CITOLOGIE Lucrarea prac)c 2 Preparatul microscopic permanent

Exclusiv pentru uz didac2c

Cerine necesare pentru o examinare precis: - Celulele i celelalte elemente prezente n esut s e pstrate n condiii ct mai apropiate de condiiile lor naturale (FIXARE)

- Preparatul s e transparent, subire, plat - Diferitele componente s e colorate diferit (COLORARE)

Preg/rea preparatului pentru microscopie op/c

Exclusiv pentru uz didac2c

2013 Dr. M.I. Nicolescu, Disciplina de citologie i histologie, UMF Carol Davila Bucureti

Posibiliti de preparare - seciuni - in toto (structuri/organisme mici, suficient de subiri pt. a fi ntinse pe o lam) - zdrobire (pt. studiul coninutului celulei) - frotiuri (celule suspendate n fluid) - culturi celulare

Preg/rea preparatului pentru microscopie op/c

Exclusiv pentru uz didac2c

2013 Dr. M.I. Nicolescu, Disciplina de citologie i histologie, UMF Carol Davila Bucureti

Preparatul microscopic permanent

Modalitatea de examinare a unor celule, fragmente de esut sau organ, crora li s-au suprimat procesele vitale prin fixare

Permite examinarea la microscopul optic a principalelor caracteristici ale celulelor i a modului lor de organizare

Exclusiv pentru uz didac2c

2013 Dr. M.I. Nicolescu, Disciplina de citologie i histologie, UMF Carol Davila Bucureti

Preparatul microscopic permanent Un preparat microscopic este alctuit din:

1. obiect de examinat (subire i transparent)

2. mediu de montare (transparent)

3. suport de montare (lam i lamel)

hGp://www.agtcbioproducts.com/images/slide.jpg

Exclusiv pentru uz didac2c

2013 Dr. M.I. Nicolescu, Disciplina de citologie i histologie, UMF Carol Davila Bucureti

Preparatul microscopic permanent

Scopul realizrii de a conserva - structurile celulare i - raporturile dintre ele pe un timp nelimitat.

Este folosit n: -clinic -laboratorul de anatomie patologic -medicin legal -cercetare -scop didactic

Exclusiv pentru uz didac2c

2013 Dr. M.I. Nicolescu, Disciplina de citologie i histologie, UMF Carol Davila Bucureti

Etapele obinerii preparatului microscopic permanent

1. Recoltare 2. Fixare 3. Deshidratare i clarificare 3. Impregnare i includere 4. Secionare 5. Colorare 6. Montare (ntre lam i lamel) 7. Etichetare

Exclusiv pentru uz didac2c

2013 Dr. M.I. Nicolescu, Disciplina de citologie i histologie, UMF Carol Davila Bucureti

1. RECOLTAREA

= Operaia prin care fragmentul de esut/organ este prelevat de la om, animal viu sau de la cadavru

RECOLTAREA BIOPSIC Se recolteaz de la om sau animal viu i se practic n scop diagnostic.

Se realizeaz prin : 1. raclare 2. puncie-biopsie 3. aspiraie cu ac fin 4. intervenie chirurgical

1. dimensiunea pieselor s nu depeasc 5 mm

2. instrumentele bine ascuite

pentru a evita zdrenuirea i pierderea paralelismului dintre planuri

3. adecvat n funcie de tipul

organului; se vor evita modificrile de volum, form i relief

Exclusiv pentru uz didac2c

2013 Dr. M.I. Nicolescu, Disciplina de citologie i histologie, UMF Carol Davila Bucureti

RECOLTAREA NECROPSIC

recoltarea de la cadavrele umane se practic n laboratoarele de anatomie patologic i medicin legal cu scopul de a confrunta datele de anatomie clinic i tanatogenetice dup sacrificarea animalului, n scop de cercetare sau didactic

1. RECOLTAREA

(ct mai aproape de momentul decesului) pentru a evita procesele de autoliz

Exclusiv pentru uz didac2c

2013 Dr. M.I. Nicolescu, Disciplina de citologie i histologie, UMF Carol Davila Bucureti

Recoltarea biopsic A. raclare B. puncie biopsie C. aspiraie cu ac fin D. intervenie

chirurgical - biopsie incizional - biopsie excizional

hGp://img.webmd.com/dtmcms/live/webmd/consumer_assets/site_images/ar)cles/health_tools/eczema_overview_slideshow/photolibrary_rm_photo_of_hand_with_eczema.jpg hGp://www.beliefnet.com/healthandhealing/images/si55551723.jpg

hGp://www.glowm.com/resources/glowm/graphics/gures/v1/0270/016f.jpg

A

C

D

B

Exclusiv pentru uz didac2c

2013 Dr. M.I. Nicolescu, Disciplina de citologie i histologie, UMF Carol Davila Bucureti

etap critic pentru un bun preparat proces fizic sau chimic prin care:

- sunt oprite rapid procesele vitale (celulare), - pstrndu-se, cu alterri minime:

- volumul, - forma, - relieful i - raporturile moleculare (n structuri/ultrastructuri) i spaiale (ntre structuri/

ultrastructuri)

Prin fixare urmrim: 1.Conservarea esuturilor 2.Prevenirea pierderii de constitueni celulari 3.Creterea diferenierii optice a structurilor celulare 4.Mrirea consistenei esuturilor n scopul de a facilita

trecerea lor prin celelalte etape i mai ales pentru secionare

2. FIXAREA

hGp://www.leicabiosystems.com/typo3temp/pics/Sci_Lab_Histo_Lead0004_d0f91f3944.jpg

