Biologie Celulara - Sortarea Celulelor

Lucrare practica nr. 6

Sortarea celulelor

Culturi celulare

Criofracturare

Tehnici de fracturare

Centrifugare

Biologie

Celulara si

Moleculara

SORTAREA CELULELOR PRIN CITOMETRIE DE FLUX

Citometria de flux permite determinarea simultană a

mai multor parametri fizici și chimici caracteristici unei

singure celule aflate în mișcare într-un curent lichid.

CE ESTE CITOMETRIA DE FLUX?

ETAPE

1. Prepararea suspensiei de celule

2. Marcarea celulelor - suspensia de celule este pusă în contact cu un set de anticorpi monoclonali marcați cu anumite substante fluorescente.

3. Suspensia trece printr-un dispozitiv de reglare a fluxului, respectiv camera de curgere, care determină o aliniere a celulelor într-un curent unicelular.

4. Inserția celulelor cu un fascicul laser, ce se soldeaza cu dispersia luminii și emisia de fluorescență.


5. Folosirea unui sistem de detecție ce analizează semnalele rezultate, obținându-se date despre dimensiunile și complexitatea structurală a celulei și respectiv despre prezența unor structuri antigenice corespondente anticorpilor marcați.

6. Curentul fluid este fragmentat în picături, ce conțin celule, prin aplicarea energiei sonice la nivelul camerei de curgere.

7. Îndeplinirea de către celulă a unor condiții predefinite, prin programare, determinând plasarea unei sarcini electrice, pe picătura care o conține.

8. Picăturile încărcate electric sunt deflectate într-un câmp electrostatic.



Principiul general al

unui flux-citometru

(după C.Voiculescul)

Un citometru de flux oferă posibilitatea de a sorta

din totalul celulelor din probă, o populație de interes.

Procedura presupune instalarea unor eprubete

pentru colectarea celulelor dorite; activarea unui meniu

de sortare din cadrul etapei de achiziție a programului;

alegerea modului de sortare, a numărului de celule dorite

și identificarea populației prin intermediul unei așa

numite “porți logice”.



Principiul sortării celulelor ( după C.Voiculescu, 1996)

Sunt in principal trei moduri de sortare:


Aplicațiile metodei sunt în:

imunodiagnostic și în monitorizarea unor afecțiuni, ca boli de

autoagresiune sau imunodeficiențe (HIV/SIDA, neoplazii);

dimensiune, structura interna a celulei

continutul de AND

continutul de ARN

analiza si sortarea cromozomilor

extensia si localizarea proteinelor

antigene de suprafata, intracelulare si nucleare

viabilitatea celulara

în imunologia experimentală (cercetări cu celule sortate)

studierea gestației fiziologice


Citometrul Becton Dickinson FACS Canto II cu 3 lasere,folosit pentru analiza multiparametrică (8 culori) a celulelor de interes


Citometrie in flux cu laser

semiconductor combinata cu tehnica de

colorare citochimica, tehnica impedantei

si colorimetrie ecologica non-cianidca

Transfer: 60 probe/oraSange intreg, sange prediluat

Are o capacitate de stocare de 100000 rezultate ale pacientilor, incluzand diagrama de dispersie, histograma si informatiile pacientilor.

O varietate de formate de printare pot fi preprogramate.

Formatele definite de utilizator sunt de asemenea disponibile

Prelevarea automata cuplata cu pozitii de acces de urgenta (4 tipuri de tuburi sunt accesibile)


Citometria in flux (FC) este o alta tehnica de sortare a spermatozoizilor. Foloseste substante fluorescente pentru a ilumina spermatozoizii ce contin cromozomi X. Aceasta substanta fluorescenta adera de materialul genetic din spermatozoizi.

Deoarece spermatozoizii ce contin cromozomi X au mai mult material genetic, acestia vor colecta mai multa substanta fluorescenta decat spermatozoizii ce contin cromozomi Y. Un aparat laser este folosit apoi, pentru a separa cele doua tipuri de spermatozoizi. Spermatozoizii cu cromozomi apropiati, sunt folositi apoi in IUI (Inseminarea artificiala intrauterina) sau FIV.

Rata de succes a citometriei in flux este mare: exista 60–70% sanse sa concepi un copil de sexul dorit.

Citometria in flux – fertilizare in vitro


Fragment histologic de polip adenomatos colonic vilos

Fragment histologic al polipului adenomatos colonic vilos malignizat

cu zone de displazie severă



Fragment histologic de polip adenomatos mixt tubulo-vilos

Fragment histologic al polipului adenomatos mixt tubulo-vilos

malignizat

Vă mulțumim pentru atenție!

Proiect realizat de :

Bodnar Ana-Maria

Boriceanu Andreea-Nicoleta

Facultatea de Medicină , specializarea Medicină

Anul 1, Grupa 1

Biologie Celulara - Sortarea Celulelor

Documents

Transcript of Biologie Celulara - Sortarea Celulelor