mimicking Microbe) ce infecteazaamoebae, nou patogen uman asociat

pneumoniilor?

Mimivirus a fost izolat prima

data in 2003, din apa din

turnurile de racire in cursul

unei epidemii de pneumonie

din Anglia

In 2008 a fost identificat un

virofag ce infecteaza

Mimivirus, denumit sputnick


6/333

1892- Dimitri Ivanovski -virusul mozaicului tutunului-Martinus Willem Beijerinckcontagium vivum fluidum

1898- Loeffler si Frosch- virusul febrei aftoase.

1909-Landsteiner si Popper-virusul poliomielitic

1949 - Enders, Weller si Robins introduc culturile de celule ca substrat pentru propagareavirusurilor


7/333

(a) Adenovirus.

(b) Rotavirus.

(c) Influenza virus (courtesy of George Leser).

(d) Vesicular stomatitis virus.(e) Tobacco mosaic virus.

(f) Alfalfa mosaic virus.

(g) T4 bacteriophage.

(h) M13 bacteriophage.

Microscopia electronic


8/333

James Batcheller Sumner John Howard Northrop Wendell Meredith Stanley

1/2 of the prize 1/4 of the prize 1/4 of the prize

USA USA USA

Cornell UniversityIthaca, NY, USA

Rockefeller Institute for

Medical ResearchPrinceton, NJ, USA

Rockefeller Institute for

Medical ResearchPrinceton, NJ, USA

b. 1887d. 1955

b. 1891d. 1987

b. 1904d. 1971

Tobacco mosaic disease virus can be crystallized in the same way as proteins and enzymes

Premiul Nobel pentru chimie 1946


9/333

SUMARSTRUCTURAVIRUSURILOR.

Virusurile nu contin dect o singur specie de acid nucleic: ADN (dezoxiribovirusuri) sau ARN(ribovirusuri). Acidul nucleic constituie genomul, depozitarul infectivittii virale.

Genomul viral este protejat de un nvelis proteic numit capsid. Capsida rezult dinasamblarea unor subunitti numite capsomere care se asociaz potrivit regulilor de simetrieicosaedric sau helicoidal. Adesea genomul si capsida alctuiesc un ansamblu numit

nucleocapsid. Capsida este nconjurat la unele virusuri de un al doilea nvelis numit anvelop sau peplos.

Anvelopa este dublu codificat: de genomul viral si de genomul celulei gazd. Aceasta

nseamn c n cursul eliberrii virionilor din celulele infectate ei includ n anvelop structuri

codificate de genomul viral si structuri proprii membranei celulei infectate

Genomul viral codific proteine structurale care alctuiesc nvelisurile genomului (capsida sianvelopa)responsabile de antigenicitatea virala si proteine reglatorii sau cu functieenzimatic, importante in cursul replicarii virale. Numrul proteinelor codificate de genomul

virusurilor este foarte diferit: de la numai dou la virusul hepatitei delta la cteva sute la

herpesvirusuri sau poxvirusuri.


10/333

STRUCTURA VIRUSURILOR


11/333

SIMETRIE ICOSAEDRICA

SIMETRIE HELICOIDALA

ASAMBLAREA CAPSOMERELOR


12/333

VIRUSURI ADN

Mimivirus -ADNds liniar 1,2Mb-cel mai mare genom

viral descris pana in prezent, mai mare ca genomul

unor bacterii


13/333

VIRUSURI ARNSS CU POLARITATE POZITIVA


14/333

VIRUSURI ARNss CU POLARITATE NEGATIVA


15/333

Genomul Familii representative

ARN ss (+) Picorna-, Calici-, Astro-,Flavi-, Toga-viridae

ARN ss (-) Orthomixo-, Paramixo-, Arena-, Rhabdo-, Bunya-viridae

ARN ss RT Retro-viridae

ARN ds REO-viridae: (Orbivirus, rotavirus, reovirus)

ADNss Parvo-viridae

ADNds Papova-, Adeno-, Herpes-, Pox-viridae

ADNds RT Hepadna-viridae

PRINCIPALELE FAMILII VIRALE PATOGENE PENTRU OM

RT- cu reverstranscriptaza, ce sintetizeaza ADN pe matrita ARN, inversand fluxul normal ainformatiei genetice.

Pentru detalii privind clasificarea consultati Index Virum: www.life.anu.edu.au/viruses


16/333

DETALII ULTRASTRUCTURALEALE VIRUSURILOR INMICROSCOPIE ELECTRONICA


17/333

Vaccinia virus. (A) Electron micrograph of purified virus, negative stain (Westwood et al.,1964). (B) Electron micrograph of a purified virion, whole mount, negative stain (Wilton et

al., 1995). (C) Freeze etch electron micrograph of a purified virion (Nermut, 1973).(D) Deep

etch electron micrograph of a purified virion (Heuser, 2005).(E) Atomic force micrograph of a

purified virion (Malkin et al., 2003). (F) Cryoelectron micrograph of a whole mount

preparation of purified virions (Griffiths et al., 2001).


18/333

PARAZITISM STICT INTRACELULAR

Mimivirus infectand Acanthamoeba polyphaga.


19/333

SUMAR

Virusurile se deosebesc de bacterii prin:

parazitism exclusiv intracelular datorat dependentei de sursele de energie

ale celulei (virusurile nu au mitocondrii) si de mecanismele de sintez

proteic (virusurile nu au ribozomi) ale celulelor parazitate;-->mecanism de

nmultire diferit de microbi -numit replicare viral si cultivare numai pe

substraturi celulare vii

talia mic, de 100 - 1000 ori mai mic dect a microbilor; virusurile se

msoar n nanometrii (10-9 metri)--ultrafiltrabilitate si vizualizare in

microscopie electronica.

N.B. Singura exceptie par a fi virusurile din familia virusurilor largi

nucleocitoplasmatice ADN (poxviridae, iridoviridae, asfarviridae,

phycodnaviridae si mimiviridae).

organizare simpl dictat de codificarea informatiei genetice de o specie

unic de acid nucleic: ARN la ribovirusuri si ADN la dezoxiribovirusuri


20/333

http://www.virology.net/Big_Virology/BVHomePage.htmlDepartamentul de Microbiologie si Imunologie al Universittii deMedicin din Tulane, New Orleans, SUA

Fotografii de microscopie electronica: Institutul Robert Koch din Berlin -

http://www.rki.de/infekt/enivd/emqm/fs_pict3.htm- Universitatea din Cape Town - I spy with my little eye

http://www.uct.ac.za/depts/mmi/stannard/linda.html,

Preparate colorate cu efecte citopatice determinate devirusuri n culturi celulare:http://www.uct.ac.za/depts/stannard/cpe.html

Please advise your students:Don't watch TV - listen to medical podcasts !http://freemedicalpodcasts.com
http://www.rki.de/INFEKT/ENIVD/EMQM/fs_pict3.htm-http://www.rki.de/INFEKT/ENIVD/EMQM/fs_pict3.htm-http://www.uct.ac.za/depts/mmi/stannard/linda.htmlhttp://www.uct.ac.za/depts/mmi/stannard/linda.htmlhttp://www.uct.ac.za/depts/mmi/stannard/linda.htmlhttp://www.uct.ac.za/depts/mmi/stannard/linda.htmlhttp://www.uct.ac.za/depts/stannard/cpe.htmlhttp://www.uct.ac.za/depts/stannard/cpe.htmlhttp://freemedicalpodcasts.com/http://freemedicalpodcasts.com/http://freemedicalpodcasts.com/http://www.uct.ac.za/depts/stannard/cpe.htmlhttp://www.uct.ac.za/depts/mmi/stannard/linda.htmlhttp://www.rki.de/INFEKT/ENIVD/EMQM/fs_pict3.htm-http://www.rki.de/INFEKT/ENIVD/EMQM/fs_pict3.htm-


21/333


22/333

IZOLAREA VIRUSURILOR IN

CULTURI CELULARE

EFECTE CITOPATICE


23/333

DIRECIILE DIAGNOSTICULUI

VIRUSOLOGIC

1. Izolarea viral

2. Demonstrarea prezeneivirusului / componentelor sale

3. Diagnosticul serologic


24/333

Izolarea virusurilor

3 sisteme de izolare

Culturi de celule

Ou de gin embrionat

Animalul de laborator


25/333

AVANTAJE / DEZAVANTAJE ALESISTEMELOR DE IZOLARE VIRALA

AVANTAJE DEZAVANTAJE

ANIMAL DE LAB Infectie naturala Cost / etica

O.G.E. Cost Susceptibilitate

limitata

CULTURI DECELULE

Sensibilitate buna/ disponibilitate

Susceptibilitatevariabila


26/333

Mediu nutritiv solutie salina tamponata - Earle, Hanks

substane nutritive ( SFV, lizate proteice)

vitamine

antibiotice i antifungice

Condiii necesare pentru pstrarea n via a celulelor din cultura celular

Condiii aseptice

pH adecvat Temperatur constant

atmosfer cu 10% CO2

Componentele culturilor de celule: Celule dispersate+ mediu nutritiv


27/333

CLASIFICAREA

CULTURILORDE CELULE

Culturi de celule dispersate Culturi primare

Tulpini celulare

Linii celulare- CELULE TRANSFORMATE


28/333

CELULE TRANSFORMATE1. conin gene implicate n imortalizarea n vitro (cultivare nr.infinit pasaje) modificari cromozomiale => cariotip

aneuploid;2. se multiplic haotic, cerine nutritive foarte sczute (semultiplic la concentraii foarte sczute de SFV), glicolizaanaerob = sursa principala de energie.

3. membran celular modificat n compoziie (absena

fibronectinei => scaderea adeziunii intercelulare4. nu au inhibitie de contact, se dispun dezordonat diferitde esutul din care deriv

5. inoculare la animale => TUMORI

6. modificarea morfologiei (rotunde, refrigente)

7. au antigene de suprafa diferite de N codif. de virus/celule gazda=> neoantigene

8. aglutineaz uor cu lectinele (antigene vegetale)

9. modificarea mesageri secunzi (AMPc)


29/333

Echipament de laborator

Hote cu flux laminar pentru obtinerea, sipropagarea culturilor de celule si izolarea

virala


30/333

TIPURI DE EFECTE CITOPATICE

SINCITIAL: HIV, v rujeolos, VRS

PICNOTIC LITIC

enterovirusuri v. poliomielitice; v. Coxsackie; ECHO

INCLUZIONAR


31/333

EFECT CITOPATIC SINCITIAL


32/333

EFECT CITOPATIC INCLUZIONAR

Intracitoplasmatic acidofil: v rabic, v vaccinal

Intranuclear -acidofil: papovavirusuri

- bazofil: adenovirusuri

Mixt: v herpetice, v rujeolos


33/333

ECP picnotic litic


34/333

INCLUZIICITOPLASMATICE

(RABIE)patognomonic in SNC - CORPII BABESNEGRI in cornul lui Ammonsi neuroniipiramidali din cerebel


35/333

INCLUZII INTRANUCLEARE(BOALA CUINCLUZII CMV)


36/333

INCLUZIIINTRANUCLEARE


37/333


38/333

Diagnostic de laborator

in neuroviroze

1. SUSPICIUNEA CLINICA


39/333

Definitie de caz meningita virala

Febra 38.5 C asociata cu minim un simptom dintre:

Cefalee severa i persistenta;

Redoare de ceafa

Durere de ceafa asociata cu minim 2 din urmatoarele:

Fotofobie

Greata

Varsaturi

Faringita exudativa

Dureri abdominale

La sugari si copiii mici semnele principale sunt febra 38.5 C asociata cuiritabilitate si pulsarea fontanelei

1. SUSPICIUNEA CLINICA


40/333

Algoritm de diagnostic virusologic

ETIOLOGIE

POSIBILA

Produs

Patologic

IZOLARE Dg. DIRECT

=detectiedirecta

Dg. INDIRECT

=serologie

80%-90%

Enterovirusuri

Polio

Cocsackie A si B

E.C.H.O.