Exclusiv pentru uz didac2c

2013 Dr. M.I. Nicolescu, Disciplina de citologie i histologie, UMF Carol Davila Bucureti

Serie de soluii alcoolice de concentraii crescnde (pn la 100%) pentru ndeprtarea apei i nlocuirea ei cu alcool

ndeprtarea alcoolului cu ajutorul unor ageni n care i alcoolul i parana sunt miscibli (ex: toluen)

3. DESHIDRATAREA i CLARIFICAREA Exclusiv pentru uz didac2c

2013 Dr. M.I. Nicolescu, Disciplina de citologie i histologie, UMF Carol Davila Bucureti

McGraw-Hill Companies / Junqueira Histology

- etapa care asigur condiii op)me pentru secionarea pieselor

Cea mai folosit mas de incluziune: parana

4. INCLUDEREA

hGp://www.leicabiosystems.com/typo3temp/pics/Embedding_028_sized_31fe12192c.jpg hGp://www.leicabiosystems.com/typo3temp/pics/Sci_Lab_Histo_Lead0008_03_a9cda89157.jpg

Exclusiv pentru uz didac2c

2013 Dr. M.I. Nicolescu, Disciplina de citologie i histologie, UMF Carol Davila Bucureti

cu microtomul ( vor rezulta seciuni cu o grosime de aprox. 5m) 5. SECIONAREA

Exclusiv pentru uz didac2c

2013 Dr. M.I. Nicolescu, Disciplina de citologie i histologie, UMF Carol Davila Bucureti

McGraw-Hill Companies / Junqueira Histology

- etapa prin care se urmrete creterea contrastului dintre elementele celulare/)sulare, prin capacitatea substraturilor morfologice (care conin proteine, acizi nucleici sau alte macromolecule) de a lega diferit coloranii

Prin metode compa)bile cu metoda de xare Pot metode universale (HE) sau specice esutului studiat

(Nissl)

6. COLORAREA Exclusiv pentru uz didac2c

2013 Dr. M.I. Nicolescu, Disciplina de citologie i histologie, UMF Carol Davila Bucureti

- permite conservarea specimenelor pentru ct mai mult )mp

ntre lam i lamel, n diferite medii de montare, iniial fluide

Protejarea seciunilor fragile de eventualele deteriorri Conservarea coloraiei i asigurarea unui mediu optic

omogen i transparent necesar examinrii microscopice

7. MONTAREA Exclusiv pentru uz didac2c

2013 Dr. M.I. Nicolescu, Disciplina de citologie i histologie, UMF Carol Davila Bucureti

8. ETICHETAREA

Pe fiecare lam se noteaz:

tipul celular/tisular sursa de recoltare fixatorul metoda de colorare data realizrii preparatului

Exclusiv pentru uz didac2c

2013 Dr. M.I. Nicolescu, Disciplina de citologie i histologie, UMF Carol Davila Bucureti

PAUZ

COLORANTUL HISTOLOGIC Substan colorat, de obicei de natur organic, ce

poate intra n celul atandu-se la nivelul componentelor celulare i permind astfel diferenierea lor optic.

Nu toate substanele colorate sunt colorani! Coloranii prezint, d.p.d.v. chimic: - Grupri cromofore (purttoare de culoare) - Grupri auxocrome (cu capacitatea de a colora)

- Ionizate (principale) formeaz leg. electrochimice cu substratul - Neionizate (secundare) formeaz leg. de hidrogen cu substratul

Exclusiv pentru uz didac2c

2013 Dr. M.I. Nicolescu, Disciplina de citologie i histologie, UMF Carol Davila Bucureti

Clasicare: - dup provenien: naturali (vegetali/animali) sau sinte)ci - dup caracterul chimic: - acizi: gr.auxocr. sarcin - se ataeaz pe substrat (+)

- bazici: gr.auxocr. sarcin + se ataeaz pe substrat (-) - neutri (amestecuri de col. acizi i bazici)

METODE DE COLORARE Exclusiv pentru uz didac2c

2013 Dr. M.I. Nicolescu, Disciplina de citologie i histologie, UMF Carol Davila Bucureti

Criterii de clasificare: 1. Momentul colorrii 2. Nr. de colorani utilizai 3. Mecanismul colorrii 4. Metoda de obinere a

coloraiei optime 5. Raportul dintre

rezultatul colorrii i culoarea colorantului

(vitale / permanente)

(simple / combinate)

(directe / indirecte cu intermediar)

(progresive / regresive cu decolorant)

(ortocromatic / metacromatic)

METACROMAZIA Capacitatea unui substrat de a se colora ntr-o alt culoare dect cea a

colorantului. PRINCIPIU: - existena unor grupri funcionale aflate la o distan foarte mic una de

alta. - colorantul se dispune ordonat i foarte aproape molecul de molecul

permind reaezri ale electronilor la alte nivele energetice i absorbia de alte lungimi de und din spectrul vizibil

Exclusiv pentru uz didac2c

2013 Dr. M.I. Nicolescu, Disciplina de citologie i histologie, UMF Carol Davila Bucureti

Mastocite Ob. 100x cu imersie Col.: Albastru de toluidin -- granulaii rou - violet

COLORAII UZUALE Exclusiv pentru uz didac2c

2013 Dr. M.I. Nicolescu, Disciplina de citologie i histologie, UMF Carol Davila Bucureti

Hematoxilin-eozin (HE) Giemsa Mallory Coloraii tricrome: Masson, Azan, Van Gieson Impregnarea argen)c Metode speciale (Cajal /Da Fano, Hematoxilin feric Regaud) Sudan (III, IV, B, BB)

1. Compoziie 2. Rezultate (text + imagini + surs) 3. Par/culariti