18. 03. 2013 · plante, sol, alimente ... Agent selectiv Zaharuri Indicator de pH Enterobacterii...

18. 03. 2013

“Felul cum întrebuinţăm timpul

liber ne trădează caracterul.”

Plinius

• Proiecte potențiale ...

• despre note / teze / generații și persoane în cadrul unei generații

• despre halatul alb

• Enterobacterii (1)

• un sindrom despre care am amintit ...

• lucrare de control

Un proiect ...

• Problemă / Beneficiari / Grup țintă

• Scop

• Obiectiv general

• Obiective specifice

• Activități / Resurse / Buget

• Rezultate

• Monitorizare și evaluare (feed-back) - indicatori

• Susținere în timp (”sustenabilitate”)

http://www.youtube.com/watch?v=TTfObrMV7gk

http://www.youtube.com/watch?v=TTfObrMV7gk

Proiecte potențiale

• dacă ar fi să ne luăm după cum ”merg” lucrurile ...

• Copii/tineri infectați HIV/SIDA ...

• Copii cu copii aflați în nevoie ...

• Copii care vor / ar vrea să învețe ...

• Cunoștințe privind prevenirea TORCH

• Vaccinare / anti-vaccinare ...

Vă dăm o veste bună: Ionela și Florina s-au calificat (singurele de la

profilul economic) pentru faza la nivel național a concursului de

matematică ”AH”, olimpiada de matematică pentru elevii de la alte

secții decât cea de matematică-informatică.

Punctajul obținut a fost cel mai bun din București: 21 puncte din 28

pentru Florina, 20 puncte pentru Ionela.

La faza precedentă Ionela luase locul întâi pe sector.

Faza pe țară va avea loc în mai, la Iași, ca și în ceilalți ani.

Ajutorul dumneavoastră și conlucrarea a făcut posibil să ne bucurăm

de aceste rezultate frumoase.

Să fie primit!

Proiecte potențiale

• dacă ar fi să ne luăm după cum ”merg” lucrurile ...

• Copii/tineri infectați HIV/SIDA ...

• Copii cu copii aflați în nevoie ...

• Copii care vor / ar vrea să învețe ...

• Cunoștințe privind prevenirea TORCH

• Vaccinare / anti-vaccinare ...

• portajul microbian în anul II / anul IV

ENTEROBACTERIACEAE

Definiție

Bacili Gram-negativi, nesporulați, mobili / imobili, aerobi /

facultativ anaerobi

Fermenteaza glucoza cu producere de acid / acid+gaz

Oxidază negativ, catalază pozitiv

G+C = 49-59%

Habitat intestinul uman și animal

alte regiuni ale corpului

plante, sol, alimente

Specii comensale, patogene, condiționat patogene

Nomenclatură și clasificare

1919 (Winslow) fermentarea zaharurilor

fermentativi

nefermentativi

intermediari

1956; 1957 (Cowan) Citrobacter, Escherichia, Klebsiella, Proteus, Salmonella si Shigella.

1959 (Kaufmann) trei triburi si 14 genuri

1960 (Ewing si Edwards) patru grupuri biochimice:

Escherichia – Shigella

Arizona – Citrobacter- Salmonella

Cloaca – Klebsiella – Serratia

Proteus - Providencia

1966 (Ewing) patru triburi si 11 genuri (genul Edwardsiella)

Eschericheae: Escherichia – Shigella

Salmonelleae: Arizona – Citrobacter- Salmonella

Klebsielleae: Enterobacter – Klebsiella – Serratia

Proteae: Proteus - Providencia

1985 (Farmer si col.) 22 genuri si 69 de specii (29 de biogrupuri nedenumite încă) … ... ...

Cultivabilitate

• Cultivă cu ușurință pe medii nutritive simple

• În medii lichide

– Tulbură omogen mediul, fara depozit, fara văl

– Proteus si Klebsiella formeaza văl sau inel

• Pe mediile gelozate simple

– Colonii rotunde, netede, bombate semitransparente, tip ”S”

– Tulpinile “R” dezvolta colonii turtite, cu marginea neregulată

– Dar și tip ”M”