10 20% alte

virusuri:VZV; V.URLIAN; HSV; CMV; V.PARAGRIPALE

Materii

Fecale*SNF

LCR**

De electie

Culturi

celulareAnimal delaborator

NU DA

Este important de notat ca enterovirusurile se excreta saptamani la rand, dar sansele de izolare scad. Se recomanda

recoltarea a 2 - 3 probe de la pacient la interval de 24-48 ore

** Sansa de izolare din acest produs creste cnd participarea meningiana este evidenta. Acest lucru se traduce prinpleiocitoza (cresterea numarului de celule limfo-monocitare in LCR).


41/333

IZOLAREA ENTEROVIRUSURILOR IN CULTURI DE CELULE ECPpicnotic litic


42/333

RSN:IDENTIFICAREA VIRUSURILOR=VIRUS NEUTRALIZARE

TITRAREA ANTICORPILOR= REACTIA DE SERONEUTRALIZARE

VIRUSNEUTRALIZAREVIRUS NECUNOSCUT

ANTICORPI CUNOSCUTI=SER IMUN DE REFERINTA

SERONEUTRALIZARETITRU DE ANTICORPI NECUNOSCUTVIRUS CUNOSCUT = TULPINA DE REFERINTA


43/333

ETAPE RSN

1. TITRAREA INFECTIVITATII VIRALE

2. BLOCAREA INFECTIVITATII VIRALE

3. DEMONSTRAREA NEUTRALIZARII

INFECTIVITATII VIRALE

1. TITRAREA INFECTIVITATII VIRALE


44/333

1. TITRAREA INFECTIVITATII VIRALE metoda plajelor

Dilutii seriale

ale virusului

Insamantare pe celulesusceptibiledupa adsorbtie, 1h la 37,se acopera cu agar

Restrictia raspandirii virusului

determina liza focalizata amonostratului celular vizibilasub forma plajelor, PFU


45/333

Metoda plajelor


46/333

2. BLOCAREA INFECTIVITATII VIRALE


47/333

3. DEMONSTRAREA NEUTRALIZARII INFECTIVITATII VIRALE

= Repetarea etapei 1 cu amestecurileantigen-anticorp

Id tifi t i il d t d T bl d h


48/333

Identificarea enterovirusurilor dupa metoda Tabla de sah

Lim - Benyesh Melnick

ENCEFALITE Algoritm de diagnostic virusologic


49/333

ENCEFALITE Algoritm de diagnostic virusologic

SINDROM ETIOLOGIE

POSIBILA

Prod.

Patologic

IZOLARE Dg.DIRECT

=detect.directa

Dg.INDIRECT

=serologie

ENCEFALITA

ACUTAMENINGO-

ENCEFALITA

ENCEFALO-MIELITA

HERPES

VIRUSURI:HSV1

HSV2

VZV,EBV,CMV

Lichidvezicular

Biopsiecerebrala

LCR

Culturicelulare

Animal delaborator

PCR

IF

NU

V. RABIC

ARBOVIRUSURITOGAVIRUSURI

FLAVIVIRUSURI

BUNYAVIRUSURI

SALIVA,AMPRENTEDERMICE,CORNEENE,

BIOPSIECEREBRALA

LCR

SANGE

Culturicelulare

Animal delaborator

PCRIF

De electie pt.ARBO

VIRUSURI

POSTINFECTIOASE:

V. RUJEOLOS

V. URLIAN

V. GRIPALE

VVZ

SALIVA,

BIOPSIECEREBRALA

LCR

Culturicelulare

PCR

IF

NU


50/333


51/333

NEUROVIROZE

POLIOMIELITA


52/333

POLIOMIELITA

(gr- polios/myelos)

Infectie subclinica (90 - 95%)

Infectie abortiva (4 - 8%)

Meningita polio non-paralitica (1- 2%)Invazie SNC prin :1. Transport axonal retrograd

2. Traversare BHE

3. Transport prin macrofage infectate

Poliovirus- receptor CD155 gp TM din super familia Ig stabilire

jonctiuni intercelulare la nivel celule epiteliale; posibil implicat in

RIU intestin subtire

6 saptamani, intermitent, > imunocompromisi

POLIOMIELITA
http://upload.wikimedia.org/wikipedia/commons/1/1d/Poliovirus_binding_receptor_1DGI.png


53/333

POLIOMIELITA

1 in 200-1000cazuri in infectia cu virusul salbatic la copii

1 in 75 cazuri in infectia cu virusul salbatic la adulti

Boala majora (0.1 0.5%)-polio

spinala sau bulbara -paralizii acute flasceprin leziuni de neuron motor periferic

Sindromul Post-polio (15-30 ani postpolio- slabiciune musculara, dureri, astenie)


54/333


55/333

Polio bulbaraRata mortalitatii

25% copii1530% adulti

1909 poliomielita poate fi tansmis la


56/333

1911-Suedia -epidemie (4000 cazuri cu

zeci de decese). Izolarea virusului pe explant de tesut

histopatologia bolii experimentale

demonstrarea ultrafiltrabilitatii agentuluietiologic

existenta infectiilor inaparente si

seroconversia.- investigarea a 6 familiicare au avut contact cu cazuri de polio

Constantin Levaditi (1874 1953)lInstitutul Pasteur, Paris, 1946

1909 - poliomielita poate fi tansmis lamaimutele superioare prin filtrat demduv spinal (Landsteiner,K., and Levaditi C. Latransmission de la paralysie infantile aux singes. C. R. Soc.Biol. 1909, 592-594).

1949- cultivarea virus polio pe culturi de celule non-

neuronale- Enders, Robbins, Weller- 1954 Nobel

VACCINURI VIRALE


57/333

VACCINURI VIRALE

Virusuri antigenic inrudite cu agentul etiologic al virozeiumane, dar nevirulente pentru om (vaccinia)

Tulpini virale natural atenuate( Max Theiler)

Atenuare in laborator sub selectia presori fizici, chimici,biologici

Virusul neatenuat in doze mici sau asociat cu anticorpispecifici/administrat pe cai de inoculare diferite

VACCINURI INACTIVATE

VACCINURI VII ATENUATE

VACCINURI ANTIPOLIO


58/333

VACCINVIRUS

Determinantiantigenici

deteminantvirulenta

VACCINURI ANTIPOLIOVaccin antipolio inactivat -SALK1952-

National Foundation for Infantile Paralysis -1938

Franklin D. Roosevelt - Al 32-lea presedinte SUA 19331945

Incident Cutter 120,000 doze - 40,000 polio abortiva, 56 polio paralitica , 5 decese

VACCIN ANTIPOLIO VIU ATENUAT SABIN 1962


59/333

VACCIN ANTIPOLIO VIU ATENUAT- SABIN 1962

Tulpini atenuate prin pasaje seriale la temperaturi suboptimale

-Baza moleculara a atenuarii distincta pentru fiecare serotip-Numar mic de mutatii disting tulpina atenuata Sabin deserotipul natural virulent (11 substitutii nucleotidice pt tip 3, 8 pt tip 2 si celputin 56 pt tip 1)

-Mutatii esentiale in IRES 5 NT (nucleotide apropiate pt toateserotipurile-480 tip1; 481 tip 2, 472 tip 3)- destabilizarea structurii secundare

a ARN si VP1

IRES

Element esential in replicare si initiere traducere
http://upload.wikimedia.org/wikipedia/commons/6/65/Poliovirus_genome.pnghttp://upload.wikimedia.org/wikipedia/commons/6/65/Poliovirus_genome.pnghttp://upload.wikimedia.org/wikipedia/commons/6/65/Poliovirus_genome.png


60/333

AVANTAJELE VACCINURILOR VII

Induc raspuns imun global (celular, umoral si local)

Raspuns imun impotriva tuturor antigenelor(inactivarea poate altera antigenicitatea)

Imunogene consecutiv administarii pe cale naturala

(pret scazut, acceptabilitate mare)

Imunogene consecutiv administrarii unice, imunitatedurabila

Capacitate de a disemina de la vaccinati la contactiiacestora- duc la eliminarea virusului din colectivitate

DEZAVANTAJELE VACCINURILOR VII


61/333

DEZAVANTAJELE VACCINURILOR VII

Reversie la virulenta-poliomielita paralitica asociata vaccinrii - PPAV

1 in 2-3 milioane - polio paralitic asociat vaccinarii

(Risc ~ 8-10 cazuri/an in SUA- din 2000 exclusiv VPI)

Instabilitate la transport sau stocaj, in absenta lantului de frig

Interferare de catre virusuri cu care impart acelasi habitat

Reactii severe la imunosupresati

Reactogene-grad de atenuare al tulpinii virale

Contaminarea vaccinului cu agenti criptici din substrat cu potential patogen sau

oncogen?

1988 - 350 000 cazuri in 125 tari endemice


62/333

1988 350 000 cazuri in 125 tari endemice

2006 1874 cazuri in 4 tari

1988- OMS - Campania de eradicarea a poliomieliteivaccin trivalent oral Sabin

1994- Eradicare poliomielita in emisfera vestica-(1991 ultimul caz in Peru; 1979 ultimul caz in SUA)2000- eradicare in 36 tari din Pacificul de vest ( inclusiv China and Australia)

2002 eradicare in Europa

Polio endemica in :

- Nord Nigeria -epidemie 2003 27, 379 cazuri de PFA intre 2001-2007-reinfectia > 20 tari anterior polio free

- Nord India, granita PakistanAfghanistan (acoperire vaccinala insuficienta si eficienta neadecvata a

vaccin trivalent)

Strategie eradicare polio:1. Mentinere nivel crescut de imunizare de rutina

2. Zile nationale de Imunizare- vaccinare tuturor copiilor


63/333

ROMANIA

Calendarul de vaccinari valabil de la 1 decembrie 2008

Varsta recomandata Vaccin Comentarii

Primele 24 de ore

4-7 zile

HepB

BCG

In maternitate

2 luni DTPaIPV, HepB Simultan

4 luni DTPaIPV Simultan

6 luni DTPaIPV, HepB Simultan

12 luni DTPa IPV, RRO Simultan

4 ani** DTPa

7 ani (in cls. I) RRO Campanii scolare

9 ani (in cls. a III-a) VPO Campanii scolare

14 ani (in cls. a VIII-a) dT, Rubeolic *** Campanii scolare

Enterovirusuri:Polioviruses 1 2 3


64/333

Polioviruses 1, 2, 3Coxsackie A1-24/ B1-6ECHO - 33 (Enteric cytopatogenic human orphans)Enteroviruses 68-71

CARACTERE GENERALE ALE ENTEROVIRUSURILOR


65/333

CARACTERE GENERALE ALE ENTEROVIRUSURILOR

Sunt virusuri cu genom ARNss, cu polaritate pozitiv, de talie mica (~30 nm) si neanvelopate.Lipsa anvelopei explic rezistenta picornavirusurilor la dezinfectante, la pH-ul acid al suculuigastric, la srurile biliare etc.

