*EXPLORAREA PARACLINIC A HEMOSTAZEI

*EXPLORAREA PARACLINICA A HEMOSTAZEI VASCULARETIMPUL DE SANGERARETESTUL FRAGILITATII CAPILAREDeterminari ale endotelin-1, E-selectinul, ICAM, VCAM, vWF, trombomodulin, fibronectin, t-PA Imunofluorescenta (in supernatant de culturi celulare) Imunohistochimie (pe sectiuni tisulare inghetate si fixate). Dozari serice (RIA, ELISA) ale t-PA, vWF, fibronectinului, endotelinului-1 - markeri indirecti ai celulei endoteliale.

*TIMPUL DE SANGERAREMASURAREA DURATEI DE SANGERARE PROVOCATE PRINTR-O INCIZIE TEGUMENTARAMETODA DUKE INCIZIE DE 1,5/3MM LA NIVELUL LOBULUI URECHII METODA IVY INCIZIE DE 2/2MM LA NIVELUL ANTEBRATULUIVALORI NORMALE : 2-4 MIN.TS > 5 MIN. PURPURE VASCULARETROMBOCITOPENIITROMBOPATII CONGENITALE SAU DOBANDITE (TRATAM. CU ASPIRINA)BOALA VON WILLEBRAND

*TESTUL FRAGILITATII CAPILAREAPRECIEREA NUMARULUI DE PETESII DUPA APLICAREA UNEI PRESIUNI LA NIVELUL TEGUMENTULUIMETODA RUMPEL LEEDE MANSETA UNUI TENSIOMETRU LA NIVELUL BRATULUIMETODA CU VENTUZANUMARAREA PETESIILOR PE O SUPRAFATA CU DIAMETRUL DE 20MMVALORI NORMALE: 0 10 PETESII; REZULTATE EXPRIMATE SEMICANTITATIV (+, ++, +++, ++++)POZITIV IN : UNELE PURPURE VASCULARE TROMBOCITOPENII, TROMBOPATII, UNELE TROMBOCITOZE HTA, UREMIE, DZ 8% SANATOSI LA FEMEIE (MAI ALES LA MENSTRA, IN SARCINA)

*EXPLORAREA TROMBOCITULUITESTE CANTITATIVETESTE CALITATIVENUMARATOAREA DE TROMBOCITEMetoda clasica camera de numarat Burger- TurckMetoda automata analizoarele de hematologie (numar de trombocite, volum trombocitar mediu, plateletcrit, curba de distributie a volumelor trombocitare)

*FROTIUL SANGVIN PERIFERICCORECTIA NUMARULUI DE TROMBOCITE(erori nontehnice ale numaratorii automate)DIMENSIUNILE TROMBOCITULUIvolumul trombocitar crescut in turnover-ul trombocitar accelerat, megakariopoieza accelerata, in sindromul Bernard Souliervolumul trombocitar scazut in sepsis, in hipersplenism, in sindromul Wiskott - Aldrich

*MORFOLOGIA TROMBOCITARA (trombocite hipo sau hipergranulare)ETALAREA PE FROTIU A TROMBOCITELOR (izolate, grupe mici, mijlocii, mari sau plaje trombocitare)PRECURSORII SERIEI megakariocitare in periferie (megakarioblasti, fragmente de nucleu de megakariocit sau micromegakariocite)

*FROTIUL MEDULARAPRECIERI ASUPRA MEGAKARIOPOIEZEI:aprecieri cantitative (numarul de megacariocite la 100 granulocite)aprecieri calitative anomalii de maturatie, trombocitogene sau nu, dispozitia pe frotiu

*MASURAREA DURATEI DE VIATA izolarea trombocitelor, fixarea cu izotopi radioactivi, reinjectarea si urmarirea captarii lor spleniceNORMAL: 8-12 zilePATOLOGIC poate fi scurtatata la 1-2 zile in PTI sau chiar la 24 ore in PTTDOZARILE COMPONENTELOR STRUCTURALE ALE TROMBOCITULUI Glicoproteinele de membranaNucleotideleBeta-tromboglobulina, factorul 4 plachetar Prostaglandinele

*CITOMETRIA DE FLUX PENTRU TROMBOCITmarcarea trombocitelor, cu anticorpi monoclonali specifici (de suprafata si intracelulari)evaluaza glicoproteinele de membranaprezenta unei activari trombocitareanticorpii antitrombocitari IgG anti GPIIb/IIIa in PTI

*TESTE DE ADEZIVITATE TROMBOCITARAevaluarea scaderii numarului de trombocite din PRP sau sange integral dupa ce sunt puse in contact cu suprafete straine. Metode IN VIVO diferenta intre numarul trombocitelor din sangele care se scurge printr-o incizie si numarul de trombocite din sangele venos.