– Unele specii / tulpini produc pigmenți

• Pe mediile cu sânge unele specii produc hemoliză

• Medii de cultură selective / diferenţiale - utilizate în diagnostic

Sistem indicator Aspectul coloniilor

Denumirea

Agent selectiv Zaharuri Indicator de pH Enterobacterii

fermentative

Enterobacterii

nefermentative

MacConkey Saruri biliare + cristal

violet

Lactoza Rosu neutru Rosii, mari,

opalescente,uneori

cu halou

opalescent

Necolorate,

semitransparente

Levine Albastru de metilen Lactoza Eozina galbena Rosu inchis, cu

sau fara luciu

metalic

Necolorate,

semitransparente

Hectoen Saruri biliare Lactoza,

zaharoza,

salicina

Albastru de

bromthymol,

fucsina adcida

Rosii, mediul

vireaza in rosu

Albastru inchis

uneoricu centrul

negru

Agar verde

brilliant

Verde brilliant Lactoza,

zaharoza

Rosu fenol Verzui,

semitransparente

ori opace

Rosu intens,

mediul v ireaza in

rosu

Wilson Blair Verde brilliant - - Mici verzu i ori

mucoide maronii

Salmonellele dau

colonii negre,

rugoase cu halou

metalic

Salmonella-

Shigella

Saruri biliare, verde

brilliant

Lactoza Rosu neutru Rosii cu centru

opac

Necolorate,

semitransparente

Medii selective utilizate pentru identificarea

Enterobacteriilor

Morfologie

• Bacili cu lungimea de 2-3μ și grosimea de 0.6μ, cu laturile

paralele și capetele rotunjite (excepţii, ex. Proteus spp., Klebsiella

pneumoniae).

• Sunt tulpini care au forma cocoidă ... tulpini cu aspect filamentos.

• Dezvoltă flageli peritrichi, cu excepția genului Tatumella

• Multe enterobacterii sunt fimbriate, identificandu-se 50-100 fimbrii

pe celula, cu rol în patogenitate

• Unele celule dezvoltă pili de ”sex” cu rol în conjugarea bacteriană

• Unele specii sunt capsulate (colonii M pe mediile solide)

Metabolism si fiziologie

Test

Esch

erich

ia

Shig

ella

Edwa

rdsie

lla

Salm

onel

la

Citro

bact

er

Kleb

siella

Ente

roba

cter

Serra

tia

Hafn

ia

Prot

eus

Prov

iden

cia

Mor

gane

lla

Yers

inia

Cede

cea

Kluy

vera

Ewin

gella

Tatu

mella

Glucoza-

gaz

+ - + + + + + d + + D d - + + - -

Zaharoza d D - - d + + + d D d - D D + - +

Lactoza + D - D d D d D - - - - - D + + -

Adonita - - - - D d D d - - D - D - - - -

Inozita - - - d - + d D - - D - - - - - -

Citrat

(Simmons)

- - - + + D + + + d + - - + + + -

Malonat - - - D D D d D d - - - - D + - -

H2S - - + + D - - - - + - - - - - - -

Indol + d + - D D - - - D + + D - + - -

Lizina d - + + - D D + + - - - - - D - -

Ornitina d D + + d - D + + D - + D D + - -

Fenilalanina - - - - - - - - - + + + - - - - +

Uree - - - - d D D - - + D + D - - - -

Mobilitate d - + + + - + + + + + + - + + + -

Patogenitate (... Ag...)

Endotoxine

Şocul endotoxic ... CID

Febră

Leucopenie

Hipotensiune arterială

Acțiune abortigenă

Exotoxinele

Toxina termolabilă

Toxina termostabilă

Toxina shiga

Invazivitate

Multiplicare intracelulară

Coagularea intravasculară

diseminată (CID)

- Sepsis bacterian

- Patologii maligne (tumori / un anumit tip de leucemie)

- Cauze obstetricale (jumatăte din cazurile cu “abruptio placentae”)

- TRAUMELE (mai ales craniene) → CID prinexpunerea sângelui la fosfolipidele din țesutullezat, hemoliză și lezare endotelială.

=> Toate duc la LEZIUNI ENDOTELIALE sauDISTRUCȚII TISULARE ce activeazăCOAGULAREA.

Etiologie

Colecţie şi colonizare la nivel nazofaringian


Pneumonie (în unele cazuri)


pneumonie

Invazie la nivel sangvin



MENINGITĂ

~ 55%



~ 55%

MENINGITĂ

MENINGITĂ+

MENINGOCOCEMIE

~30%



~ 55% ~30%

MENINGITĂ+

MENINGOCOCEMIE

MENINGITĂMENINGOCOCE

MIE

FULMINANTĂ

(sdr. Waterhouse-

Friderichsen)

~15%

~ 55%

MENINGITĂ

MENINGITĂ+

MENINGOCOCEMIE

~30%



~15%

MENINGOCOCE

MIE

FULMINANTĂ

pneumonie

Defecte la nivelul Ac

bactericizi, MBL,

complement,

opsonofagocitoză

TNF, FcγIIA, PAI-1,

ACE-1, IL-1Ra, gene

IL-1

Fiziopatologia CID

• Formare de fibrină răspândită intravascular

• activitate excesivă a proteazelor sangvine

• depășește mecanismele naturale de

anticoagulare.