Afectiuni produse de unele enterovirusuri. Virusul Boala frecvent determinat:

Virusurile Cox A Herpangina, diarei minore de vara, meningite aseptice

Virusurile Cox B Mialgie epidemica sau pleurodinia Bornholm,moarte subit a nou-nscutilor, meningite aseptice,miocardite, pancreatite, hepatite, etc.

Virusurile ECHO Meningite aseptice, guturai, conjunctivite, exanteme

Enterovirusurile 68-71 Encefalite, mieloradiculonevrite.

Virusurile ECHO produc uneori epidemii extinse de meningite aseptice. Astfel, n vara anului1999 o epidemie cu virusul ECHO 33 de peste 5000 cazuri a afectat judetele din Moldovaextinzndu-se ulterior si n restul trii. Cazurile s-au datorat consumului apei infectate sauscldatului n ape contaminate si au prevalat la grupa de vrst 5-15 ani.

Impactul economic al meningitelor virale (meningite aseptice sau cu lichid cefalorahidian clar)este considerabil fiind estimat la cheltuieli n jur de 5000 $ per caz (costuri directe) si 8 zile deinactivitate (costuri indirecte). n 90% din cazuri aceste meningite sunt de etiologieenteroviral. Cheltuielile directe sunt mai mari pentru cazurile pediatrice si deriva dinadministrarea empirica a antibioticelor si ngrijirea cazurilor cu deshidratare severa n serviciilede reanimare.

Virusul rabic Familia


66/333

Virusul rabic-FamiliaRhabdoviridae, genul Lyssavirus

Rabia- zoonoz major anualcirca 60 000 decese

-Incubatie (10 zile- 6 luni-2

ani!?)

- Prodrom

- Sindrom neurologic acut

- Coma- Deces

Virusul rabic


67/333

Virusul rabic

Virusul rabic (lyssavirus) face parte din familia Rhabdoviridaevirusuri ARNss cu polaritatenegativn form de glont.

Virusul rabic salbatic este numit "de strada" si are o incubatie variabila; pasaje repetate laaceiasi specie stabilizeaza si scurteaza incubatia, tulpinile fiind etichetate ca "virus rabicfix".

Leziunile citopatice sunt exclusiv intraneuronale, citoplasmatice si au aspectul unor incluziigranulare numite corpii Babes Negri.

Tulpinile de virus fix dau incluzii mici. Corpii Babes Negri predomina n neuronii din cornulAmmon din hipocamp si n celulele Purkinje din cerebel. Aceste leziuni corespund situsurilorreplicarii virale.

In celulele glandelor salivare virusul se replica si se elibereaza prin nmugurire la nivelulmembranei celulare ceea ce reprezinta o adaptare eficienta pentru propagarea infectiei la onoua gazda. n afara neuronilor si celulelor glandelor salivare antigenul rabic mai poate fievidentiat n cornee, piele, mucoasa bucala - elemente care au valoare diagnostica.

Patogenia infectiei este conditionat de diseminarea septinevritic centripet a virusului de la

nivelul plcutelor neuromusculare periferice ctre SNC. Din SNCvirusul se propag centrifugpe calea filetelor senzitive (septinevritic) si se secret n saliv.


68/333

Incluzii i-citoplasmice Negri Antigene rabice

Neuroni fara incluzii

1885 -Pasteur -atenuare virus rabic prin pasaje repetate intra-


69/333

cerebral la iepure(L.Pasteur: Methode pour prevenir la rage morsure. C.R. Acad Sci,101, 765)

1887- Babes si Puscariu -metoda romneasc de vaccinare

antirabic cu virus fix -atenuat prin pasaje la cobai si princldur. (V.Babes: Ann. Inst. Pasteur 1889, 7, 384).

1894- Babes recomand utilizarea serurilor de la animaleleimunizate cu virus fix pentru tratamentul rabiei dup musctur(V. Babes: Romnia Medical, 1894, p. 467-469).

Vaccinarea la om- vaccin inactivat preparat pe culturi decelule diploide umane (vaccinoterapia Pasteur)

Administrarea de IgG in jurul plagii muscate (seroprofilaxia

Babes). Vaccinarea animalelor domestice(obligatorie) si salbatice-

vaccinuri vii atenuate- cu mutatii si deletii n proteina G- uzveterinar

http://americanhistory si edu/polio/virusvaccine/index htm
http://americanhistory.si.edu/polio/virusvaccine/index.htmhttp://americanhistory.si.edu/polio/virusvaccine/index.htm


70/333

http://americanhistory.si.edu/polio/virusvaccine/index.htm

http://www.astdhpphe.org/infect/polio.html-polio facts- FAQ

http://www.nlm.nih.gov/medlineplus/polioandpostpoliosyndro

me.html http://w3.whosea.org/EN/Section1226/Section1228.htm-

vaccin antipolio http://www.post-polio.org/

Cello J, Paul AV, Wimmer E: Chemical synthesis of poliovirus cDNA: generation ofinfectious virus in the absence of natural template. Science 2002, 297:1016-1018.http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?cmd=Retrieve&db=PubMed&dopt=Abstract&list_uids=12114528- sintetizare virus polio in laborator
http://americanhistory.si.edu/polio/virusvaccine/index.htmhttp://www.astdhpphe.org/infect/polio.html-http://www.nlm.nih.gov/medlineplus/polioandpostpoliosyndrome.htmlhttp://www.nlm.nih.gov/medlineplus/polioandpostpoliosyndrome.htmlhttp://w3.whosea.org/EN/Section1226/Section1228.htm-http://www.post-polio.org/http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?cmd=Retrieve&db=PubMed&dopt=Abstract&list_uids=12114528-http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?cmd=Retrieve&db=PubMed&dopt=Abstract&list_uids=12114528-http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?cmd=Retrieve&db=PubMed&dopt=Abstract&list_uids=12114528-http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?cmd=Retrieve&db=PubMed&dopt=Abstract&list_uids=12114528-http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?cmd=Retrieve&db=PubMed&dopt=Abstract&list_uids=12114528-http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?cmd=Retrieve&db=PubMed&dopt=Abstract&list_uids=12114528-http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?cmd=Retrieve&db=PubMed&dopt=Abstract&list_uids=12114528-http://www.post-polio.org/http://www.post-polio.org/http://www.post-polio.org/http://w3.whosea.org/EN/Section1226/Section1228.htm-http://w3.whosea.org/EN/Section1226/Section1228.htm-http://www.nlm.nih.gov/medlineplus/polioandpostpoliosyndrome.htmlhttp://www.nlm.nih.gov/medlineplus/polioandpostpoliosyndrome.htmlhttp://www.astdhpphe.org/infect/polio.html-http://www.astdhpphe.org/infect/polio.html-http://americanhistory.si.edu/polio/virusvaccine/index.htm


71/333

ORTHOMYXOVIRIDAE


72/333

Matrice

Nucleocapsida helicoidala(ARNss -, segmentat)

HA - hemaglutinina

transcriptaza

anvelopa

NA - neuraminidaza

tip A, B, C : NP, Msubtipuri: HA si NA16 tipuri de HA si 9 de NAtip/subtip/ loc, an izolare/nr. pasaje-A/H5N1/Guangdong/1996/1

HEMAGLUTININA


73/333

Virusul gripal tip A de laspecia/organul

Receptorul culegatura de tip

Uman, trahee uman SA-2-6-Gal beta

Aviar (trahee sau epiteliu

intestinal), ecvin

SA-2-3-Gal beta

Porcin, trahee porcin;

prepelit

SA-2-3-Gal beta si

SA-2-6-Gal beta

REASORTANTI

principaliideterminanti

antigenici

Endocitoza mediata de receptorschimbari

conformationale cu expunerea peptid de


74/333

conformationale cu expunerea peptid de

fuziune N-terminal HA2- -complex

ribonucleoproteic transportat in nucleu

Proteina M- rol de canal ionic

INHIBITORII DECAPSIDARII- AMANTADINA SI

RIMANTADINA


75/333

INHIBITORII DE NEURAMINIDAZA-

O SELTAMIVIR -75 mg x 2/ziZANAMIVIR -10 mg (2 inhalatii de 5 mg/zi)PERAMIVIR-injectabil- aprobat in regim de urgentade FDA pe 23 Octombrie 2009, pt utilizare in cazurisevere, spitalizate in care ceilalti inhibitori de NA suntneutilizabili (rezistenta la Oseltamivir , imposibilitatea

administrarii Zanamivir)

NS1 inhibitor al sintezei de IFN


76/333

V. Gripale A: VARIABILITATE DRIFT ANTIGENIC-mutatii punctiforme- EPIDEMII

VARIABILITATEA VIRUSURILOR GRIPALE A


77/333

SHIFT ANTIGENIC- PANDEMII

1. reasortarea genic ntre tulpini gripale de la specii diferite

2. transferul direct al unor tulpini gripale de la animal la om- modificriconformationale in structura hemaglutininei.

3. Re-emergenta unui virus ce a determinat epidemii cu ani inainte

Psri acvatice slbatice (rate,gste, pescrusi)-rezervorulnatural al virusurilor gripale A

La psrile domestice gripa poate evolua n dou forme,-minor (LPAI) sau asimptomatic, - afecteaz productia ou in cresctorii- majora (HPAI), foarte sever, nalt contagioas, cu mortalitate 50-100%. (aminoacizi bazici suplimentari la

nivelul situs de clivare HA)

Pandemii gripale


78/333

Pandemii gripale

1918-H1N1gripa spaniola -20-50 milioane decese Virus aviar

1957-H2N2 gripa asiatica-1-2 milioane decese

reasortant

1968- H3N2 gripa Hong Kong -700,000 decese-reasortant

1977- H1N1gripa ruseasca-re-emergenta

A/H1N1/ 2009 pandemic

414 000 i fi t d


79/333

Influenza A H1N1/20096 Minigene de la tulpinile

porcine Nord America(reasortant 1998

suin/aviar/uman) si2 de la tulpinile porcine izolate

in Europa/Asia

Aceste tulpini au coexistatpentru mai mult de 10 ani -

Reasortarea actuala probabilla porc- gazda ramane totusinecunoscuta (supraveghereinsuficienta; infectie

asimptomatica la porc,

reasortare recenta?)

414,000 cazuri confirmate delaborator

cca 5000 decese raportate la OMS

Primul val pandemic (H1N1) 2009


80/333

80

Primul val pandemic (H1N1) 2009

12% din forta de muncaVarf rata de absenteism

0.1% - 0.2% (pana la 0.35%)Rata de fatalitate

2% din cazuri clinic aparenteRata de spitalizare

15% din cazuri clinic aparenteRata Complicatii

6.5% (4.5% - 8%) per saptamanaVarf rata de atac

30%Rata de atac

Courtesy of Department of Health, UK, http://www.dh.gov.uk/en/Publicationsandstatistics/Publications/PublicationsPolicyAndGuidance/DH_102892

Data valabile in Iulie 2009 pt UK

45 decese asociate cu cazuri confirmate delaborator de H1N1/pandemic 2009 in 13 tari in

i d 21 27 O t b i


81/333

53 State Membre in regiunea Europeana OMS

WHO/Europe influenza surveillance(EuroFlu.org)

perioada 21- 27 Octombrie.Numar total de decese confirmate din Aprilie

2009 in 27 tari EU si 4 EFTA 317.Ukraina a raportat 12 decese cauzate depneumonii regiunea Ternopol alte 6 decese in

regiuni invecinate

SHIFT ANTIGENIC- Modificri conformationale n structurahemaglutininei pentru traversarea barierei de specie


82/333

2. transferul direct al unor tulpinigripale de la animal la om

hemaglutininei pentru traversarea barierei de specie Toate virusurile gripale umane au singur reziduu bazic de arginin la nivelul sitului de clivare

a hemaglutininei.