*PFA-100 = platelet function analyserReproduce fenomenul de aderare trombocitara desfasurat IN VIVO. PRINCIPIUL METODEI: trecerea plasmei citrate bogate in trombocite printr-o fanta a unei membrane incarcate cu COLAGEN+ADP sau COLAGEN + EPINEFRINA si masurarea timpului de obturare a fantei.

*Adezivitatea trombocitara scade in: unele trombopatiiboala von Willebrandsindromul Bernard- Souliertratamentul cu aspirinacreste in:starile pretrombotice.

*AGREGOMETRIAMETODA OPTICA turbidimetrica descrisa de Born. Trombocitele din plasma bogata in trombocite incubatA la 37C SI agitate continuu sunt stimulate cu diversi agonisti: ADP, COLAGEN, EPINEFRINA, ACID ARAHIDONIC, RISTOCETINAModificarile in timp a transmisiei optice a PRP comparativ cu PPP sunt inregistrate sub forma unei curbe de agregare. Rezultatele depind de tipul agonistului si de concentratia sa.

*

*

*VALOAREA DIAGNOSTICA

screening pentru diagnosticul bolii von Willebrand (RIPA)diagnosticul trombopatiilor congenitale si dobanditemonitorizarea terapiei antiagreganteevaluarea satrilor de hiperagregabilitate (pentru celelalte metode) si a predispozitiei la tromboza

EPINEFRINAADPCOLAGENACID ARAHIDONICRISTOCETINA*

*METODA CU IMPEDANTA cea mai potrivita pentru a detecta starile de hiperagregabilitate. Se masoara impedanta unor electrozi introdusi in proba ca urmare a agregarii trombocitelor la suprafata acestor electrozi.

METODA CU LUMINESCENTA masoara simultan agregarea trombocitara si secretia de ATP de la nivelul corpusculilor densi trombocitari cuantificand astfel secretia trombocitara

*ALTE TESTETIMPUL DE SANGERARETESTUL FRAGILITATII CAPILARETIMPUL HOWELLRETRACTIA CHEAGULUI

*EXPLORAREA HEMOSTAZEI SECUNDAREPRINCIPIUL TESTELOR DE COAGULARE: recoltarea sangelui pe anticoagulant blocarea ionilor de calciu blocarea coagularii plasma IN VITRO - se reia coagularea in plasma aducand CALCIU + FACTOR TISULAR/ CEFALINA/TROMBINA se masoara timpul de aparitie al cheagului

*TIMPUL HOWELL= timpul de coagulare al unei plasme bogate in trombocite (1000 r.p.m. 10 min.) la adaus de calciuVN = 60-120sec.SCURTAREA TH nu poate cuantifica starea de hipercoagulabilitate

*PRELUNGIREA TH:patologie trombocitara (trombocitopenii, trombopatii)patologia caii intrinseci si comune- deficienta congenitala (izolata) a factorilor XII, XI, IX hemofilia B, VIII hemofilia A X, V, II sau - dobandita (complexa) prin sinteza scazuta hepatopatii sau consum exagerat CID.monitorizarea heparinoterapiei

*TIMPUL DE CEFALINA= timpul de coagulare a unei plasme sarace in trombocite la adaus de calciu si cefalina (inlocuitor a fosfolipidelor trombocitare)Timp de Tromboplastina Partiala (PTT)Timp de Tromboplastina Partial Activata (APTT) se adauga si un activator al factorului de contact

*VN = 35-55 SEC. (PTT) 25-35 SEC. (APTT)SCURTAREA PTT nu poate cuantifica hipercoagulabilitateaPRELUNGIREA SA:patologia caii intrinseci si comune(deficientele congenitale de XII, XI, X, IX, VIII, V, II, hepatopatii, CID)monitorizarea heparinoterapiei (interval optim terapeutic 1,5-2,5xmedia intervalului de normalitate)

*

TIMPUL DE PROTROMINA(Timpul Quick) =TIMPUL DE COAGULARE A UNEI PLASME SARACE IN TROMBOCITE (PPP) LA ADAUS DE CALCIU SI TROMBOPLASTINA (factor tisular)VN = 12-15 SEC.

