Determinarea Activitatii Peroxidazei

8/11/2019 Determinarea Activitatii Peroxidazei

1/18

Determinarea activitatiiperoxidazei


2/18

Scurt istoric

Enzimele sunt compusi organici,proteine coloidal solubile, elaborate decelulele vii, capabile sa mareasca vitezareactiilor care se desfasoara in sistemelebiologice, fara sa se consume in cursul lor.Se mai numesc biocatalizatori sau

fermenti .


3/18

In 1878, in urmacercetarilor, au fostextrase primeleenzime din drojdia debere. Denumirea lor afost data de Kuhne siprovine de la cuvantulen zime care in

limba greaca setraduce prin indrojdie.

Figura 1. Drojdia de bere

Scurt istoric


4/18

Peroxidaza

Sunt enzime care catalizeaza urmatoarea reactie tipica:

Toate plantele sunt bogate in peroxidaza; surse excelente sunt hreanulsi ridichea neagra. In schimb, peroxidazele sunt rar intalnite in tesuturileanimale; in ficat si rinichi s-a evidentiat o slaba de activitateperoxidazica .


5/18

Peroxidaza

Peroxidazele din tesuturi vegetalelezate sau sectionate oxideaza polifenolii,pe care-i transforma in chinone de culoareinchisa, afectand culoarea fructelor silegumelor in timpul prelucrarii lor. Pentruinactivarea acestor enzime, este necesar

un tratament termic mai intens deoareceresunt termostabile.


6/18

Solanum tuberosum (cartoful)

Cartoful ( Solanumtuberosum ) este o plantaerbacee din familiasolanaceelor, cu flori albesau violete i tulpinisubterane terminate cutuberculi de formrotund, oval sau

alungit , fiind originari din America de Sud dinregiunea muntilor Anzi.

Figura 2. Flori de cartof


7/18

Determinarea activitatii

peroxidazei


8/18


9/18

Determinarea activitatii peroxidazei

Peroxidaza catalizeaza reactia dintre apa oxigenata si oamina aromata (p-fenilendiamina) cu formarea unui compuscolorat violet, spectrofotometrabil la 420 nm.

Reactia care sta la baza metodei este:


10/18


Pentru determinarea activitatii peroxidazei s-au utilizat 4soiuri de cartofi, unul strain si celelalte 3 romanesti : DESIREE,

RUXANDRA, CHRISTIAN si RUSTIC.

Figura 3. Soiurile de cartof folosite


11/18


5g de produs vegetal se mojareaza fin cu 25 ml solutie de NaCl.

Figura 4. Obtinerea materiei pentru mojarare

Figura 5. Mojararea cartofilor


12/18


Se trece cantitativ continutul mojarat, prin spalari repetate intr-unvas Erlenmeyer.

Figura 6. Spalarea mojarului Figura 7. Amestecul de cartof mojarat si NaClse trece intr-un vas Erlenmeyer


13/18


Se agita pentru omogenizare si se lasa 30 de minute in repaus.

Figura 8. Solutia omogenizata de cartof si NaCl


14/18


Apoi, solutia se filtreaza printr-un filtru,intr-un vas Erlenmeyer uscat.

Figura 9. Amestecurile omogenizate ale

soiurilor de cartofi

Figura 10. Fiecare amestec este

filtrat intr-un pahar Erlenmeyer


15/18


Amestecurile filtrare contin extract de peroxidaza.

Figura 11.De la stanga la dreapta: extracte de peroxidaza din soiurile Desire, Christian, Ruxandra si Rustic


16/18


Se lasa 30 minute la temperatura camerei. Apoi, se masoaraextinctia solutiei la 420 nm in cuva de 1 cm, fata de apa distilata.

Figura 12. Masurarea extinctieiextractului de peroxidaza, folosindspectofotometru


17/18


Activitatea peroxidazei= E d/mE= extinctia determinatam= masa de produs luata in analiza, ingramed = 5 factor corespunzator dilutieirealizate


18/18


Soi de cartof Activitatea enzimatica a peroxidazei

Desire 0.366 Christian

0.287

Ruxandra 0.434

Rustic 0.727

Spectofotometrarea produsului final de reactie enzimatica permite determinareaactivitatii enzimatice, prin citirea extinctiei solutiei de chinon-diamina.

De asemenea, s-a demonstrat ca soiurile de cartof cu activitatea enzimatica aperoxidazei redusa, soiul Desire (0.366), respectiv soiul Christian (0.287), au dezvoltat oculoare usor rozalie pe coaja.

In urma spectofotometrarii, s-a dezvaluit ca soiul de cartof cu activitateaenzimatica a peroxidazei cea mai redusa, este soiul Christian (0.287), fiind cel mai potrivitpentru fabricarea fulgilor de cartof.

Determinarea Activitatii Peroxidazei

Documents

Transcript of Determinarea Activitatii Peroxidazei