Achizitia unor aminoacizi bazici suplimentari la acest nivel, duc la o conformatie

asemntoare virusurilor aviare HPAI (situri de clivare multiple) si permit si altor proteaze nafara tripsinei s cliveze hemaglutinina, ceea ce duce la alterarea tropismului tisular (cuposibilitatea afectrii tesutului cerebral, miocardic si vaselor de snge) si la crestereavirulentei.

O serie de mutatii punctiforme afecteaza legarea la receptori si cresc legarea de rezidurisialozidice specifice mamiferelor

V.GRIPAL 1918


83/333

Caracteristica Tulpina H1N1 A/New

Caledonia/20/99

A/New Caledonia/20/99 cu HA si N A

de la tulpina pandemic 1918

LD50/Soarece >106 PFU


84/333

Decembrie 2003- cazuri letale gripa H5N1 lafeline mari Thailanda, continua in octombrie2004 -147/441 tigrii 2004--H5N1- Coreea deSud, Vietnam, Cambodia, Laos, Japonia,

Thailanda, Indonezia, China, Hong Kong

2005-iulie-august Rusia , Kazakstan , Mongolia

octombrie- decembrie-Turcia, Romania),Croatia , Kuwait, Ukraina

China, Indonezia, Vietnam, Cambodia,Turcia (cazuri umane)

2006- Iraq, Nigeria, Azerbaijan, Egipt, India,Franta (februarie-I data in UE), Niger,Albania - pasari domesticeBulgaria, Greece, Italy, Slovenia ,

Iran, Austria, Germania, Franta,

Ungaria, Slovacia, Bosnia-Herzegovina, Georgia, Suedia, Elvetia ,Serbia-Muntenegru, Polonia-pasarisalbaticelebede, rate

2008-2009 China, Indonezia, VietNam, Egipt,Thailanda, Iraq, Turcia-cazuri umane

Transferul tulpinilor nalt patogene H5N1 dinAsia ctre Estul Europei este atribuit ruteipsrilor deasupra Eurasiei continentale saude-a lungul litoralului Mrii Arctice.

Aprilie 2005- extinderea spectrului de gazda la pasarisalbatice - 6,345 pasari din specii diferite mor in citeva

saptamini in regiunea marilor lacuri (Qinghai Lake) din Chinacentrala- se extind in n Siberia, Caucaz, Balcani.

2009- 442 cazuri umane/262 fatale

Conditii necesare izbucnirii unor pandemii


85/333

Conditii necesare izbucnirii unor pandemii

noutatea antigenica a virusului

lipsa imunittii n populatia uman

facilitatea transmiterii interumane anoilor tulpini.

VACCIN INACTIVAT CU VIRUS INTREGSAU SUBUNITAR (1931-izolare in OGE


86/333

SAU SUBUNITAR (1931-izolare in OGE,1940- vaccin inactivat)

- Virus izolat in OGE, lichid alantoidian imbogatit,particule virale centrifugate in gradient de densitate

pentru concentrare si purificare, inactivare cuformaldehida sau -propiolactona +/_ tratare cudetergent si purificare HA si NA- vaccin trivalent

- Petrescu si colab., 1980 - NIVGRIP- administrareaintranazal a vaccinului inactivat preparat cu virusul

ntregprioritate romneasc.

VACCIN VIU ATENUAT CU TULPINIRECI

Tulpina master atenuata, adaptata pentru cresterela 250 C (A /H2N2 /Ann Arbor/6/60 si B/AnnArbor/1/66) in care se insera genele pentru HA/ NA-

mutatii stabile in genele complexului polimerazicPA, PB1, and PB2, propagate n pasaje seriate latemperaturi din ce n ce mai sczute pe celule renalede pui de gin SPF (specific pathogen free)

Fiecare doz de vaccin continehemaglutinina corespunztoare a 10bilioane de virioni n cazul cultivriivirusului pe OGE (15 ug per 0.5 ml) .

Cantitatea de neuraminidaz nu este

standardizat -protein labil n cursulprocesului de preparare si stocare avaccinului.


87/333

PB2PB1

PAHANANP

MNS

PB2PB1PA

HANANP

MNS

PB2PB1PA

HA

NANPMNS

Tulpina matca -PR8 (H1N1A/PR/8/34)atenuata,nonpatogena, incapabila de

replicare la om

Tulpina antigenic noua

X

Reasortantvirus cu 6 gene PR8, dar HA siNA tulpinii circulante

Vaccinuri Influenza A (H1N1) 2009 monovalente aprobate in US, 6 Octombrie 2009

V i P d t P tg Hg/0.5

G tNo.


88/333

Vaccin Producator Prezentareg g

mLGrup varsta

doze

Inactivat Sanofi Pasteur SA

0.25 mL siringa 0 6--35 luni 2

0.5 mL siringa 0 36 luni 1 or 2

5.0 mL fiola multidoza 25.0 6 luni 1 or 2

InactivatNovartis Vaccines

Diagnostics Ltd

5.0 mL fiola multidoza 25.0 4 ani 1 or 2

0.5 mL siringa


89/333

EUROPEANA Celvapan(Baxter AG);- virion ntreg, A/California/07/2009 (H1N1) inactivat,

cultivat pe celule Vero 7,5 micrograme HA per doz de 0,5 ml

. Focetria(Novartis Vaccines and Diagnostics S.r.l)- Antigene de suprafaale virusului gripal (hemaglutinin i neuraminidaz) din tulpina:

A/California/7/2009 (H1N1) v (X-179A) cultivata n OGE 7,5 micrograme HAper doz de 0,5 ml -adjuvant (MF59C.1)

Pandemrix(GlaxoSmithKline Biologicals S.A)- Virus gripal fragmentat,inactivat, coninnd HA din tulpin similar virusului A/California/7/2009

(H1N1) (X-179A) cultivata n OGEechivalent cu: 3,75 micrograme** per doz de 0,5 ml- adjuvant AS03

GRUPE DE RISC


90/333

Persoane cu risc nalt de complicatii

copii < 2 ani (rate de spitalizare de 2.3 ori > ca cei 2- 4 ani, acesrtia la randul

lor sanse de 20% mai frecvente complicatii)

adulti > 65 anifemeile gravide n trimestrele II si III de sarcin, 2 saptamani postpartum

inclusiv dupa pierdere sarcina

pacienti institutionalizati

adulti si copii cu boli cardiace (cu exceptia HTA) si pulmonare cronice

(inclusiv astm), boli metabolice (inclusiv diabet zaharat), disfunctii hepatice,

renale, hematologice , imunosupresie (inclusiv cei HIV pozitivi)

Obezitate (BMI 30-35), mai ales obezitate morbida (BMI )>40 n

Persoane care pot transmite infectia gripal celor cu risc de complicatii

personalul medico-sanitar

angajatii institutiilor psihiatrice si cei ce ngrijesc bolnavi cronici

membrii familiilor persoanelor la risc

Persoane la care vaccinarea poate fi recomandat

persoane care cltoresc n zone cu epidemii de grip

persoane implicate n servicii comunitare esentiale

copiii din gradinite si scoli, studentii, militarii

UP TO DATE


91/333

http://ec.europa.eu/health/ph_threats/com/Influenza/h1n1_en.htm

http://ec.europa.eu/health-eu/newsletter/influenza/1/newsletter_en.htm

http://www.emea.europa.eu/influenza/vaccines/home.htm http://www.euro.who.int/surveillance

http://www.cdc.gov/flu/weekly

http://www.ecdc.eu.int/

http://www.oie.int Organizatia Mondiala Pentru Sanatatea Animala

www.virology.ro- INSTITUTUL DE VIRUSOLOGIE St. S. Nicolau date despre debutul pandemiei

www.who.int/csr/disease/avian-influenza

http://www.efsa.eu.int/science/- The European Food Safety Authority

http://europa.eu.int/comm/food/animal/diseases/controlmeasures/avian/

avain_influenza_22092005.pdf

Taubenberger et al in Nature ( VOL. 437 October 6th 2005 )http://www.nature.com/news/2005/051003/full/437794a.html http://www.nature.com/news/2005/051003/full/nature04230.html

Tumpey et al in Science (2005; 310: 77-80).
http://ec.europa.eu/health/ph_threats/com/Influenza/h1n1_en.htmhttp://ec.europa.eu/health-eu/newsletter/influenza/1/newsletter_en.htmhttp://www.emea.europa.eu/influenza/vaccines/home.htmhttp://www.euro.who.int/surveillancehttp://www.euro.who.int/surveillancehttp://www.cdc.gov/flu/weeklyhttp://www.ecdc.eu.int/http://www.oie.int/http://www.who.int/csr/disease/avian-influenzahttp://www.who.int/csr/disease/avian-influenzahttp://www.who.int/csr/disease/avian-influenzahttp://www.who.int/csr/disease/avian-influenzahttp://www.efsa.eu.int/science/-http://europa.eu.int/comm/food/animal/diseases/controlmeasures/avian/avain_influenza_22092005.pdfhttp://europa.eu.int/comm/food/animal/diseases/controlmeasures/avian/avain_influenza_22092005.pdfhttp://www.nature.com/news/2005/051003/full/437794a.htmlhttp://www.nature.com/news/2005/051003/full/nature04230.htmlhttp://www.nature.com/news/2005/051003/full/nature04230.htmlhttp://www.nature.com/news/2005/051003/full/437794a.htmlhttp://europa.eu.int/comm/food/animal/diseases/controlmeasures/avian/avain_influenza_22092005.pdfhttp://europa.eu.int/comm/food/animal/diseases/controlmeasures/avian/avain_influenza_22092005.pdfhttp://www.efsa.eu.int/science/-http://www.efsa.eu.int/science/-http://www.who.int/csr/disease/avian-influenzahttp://www.who.int/csr/disease/avian-influenzahttp://www.who.int/csr/disease/avian-influenzahttp://www.who.int/csr/disease/avian-influenzahttp://www.who.int/csr/disease/avian-influenzahttp://www.who.int/csr/disease/avian-influenzahttp://www.who.int/csr/disease/avian-influenzahttp://www.who.int/csr/disease/avian-influenzahttp://www.who.int/csr/disease/avian-influenzahttp://www.who.int/csr/disease/avian-influenzahttp://www.oie.int/http://www.ecdc.eu.int/http://www.cdc.gov/flu/weeklyhttp://www.euro.who.int/surveillancehttp://www.euro.who.int/surveillancehttp://www.emea.europa.eu/influenza/vaccines/home.htmhttp://ec.europa.eu/health-eu/newsletter/influenza/1/newsletter_en.htmhttp://ec.europa.eu/health-eu/newsletter/influenza/1/newsletter_en.htmhttp://ec.europa.eu/health-eu/newsletter/influenza/1/newsletter_en.htmhttp://ec.europa.eu/health/ph_threats/com/Influenza/h1n1_en.htm


92/333

HERPESVIRIDAEh i


93/333

gr. herpein

Centers for Disease Control and Prevention's PublicHealth Image Library (PHIL), identification nr #1878.