• Formare necontrolată de trombină prin

expunerea la nivele patologice de factori

tisulari

=> 2 mari probleme:

1). Proces accelerat de formare a trombinei

- suprimarea mecanismelor naturale anti C

- fibrinoliză anormală

DEPUNEREA SISTEMICĂ DE FIBRINĂ (v. m și m)

=> compromiterea vascularizației organelor

=> insuficiență de organ (mai ales pulmonar, renal, hepatic, cerebral)

2). Activare continuă a coagulării

=> consumul de factori de coagulare

=> consumul de plachete sangvine

=> SÂNGERARE SISTEMICĂ

(proces agravat de hiperfibrinoliza

secundară)

Generare necontrolată de trombină

CID

CID


Consumarea plachetelor sangvine şi a factorilor plachetari

CID



Sângerare difuză

CID



Sângerare difuză

Depozite de fibrină în microcirculaţie

CID



Afectarea ischemică tisulară

Afectarea hematiilor şi hemoliză

CID




Insuficiență de organ


CID





Hiperfibrinoliză secundară

Insuficiență de organe

CID






Deblocarea vaselor


CID






Deblocarea vaselor Sângerare difuză



FDPD-dimer test

CID




Hiperfibrinoliză secundară Sângerare difuză



Deblocarea vaselor


Semne clinice

• sângerările

• La locul de recoltare,

• Peteșii,

• Echimoze până la

• Hemoragii severe

• tract intestinal,

• pulmonar

• SNC etc.

În CID cronică:

- sângerare mai discretă

– limitată la suprafața tegumentului

– limitată la nivelul mucoaselor

- Insuficiența de organ (e)

- datorită ocluziilor vasculare

- prin hipercoagulabilitate.

În CID acută

- complicații hemodinamice

- șoc.

• Purpura fulminans

– formă severă de CID

– tromboza unor arii extinse la nivel tegumentar

– afectează m.a. copiii în urma unor infecții

bacteriene sau

virale

– mai ales pe cei cu hipercoagulabilitate

înnăscută/dobândită.

Diagnostic de laborator în CID

• PT / aPTT

• Nr de plachete sangvine <100.000/mm3

sau scădere rapidă a numărului de

plachete

• Prezenta schistocitelor (fragmente de

eritrocite) pe frotiul de sânge

• PDF (produși de degradare a fibrinei)

Tratament

• I) monitorizarea semnelor vitale + analizaseverității hemoragiilor + corectareahipovolemiei + proceduri hemostatice (dacă e nevoie).

• II) tratamentul patologiei pre-existente ! (traumă, sepsis, urgență obstetricală etc)

• III) înlocuire de plachete și factori;

Heparina – pt tratamentul depozitelor de fibrină

Proteina C activă – pt rolul ei anticoagulant

ESCHERICHIA COLI

Germeni comensali

Patogeni digestivi

Patogeni extraintestinali Infecții urinare

Meningite

Septicemii / sepsis

Bacili Gram-negativi, fermentativi, aerobi, mobili/imobili

G+C: 50-51%

1-3 X 0.4-0.7

Filamente/cocobacili

Cili peritrichi/capsulă/fimbrii

Definiție

Metabolism

Caractere + Caractere -

Catalază Oxidază

Gaz/glucoză / lactoză Uree

-galactozidază Citrat

Indol Malonat

Lizina H2S

Structura antigenică

• Antigene somatice “O”

• Antigene flagelare “H”

• Antigene de înveliș “K” (L, A, B)

Patogenitate

• Adezine de tip fimbrial și afimbrial

• Factorii de colonizare

• Antigenele somatice “O”

• Capsulă

• Toxine

E. coli enterotoxigen (ETEC)

Factori de patogenitate Control genetic Mecanisme de patogenitate

Adezine Plasmidic Adeziune la nivelul

vilozitatilor intestinale

Colonizarea peretelui

intestinal

Enterotoxine termolabile (LT) Plasmidic/cromozomal Receptorul celular este GM1

Perturbarea sistemului

secretor

Enterotoxine termostabile

(STa)

Plasmidic Perturbarea sistemului

secretor

Modificarea citoscheletului

Enterotoxine termostabile

(STb)

Plasmidic Atrofie vilozitara

Diminuarea capacitatii de

absorbtie

Proteine de membrana

externa

Cromozomal Adeziune/invazivitate?

