CITOLOGIE MEDICINA DENTARA

of 22 /22
CITOLOGIE Lucrarea prac)că 2 – Preparatul microscopic permanent Exclusiv pentru uz didac2c

Embed Size (px)

description

LUCRARE PRACTICA DE CITOLOGIE MEDICINA DENTARA UMF CAROL DAVILA BUCURESTI

Transcript of CITOLOGIE MEDICINA DENTARA

  • CITOLOGIE Lucrarea prac)c 2 Preparatul microscopic permanent

    Exclusiv pentru uz didac2c

  • Cerine necesare pentru o examinare precis: - Celulele i celelalte elemente prezente n esut s e pstrate n condiii ct mai apropiate de condiiile lor naturale (FIXARE)

    - Preparatul s e transparent, subire, plat - Diferitele componente s e colorate diferit (COLORARE)

    Preg/rea preparatului pentru microscopie op/c

    Exclusiv pentru uz didac2c

    2013 Dr. M.I. Nicolescu, Disciplina de citologie i histologie, UMF Carol Davila Bucureti

  • Posibiliti de preparare - seciuni - in toto (structuri/organisme mici, suficient de subiri pt. a fi ntinse pe o lam) - zdrobire (pt. studiul coninutului celulei) - frotiuri (celule suspendate n fluid) - culturi celulare

    Preg/rea preparatului pentru microscopie op/c

    Exclusiv pentru uz didac2c

    2013 Dr. M.I. Nicolescu, Disciplina de citologie i histologie, UMF Carol Davila Bucureti

  • Preparatul microscopic permanent

    Modalitatea de examinare a unor celule, fragmente de esut sau organ, crora li s-au suprimat procesele vitale prin fixare

    Permite examinarea la microscopul optic a principalelor caracteristici ale celulelor i a modului lor de organizare

    Exclusiv pentru uz didac2c

    2013 Dr. M.I. Nicolescu, Disciplina de citologie i histologie, UMF Carol Davila Bucureti

  • Preparatul microscopic permanent Un preparat microscopic este alctuit din:

    1. obiect de examinat (subire i transparent)

    2. mediu de montare (transparent)

    3. suport de montare (lam i lamel)

    hGp://www.agtcbioproducts.com/images/slide.jpg

    Exclusiv pentru uz didac2c

    2013 Dr. M.I. Nicolescu, Disciplina de citologie i histologie, UMF Carol Davila Bucureti

  • Preparatul microscopic permanent

    Scopul realizrii de a conserva - structurile celulare i - raporturile dintre ele pe un timp nelimitat.

    Este folosit n: -clinic -laboratorul de anatomie patologic -medicin legal -cercetare -scop didactic

    Exclusiv pentru uz didac2c

    2013 Dr. M.I. Nicolescu, Disciplina de citologie i histologie, UMF Carol Davila Bucureti

  • Etapele obinerii preparatului microscopic permanent

    1. Recoltare 2. Fixare 3. Deshidratare i clarificare 3. Impregnare i includere 4. Secionare 5. Colorare 6. Montare (ntre lam i lamel) 7. Etichetare

    Exclusiv pentru uz didac2c

    2013 Dr. M.I. Nicolescu, Disciplina de citologie i histologie, UMF Carol Davila Bucureti

  • 1. RECOLTAREA

    = Operaia prin care fragmentul de esut/organ este prelevat de la om, animal viu sau de la cadavru

    RECOLTAREA BIOPSIC Se recolteaz de la om sau animal viu i se practic n scop diagnostic.