Proteine virale deja sintetizate:-inhiba sinteza proteinelor celulare,- inhiba mecanismele de aparare celulara-stimuleaza expresia genelor virale.

GENOMUL HERPESVIRUSURILOR
http://en.wikipedia.org/wiki/Centers_for_Disease_Control_and_Preventionhttp://phil.cdc.gov/phil/home.asphttp://phil.cdc.gov/phil/home.asphttp://phil.cdc.gov/phil/home.asphttp://phil.cdc.gov/phil/home.asphttp://en.wikipedia.org/wiki/Centers_for_Disease_Control_and_Preventionhttp://upload.wikimedia.org/wikipedia/commons/1/16/Varicella_(Chickenpox)_Virus_PHIL_1878_lores.jpg


94/333

Genomul este ADNds, liniar, asamblat ca un toroid care circularizeaz cu usurint.Fiecare spir ADN contine dou componente L (long) si S (short) mrginite desecvente repetate inverse. Componentele L si S pot face rocada producnd formelineare izomere care explic ntre altele latenta


95/333

HERPESVIRIDAE


96/333

ALPHAHERPESVIRINAE- Neuronii senzitivi din rdcinaposterioar a nervilor spinali si nucleii senzitivi ai nervilor cranieni

HERPES SIMPLEX 1 (HSV1)

HERPES SIMPLEX 2 (HSV2)

VARICELO-ZOSTERIAN (VZV)

BETAHERPESVIRINAE-Limfocitul T, monocite, organe solide

(plamni, rinichi) +/- epiteliul glandelor salivare CITOMEGALIC (CMV)

HUMAN HERPESVIRUS 6 (HHV6)


GAMAHERPESVIRINAE-Limfocitul B, endoteliu capilar EPSTEIN BARR (EBV)

HUMAN HERPESVIRUS 8 (HHV8)-KAPOSI ASSOCIATED

gp C=receptori-

glicosaminoglicani


97/333

glicosaminoglicani

gpD =co-receptori

(nectine, HVEM-herpes

virus entry mediator, 3OS

heparansulfat -formamodificata a heparan sulfat sub

influenta 3-O sulfotranferaza

enzima prezenta in creier)

-TEGUMENT-

-VHS virion host shut-offprotein (de decuplare asintezei proteinelor celulare)

-factor de transcripie virional

(VP16 sau alfa TIF -alfa trans-

inducing factor)-proteina "DNA-binding"Oct-1 n celulele nouinfectate - activarespecifica a unor promotorivirali

ADN-ul viral ---ARN polimeraza II celulara----sinteza ARNm pt 3 specii de proteine:

alfa (IE)si beta (E) (reglatorii, enzimatice, timpurii) si gama (L) (structurale, tardive).


98/333

alfa (IE)si beta (E) (reglatorii, enzimatice, timpurii) si gama (L) (structurale, tardive).

Sinteza ADN- Rolling circleconcatemeri clivati in

monomeri in cursul asamblarii nucleocapsidei

Deficiente in transportul-factor de transcripie virional (VP16/ alfa TIF-trans-inducing factor)

-proteina "DNA-binding" Oct-1 n celulele nou infectate - activare

LATENTA


99/333

moleculelor alfa-TIF dincitoplasma catre nucleulneuronilor -blocheaza

infectia HSV productiva

Fixarea unor proteinecelulare cu actiunerepresoare, la nivelulsecventelor din ADN-ul viral

care controleaza expresiagenelor .

Reducerea sau absentaexpresiei proteinelor celularenecesare activarii genelor .

Prezenta de proteine careinhiba activitatea alfa-TIF.

proteina DNA binding Oct 1 n celulele nou infectate activare

specifica a unor promotori virali

Expresia diferentiata a proteinelor celulare implicate in reglarea expresiei genelor virale

reprezinta factorul major care hotareste daca un neuron infectat va evolua catre o infectie

latenta sau productiva.

LATENTA


100/333

- Dou gene IE(ICP 4 si ICP 27) conditioneaz propagarea HSV 1 numai n celule

permisiv, fiind transactivatori ai genelor asociate cu infectia litica.

- O singura zona a genomului viral este functionala in timpul latentei- situata in

secventele repetitive ale genomului si codifica un numar inca necunoscut de molecule

de ARN, denumite LATs (Latency Associated Transcript) , care nu vor fi traduse in

proteine

Expresia LAT in neuroni inhiba expresia unor gene litice (ICP4 si timidin kinaza),

prin modificari ale histonelor ce convertesc portiuni din ADN viral in forme

neproductive

Elemente din jurul genei pt ICP4 leaga o proteina - NRSF- factor de silentiere

neuronala restrictiva (element represor al transcriptieiREST Repressor Element

Silencing Transcription Factor)- duc la blocarea unor gene imediat timpuriistabilirea latentei.

Forme truncate ale NRSF sunt produse in neuroni si controleaza selectiv expresia

unor canale pentru neurotransmitatori

LAT interfera cu mecanismele naturale ale mortii celulare


101/333

GINGIVOSTOMATITA HERPETICA HERPES FACIAL


102/333

HERPES GENITAL


103/333

HERPESNEONATAL

Episoade recurenteadulti imunocompetenti:

F -20% (8-80%); M-15% (5-50%)

Excretie virala asimptomatica(EVA)-75% din recurente


104/333

1988 -PREMIUL NOBEL PENTRU MEDICINA

NOI PRINCIPII TERAPEUTICE


105/333

PO4PO4PO4

ACYCLOVIRAnalog nucleozidic purinic aciclic , derivat din guanin- activ informa trifosforilata

NOI PRINCIPII TERAPEUTICE

Sir James W. Black, Gertrude B. Elion , George H. Hitchings

S i h l i it l i t i l i


106/333

Supresia herpesului genital prin terapia cu acyclovir:

Numarul mediu de episoade de herpes genital per

persoana per an

VARICELA


107/333


108/333

VARICELA (LEZIUNI PROGRESIVE, IN VALURI- MACULE, VEZICULE, CRUSTE)-vs RUJEOLA(ERUPTIE MACULO-PAPULARA)

RUJEOLA (ERUPTIE MACULO-PAPULARA CUFEBRA, RINOREE, CONJUNCTIVITA, DIAREE)

VACCIN VIU ATENUANT ANTI VARICELOSadministrare la 19-35 luni

VACCIN VIU ATENUANT MMRmeasles,mumps, rubella(rujeola, oreion, rubeola)

administrare la 12 luni

Reactivarea virusului varicelo- zosterian latent = zona zoster- eruptie herpetica pe


109/333

traseul unui nerv

BETAHERPESVIRINAECITOMEGALIC (CMV)



110/333



Transmiterea materno-fetal a CMV majoritar la primoinfectia in sarcina:

Prenatal-teratogen determin malformatii congenitale severe (microcefalie, retard mental,chorioretinit, anomalii osoase);

Perinatal - determin boala cu incluzii citomegalice a nou nscutului (hepatosplenomegalie,

icter, anemie hemolitic);

Postnatalinfectie asimptomatic sau asemntoare mononucleozei

Citomegalie si incluziiintranucleare tipice in ochi de

bufnita

INFECTIA CU CMV
http://upload.wikimedia.org/wikipedia/commons/b/b1/CMV_placentitis2_mini.jpg


111/333

La imunosupresati infectii primare si reactivari simptomatice:

CMV POST-TRANSFUZII: mononucleosis-like

CMV +SIDA: RETINITE/ encefalopatii CMV POST- TRANSPLANT :

PNEUMONIEletalitate ridicata>85%

Hepatite, colite, encefalite

GANCICLOVIRCytovene

CIDOFOVIR- RETINITA CMV

FOSCARNET

TRATAMENT

MONONUCLEOZA INFECTIOASA


112/333

EPSTEIN BARR (EBV)- GAMAHERPESVIRINAE

LATENTA- EXPRESIA PROTEINELOR

VIRALE TIMPURII:

FACTORI DE CRESTERE AUTOCRINI PT.

LIMFOCITELE B

RECEPTORI AI FACTORILOR DE

CRESTERE

ACTIVATORI AI UNOR ONCOGENE

CELULARE

HUMAN HERPES VIRUS 8 (HHV8)- SARCOMUL KAPOSI- cancerl l d t li l


113/333

celule endoteliale

MAI MULTE INFORMATII


114/333

MAI MULTE INFORMATII

http://www.ashastd.org/- American Social HealthAssociation. http://www.gotherpes.com/ http://www.famvir.com/ si http://www.herpeshelp.com/

GlaxoSmithKline si Novartis.

http://www.ihmf.org/ International Herpes ManagementForum. http://www.herpesdiagnosis.com/

http://www.focusdx.com/focus/splash/splash.asp http://www.webmd.com/

http://www.herpeshomepage.com/
http://www.ihmf.org/http://www.ihmf.org/http://www.herpesdiagnosis.com/http://www.ihmf.org/http://www.herpesdiagnosis.com/http://www.westoverheights.com/http://www.herpeshomepage.com/http://www.herpeshomepage.com/http://www.herpeshomepage.com/http://www.herpeshomepage.com/http://www.webmd.com/http://www.westoverheights.com/http://www.herpesdiagnosis.com/http://www.herpesdiagnosis.com/http://www.ihmf.org/http://www.ihmf.org/http://www.gotherpes.com/


115/333


116/333

DIAGNOSTIC DE LABORATOR INHEPATITE DE ETIOLOGIE VIRALA

ALGORITM DE DIAGNOSTIC IN HEPATITE


117/333

ALGORITM DE DIAGNOSTIC IN HEPATITE

1. Tablou clinic

2. Teste biochimice Markerii necrozei hepatocitare (transaminaze, LDH)

Markeri colestaza (FAL, GGT, bilirubina)

Markeri ai incapacitatii de sinteza la nivel hepatic (proteine serice, colesterol,trigliceride)

3. Date epidemiologice: cale transmitere, contactinfectant, per. incubatie, vaccinuri

4. Diagnostic etiologic = detectia markerilor virali: antigene virale (ag)

anticorpi antivirali (anti)

acid nucleic viral

Hepatita B


118/333

Hepatita B

Hepatita acuta

Hepatita cronica persistenta

Hepatita cronica agresivaCiroza hepatica

Carcinom hepato-celular

ALGORITM

Sisteme antigenice VHB


119/333

Sisteme antigenice VHB

Ag HBs Ac antiHBS

Ag HBc Ac antiHBc

Ag HBe Ac antiHBe

Infectia acuta cu VHB

evolutie spre vindecare


120/333

SimptomeAgHBeADN/VHB

anti-HBe

anti-HBc totali

anti-HBc IgM anti-HBsAgHBs

0 4 8 12 16 20 24 28 32 36 52 100

evolutie spre vindecare

Saptamini post expunere

Infectia cronica cu VHB


121/333

IgM anti-HBc

Total anti-HBc

HBsAg

Acute

(6 months)HBeAg

Chronic

(Years)anti-HBe

0 4 8 12 16 20 24 28 32 36 52 Years

Weeks after Exposure


122/333

ELISA de detectie a Ag viraleELISA de detectie a Ac antivirali

Tehnica ELISA sandwich

1. Incubare ser pacient 1h la 37C

ELISA de detectie a Ag virale


123/333

1. Incubare ser pacient 1h la 37 C2. Spalare3. Incubare CONJUGAT 30min la 37C

4. Spalare5. Incubare SUBSTRAT 20 min la t.camerei6. Citire la spectrofotometru => D.O., MN, MP, C.O.

Ag HBs

Anti HBs

Anti HBs cuplat cuo enzima =CONJUGAT

SUBSTRAT+

EVOLUTIA MARKERI DE INFECTIE VHA


124/333

0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13

saptamana

simptomatologie

ALT

IgM

IgG

VHA in MFInfectie

Viremie

Diagnostic hepatita acuta A = detectie Ac anti VHA IgM (ELISA de captura)