Inflamatie

E. coli enteropatogen (EPEC)


Adezine bfp (bundle-forming

pilus)

Alte adezine

Plasmidic-factor de aderenta

Gene bfpA

Receptori: glicolipidele din

membrana

Aderenta localizata

Intimina

Proteina de 39 KDa

Proteine bacteriene de

marimi diferite

Cromozomal

eaeA: codifica intimina

(atasare/stergere)

esp, sep: codifica pentru

proteine secretate de EPEC

Aderare intima la epiteliul

intestinal, distrugerea

microvilozitatilor apicale,

diaree prin malabsorbtie,

internalizare

E. coli enterohemoragic (EHEC)

Factori de patogenitate Control genetic Mecanisme patogenice

Fimbrii

Alte sisteme

Plasmidic Adeziune fara invazivitate

Intimina O 157

(atasare/stergere)

Cromozomal

eaeA (locusul LEE)

Aderare intima la epiteliul

intestinal, distrugerea

microvilozitatilor apicale,

Citotoxine SLT (shiga-like) Bacteriofag temperat Receptor celular: Gb3

(globotriosyl)

Actiune pe ARNr 28S-

inhibarea biosintezei proteice

Escherichia coli enteroagregativ (EAgEC)

Factori de patogenitate Control genetic Mecanisme patogenice

Adezine AAF

Invazine

Plasmidic Adeziune, invazivitate

Enterotoxine termolabile (LT) Plasmidic Dezechilibru hidroelectrolitic

Toxina necrozanta Plasmidic Edem si inflamare a vilozitatilor

intestinale

Citotoxina (ST-like) Plasmidic Activarea guanilat-ciclazei

Dezechilibru hidroelectrolitic

Escherichia coli cu aderență difuză (DAEC)


Adezine (AIDA) Plasmidic Adziune la enterocitele

epiteliului intestinal

Fimbrii F1845 (AFA) Plasmidic (operonul afa)

Cromozomal

Recunoasterea receptorului

DAF

Evidențierea în laborator a patotipurilor enterice

Patotip Metode de diagnostic

ETEC ELISA pentru detectarea toxinelor LT si/sau ST

PCR pentru st si sau lt (toxina termostabila/termolabila)

EPEC Serologie “O”Adeziune pe linii celulare Hep-2 sau HeLa

PCR pentru bfp (pilina) si eaeA (intimina)

EHEC ELISA pentru detectarea toxinelor SLT1 si/sau SLT2

Efect citotoxic pe linia celulara Y1

PCR pentru eaeA (intimina)

PCR pentru slt1 si slt2 (toxina shiga-like1 si shiga-like2

EIEC Serologie “O”Testul Sereny

PCR pentru ipaH (invazina)

DAEC Adeziune de tip difuz pe linii celulare HEp-2 sau HeLa

PCR pentru afa (adezine afimbriale)

EAggEC Adeziune de tip agregativ pe linii celulare Hep-2 sau HeLa

PCR pentru agg

Genul Klebsiella

K. pneumoniae, K. ozaenae, K. rhinoscleromatis şi K. oxytoca.

• larg răspândită în natură (sol, apă)

• intestinul omului şi animalelor;

• în mediul spitalicesc se selectează tulpini

multirezistente

Bacili gram negativi, încapsulaţi (capsula are

dimensiuni de 2-3 ori mai mari decât diametrul

bacteriei), imobili, nesporulaţi.

Se pot dispune în diplo.

Bacili gram negativi, încapsulaţi (capsula are dimensiuni de 2-3

ori mai mari decât diametrul bacteriei), imobili, nesporulaţi.

Se pot dispune în diplo.

Cultivă cu uşurinţă pe medii uzuale.

Colonii de tip …

Lactoză ...

Structură antigenică• Antigene somatice O (LPZ) specifice de grup

• Antigene capsulare polizaharidice K, specifice de tip

• peste 80 de tipuri antigenice

• reacţia de umflare a capsulei.

Caractere de patogenitate• microorganism condiţionat patogen

•poate fi implicat în patologia prin multiplicare şi invazivitate.

Factorii de patogenitate

• capsula

• endotoxina (antigenul O).

Boli produse ?

Pneumonii ...

Alte boli

Genul Proteus

Proteus mirabilis şi Proteus vulgaris

P. morganii a devenit Morganella morganii; P.

rettgeri a devenit Providencia rettgeri).

• larg răspândit în natură (ubicuitar)

• intestinul omului şi animalelor;

• în mediul spitalicesc se selectează tulpini multirezistente;

• se pot identifica în materiile organice în putrefacţie, în

alimente.

Bacili gram negativi, foarte mobili (cili peritrichi),

nesporulaţi.

Cu accentuat polimorfism.

Bacili gram negativi, foarte mobili (cili peritrichi), nesporulaţi.

Cu accentuat polimorfism.

Cultivă cu uşurinţă pe medii uzuale.

Colonii de tip …

“Fenomene” ...

Boli produse ?

Infecţii urinare

Probleme deosebite ?

18. 03. 2013 · plante, sol, alimente ... Agent selectiv Zaharuri Indicator de pH Enterobacterii...

Documents

Transcript of 18. 03. 2013 · plante, sol, alimente ... Agent selectiv Zaharuri Indicator de pH Enterobacterii...