*SCURTAREA PT nu poate cuantifica starea de hipercoagulabilitate (sarcina, calibrare nepotrivita)PRELUNGIREA PT:patologia caii extrinseci: deficienta congenitala de FVII, FX, FV, FII sau deficiente dobandite (suferinte hepatice sau CID)monitorizarea terapiei anticoagulante cu antivitamine K

*Standardizarea PTACTIVITATEA DE PROTROMBINA (AP) = raportarea la PT-ul unei plasme normaleCurba de calibrare: dilutii seriale ale unei plasme normale (3-5 puncte de calibrare)Plasma nediluata = 100%, = 50%; = 25%; 1/8 = 12,5%; = 75%

AP (%)PT (sec.)100%50%25%12,5%1217203925AP*

PT (SEC.)INVERSUL DILUTIILOR123415202530*

*INDICE DE PROTROMBINA (IP)PT BOLNAVPT NORMALIP =

*INR = (IP)ISISCOP PROFILACTIC INR = 2-3SCOP TERAPEUTIC INR = 2,5-3,5 -4

*TESTE DE EXPLORARE A CAII COMUNE TIMPUL DE TROMBINA = Timpul de coagulare a unei plasme sarace in trombocite la adaus de TROMBINA. Reia coagularea de la trombina in josVN = 15-18 sec.

*Prelungirea sa:Prezenta de antitrombine (terapeutice heparinoterapia sau anormale paraproteine, PDF)Anomalii ale fibrinogenului: afibrinogenemia congenitala, disfibrinogenemia congenitala, hipofibrinogenemia congenitalafibrinoliza primara CID

*TIMPUL DE REPTILAZA= Timpul de coagulare a unei plasme sarace in trombocite la adaus de REPTILAZA = un venin de sarpe cu proprietati trombin-like dar care e rezistenta la actiunea antitrombinelorVN = 11-13 SEC.Prelungirea sa patologia fibrinogenuluiSe lucreaza in paralel cu TT si se coroboreaza impreuna

*ALTE METODE DE EXPLORARE A COAGULARIIDozarea factorilor plasmatici ai coagularii (I XIII)

METODE: COAGULOMETRICA CROMOGENICA IMUNOLOGICA

*TESTE DE HIPERCOAGULABILITATETestul monomerilor de fibrina (TMF)Testul de activare reziduala in ser TARSDozarea peptidelor de clivare F1+2, FpA, FpB, PCPDeterminarea complexelor TAT

*EXPLORAREA FIBRINOLIZEITeste globale: TLCS, TLCSD, TLCETeste care evalueaza componentele sistemului fibrinolitic: Plasminogenul, PAI, t-PA, 2-APTeste care evalueaza consecintele fibrinolizei: PDF, DD, complexele PAP, Plasmina libera

*TIMPUL DE LIZA A CHEAGULUI DE SANGE INTEGRAL Sange recoltat simplu coagulare Urmarirea disparitie cheaguluiVN > 24 oreValoare diagnostica scazutaTIMPUL DE LIZA A CHEAGULUI DE SANGE DILUATVN = 150 300 min.

*

TIMPUL DE LIZA A CHEAGULUI EUGLOBULINIC = TLCESepararea activatorilor (euglobuline) de inhibitorii fibrinolizei prin diluarea si acidifierea plasmeiTest de evaluare globala a fibrinolizeiVN = 150-180 min.< 150 min. fibrinoliza accelerata (CID, fibrinoliza primara)>180 min. fibrinoliza incetinita (stari postoperatorii, vasculite, obezitate, DZ tip II, la nou-nascuti)

*Produsii de degradare ai fibrinogenului si fibrinei (PDF)Metoda - latex aglutinare (! Specificitate teste care interfera cu fibrinogenul)Recoltare pe tuburi speciale ce contin trombina bovina si un inhibitor al fibrinolizeiVN < 4g/mLValori crescute: CID, fibrinoliza primara, TVP, embolie pulmonara, tratamente trombolitice, interventii chirurgicale

*D-DimeriiRezulta din degradarea de catre plasmina a fibrinei stabilizate (polimerizata transversal)Metode: latex aglutinare, ELISA (! Interferenta cu FR)VN < 250 ng/mL (< 0,25 g/mL)Valori crescute in: TVP, embolie pulmonara, CID, dupa tromboliza, postoperator, sarcina