ELISA de captura


125/333

p

Anti-IgM

IgM

Ag marcatenzimatic =conjugat

ETAPE


2. Spalare

3. Incubare conjugat 30 min la 37C

4. Spalare

5. Incubare substrat 20 min la t. camerei

6. Citire la spectrofotometru

SUBSTRAT

+


126/333

HEPATITE VIRALE


127/333

AInfectioasa

Serica

HEPATITA

VIRALA

Transmitere

Enterica

TransmitereParenterala

E

NANB

B D

C

Virusuri hepatitice F,GCoxackie, EBV, CMV, arbovirusuri

VIRUSUL HEPATITEI A PICORNAviridae; gen HEPARNA-viridae


128/333

VHA este rezistent la- cldur,- pH acid,- alcool-ether.Inactivare- fierberela > 85 oC, cel putin 3minute

CONCENTRATIA VHA IN DIFERITE FLUIDE

CORPORALE


129/333

Soursa: Viral Hepatitis and Liver Disease 1984;9-22

J Infect Dis 1989;160:887-890

Materii fecale

Ser

Saliva

100 102 104 106 108 1010

TITRUL/ml

Digestiv

Contact personal direct

Sange (rar postransfuzional,

IDU)(e.g., injection drug use, r

Incubatie: medie 25 zile (limite 15-50 ) Icter:


130/333

0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13

saptamana

simptomatologie

ALT

IgM

IgG

VHA in MFInfectie

Viremie

y

Complicatii: hepatita fulminanta; colestaza(rare)- vindecarecompleta regula in hepatita A

In Romnia, peste 80% dincopiii sub 10 ani au trecutprin infectie

profilaxie specific: vaccin inactivat

profilaxie nespecific: igien personal sau gamaglobuline la contacti

Virusul Hepatitei E- Calicivirus1983-IEM n preparat provenit de la unvoluntar care a fost infectat cu filtrat

Incubatie: Medie 40 zile (15-60)

Severitate creste cu varsta


131/333

voluntar care a fost infectat cu filtratde materii fecale de la un pacient cuhepatit enteric nonA nonB.

Ulterior, virusul transmis la maimutecynomolgus- clonat, genomulsecventiat.

Retrospectiv, probe arhivate prelevaten cursul unor epidemii hidrice -circulatia VHE din anii 50.

Epidemii hidrice extinse n subcontinentul indian si n America Central

Rata de atac: 1-15%; adulti (3 30%); copii (0.2-10%).Transmitere interpersonala minima

Nu exista vaccin- eficienta Ig din sangele donatorilor din zone ne-

endemice?

Severitate creste cu varsta

Rata fatalitatii : 1%-3%;

femei gravide 15-25%- avorturi sau nasteri premature: 1230%- moartea ftului in utero: 25%;-decesul mamei prin hepatit fulminant: 25%

Hepatita Eo zoonoz ?


132/333

Un nou virus desemnat swine VHE a fost identificat la

porci Porcii peste 3 luni din unele cresctorii prezint anticorpi,

desi nu au semne clinice. Porcii


133/333

GENOMUL VHB- ADNpartial ds,

partial circularizat

Genomul VHB este ADN partial dublu catenar cu o

spir lung (L, negativ) si una scurt (S, pozitiv).

Pe spira lung se gsesc genele ce codific

proteinele VHB:

Antigenul de suprafa AgHBs mediaz atasarea la

receptorii celulari si este implicat n

virusneutralizare- Codificat de gena S- cu trei

componente: preS1+preS2+S;Antigenul de centru AgHBc (gena c) care prin

clivare produce AgHBe (marker de infectivitate);

Reverstranscriptaza , ADN polimeraza, si

proteinkinaza VHB(gena P-pol)

Factori transactivatori ai unor gene celulare (gena

x, implicat n cancerizare).

Genomul ADN partial ds, partialcircular cu dimensiuni mici (3200nucleotide) este foarte eficient

organizat. Prezenta orf suprapusepermite codificarea a 50% proteine

n plus, n raport cu ceea ce ar fiteoretic posibil.

CICLUL REPLICATIV VHBDup completarea secventei spirei scurte, pe matrita ADN ds se sintetizeaz o copie ADN circular relaxat (DNAccc - Dclosed covalent circular) care este transferat n nucleu n form episomal, neintegrat cromozomial. Pe acest ADN sesintetizeaz un ARN relaxat numit ARN pregenomic Acesta serveste fie ca ARNm pentru sinteza proteinelor virale fie c


134/333

Adapted from Lai CL, et al. J Med Virol. 2000;61:367-373.

Virion VHB infectios

ADN partial ds

Completarea spireiscurte de catre ADN

polimeraza virala

Particule subvirale

Hepatocyte

mRNA

Citoplasma

NucleuPrecore/core

HBeAg

ER

HBcAg

HBsAg

cccDNA

ADNss-

ARN mpregenomic incapsidat

cccDNA, covalently closed

circular DNA

sintetizeaz un ARN relaxat, numit ARN pregenomic. Acesta serveste fie ca ARNm pentru sinteza proteinelor virale, fie cmatrit pentru reverstranscriptaza care va sintetiza genomul progen.

Caracteristic pentru VHB este sinteza

disproporionat ntre particulele virale complete

(particulele Dane) cu genom ( 108

) si cele vide (1014)

.


135/333

In serul bolnavilor se gsesc diferite forme ale VHB: particulele omogene, sferice de 42 nm

care reprezint virionul complet (numite particule Dane) si particule neomogene, sferice saufilamentoase, (cu diametrul de 22 nm) constituind structuri lipsite de ADN si de infectivitate.

Concentratia VHB in fluide


136/333

INALT Moderat Scazut/

nedetectabil

Sange Lichid spermatic Urina

Ser Secretie vaginala Materii fecale

Exudat rani Saliva Gl. sudoripare

Lacrimi

Lapte matern

corporale

CAI DE TRANSMITERE VHBParenteral Sexual

Perinatal

Contact

100100

Evolutia hepatitei B in functie de varsta

Incubatie: medie 75 zile (45-180)


137/333

Simptomatologie

Cronicizare

Varsta la achizitia infectiei

Infectia cronica (%) Infectia Simptomatica (%)

nastere 1-6 luni 7-12 luni 1-4 ani Copii mari si adulti

0

20

40

60

8080

60

40

20

0

( )

Icter:


138/333

Unul din urmtoarele patru criterii pentru diagnostic:

persistenta AgHBs >6 luni,

valori ale ncrcrii virale >104

copii/ml ADN/VHB, transaminaze persistent sau intermitent crescute,

scor Knodell >4 pentru activitatea necroinflamatorie pe biopsia hepatic.

Immuno-

toleranta

hepatita B

cronicaAgHBe+

Purtator inactiv

Ag HBs

hepatita B cronica

AgHBe-(Mutante Precore )

AgHBs + + + +

AgHBe + +

Anti-HBe + +

ALT Normal Normal

ADN VHB> 20,000 IU/mL

(> 105copii/mL)

> 20,000 IU/mL(> 105

copies/mL)

< 200 IU/mL(< 103

copies/mL)

> 2000 IU/mL(> 104 copies/mL*)

HistologieNormal/moder

Activa Normal Activa

Fazele infectiei cronice cuVHB

eliminarea unor subseturi delimfocite Tc sensibilizate (prinantigene care induc tolerant)blocarea functiilor LTc si APC prinsinteza exagerat de IL10

Pierderea efectului tolerogenprecipit liza imun indus ahepatocitelor infectateGenerarea limfocitelor Tcitotoxice specifice infectieiVHB it li i i


139/333

HBeAg+ HBeAg-/anti-HBe+ (precore/core promoter variants)

ALT

HBV DNA

Normal/mild

CHInflamatie Moderate/severe CHNormal/mild CH

Cirrhosis

Immune

Tolerance

Immune

Clearance

Low Replicative

Phase

Reactivation

Phase

Cirrhosis

< 2000 IU/mL

> 2000 IU/mL

Inactive cirrhosis

2 x 108

-2 x 1011 IU/mL

Slide courtesy of A. S. F. Lok, MD.

200,000 - 2 x 109 IU/mL

Inactive-carrier state HBeAg-chronic hepatitis

HBeAg+chronic hepatitis

viremia nalt nu se asociaz cutransaminaze crescute

lipsa citopatogenittii VHB.

VHBcitoliza- mecanism imunmediat

Hepatita B Cronica activa, cu AgHBe negativ la pacienti cu mutante precore/core

Variantele precore previn sinteza AgHBe


140/333

p p g

- sunt determinate de mutatia nonsens G1896A inlturun semnal indispensabil ncapsidrii

Mutantele core sintetizeaz numai un produs truncat

care nu este detectat de trusele ELISA pentru

AgHBe/antiHBe. Cele mai frecvente mutatii sunt: A1762Tsi G1764A. Mutatiile duble reduc si productia viral cupeste 20%.

Variantele core promoterprevin initierea traducerii

Sunt determinate de mutatii punctiforme la codonul start

ATG. In majoritatea cazurilor, devin prevalente nc

nainte de seroconversia anti HBe

6-15% -remisiuni spontane definitive (rata anual 0,5%)

Prognosticul mai rezervat dect n hepatitele cronice AgHBepozitive att n ceea ce priveste probabilitatea cirozei ct si acarcinomului hepatic primitiv (CHP).

Evolutia Hepatitei B400 milioane infectii


141/333

1. Hepatita cronica persistentaasimptomatica

2. Hepatita cronica Activasimptomatica

3. Ciroza hepatica

4. Carcinom Hepatocelular

cronice

500 000- 1 milion

decese/an

10% HIV/ HBV

coinfectii

Prevalentahepatitei B cronice

2 miliarde de infectii curente sau vindecat4 milioane infectii acute/an300-400 milioane infectii cronice


142/333

HBsAg Prevalence

> 8% - High

2-8% - Intermediate

< 2% - Low

Numarul imigrantilor pe fiecare continent intre 1996-2006

~ 2 million Asians

~ 400,000

South Americans

~ 350,000Africans

~ 930, 000

Europeans

Centers for Disease Control. Hepatitis B fact sheet. Available at: http://www.cdc.gov/hepatitis. 2008. Mahoney FJ. Clin Microbiol Hepatitis B statistics1. WHO. Hepatitis B. 2002. 2. Maynard JE, et al. In: Viral Hepatitis and Liver Disease. New York: Alan R. Liss, Inc. 1988. 3. CDC. Epidemiology &prevention of vaccine-preventable diseases. The Pink Book. 8th ed. 4. CDC. MMWR. 2001;50:RR-11

300 400 milioane infectii cronice25% decedeaza datorita cirozei sau CHP - 1 milion dedecese /an

60-80% din cauzele de CHP

OMS global-VHB a 10-a cauza demortalitateVHB este al doilea agent carcinogen dupatutunVHB este de 100 ori mai contagios ca HIV


143/333

ncetinirea progresiei fibrozei ctre ciroz, prevenirea insuficientei hepatice, prevenirea

aparitiei CHP

TRATAMENTUL CU ANTIVIRALE N HEPATITA B CRONIC


144/333

aparitiei CHP

Hepatit cronic AgHBs +

Transaminaze peste 2xLSN Trateaz

AgHBe Prezent Trateaz

ADN VHB >1000 copii Trateaz

Fibroz Prezent Trateaz

Formele replicative ale genomului viral rmn n nucleul hepatocitelor infectate sub

forma ADN ccc, - recderi la ntreruperea terapiei sau n conditii de imunosupresie.