    Se realizeaz prin : 1. raclare 2. puncie-biopsie 3. aspiraie cu ac fin 4. intervenie chirurgical

    1. dimensiunea pieselor s nu depeasc 5 mm

    2. instrumentele bine ascuite

    pentru a evita zdrenuirea i pierderea paralelismului dintre planuri

    3. adecvat n funcie de tipul

    organului; se vor evita modificrile de volum, form i relief

    Exclusiv pentru uz didac2c

    2013 Dr. M.I. Nicolescu, Disciplina de citologie i histologie, UMF Carol Davila Bucureti

  • RECOLTAREA NECROPSIC

    recoltarea de la cadavrele umane se practic n laboratoarele de anatomie patologic i medicin legal cu scopul de a confrunta datele de anatomie clinic i tanatogenetice dup sacrificarea animalului, n scop de cercetare sau didactic

    1. RECOLTAREA

    (ct mai aproape de momentul decesului) pentru a evita procesele de autoliz

    Exclusiv pentru uz didac2c

    2013 Dr. M.I. Nicolescu, Disciplina de citologie i histologie, UMF Carol Davila Bucureti

  • Recoltarea biopsic A. raclare B. puncie biopsie C. aspiraie cu ac fin D. intervenie

    chirurgical - biopsie incizional - biopsie excizional

    hGp://img.webmd.com/dtmcms/live/webmd/consumer_assets/site_images/ar)cles/health_tools/eczema_overview_slideshow/photolibrary_rm_photo_of_hand_with_eczema.jpg hGp://www.beliefnet.com/healthandhealing/images/si55551723.jpg

    hGp://www.glowm.com/resources/glowm/graphics/gures/v1/0270/016f.jpg

    A

    C

    D

    B

    Exclusiv pentru uz didac2c

    2013 Dr. M.I. Nicolescu, Disciplina de citologie i histologie, UMF Carol Davila Bucureti

  • etap critic pentru un bun preparat proces fizic sau chimic prin care:

    - sunt oprite rapid procesele vitale (celulare), - pstrndu-se, cu alterri minime:

    - volumul, - forma, - relieful i - raporturile moleculare (n structuri/ultrastructuri) i spaiale (ntre structuri/

    ultrastructuri)

    Prin fixare urmrim: 1.Conservarea esuturilor 2.Prevenirea pierderii de constitueni celulari 3.Creterea diferenierii optice a structurilor celulare 4.Mrirea consistenei esuturilor n scopul de a facilita

    trecerea lor prin celelalte etape i mai ales pentru secionare

    2. FIXAREA

    hGp://www.leicabiosystems.com/typo3temp/pics/Sci_Lab_Histo_Lead0004_d0f91f3944.jpg

    Exclusiv pentru uz didac2c

    2013 Dr. M.I. Nicolescu, Disciplina de citologie i histologie, UMF Carol Davila Bucureti

  • Serie de soluii alcoolice de concentraii crescnde (pn la 100%) pentru ndeprtarea apei i nlocuirea ei cu alcool

    ndeprtarea alcoolului cu ajutorul unor ageni n care i alcoolul i parana sunt miscibli (ex: toluen)

    3. DESHIDRATAREA i CLARIFICAREA Exclusiv pentru uz didac2c

    2013 Dr. M.I. Nicolescu, Disciplina de citologie i histologie, UMF Carol Davila Bucureti

    McGraw-Hill Companies / Junqueira Histology

  • - etapa care asigur condiii op)me pentru secionarea pieselor

    Cea mai folosit mas de incluziune: parana

    4. INCLUDEREA

    hGp://www.leicabiosystems.com/typo3temp/pics/Embedding_028_sized_31fe12192c.jpg hGp://www.leicabiosystems.com/typo3temp/pics/Sci_Lab_Histo_Lead0008_03_a9cda89157.jpg

    Exclusiv pentru uz didac2c

    2013 Dr. M.I. Nicolescu, Disciplina de citologie i histologie, UMF Carol Davila Bucureti

  • cu microtomul ( vor rezulta seciuni cu o grosime de aprox. 5m) 5. SECIONAREA

    Exclusiv pentru uz didac2c

    2013 Dr. M.I. Nicolescu, Disciplina de citologie i histologie, UMF Carol Davila Bucureti

    McGraw-Hill Companies / Junqueira Histology

  • - etapa prin care se urmrete creterea contrastului dintre elementele celulare/)sulare, prin capacitatea substraturilor morfologice (care conin proteine, acizi nucleici sau alte macromolecule) de a lega diferit coloranii

