Identificare virala

REACTIA DE

SERONEUTRALIZARE

Titrarea infectivitatii virale

Identificarea

enterovirusurilor

RSN

RSN: IDENTIFICAREA VIRUSURILOR = VIRUSNEUTRALIZARE

TITRAREA ANTICORPILOR = SERONEUTRALIZARE

VIRUSNEUTRALIZARE VIRUS NECUNOSCUT

ANTICORPI CUNOSCUTI=SER IMUN DE REFERINTA

SERONEUTRALIZARE TITRU DE ANTICORPI NECUNOSCUT

VIRUS CUNOSCUT = TULPINA DE REFERINTA

ETAPE RSN 1. TITRAREA INFECTIVITATII VIRALE

2. BLOCAREA INFECTIVITATII VIRALE

3. DEMONSTRAREA NEUTRALIZARII INFECTIVITATII VIRALE

1. TITRAREA INFECTIVITATII VIRALE

metoda plajelor

Dilutii seriale

ale virusului

Insamantare pe celule

susceptibile

dupa adsorbtie, 1h la 37,

se acopera cu agar

Restrictia raspandirii

virusului determina liza

focalizata a monostratului

celular vizibila sub forma

plajelor, PFU

Metoda plajelor

Nr PFU = nr plaje / Vol x dil

2. BLOCAREA INFECTIVITATII VIRALE

3. DEMONSTRAREA NEUTRALIZARII

INFECTIVITATII VIRALE

= Repetarea etapei 1 cu amestecurile

antigen-anticorp

Definitie de caz Meningita virala

Febra 38.5 C asociata cu minim un simptom dintre:

Cefalee severa i persistenta; Redoare de ceafa

Durere de ceafa asociata cu minim 2 din urmatoarele:

Fotofobie Greata Varsaturi Faringita exudativa Dureri abdominale

La sugari si copiii mici semnele principale sunt febra 38.5 C asociata cu iritabilitate si pulsarea fontanelei

1. SUSPICIUNEA CLINICA

ETIOLOGIE POSIBILA

SINDROM ETIOLOGIE

POSIBILA

MENINGITA

ASEPTICA

80%-90%

Enterovirusuri Polio

Cocsackie A si B

E.C.H.O.

10 - 20%

alte virusuri: VZV

V. URLIAN

HSV

CMV

V. PARAGRIPALE

Algoritm de diagnostic virusologic

meningite virale

ETIOLOGIE

POSIBILA

Produs

Patolog

IZOLARE Dg. DIRECT

=detectie

directa

Dg. INDIRECT

=serologie

80%-90%

Enterovirusuri Polio Cocsackie A si B E.C.H.O.

MF

SNF

LCR

De electie

Culturi celulare Animal de laborator

NU

(PCR)

DA

Produse patologice

Materiile fecale(MF) Recoltare. Materiile fecale pot fi recoltate ca atare in cantitate de 4-8

grame sau corespunzator volumului extremitatii falangei distale a indexului de adult. De asemenea, se pot recolta intr-o solutie 1 M de Mg SO4 in suspensie 20% (stabilizeaza infectivitatea enterovirusurilor)

Precizari. Este important de notat ca enterovirusurile se excreta saptamani la rand , dar sansele de izolare scad. Se recomanda recoltarea a 2 - 3 probe de la pacient la interval de 24-48 ore.

Stocare si transport. Produsele patologice sunt transportate si stocate la 2-4 C.

Prelucrare. In vederea izolarii de virus suspensia de materii fecale se prepara amestecand proba recoltata cu 15 ml de solutie Hanks si bile de sticla sterile intr-un tub de centrifuga inchis. Se agita puternic, se centrifugheaza , si se recolteaza supernatantul.

Produse patologice Lichid cefalorahidian (LCR)

Recoltare. Se realizeaza prin punctie la nivelul L4-L5, cat mai rapid posibil de la debutul simptomatologiei, inainte de inceperea tratamentului antibiotic, respectind strict masurile de asepsie.

1 ml de LCR este suficient pentru investigatii virusologice. Cantitatea recoltata nu trebuie sa depaseasca 5-6 ml in 3 tuburi sterile. Se determina numarul de celule, proteine totale, glicorahia si presiunea LCR. Sansa de izolare din acest produs creste cnd participarea meningiana este evidenta. Acest lucru se traduce prin pleiocitoza (cresterea numarului de celule limfo-monocitare in LCR).

Stocarea. Se pastreaza la 2-4 C, fara adaos de mediu de transport viral.

Transportul. Se realizeaza cat mai rapid posibil. Daca se depaseste 1 ora de la recoltare transportul se face obligatoriu pe gheata sau la -70 C.

Exsudat faringian/SNF

IZOLAREA ENTEROVIRUSURILOR IN CULTURI

DE CELULE

ECP PICNOTIC LITIC

ECP picnotic litic

Identificarea

enterovirusurilor

RSN

Identificarea enterovirusurilor dupa metoda Tabla de sah

Lim - Benyesh Melnick

Animalul de

laborator

-Vir pretentioase nutritiv

-(v. Coxsackie A - pe oarece nou nscut; VHB - pe cimpanzeu -Studiul patogenezei virale,

mecanismelor oncogenezei,

Rspuns imun specific=>folosit la obinerea ser hiperimune de referinta, ser antiglobuline specifice

BALB/c nude

Utilizat pentru:

Biobaza IVC - individual ventilated cage

Cadru stereotaxic

Lipsa reproductibilitii n rezultatele experimentale

se datoreaza

A - factori genetici

B - factor condiionat de mediu, hran, suprainfectii C - factori random