145/333

DESCOPERIREA VHC 1989- Clonare molecular- Choo Q-L., Science244, 359-62


146/333

Adsorbtiacomplex de receptori: CD 81, receptorul scavenger B I (SR-B I); moleculelede adeziune DC-SIGN Si LSIGN, claudina 1 si receptorii pentru LDL- Susceptibilitatea

VIRUSUL HEPATITIC C- FLAVIVIRIDAE-

HEPACIVIRUS


147/333

Traducere IRES mediata -

procesarea unui precursorpoliproteic larg clivat ulterior depeptidaze semnal SP si proteaze

virale in 10 proteine virale .

, p p p

crescut a vrstnicilor cu leziuni de ateroscleroz

Replicarea VHC - n zone

alterate ale endoteliuluicitoplasmic - alctuiesc

reteaua /nodul replicativ

(membranous web);morfologic determin incluzii

intracitoplasmice cu aspect

spongios.

Prelucrarea posttraducerencomplexul replicativ -

proteinele nonstructurale +

proteinele celulei gazd.

Eliberarea la nivelul polului apical al hepatocituluistructur cu bogat continut LDL- celulele depletate deinsulele membranare lipidice (rafturi) sunt slabproductive n particule virale infectante


148/333

Rata replicarii: 10 trilioane virioni/zi; Titruri plasmatice > 10 milioane copii ARN

VHC/mlrata mutatiilor 105 per nucleotid per ciclu; la fiecare sit din genom produc 105 mutatii

tif


149/333

punctiforme

HETEROGENITATE VIRALA

6 genotipuri majore -20-48% diferente

Cvasispecii-SECVENTA CONSENS- 2-10%-diferente escape mutants

proteaza HCV NS3/4A cliveaza moleculeadaptator ce intervin in caile desemnalizarea dependente de TLR si RIG I

RISC REZIDUAL AL TRANSFUZIEI:

Virus fereeastra serologica risc rezidual

HTLV 51 il (32 72) 1 56/1 ili d

Ecranarea antigenicitatii virale

de lipoproteine plasmatice

determina seroconversia

t di t 4 i 10 t i


150/333

Virus si test Riscrezidualprin triajserologic

Riscrezidualprin testareacizinucleici

Reducereariscului

CostPer test(USD)

VHB -

ADN/PCR

15.83 9.12 42.4% 30

VHCARN/Rt- PCR

9.7 2.72 72.0% 200

HIV - Ag p24

2.03

1.48 27.3% 5

HIV - ADN/PCR 1.48 27.3% 50

HIV

1.01 50.0% 200

Reducerea riscului rezidual asociat transfuziilor

HTLV: 51 zile (32-72) 1,56/1 milion dedonatii

HIV: 22 zile (6-38) 2,03/1 milion de

donatii

HCV: 82 zile ( 54-192) 9.7/1 milion dedonatii

HBV: 75 zile (37-87) 15.8/1 milion de

donatii

tardiva, ntre 4 i 10 sptmni

post-infectie. Aceast

fereastr serologic mentineriscul transmiterii VHC prin

transfuzii.


151/333

PATOGENIE- CLINICA


152/333

Incubatie medie 6-7 saptamani (2-

26 )

Icter 85%

Hepatita cronica activa 10%-60%

Ciroza 6 luni; Inflamatie/necroza


153/333

moderata/fibroza scazuta

Factori predictivi pentru RSV:

Genotip 2/3

VL baseline


154/333

Rspuns tranzitoriu(dispariia ARN VHC la sfritul tratamentului, cu recderi ulterioare)- 10-25% din pacieni -retratarea acestorpacieni poate furniza uneori RSV, dar la doze mai mari i pe termen mai lung de administrare amedicamentelor.

Absena rspunsului la tratament -30% din pacieni -chiar dac se nregistreaz scderea nivelului ncrcriivirale sub tratament nu se produce niciodatdispariia virusului din organism- recderea este regul.

Denumire Criterii

VEVR

Rspuns virusologic foarte rapid

Scadere >1.4 log10 HCV ARN la 24 ore ; recul viral dupa 7

zile?

RVR

Rspuns virusologic rapid

HCV ARN nedetectabil la 4 saptamani ; predictor RSV

EVR

Rspuns virusologic timpuriu


155/333

Imunomodulator Creste rata de mutatii

VHC (viral fitness)

Mutageneza letala aVHC

Scade frecventareculului viral

Accentueaza apoptozacelulelor infectate

Antiviral

Imunomodulator- stimuleaz activitatea citolitic a limfocitelor CD8

- contribuie la limitarea accesului intralobular al

limfocitelor implicate n rspunsul inflamator.

cresterea markerilor de activare a macrofagelor

(exemplu, CD 69);

cresterea activittii celulelor NK si armareaperforinelor;

adugarea ribavirinei creste rspunsul

antiinflamator prin scderea citokinelor IL-2 si IL-

12 si cresterea IL-10.

PEG-IFN alpha-2a (PEGASYS;Roche)-180 godat pe sptmn.


156/333

VIRUSUL HEPATITEIDELTA = virus


157/333

HBsAg

RNA HDV

antigen

DEFECTIV

1977 Mario Rizzetto

Coinfectie VHB - VHDBOALA ACUTA SEVERARISC SCAZUT DE CRONICIZARE


158/333

Ac anti-

HBs

Simptome

ALTcrescute

Ac anti-VHDtotali

IgM anti-HDV+ IgM antiHBc

HDV RNA

AgHBs;ADN VHB

Timp dupa

Titru

RISC SCAZUT DE CRONICIZAREPROFILAXIA HEPATITEI B

SUPRAINFECTIA VHB - VHDBOALA ACUTA ?RISC CRESCUT DE CRONICIZARE INFORME SEVERE


159/333

Icter

Simptome

ALTAc Totali anti-HDV + anti HBc

IgG

IgM anti-HDV

ARN VHD

AgHBs

Timp dupa

Titru

FORME SEVERETRATAMENT VHB/REDUCERE RISC

TRANSMITERE VHD

Asociatia American pentru studiul bolilor hepatice

http://www.aasld.org/netFORUMAASLD/eweb/docs/update
http://www.aasld.org/netFORUMAASLD/eweb/docs/updatehttp://www.aasld.org/netFORUMAASLD/eweb/docs/update


160/333

Centrul pentru Controlul si Profilaxia Bolilor CDCAtlanta

http://www.cdc.gov

Clinical Care Options for Hepatitis

http://www.clinicalcareoptions.com/hepatitis.aspx

Medscape Hepatitis Resource Center

http://www.medscape.com/resource/hbv

Projects In Knowledge, Advanced Certificate Program in the Management

of Chronic Hepatitishttp://www.projectsinknowledge.com/1712

Viral Hepatitis Serology A-E: CDC-sponsored

http://www.cdc.gov/ncidod/diseases/hepatitis/serology/
http://www.cdc.gov/ncidod/diseases/hepatitis/slideset/index.htmhttp://www.clinicalcareoptions.com/hepatitis.aspxhttp://www.medscape.com/resource/hbvhttp://www.projectsinknowledge.com/1712http://www.cdc.gov/ncidod/diseases/hepatitis/serology/http://www.cdc.gov/ncidod/diseases/hepatitis/serology/http://www.projectsinknowledge.com/1712http://www.medscape.com/resource/hbvhttp://www.clinicalcareoptions.com/hepatitis.aspxhttp://www.cdc.gov/ncidod/diseases/hepatitis/slideset/index.htm


161/333

Hepatologie 2009www.HepatologyTextbook.comVersiunea in limba romana-

http://www.fb4d.com hepatologie 2009

Versiunea in limba romana.

Traducerea a fost asigurata de

colectivul Disciplinei de Virusologie,

UMF Carol Davila

Institutul de Virusologie St. S. Nicolau

285, sos. Mihai Bravu, Bucuresti RomaniaTel/fax +40213242590
http://www.fb4d.com/http://www.fb4d.com/


162/333


163/333

DIAGNOSTIC SEROLOGIC

1. DIAGNOSTIC SEROLOGIC IN INFECTIA HIV/SIDA


164/333

TESTE DE TRIAJ- sensibilitate inaltaELISA de detectie a Ac antiviraliTESTE RAPIDE

TESTE DE CONFIRMARE- specificitate inalta

WESTERN BLOTRADIOIMUNOPRECIPITAREA (RIPA)IMUNOFLUORESCENTA INDIRECTA

2. DETECTIA DIRECTA A VIRUSULUI SAU A

PRODUSELOR VIRALEIZOLARE VIRALA

DETECTIA ANTIGENEMIEI p24 ELISA de detectie a Ag virale

DETECTIA ACIDULUI NUCLEIC VIRAL

ELISA de detectie a anticorpilor antivirali

TEHNICA INDIRECTA


165/333

ETAPE


2. Spalare

3. Incubare conjugat (Ac anti IgG uman x enzima)- 1h la 37C

4. Spalare

5. Incubare substrat 20 30 min la temp camerei

6. Citire la spectrofotometru DO probe, martori, cut off, zona gri

ELISA de capturadetectia de Ac de clasa IgM


166/333

Ac Anti-IgM

IgM

Ag marcatenzimatic =

conjugat

ETAPE


2. Spalare

3. Incubare conjugat 30 min la 37C

4. Spalare

5. Incubare substrat 20 min la t. camerei

6. Citire la spectrofotometru

TESTE DE CONFIRMARE


167/333

Tehnica

WESTERN BLOT

1. SDS-PAGE

2. BLOT (transfer)

3. DETECTIA ANTICORPILOR

WESTERN BLOT detectia Ac serici


168/333

Substrate

Stop

color

Antiviral antibody

Western blotin infectia HIV

gp160

gp120


169/333

gp41

p66

p31

p24

p17

p10/11

p7/9

p51

p55

Criteriul minim de

pozitivitate

2 env

+

1 gag


170/333

Test imunoblot pt

confirmarea

infectiei VHC

RIBA

(Recombinant

Imunoblotting Assay)

DIAGNOSTIC SEROLOGIC IN INFECTIA HIV

ELISA


171/333

POZITIV IN DUPLICAT

WESTERN BLOT

NEGATIV=

ABSENTAINFECTIEI HIV

! Ferestraserologicarisc rezidual al

transfuziei = 2/1 milion

NEGATIV

INDETERMINAT

- repeta la 6-8 saptamini- alt test de confirmare

POZITIV=

INFECTIE HIV

Ag p24- 1.48/1 milionADN proviral1.48/1 milionARN HIV 1.01/1 milion


172/333


173/333

HIV/SIDA

173

Human Immunodeficiency Virus

Acquired immunodeficiency syndrome

Sindrome dimmunodeficience aquise

rem u o e pen ru e c na sau z o og e

2008


174/333

174

Franoise Barr-

SinoussiLuc Montagnier

1/4 of the prize 1/4 of the prize

Regulation of

Retroviral Infections

Unit, Institut

Pasteur Paris,

France

World Foundation for AIDS

Research and Prevention

,Paris, France

b. 1947 b. 1932

1981- primele cazuri AIDS (sindrom de imunodeficienta umana dobandita ) raportate inSUA la homosexuali tineri, anterior sanatosi

1981 83 d i AIDS b l i l l (h i h l)


175/333

175

1981-83- grupe de risc, AIDS- boala transmisa parenteral, sexual (hetero si homosexual),

materno-fetal1983 - se stabileste etiologia virala a bolii prin izolarea virusului - tulpina numita LAV(Lymphadenopathy Associated Virus) - Luc Montaigner, Institutul Pasteur din Paris / tulpinanumita HTLV III (Human T-cell Leukemia Virus III) - Robert Gallo, Bethesda, SUA/tulpinaARV AIDS associated retrovirus (J. Levy, San Francisco, SUA)

1985cele 3 tulpini sunt demonstrate a apartine aceluiasi virus redenumit HIV (HumanImunodeficiency Virus), Familia RETROVIRIDAE, GEN LENTIVIRINAE

1985 - sunt livrate primele truse de diagnostic imunoenzimatic

1986 - se descopera HIV2 (Africa de Vest)

1998secventierea prin Rt-PCR celei mai vechi probe de plasma HIV1 pozitivacunoscuta -recoltata n 1959, de la un barbat din Congo.