    Prin metode compa)bile cu metoda de xare Pot metode universale (HE) sau specice esutului studiat

    (Nissl)

    6. COLORAREA Exclusiv pentru uz didac2c

    2013 Dr. M.I. Nicolescu, Disciplina de citologie i histologie, UMF Carol Davila Bucureti

  • - permite conservarea specimenelor pentru ct mai mult )mp

    ntre lam i lamel, n diferite medii de montare, iniial fluide

    Protejarea seciunilor fragile de eventualele deteriorri Conservarea coloraiei i asigurarea unui mediu optic

    omogen i transparent necesar examinrii microscopice

    7. MONTAREA Exclusiv pentru uz didac2c

    2013 Dr. M.I. Nicolescu, Disciplina de citologie i histologie, UMF Carol Davila Bucureti

  • 8. ETICHETAREA

    Pe fiecare lam se noteaz:

    tipul celular/tisular sursa de recoltare fixatorul metoda de colorare data realizrii preparatului

    Exclusiv pentru uz didac2c

    2013 Dr. M.I. Nicolescu, Disciplina de citologie i histologie, UMF Carol Davila Bucureti

  • PAUZ

  • COLORANTUL HISTOLOGIC Substan colorat, de obicei de natur organic, ce

    poate intra n celul atandu-se la nivelul componentelor celulare i permind astfel diferenierea lor optic.

    Nu toate substanele colorate sunt colorani! Coloranii prezint, d.p.d.v. chimic: - Grupri cromofore (purttoare de culoare) - Grupri auxocrome (cu capacitatea de a colora)

    - Ionizate (principale) formeaz leg. electrochimice cu substratul - Neionizate (secundare) formeaz leg. de hidrogen cu substratul

    Exclusiv pentru uz didac2c

    2013 Dr. M.I. Nicolescu, Disciplina de citologie i histologie, UMF Carol Davila Bucureti

    Clasicare: - dup provenien: naturali (vegetali/animali) sau sinte)ci - dup caracterul chimic: - acizi: gr.auxocr. sarcin - se ataeaz pe substrat (+)

    - bazici: gr.auxocr. sarcin + se ataeaz pe substrat (-) - neutri (amestecuri de col. acizi i bazici)

  • METODE DE COLORARE Exclusiv pentru uz didac2c

    2013 Dr. M.I. Nicolescu, Disciplina de citologie i histologie, UMF Carol Davila Bucureti

    Criterii de clasificare: 1. Momentul colorrii 2. Nr. de colorani utilizai 3. Mecanismul colorrii 4. Metoda de obinere a

    coloraiei optime 5. Raportul dintre

    rezultatul colorrii i culoarea colorantului

    (vitale / permanente)

    (simple / combinate)

    (directe / indirecte cu intermediar)

    (progresive / regresive cu decolorant)

    (ortocromatic / metacromatic)

  • METACROMAZIA Capacitatea unui substrat de a se colora ntr-o alt culoare dect cea a

    colorantului. PRINCIPIU: - existena unor grupri funcionale aflate la o distan foarte mic una de

    alta. - colorantul se dispune ordonat i foarte aproape molecul de molecul

    permind reaezri ale electronilor la alte nivele energetice i absorbia de alte lungimi de und din spectrul vizibil

    Exclusiv pentru uz didac2c

    2013 Dr. M.I. Nicolescu, Disciplina de citologie i histologie, UMF Carol Davila Bucureti

    Mastocite Ob. 100x cu imersie Col.: Albastru de toluidin -- granulaii rou - violet

  • COLORAII UZUALE Exclusiv pentru uz didac2c

    2013 Dr. M.I. Nicolescu, Disciplina de citologie i histologie, UMF Carol Davila Bucureti

    Hematoxilin-eozin (HE) Giemsa Mallory Coloraii tricrome: Masson, Azan, Van Gieson Impregnarea argen)c Metode speciale (Cajal /Da Fano, Hematoxilin feric Regaud) Sudan (III, IV, B, BB)

    1. Compoziie 2. Rezultate (text + imagini + surs) 3. Par/culariti