Argumente SIV-HIV:

Similitudini in organizarea

genomului

Inrudire filogenetica


176/333

176

Inrudire filogenetica

Prevalenta in gazda

naturala

Areal geografic

Cai plauzibile de

transmitere

1992 - 1993 - variantele genomice ale HIV1-M sunt ncadrate n 8 clade (A-H), Media distanteiintercladale este de aproximativ 27%, izolatele din aceeasi clada nu se deosebesc decit prin

11% din nucleotide

Camerun; Gabon,Guineea Ecuatoriala

HIV-1 NCamerun

1999 - se descopera rezervorul natural

al HIV1SIV cpz- provenit de la o

subspecie din Africa Centrala, Pan

troglodites troglodites

2006- identificare v. la cimpanzei care


177/333

177

3 transferuri distincte ale

SIV cpz de la aceeasi

specie:

Pan troglodites trogloditesGao.F et al, Nature, 1999, 397, 436-41Weiss RA,

Wrangham RW, Nature, 1999, 397, 385-6.

Keele, BF, 2006 Science www. sciencexpress.org

p

traiesc in salbaticie in sud Camerun

Gp160-precursor

Gp120-

GENOMUL HIV:1.Gene structurale:env (anvelopa-gp120, gp41)gag :antigene de grup: (capsida, matricea, nucleocapsida;)pol: cx polimerazic-(reverstranscriptaza, integraza, proteaza)

l ii f


178/333

178

superficiala

Gp41-transmembranara

P66-Rt

P32-proteaza

P24- capsida

P17- matricea

p10/11-integraza

p7/9- nucleocapsida

P55-Rt

Western

2.Gene reglatorii(rev, tat, nef)3. Gene accesorii (de maturare)

CELULE TINTA IN INFECTIA HIV- celule CD4 pozitive :

limfocitele T helper

macrofage


179/333

macrofage

celule foliculare dendritice (CFD)

179

CELULE TINTA IN INFECTIA HIVCelule murine transfectate cu CD4 nu sunt infectate

cofactor in celulele umane


180/333

180

Co-Receptori?

CD8+ Cells

MIP-1 alpha MIP-1 beta RANTESChemokine

Blocare infectie HIV -Co-Receptori=Receptori pentru chemokine

CCR5 Macrofage CXCR4

limfocite

celule Th de memorie din tesuturi nonlimfoide- celule Th nave si de memorie

Tropism HIV

Tulpini R5

M-tropeTulpini

Tulpini X4

T-trope

Asociate cu progresia


181/333

Macrofage

CD4+ CCR5+

Linii celulare TCD4+ CCR5+/CXCR4+

Limfocite TCD4+ CXCR4+

M-trope

Asociate cu transmiterea

HIV

R5/X4

Dual-trope

Asociate cu progresia

bolii

Forma modificata a CCR5- Deletie 32 bp

Alela prezenta in forma homozigota- pacienti expusi dar neinfectati HIV

Heterozigota- supravietuitori de lunga durata (non-progresori, lent progresori)

Polimorfism populational

In stadiile timpurii ale infectiei, tulpini:


182/333

182

p p

Macrofagotrope

Nonsincitizante

rata replicativa scazuta

In stadiile tardive ale infectiei, tulpini:

limfotrope

sincitizante

rata replicativa inalta

Ciclul Replicativ viral: faza de eclipsa


183/333

183

CRESTEREA LOGARITMICA

NUCLEU

In fiecare zi circa 10 miliarde de virioni

Pol II rata mare de erori 1:2,000-10,000

vp

r

Rata mare de erori a Rt-azei:

3x10-5 mutatii/ nucleotid/ ciclu


184/333

184

INTEGRAZA

LTR

ARN polimeraza ADN

dependenta -POLII

CITOPLASMA

genom HIV 9749 nucleotidesFIECARE virion progen poate avea cel putin o

mutatie!

r

Tat, rev

replicativ

Rata mare de recombinari in

cursul reverstranscrierii

ROLUL PROTEINELOR REGLATORII SI ACCESORII


185/333

NEF interactioneaza cu proteine celulare implicate insemnalizarea celulara permitand supravietuirea pe

termen lung a LTh infectate si la promovarea

apoptozei LT neinfectate

VIF Interactioneaza cu citozin-

deaminaza celulara

APOBEC3G


186/333

186

AADDNN pprroovviirraalleverstranscriptaza

virala

AARRNN HHIIVV

PROTEINE

ADN

celular

integraza

COFACTORI

LTR

HIV

Proteine celulare implicate in

replicarea HIV:

-TRIM5 (TRIpartite Motif) laprimate intervine in degradarea cx de

reverstranscriere in proteazomi

-APOBEC3G citozin deaminaza

converteste citozina in uracil in curs

MATURARE- ASAMBLARE-

ELIBERARE


187/333

187

Maturarea-Clivarea precursorilor polipeptidici sub

influenta proteazei viraleEliberare prin

inmugurire

TINTE ALE MEDICAMENTELOR ANTIRETROVIRALE

Inhibitori de RT

NRTI

NNRTI


188/333

188

NNRTI

INHIBITORI DE

INTEGRAZA

INHIBITORI DE

PROTEAZA

INHIBITORI

ATASARII DE

CORECEPTORI

SI INHIBITORII

INTERNALIZARII

3 CLASE MAJORE DE INHIBITORI AI FAZEI DE ECLIPSA


189/333

Inhibitori CD4??-neaprobati pt

utilizare- in curs de

testare

Inhibitori ai

corecptorilor CCR5

Inhibitorii Fuziunii

NativeTrimer

CD4 BindingENV binding siteexposure

CoR Binding Fusionpeptide insertion?

6-Helix BundleFormation Membranefusion

Maraviroc (R5)

Vicriviroc (R5)Fuzeon (Enfuvirtide)TNX-355

gp120

Variableloops

gp41

CD4

INHIBITORII FUZIUNII

FUZEON (ENFIVURTIDE)


190/333

Source: www.trimeris.com

PRINCIPALELE CLASE DE ANTIRETOVIRALE FOLOSITE IN PRACTICA

De prima linie:

Analogii nucleozidici inhibitori ai reverstranscriptazei virale (NRTI) - compusi apartinndclasei dideoxinucleozidelor substante chimice formate dintr-o baza azotat si un rest glucidic a crui


191/333

clasei dideoxinucleozidelor, substante chimice formate dintr-o baza azotat si un rest glucidic a crui

grupare hidroxil din pozitia 3' a fost nlocuit cu un alt substituent care nu permite participarea

acestei structuri la legturi fosfodisterice. In celulele umane, analogii nucleozidici sunt fosforilati de

enzimele celulare Mecanismele care stau la baza acestei activitti sunt:

- blocarea elongatiei lantului ADN rezultat prin retrotranscriere, datorit imposibilittii pozitiei 3' a

dideoxinucleozidelor de a participa la legturi fosfodiesterice cu alte nucleozide;

- competitia cu nucleozidele fiziologice la nivelul situsurilor de legare ale reverstranscriptazei.

Inhibitorii nonnucleozidici ai reverstranscriptazei virale (NNRTI)sunt activi direct, fr anecesita fosforilare intracelular-blocheaz direct activitatea enzimei, fixndu-se la nivelul unui "buzunar"hidrofob, situat foarte aproape de situl catalitic al Rt

Inhibitorii proteazei virale (PI)-blocheaza clivarea precursorului gag-pol n:- proteinestructurale gag(p24, p17, p7) si pol- enzime virale (RT-aza, intrgraza si proteaza p32 nssi).Sunt medicamente active ca atare-blocheaz maturarea si inhib infectivitatea virionilor

progeni att n celulele infectate activ ct si n cele infectate cronic, penetrarea lorintracelular fiind bun (inclusiv n macrofage si celule foliculare dendritice - CFD).

De rezerva- Inhibitorii fuziunii (Fuzeon), antagonistii coreceptorilor CCR5 (Maraviroc,

vicriviroc) si inhibitorii integrazei (Raltegravir)

191


192/333

Global estimates for adults and children, 2008

Situatia globala a epidemiei HIV la 1 decembrie 2009 (date

UNAIDS)


193/333

December 2009

People living with HIV 33.4 million [31.1 35.8million]

New HIV infections in 2008 2.7 million [ 2.4 3.0million]

Deaths due to AIDS in 2008 2.0 million [1.7 2.4 million]

Adults and children estimated to be living with HIV, 2008


194/333

December 2009

Total: 33.4 million (31.1 35.8 million)

Western &Central Europe

850 000[710 000 970 000]

Middle East & North Africa

310 000[250 000 380 000]

Sub-Saharan Africa

22.4 million[20.8 24.1 million]

Eastern Europe& Central Asia


South & South-East Asia


Oceania

59 000[51 000 68 000]

North America


Latin America


East Asia

850 000[700 000 1.0 million]

Caribbean

240 000[220 000 260 000]

Estimated number of adults and children

newly infec

Lp Virusologie

Documents

Transcript of Lp Virusologie

Curs 10 (I) - Virusologie, Bacteriologie, Parazitologie

Lp Anatomie

Virusologie Curs 3

Virusuri Hepatotrope - Virusologie

CURS 8 Virusologie Refacut

referat virusologie

Curs 12 AMG - Virusologie. Caractere Generale

Carte Virusologie

Încadrarea postului în - · PDF file8 Medicină M2-Microbiologie 14 bacteriologie-virusologie-parazitologie (1)_LE; bacteriologie-virusologie-parazitologie (2)_LE;bacteriologie,virusologie

67037640 Referat Virusologie Bacilul Kok

Virusologie LP - Cultivarea virusurilor, Efecte citopatice

curs_24 (1) virusologie

Virusologie Umana

VIRUSOLOGIE GENERALĂ

58882799 Carte virusologie

curs_10 (1) virusologie

Curs 3 virusologie bun.ppt

Lp Sindroame

Virusologie Curs Concis

Curs Virusologie